大鼠心肌细胞Na~ -K~ -ATP酶的细胞化学定位及异丙基肾上腺素的影响

用Mayahara改良法检出质膜Na~ -K~ -ATP酶活性,以对-硝基苯酚磷酸盐(P-NPP)为底物,检出K~ 依赖、硅巴因敏感,参与Na~ -K~ -ATP酶系统中第二步脱磷酸作用的对-硝基苯酚磷酸酶(K~ -NPP酶),用以反映Na~ -K~ -ATP酶活性的存在部位。实验证实此方法特异性强,非特异沉淀干扰少,为研究Na~ -K~ -ATP酶亚细胞定位的一种好方法。应用此法观察到过量异丙基肾上腺素(ISO)能抑制心肌细胞质膜Na~ -K~ -ATP酶活性;钙拮抗剂异搏定与ISO同时应用能保护Na~ -K~ -ATP酶活性。文中分析了Na~ -K~ -ATP酶活性与Ca~(2 )浓度变化的关系。     

基于能量代谢相关酶活性改变探析脾阳虚证病理机制

目的:通过对脾阳虚大鼠回肠组织中线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ和Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的检测,探讨脾阳虚证状态下大鼠能量代谢障碍的机制。方法:采用经典复合因素塑造脾阳虚大鼠模型,随机分为正常对照组、脾阳虚模型组、中药反证组,行比色法检测各组大鼠模型回肠组织中线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ和Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性。结果:脾阳虚状态下,大鼠回肠组织中线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ和Na+-K+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性均显著减少(P0.05),经附子理中汤中药治疗后,其活性均有所回升,但仍低于正常组(P0.05)。结论:脾阳虚证状态下,能量代谢相关酶的活性下降,能量代谢异常,提示可能与脾阳虚证的病理机制有关。     

低剂量丙泊酚对肝缺血再灌注模型大鼠心肌能量代谢的影响

目的:探讨低剂量丙泊酚对肝缺血再灌注模型大鼠心肌能量代谢的影响。方法:选取健康雄性SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组,每组10只。空白组股静脉注射生理盐水3 ml/(kg·h),高和低剂量组于造模前30 min股静脉分别注射丙泊酚30 mg/(kg·h)和10 mg/(kg·h),依据文献复制肝缺血再灌注模型大鼠(参照王宏等实验研究)。分别检测各组心肌组织ATP、ADP、EC、AMP的含量和Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性,超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醇(MDA)的蛋白含量,并进行比较。结果:低剂量组和高剂量组ATP、ADP、EC、AMP含量明显高于模型组,且低剂量组ATP、ADP、EC含量明显高于高剂量组(P<0.05);模型组Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、Na~+-K~+-ATP酶明显低于其它三组,低剂量组Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、Na~+-K~+-ATP酶明显高于高剂量组(P<0.05);模型组SOD明显低于其它三组,模型组MDA明显高于其它三组(P<0.05);低剂量组SOD明显高于高剂量组,低剂量组MDA明显低于高剂量组(P<0.05)。结论:低剂量丙泊酚对肝缺血再灌注模型大鼠心肌能量代谢具有保护作用。     

人红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶的研究——Ⅰ.活力测定及某些生化特性

采用低渗溶血,高速旋离沉淀方法制得人红细胞膜制剂。测得Na~++K~+-ATP酶活力为6.15nmo P/min/mg蛋白质。测活反应系统中加入专一抑制剂乌本苷,一般可以用测活反应系统中缺K~+,Na~+来代替。在27～37℃范围内,Na~+-K~+-ATP酶对ATP的km值随温度上升而有增加。反应活化能为1.8×10~(-4)Cal/mol(卡/克分子)。 测活系统中加入Co~(2+),Ni~(2+),Zn~(2+),Cd~(2+),或Pb~(2+),对Na~+-K~+-ATP酶没有明显的影响,Sn~(2+)在10~(-4)M时有抑制Na~+-K~+-ATP酶的现象。Mn~(2+)能提高总ATP酶及Mg~(2+)-ATP酶活力,影响Na~+-K~+-ATP酶活力的测定。实验表明Ma~(2+)对乌本苷抑制Na~+-K~+-ATP酶的效应有拮抗作用。 没有发现胆汁酸盐对Na~+-K~+-ATP酶有明显的激活或抑制效应。     

奥瑞合剂对反流性食管炎肝胃郁热证患者超微量Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的影响

目的:观察奥瑞合剂对反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)患者食管组织超微量Na~+-K~+-ATP酶(ultramicro Na~+-K~+-ATPase,u Na KATPase)和超微量Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶(ultramicro Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase,u Ca Mg ATPase)的影响。方法:将60例反流性食管炎肝胃郁热证患者,随机分为治疗组和对照组,每组30例。两组患者均给予基础治疗,口服奥美拉唑肠溶胶囊。治疗组加用药奥瑞合剂治疗,对照组加用奥瑞合剂模拟剂治疗。治疗4周后比较两组患者的临床疗效,食管组织u Na KATPase和u Ca Mg ATPase指标以及胃镜变化。结果:治疗组有效率为96.43%,对照着有效率为74.07%,差异有统计学意义(P0.05);治疗后两组患者u Na KATPase和u Ca Mg ATPase指标均有升高,治疗组优于对照着,差异有统计学意义(P0.05);胃镜评分比较,治疗组有效率为96.43%,治疗组有效率为88.89%,两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:奥瑞合剂可以通过提高反流性食管炎肝胃郁热证患者食管组织u Na KATPase和u Ca Mg ATPase水平,从而改善食管下括约肌收缩与蠕动能力,实现对反流性食管炎的治疗。     

缝隙连接在重度失血性休克兔脑损伤延生复苏中对细胞能量代谢的作用

目的探讨缝隙连接在重度失血休克兔脑损伤延生复苏中对Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力的作用机制,为延生复苏提供新的临床策略和方法。方法 24只家兔随机分4组:A组(常规复苏组)、B组(低温复苏组)、C组(辛醇复苏组)和D组(低温+辛醇复苏组),每组6只。动物麻醉后,机械通气,动静脉插管,心电监测。采用改良的Wiggers法制作重度失血性休克动物模型,模拟临床将该模型分为三期:即失血休克期,院外救助期,院内复苏期。动物处死后取右半脑组织作脑组织干湿重比检测,取部分脑组织作Cx43免疫组化、Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-ATP酶活力测定。结果B、C、D组的脑组织干湿重比明显低于A组(P0.05);Cx43的免疫组化示B、C、D组与A组相比表达明显增多(P0.05);B、C、D组的Na~+-K~+-ATP酶活力、Ca~(2+)-ATP酶活力明显高于A组(P0.05),但B、C、D组之间没有明显差异。结论抑制缝隙连接可提高重度失血性休克兔缺血性脑损伤后延生复苏中Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力;抑制缝隙连接和低温在重度失血性休克缺血性脑损伤延生复苏中对Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力作用相似;低温在重度失血性休克缺血性脑损伤延生复苏中有可能是通过阻断GJ/Cx43上调Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力而起作用的。     

脂氧素A_4及其受体对急性肺损伤Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的研究脂氧素A_4及其受体对大鼠急性肺损伤Na~+-K~+-ATP酶的影响及机制。方法将大鼠随机分为7组:1对照组;2油酸(OA)组;3油酸+脂氧素A4(OA+LX)组;4OA+Alcohol组;5油酸+BML-111组(OA+BML-111组);6油酸+脂氧素A_4+BOC-2(OA+LX+BOC-2)组;7OA+DMSO组。机械通气1 h后处死,取肺组织测定Na~+-K~+-ATP酶α_1、β_1亚基蛋白表达和Na~+-K~+-ATP酶活性。结果与OA组比较,OA+LX组和OA+BML-111组肺组织Na~+-K~+-ATP酶β_1亚基蛋白表达明显增高(P0.05),Na~+-K~+-ATP酶活性明显增强(P0.05);与OA+LX组比较,BOC-2抑制Na~+-K~+-ATP酶的活性(P0.01)。结论脂氧素通过上调Na~+-K~+-ATP酶蛋白表达及活性减轻油酸诱导的大鼠急性肺损伤,其作用机制与脂氧素受体(ALX)相关。     

血浆中分子物质对人红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力的影响

本文初步观察了正常人中分子物质(N-MMS)和烧伤病人中分子物质(B-MMS)对正常人红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力的影响。结果表明,不同保温时间N-MMS对红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力有明显影响,保温时间越长酶活力抑制越显著(p<0.01),对照组变化不明显;不同浓度N-MMS和B-MMS对红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力均有影响,浓度越高酶活力抑制越明显(P<0.01)。MMS对质膜Ca~(2+)-ATP酶的抑制作用可能是MMS导致细胞病理变化的一个重要环节。     

四种小檗胺衍生物与红细胞膜Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase的相互作用

四种小檗胺衍生物对人红细胞膜Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase的基础活性无影响,但对钙调素(CaM)和胰蛋白酶限制性酶解这两种形式所活化的Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase都有不同程度的抑制作用,且有平行的抑制强度。初步探讨了这类化合物影响Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase活力的可能机制。     

缺铁对大鼠红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶的影响

为探讨铁缺乏对红细胞膜蛋白的影响,对缺铁性贫血大鼠红细胞脱Na~+-K~+-ATP酶活力与位点进行了研究。结果表明,随缺铁病程发展,酶活力呈现不同的变化特征;缺铁大鼠和正常大鼠酶位点测值之间无显著差异;与对照组不同,缺铁红细胞的酶活力与酶位点之间无相关联系,提示缺铁红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶活力变化可能主要受酶分子所处的细胞代谢状态和空间结构环境的调控。     

精浆Na~+-K~+-ATP酶及降钙素基因相关肽与男性精子质量相关研究

目的探讨精浆Na~+-K~+-ATP酶、降钙素基因相关肽(CGRP)与男性精子质量的相关性。方法参照第5版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》标准,将研究对象分为无精子症组、少精子症组、少弱精子症组、弱精子症组、死精子症组及正常对照组,通过双抗体夹心法检测精浆中Na~+-K~+-ATP酶及CGRP的浓度,研究精浆中Na~+-K~+-ATP酶及CGRP与男性精子质量的相关性。结果比较不同精液质量组(无精子组、少精子组、少弱精子组、弱精子组、死精子组)间精浆中Na~+-K~+-ATP酶的浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。比较不同精液质量组间精浆中CGRP的浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论精浆中Na~+-K~+-ATP酶的浓度及降钙素基因相关肽的浓度与精子质量可能均无相关性。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活力和细胞内离子水平变化

测定20例正常人及40例 NIDDM 患者红细胞膜 ATP 酶活力和红细胞内离子浓度。结果NIDDM 患者 Na~+-K~+-ATP 酶、Ca~(2+)-ATP 酶活力明显低于正常人(P 均<0.001),Mg~(2+)-ATT 酶活力无明显改变(P>0.05);NIDDM 患者红细胞内[Na~+]、[Ca~(2+)]明显高于正常人(P 分别<0.001和0.01),[Mg~(2+)]明显低于正常人(P<0.001),[K~+]无明显变化(P>0.05)。上述变化在无血管病者就已出现,有血管病者更加明显。     

人红细胞膜Na~ -K~ -ATP酶的研究Ⅱ原发性高血压病人红细胞膜Na~ -K~ -TP酶活力及川芎治疗后酶活力变化的观察

测定了43例原发性高血压病人及10例正常血压健康人的红细胞膜Na~ -K~ -ATP酶活力。采用渗低溶血,高速离心洗涤沉淀法制备红细胞膜制剂,以乌本苷作为酶的专一抑制剂测得酶活力。发现原发性高血压病人川芎治疗组与未用川芎治疗组的红细胞膜Na~ -K~ -ATP酶活力差别不显著,但与健康对照组比较则治疗及未治疗两级酶活力均显著降低。     

冠心病患者红细胞膜的ATP酶活性改变

研究正常青年人(青年对照组)、与患者同龄之正常人(同龄对照组)及冠心病患者红细胞膜Na~+-K~+ATP酶、Ca~(2+)ATP酶和Mg~(2+)ATP酶的活性;观察了运动试验和钙拮抗剂硝苯吡啶对上述三种酶活性的影响。结果表明:同龄对照组的三种ATP酶活性均低于青年对照组;静息状态下,冠心病患者的Na~+-K~+ATP酶活性低于同龄对照组,而Mg~(2+)ATP酶活性高于同龄对照组;运动试验后,同龄对照组Na~+-K~+ATP酶、冠心病组Na~+-K~+ATP酶和Ca~(2+)ATP酶活性增高。冠心病患者服用硝苯吡啶后,前述的ATP酶的改变不复存在。     

二氢槲皮素对脑缺血损伤模型大鼠炎症因子、氧化应激水平以及脑组织能量代谢影响

目的 :研究二氢槲皮素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用及机制。方法 :采用传统的双侧结扎法,建立大鼠急性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(20 mg/kg),二氢槲皮素高、中、低剂量组(60、30、15 mg/kg),每组10只。日给药1次,连续14 d,第15天复制脑缺血损伤大鼠模型,于手术后24 h取材。采用HE染色观察二氢槲皮素对大鼠脑组织结构的影响,ELISA法检测各组大鼠血清中IL-6、TNF-α和ICAM的含量。制备脑组织匀浆,采用比色法检测脑组织匀浆中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na~+-K~+-ATP酶以及Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性。结果 :与模型组比较,二氢槲皮素可明显改善脑缺血损伤模型大鼠脑组织的病理情况,能够降低血清中IL-6、TNF-α和ICAM的水平。降低脑组织中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px、LDH、Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性。结论 :二氢槲皮素可以减轻双侧结扎法造成的大鼠急性脑损伤,其作用机制可能与通过抑制炎症反应、抗氧化以及改善脑组织能量代谢相关。     

五项衰老生化指标的探讨

本文观察了2月、10月和24月龄大鼠红细胞膜Na~ -K~ -ATP酶、全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及红细胞膜和血浆脂质过氧化物(LP0)水平,结果显示10月龄与2月龄组相比,Na~ -K~ -ATP酶活性增高24.16%.GSH-PX活性增高4o.07%.红细胞膜LPO增高44.44%,血浆LPO增高了102.72%;24月龄与10月龄组相比,Na~ -K~ -ATP酶活性下降45.16%,GSH-PX活性下降了22.3%,SOD活性下降12.32%,而红细胞膜LPO升高30.0%.由此认为上述5项指标可用于评估机体衰老情况     

霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响

目的研究霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响。方法采用灌服甲状腺素建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠阴虚状态的影响。检测各组小鼠温度趋向性和负重游泳时间的变化,酶联免疫吸附法测定小鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4)。放射免疫分析法检测血清乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),环磷酸腺苷(cAMP),环磷酸鸟苷(cGMP),计算cAMP/cGMP比值。比色法检测肝组织Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的含量。结果与正常组相比,模型组小鼠热区停留比例和负重游泳时间明显下降(P 0. 01),T3、T4、cAMP和cAMP/cGMP的含量明显升高(P 0. 01、P 0. 001),LDH显著降低(P 0. 05); CK、Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶显著增高(P 0. 001)。与模型组相比,霍山石斛A、B、C、D 4个剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组小鼠的热区停留比例和负重游泳时间明显增高(P 0. 01、P 0. 05、P 0. 001),cAMP/cGMP明显降低(P 0. 05、P 0. 01),Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶明显降低(P 0. 01、P 0. 001),霍山石斛B、C、D剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组T3、T4显著降低(P 0. 05、P 001、P 0. 001),霍山石斛B、C剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组的LDH显著增高,CK显著降低(P 0. 01、P 0. 05、P 0. 001)。结论霍山石斛具有滋阴清热的作用,能降低甲状腺素诱导的肾阴虚小鼠的代谢酶活性和甲状腺素水平,调节能量代谢速率,提高阴虚小鼠的负重游泳时间,具有抗疲劳作用,其机制与调节能量代谢酶作用相关,进一步验证了霍山石斛药性偏寒。     

Duchenne型肌营养不良红细胞膜糖、脂质及Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶的变化

对10例Duchenne型肌营养不良(DMD)患者红细胞膜进行了膜糖、脂质及Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶活力的研究。结果为DMD红细胞膜唾液酸显著减少,而中性糖含量无变化;膜磷脂含量无明显改变,但膜胆固醇显著增加,磷脂/胆固醇之比显著降低,膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶活力显著升高。表明DMD红细胞膜有组成和功能上的改变。     

槲皮素在大鼠心肌损伤中的抗氧化作用

目的:评价槲皮素对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠损伤心肌的氧化应激活动功能的影响。方法:以Wistar大鼠为试验模型,分为对照组、ISO组(70mg/kg)干预组、ISO+不同浓度槲皮素干预组,分别测定Na~+-K~+ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶和MPO的活性、心肌脂质过氧化水平、心肌谷胱甘肽水平(GSH)、SOD、CAT、GSH-Px活性。结果:与对照组相比,ISO组的Na+-K+ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶、心肌谷胱甘肽水平、SOD、CAT、GSH-Px活性均明显降低(P<0.01),而MPO的活性、心肌脂质过氧化物水平明显增加(P<0.01);与ISO组相比,三个剂量槲皮素干预组可剂量依赖型地增加、心肌组织Na~+-K~+ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶活性,GSH水平和SOD、CAT、GSH-Px活性(P<0.01),并剂量依赖型降低MPO活性及心肌脂质过氧化水平(P<0.01)。结论:槲皮素有对抗心肌细胞氧化损伤的作用,其作用机制与槲皮素的抗氧化活性有关。     

白血病小鼠(L7811)红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶活性的测定

我们对白血病小鼠(L_(7811))及其接种传代的正常615纯系小鼠红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶催化ATP生成ADP产生的无机磷进行测定比较,发现L_(7811)小鼠红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶活性明显低于正常