云南地区结直肠癌患者RAS/BRAF/PIK3CA基因突变状态及与临床病理特征的关系

目的:本研究主要对结直肠癌患者的KRAS/NRAS/BRAF V600E/PIK3CA基因突变情况及与临床病理特征的关系进行探究。方法:我们对2018年01月至2020年01月在我院分子诊断中心进行基因检测的结直肠癌患者的KRAS/NRAS/BRAF V600E/PIK3CA突变情况进行回顾性分析,共纳入209例具有完整临床信息的患者,所有患者的基因检测都是采用高通量测序方法获得的,并对患者的人口统计学和临床信息进行分析。结果:209例结直肠癌患者中,KRAS、NRAS、BRAF V600E、PIK3CA突变例数分别为98例、7例、10例和25例,突变率分别为46.9%、3.3%、4.8%和12.0%。KRAS 2号外显子突变最常见,其中又以G12D亚型突变高发,肿瘤原发部位在直肠的患者和微卫星稳定的CRC患者KRAS突变率明显高于原发部位在左右半结肠和微卫星不稳定的患者(P<0.05);BRAF V600E在MSI-H的CRC患者中突变率显著高于MSS的患者(P<0.05);男性患者、既往没有吸烟史、有淋巴结转移、临床分期较早以及MSI-H的CRC患者有更高的PIK3CA...     

中国人群结直肠癌中PIK3CA基因突变分析

目的:PIK3CA基因编码ⅠA型磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3Ks)的p110催化亚基,致癌性的PIK3CA突变可通过激活P13K通路参与结直肠癌的发生发展。PIK3CA在西方结直肠癌患者中有较高的突变频率,但其在中国人结直肠癌中的突变情况尚不明确。本研究旨在探讨中国人结直肠癌中PIK3CA基因的突变频率、分布特点及其与结直肠癌的关系。方法:采用PCR产物直接测序法,对79例中国结直肠癌患者肿瘤标本中PIK3CA基因外显子9和外显子20中的突变进行检测分析。结果:在79例肿瘤标本中检出PIK3CA基因突变率为8.9%(7/79),其中外显子9突变率为6.3%(5/79),外显子20突变率为2.5%(2/79),其突变热点分布与既往文献报道基本相符。结论:中国人结直肠癌中存在一个PIK3CA基因突变的亚群,其E542K、E545K和H1047R突变,与以往报道的该基因的致癌性突变相一致,可能是这部分结直肠癌中PI3K信号通路激活的原因。     

PIK3CA和C-KIT基因突变与伴腋窝淋巴结转移乳腺癌临床病理特征及预后的关系

目的 探讨PIK3CA和C-KIT基因突变与乳腺癌伴腋窝淋巴结转移患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集84例乳腺癌伴淋巴结转移患者术后存档癌组织石蜡标本,采用Ion Torrent测序技术检测其PIK3CA、C-KIT基因的突变情况（突变率及突变位点分布）;分析两种基因突变与临床病理特征（年龄、月经、淋巴结转移数、癌栓、肿瘤大小、临床分期、ER／PR和HER-2表达情况）的关系;根据突变情况分组（突变组和未突变组）,随访3年无瘤生存率。结果 PIK3CA、C-KIT基因突变率分别为63.1％（53／84）和15.5％（13／84）,均为错义突变;其中PIK3CA第9、13和20号外显子突变依次有7、8和24例,第13、20号外显子双突变共14例,而C-KIT基因突变均位于第10号外显子。两基因突变均与HER-2表达有关,仅PIK3CA与临床分期和ER／PR表达有关,但其各外显子突变与临床病理特征无关。PIK3CA基因突变组的3年无瘤生存率为75.5％,未突变组为48.4％;而C-KIT基因突变组与未突变组分别为76.9％和62.0％,两种基因不同突变情况的差异均无统计学意义（P＞0.05）。年龄、月经、淋巴结转移数、肿瘤大小、临床分期、ER／PR表达、HER-2表达、PIK3CA基因突变和C-KIT基因突变均不是影响乳腺癌伴淋巴结转移患者预后的独立因素。结论 乳腺癌伴腋窝淋巴结转移患者PIK3CA的基因突变率较高,与临床分期、ER／PR及HER-2表达有关;C-KIT仅与HER-2表达有关,两种基因突变可能在乳腺癌的发生发展及腋窝淋巴结转移中起一定作用。     

结直肠癌K-Ras突变的影响因素分析

目的 探讨结直肠癌K-Ras突变的影响因素.方法 以150例结直肠癌患者为研究对象,同时选取200例健康成年人为对照组.观察两组K-Ras突变率的差异,以及不同临床病理特征的结直肠癌患者K-Ras突变率,分析结直肠癌患者K-Ras突变率的影响因素.结果 结直肠癌患者的K-Ras突变率为76.67%,明显高于对照组(6.50%),差异有统计学意义(P<0.01);单因素分析显示,有淋巴结转移、组织学分型为管腺癌、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、肿瘤直径≥5 cm的结直肠癌患者其K-Ras突变率较高(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,有淋巴结转移、组织学分型为管腺癌和TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期是影响结直肠癌患者K-Ras突变的危险因素,其OR值分别为4.235、4.857和5.023,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 K-Ras突变率在结直肠癌患者中较高,且与患者的组织学分型、TNM分期和有无淋巴结转移有关.     

K-ras、PIK3CA基因突变与结直肠癌患者临床特征的关系及相关性分析

目的探讨K-ras、PIK3CA基因突变与结直肠癌患者临床特征的关系,分析K-ras、PIK3CA基因表达的相关性。方法选取110例结直肠癌患者,均接受了K-ras、PIK3CA基因突变检测。分析结直肠癌患者的K-ras、PIK3CA基因突变情况,并比较不同临床特征的结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因的突变率,分析K-ras、PIK3CA基因表达的相关性。结果结直肠癌患者K-ras基因突变率为37.27%,PIK3CA基因突变率为18.18%;肿瘤直径≥5cm、直肠癌和Ⅲ~Ⅳ期患者K-ras基因突变率分别明显高于肿瘤直径﹤5cm、结肠癌和Ⅰ~Ⅱ期的患者(P﹤0.01);Ⅲ~Ⅳ期患者的PIK3CA基因突变率明显高于Ⅰ~Ⅱ期的患者(P﹤0.01);K-ras基因与PIK3CA基因表达呈正相关(r=0.514,P﹤0.01)。结论K-ras、PIK3CA基因突变与结直肠癌患者的临床特征有关,K-ras、PIK3CA基因表达有一定的相关性。     

结直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变检测及其临床意义

目的探讨结直肠癌患者组织中KRAS和BRAF基因突变情况,分析突变与临床病理特征的关系。方法应用荧光PCR-优化寡核苷酸探针法检测304例结直肠癌石蜡包埋标本中KRAS基因2号外显子的12和13密码子、BRAF基因的15号外显子的突变情况,分析KRAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系。结果 KRAS和BRAF基因在结直肠癌的突变率分别为38.8%(118/304)和4.3%(13/304)。KRAS基因突变阳性标本中12密码子的突变率为78.0%,其中p.G12D发生率最高,占总突变的45.3%;13密码子的突变率为22.0%。高年龄组(≥60岁)患者的KRAS基因突变率为47.2%(58/123),高于低年龄组(<60岁)的33.1%(60/181),差异有统计学意义(P<0.05)。转移性结直肠癌患者19例,其KRAS基因突变率为36.8%(7/19),与285例原发性结直肠癌患者的突变率(38.9%,111/285)差异无统计学意义(P>0.05)。BRAF基因在结肠、低分化、黏液腺癌患者中的突变率明显高于直肠、中或高分化和管状腺癌的患者。结论结直肠癌患者中KRAS基因突变的发生率较高,与年龄相关,而与性别、部位、病理类型和分化程度不相关。BRAF基因突变与肿瘤部位、病理类型和分化程度有关。原发性与转移性结直肠癌患者KRAS基因突变率无明显差异。     

结直肠癌中K-ras基因突变研究

目的研究K-ras基因突变表达与结直肠癌的相关性。方法采用实时荧光定量PCR方法检测89例患者结直肠癌组织中K-ras基因2号外显子12与13编码子突变情况,并结合病理资料进行分析。结果89例患者结直肠癌组织中K-ras基因突变者为37例,突变率为41．6％。其中12编码子突变为29例,突变率为32．6％。13编码子突变为8例,突变率为9．O％。K-ras基因突变与肿瘤位置、分化程度无明显相关性（P〉0．05）,与浸润深度、淋巴结转移、肝转移有相关性（P〈0．05）。淋巴结转移越多K-ras基因突变率越高,有肝转移者K-ras基因突变率高。结论K-ras基因突变在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,与浸润深度、淋巴结转移和肝转移密切相关。     

消化道恶性肿瘤高通量基因测序的生物统计分析

目的:观察TP53、KRAS、KDR、APC、MLH1及PIK3CA等56个基因在消化道恶性肿瘤中的突变情况,探讨驱动基因的诊疗意义。方法:选择胃食管癌15例、结直肠癌21例患者组织石蜡标本,运用高通量基因测序技术检测56个肿瘤突变高频基因,并进行生物统计分析。结果:36例标本检出34例有已知基因突变,突变基因为TP53、KRAS、MLH1、PIK3CA、KDR、APC、SMARCB1、KIT、EGFR、NRAS、STK11、SMO、SMAD4、CDH1、ERBB2、JAK2和RET共17种。其突变率由高到低依次为:TP53（75.00%）,KRAS（33.33%）,MLH1、PIK3CA、KDR（均为13.89%）,APC（11.76%）,SMARCB1（8.82%）,KIT、EGFR及NRAS（均为2.78%）。KRAS在结直肠癌中的突变率（47.62%）显著高于在胃食管癌中的突变率（13.33%）。TP53的突变率明显高于其他突变基因。在结直肠癌中KRAS的突变率显著高于KDR、APC、MLH1,未发现有统计学关联。结论:消化道恶性肿瘤TP53突变率较高,可能与病理组织分化程度低及淋巴结转移有关。KRAS在结直肠癌中较在胃食管癌中更易发生突变,存在部位差异。同时KRAS与KDR、APC、MLH1,在结直肠癌患者中存在共突变现象,提示结直肠癌的酪氨酸激酶通路和血管内皮生长因子受体基因在致癌过程中可能存在协同作用,导致肿瘤在结直肠中更易发生发展,选择靶向药物治疗时需考虑协同作用,以便科学精准用药。     

非小细胞肺癌BRAF突变及靶向治疗的研究进展

鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1（BRAF）基因是非小细胞肺癌（NSCLC）的驱动基因之一,在NSCLC中突变率为0.5％～4.9％,其中V600E突变类型占到一半以上。BRAF突变多见于女性、肺腺癌患者,亚裔人群中突变率相对较低。BRAF突变可与其他基因突变,如EGFR、K-Ras突变共存,但其临床意义尚不清楚。全球NSCLC患者数量庞大,尽管BRAF突变率在NSCLC中较低,低突变率基因及其靶向治疗的研究仍然相当重要。目前BRAF抑制剂治疗NSCLC正在临床试验中。本文就NSCLC中BRAF突变及靶向治疗的研究进展进行综述。     

中国非小细胞肺癌患者K-Ras和EGFR基因突变与临床病理特征的关系

目的 探讨中国非小细胞肺癌（NSCLC）患者中K-Ras和表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理特征的关系。方法 回顾性分析2011年7月至2013年8月广州医科大学附属第一医院收治的381例NSCLC患者的临床病理特征,并应用扩增突变阻滞系统（ARMS）检测其癌组织中EGFR基因18、19、20、21外显子共21个点突变和K-Ras基因12、13密码子共6个点突变,分析其突变情况及与临床病理特征的相关性。结果 21例（5.5％）存在K-Ras基因突变,其中20例12密码子,1例13密码子Asp突变;146例（38.3％）存在EGFR突变,其中4例18外显子突变（G719S）,52例19号外显子序列缺失突变,3例20外显子序列缺失突变,85例21外显子突变（81例L858R,4例L861Q）,2例双突变。男性患者K-Ras基因突变率高于女性患者,差异有统计学意义（6.8％ vs. 2.5％, P=0.018）。EGFR基因突变与性别、吸烟史、临床分期、全身转移、病理类型均有关（P＜0.05）。二分类Logistic回归分析显示,病理类型和性别与EGFR基因突变密切相关。结论 中国NSCLC患者中EGFR突变常见,该突变与腺癌有关;K-Ras基因突变率较低,多见于男性,其他相关因素尚需进一步研究。     

KRAS, BRAF and PIK3CA mutations in human colorectal cancer: relationship with metastatic colorectal cancer

Many abnormal gene expressions and dysregulated signaling pathways have been found in human colorectal cancer. Activating mutations of the KRAS, BRAF or PIK3CA oncogenes are frequently found in colorectal cancer. The aim of the study was to investigate the molecular occurrence of KRAS, BRAF and PIK3CA mutations in the colorectal tumorigenesis and to study the association of these events with clinicopathological parameters. In our study, DNA was extracted from 200 cases of human colorectal cancer tissue samples. KRAS, BRAF and PIK3CA mutation analysis was performed by PCR and pyrosequencing. Using statistical methods, we analyzed the relationships between the gene mutations and clinicopathological parameters. KRAS point mutations were detected in 63/200 patients (31.5%), with codon 12 mutations in 52/200 patients (26%), codon 13 mutations in 10/200 patients (5%) and codon 12.13 bi-mutations in 1/200 patients (0.5%). The V600E mutations of BRAF were detected in 14/200 patients (7%). PIK3CA point mutations (exon 9, exon 20) were detected in 25/200 (12.5%) patients, exon 9 mutatons in 12/200 patients (6%) and exon 20 mutations in 13/200 (6.5%). Our study suggested that both KRAS and BRAF mutations are exclusive, but KRAS and PIK3CA mutations are coexistent. The mutational status of BRAF did not correlate with Dukes' staging, histological type, age and gender. However, strong associations were found between KRAS, PIK3CA mutations and Dukes' staging (staging D, 12/25, 48%). Notably, our data indicated that colorectal cancers with KRAS and PIK3CA bi-mutations are more likely to develop into liver metastasis.     

Molecular spectrum of KRAS,BRAF, and PIK3CA gene mutation: determination of frequency,distribution pattern in Indian colorectal carcinoma

Molecular evaluation of KRAS, BRAF, and PIK3CA mutation has become an important part in colorectal carcinoma evaluation, and their alterations may determine the therapeutic response to anti-EGFR therapy. The current study demonstrates the evaluation of KRAS, BRAF, and PIK3CA mutation using direct sequencing in 204 samples. The frequency of KRAS, BRAF, and PIK3CA mutations was 23.5, 9.8, and 5.9 %, respectively. Five different substitution mutations at KRAS codon 12 (G12S, G12D, G12A, G12V, and G12C) and one substitution type at codon 13 (G13D) were observed. KRAS mutations were significantly higher in patients who were >50 years, and were associated with moderate/poorly differentiated tumors and adenocarcinomas. All mutations in BRAF gene were of V600E type, which were frequent in patients who were ≤50 years. Unlike KRAS mutations, BRAF mutations were more frequent in well-differentiated tumors and right-sided tumors. PIK3CA–E545K was the most recurrent mutation while other mutations detected were T544I, Q546R, H1047R, G1049S, and D1056N. No significant association of PIK3CA mutation with age, tumor differentiation, location, and other parameters was noted. No concomitant mutation of KRAS and BRAF mutations was observed, while, interestingly, five cases showed concurrent mutation of KRAS and PIK3CA mutations. In conclusion, to our knowledge, this is the first study to evaluate the PIK3CA mutation in Indian CRC patients. The frequency of KRAS, BRAF, and PIK3CA was similar to worldwide reports. Furthermore, identification of molecular markers has unique strengths, and can provide insights into the pathogenic process and help optimize personalized prevention and therapy.     

肺腺癌中LN 5蛋白表达及其与EGFR突变关系的临床研究

目的 探讨肺腺癌组织中层粘连蛋白 5（LN-5）表达及其与人表皮生长因子受体（EGFR）基因突变关系。方法 收集2015年1月至2015年12月57例肺腺癌及其配对癌旁组织标本,采用免疫组化SP法检测LN 5蛋白表达,同时通过液相芯片技术检测EGFR基因突变状态,分析LN 5表达与肺腺癌临床病理特征的关系以及与EGFR基因突变的相关性。 结果肺腺癌组织中LN 5蛋白阳性表达率为21.1％（12／57）,癌旁组织中为1.7％（1／57）,差异有统计学意义（P＜0.05）。EGFR敏感突变（E19+E21）的发生率为43.9％（25／57）,EGFR非敏感突变（野生型+E20）的发生率为56.1％（32／57）。LN-5蛋白表达与淋巴结转移和EGFR突变有关（P＜0.05）,与TNM分期无关（P＞0.05）。LN 5表达与EGFR突变呈负相关（r=-0.283,P＜0.05）。结论 LN 5在肺腺癌组织中的表达升高,且其表达与EGFR突变状态具有相关性。     

粪便DNA中联合SFRP1及SEPT9基因甲基化检测对#br# 老年性结直肠癌早期诊断的临床研究#br#

目的 探讨粪便DNA中联合分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）及胞裂蛋白9（SEPT9）基因甲基化检测对老年性结直肠癌（CRC）早期诊断的临床价值。方法 选取我院从2016年1月至2016年9月确诊的35例年龄＞60岁CRC患者为研究组,选取同期35例＞60岁正常体检者为对照组。提取CRC患者和正常体检者粪便DNA,采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别检测SFRP1及SEPT9基因的甲基化状态;比较CRC患者单基因和联合双基因甲基化检出率的差异,以及CRC患者联合双基因甲基化检出率与对照组的差异;分析CRC患者SFRP1或SEPT9基因甲基化与临床病理特征（如年龄、性别、肿瘤位置）的关系。 结果 CRC患者粪便DNA中SFRP1及SEPT9基因甲基化检出率分别为45.71％（16／35）和51.43％（18／35）,均显著高于对照组的8.57％（3／35）和14.29％（5／35）,差异均有统计学意义（P＜0.01）;联合双基因检测结果显示, 82.86％（29／35）的CRC患者粪便DNA中至少存在一个基因的甲基化,显著高于单基因检出率（P＜001）,亦高于对照组的17.14％（6／35）,差异有统计学意义（P＜001）。CRC患者SFRP1或SEPT9基因甲基化与年龄、性别、肿瘤位置均无关（P＞0.05）。结论 粪便DNA中联合SFRP1及SEPT9基因甲基化检测比单基因检测更加敏感,对老年性CRC早期诊断具有重要的应用价值。     

胃癌患者错配修复缺陷和PIK3CA基因突变与临床病理特征的关系

目的:分析胃癌中错配修复缺陷(dMMR)和PIK3CA基因突变分别与临床病理特征的关联,以及两者之间的相关性。方法:选取本中心554例胃癌肿瘤组织标本,收集临床病理参数。免疫组化检测错配修复蛋白MSH2、MSH6、MLH1和PMS2,评判是否为dMMR。ARMS-PCR检测PIK3CA基因突变。应用统计学方法,分析dMMR和PIK3CA突变与临床病理特征的关系,以及dMMR与PIK3CA突变的关联。结果:554例胃癌患者中,dMMR 30例(5.4%)。其中,MLH1和PMS2双缺失27例(90.0%),MSH2和MSH6双缺失2例(6.7%),PMS2缺失1例（3.3%）。PIK3CA突变34例（6.1%）,其中15例E545 K (44.1%), 7例E542 K (20.1%),1例E545D(2.9%),6例H1047R(17.6%),4例H1047L(11.8%),1例E545K和E542K双突变（2.9%）。9号外显子突变24例（70.6%）,20号外显子突变10例（29.4%）。单因素分析发现,dMMR与女性,年龄> 65岁,肿瘤直径> 5 cm,肿瘤未侵及浆...     

结直肠癌组织中KRAS和BRAF基因突变与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨结直肠癌组织中KRAS和BRAF基因突变与临床病理和预后的关系。方法:采用扩增阻滞突变系统（ARMS）方法对134例结直肠癌组织进行回顾性分析。结果:134例CRC组织中KRAS基因突变率49.3%（66/134）,第2外显子突变率42.5%（57/134）,其中12及13密码子突变率分别为35.1%（47/134）和7.5%（10/134）,第3外显子61密码子突变率1.5%（2/134）,第4外显子117/146密码子突变率5.2%（7/134）,BRAF V600E突变率4.5%（6/134）。左半结肠KRAS基因突变率54.5%（54/99）高于右半结肠34.3%（12/35）,差异有统计学意义（P＜0.05）,右半结肠BRAF基因突变率14.3%（5/35）高于左半结肠1.0%（1/99）,差异有统计学意义（P＜0.05）,而KRAS和BRAF基因突变与性别、年龄、民族、肿块大小、分化程度、淋巴结转移及病理分期等临床病理特征,差异均无统计学意义（P＞0.05）。KRAS基因突变型CRC患者的中位生存时间48个月（39.9%）,与野生型47个月（46.2%）相比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。BRAF基因突变型CRC患者的中位生存时间21个月（26.7%）,与野生型48个月（44.7%）相比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素COX回归风险模型结果显示,BRAF基因突变型是CRC患者预后不良的独立危险因素（B=1.664,OR=5.278,95%CI:1.505~18.516, P＜0.05）,而性别、年龄、民族、肿块大小、分化程度、肿瘤部位、淋巴结转移及病理分期均不是CRC患者生存时间的独立危险因素（P＞0.05）。结论:CRC组织中KRAS基因突变率高,BRAF基因突变率低。KRAS和BRAF基因突变型与肿瘤部位有关。BRAF基因突变型是CRC预后不良的独立危险因素。     

SATB1、KISS1在胃腺癌组织芯片中的表达及其临床意义

目的 探讨特异性核基质结合区蛋白-1（SATB1）和亲水性蛋白-1（KISS1）在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测76例胃腺癌组织及19例癌旁正常胃黏膜组织中SATB1、KISS1的表达情况,并分析其表达与临床病理特征和预后的关系。结果 SATB1、KISS1在胃腺癌组织中的阳性表达率分别为80.3％（61／76）和14.5％（11／76）,与正常胃黏膜组织的10.5％（2／19）、89.5％（17／19）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。SATB1和KISS1的表达与胃癌淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤直径和组织分化程度无关（P＞0.05）;SATB1和KISS1的表达呈负相关（r=-0.736,P＜0。01）。SATB1阳性和阴性表达患者的中位总生存时间（OS）分别为16.8个月（95％CI：10.124～21.876个月）、42.2个月（95％CI：31.804～52.196个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）;KISS1阳性和阴性表达患者的中位OS分别为45.1个月（95％ CI：36.736～53.264个月）、13.6个月（95％ CI：9.971～16.029个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃腺癌组织中SATB1、KISS1的表达与胃腺癌发生、发展及侵袭性有关,二者均可作为评价胃腺癌生物学行为的指标。