组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导脑胶质瘤细胞凋亡及其机制的研究

背景与目的:使用分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:以不同药物浓度梯度与U251细胞分别共培养24、48和72h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,Transwell法检测药物作用前后U251细胞迁移能力的变化,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量,免疫印迹检测IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白和聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达。结果:MS-275能显著抑制U251细胞的增殖。MS-275药物浓度40nmol/mL,与U251共培养72h,细胞增殖抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用72h后,U251细胞凋亡率为(29.000±2.306)%;实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量随药物作用时间的延长而降低,免疫印迹检测提示IκB-α蛋白表达水平降低,IκB-α蛋白磷酸化被抑制,PARP被剪切。结论:MS-275对胶质瘤细胞的增殖和迁移抑制作用具有浓度和时间依赖性,其机制是通过抑制IκB-α蛋白磷酸化诱导凋亡实现的。     

褪黑素联合顺铂通过诱导细胞凋亡抑制人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖

目的：研究褪黑素（melatonin,MT）和顺铂（cisplatin,DDP）单独或联合应用对人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖及凋亡的影响。方法：采用不同质量浓度MT和DDP单独或联合处理U251和SHG-44细胞,并设对照组（不加任何药物）及乙醇组（加入乙醇）;以CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期,采用两药相互作用指数（coefficient of drug interaction,CDI）评估MT是否影响U251和SHG-44细胞对DDP的敏感性。结果：CCK-8结果显示,单用MT或DDP可浓度依赖性抑制U251和SHG-44细胞的增殖,MT还可协同增强DDP对U251和SHG-44细胞的增殖抑制作用（CDI<1）。流式细胞术检测结果显示,MT可促进U251和SHG-44细胞的凋亡,MT可增强DDP对U251和SHG-44细胞的凋亡诱导作用,0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP组U251和SHG-44的细胞凋亡率显著高于20 μg/ml DDP组\[（66.3±1.0）% vs （45.9±1.7）%,（35.5±0.8）% vs （15.5±0.8%）;均P<0.01\];而且0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP 组U251和SHG-44细胞的G1期比例显著高于20 μg/ml DDP组\[（52.4±2.1）% vs （27.9±1.5）%,（39.7±1.5）% vs （27.7±1.3）%;均P<001\]。结论：MT能显著增强DDP对人胶质瘤细胞U251和SHG-44的凋亡诱导作用,从而协同增强DDP对细胞增殖的抑制作用,有望成为人胶质瘤化疗的辅助药物。     

RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响#br#

目的探讨RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。 方法采用脂质Attractene reagent将靶向沉默UHRF1的质粒LV UHRF1 shRNA和阴性对照质粒LV scramble shRNA分别转染至U251细胞（LV UHRF1 shRNA组和LV scramble shRNA组）,以仅转染脂质体的细胞为对照组;采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组转染48 h后的UHRF1 mRNA水平,采用MTT法检测各组转染24、48、72 h的增殖情况,BrdU染色法检测转染12、24、48、72 h后的BrdU阳性率,Annexin V FITC／PI双染流式细胞术检测转染48、72 h后的凋亡率,Western blotting检测转染72 h后的凋亡相关蛋白（Bax、caspase 3和Bcl 2）水平。 结果QPCR检测结果显示对照组、LV scramble shRNA组和LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平分别为1098±0136、1127±0193和0309±0073,LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平低于对照组和LV scramble shRNA组（P＜005）。与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV UHRF1 shRNA组在以上时间点细胞增殖率和BrdU阳性率均降低,差异有统计学意义（P＜005）;LV UHRF1 shRNA组的凋亡率为（2571±187）％,均高于对照组的（773±066）％和（786±059）％,差异有统计学意义（P＜005）;Western blotting检测结果显示与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV scramble shRNA组的Bax、caspase 3水平升高,而Bcl 2水平降低,差异有统计学意义（P＜005）;对照组和LV scramble shRNA组以上指标的差异均无统计学意义（P＞005）。 结论在U251细胞中的下调UHRF1可抑制增殖并诱导凋亡,UHRF1发挥类似癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACI）对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响。方法 体外培养神经胶质瘤细胞株U251,用脂质体转染MKK7-siRNA1、MKK7-siRNA2和对照siRNA,48 h后Western blot检测MKK7表达及JNK/c-Jun活性,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况;用0.5 μM组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（trichostatin A, TSA）处理细胞8 h,DMSO作对照,Western blot检测MKK7、p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun表达或磷酸化水平;用TSA分别处理细胞8、12、24 h,检测各时间点细胞增殖率;用其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括伏立诺他（suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA）,丙戊酸（valproic acid, VPA）,M344处理细胞检测MKK7表达及细胞增殖。结果 同对照组相比,沉默MKK7表达抑制了JNK/c-Jun活性和细胞增殖（P=0.008）;TSA处理细胞8 h显著抑制MKK7表达及JNK/c-Jun活性,SAHA、M344、VPA均显著抑制MKK7表达。TSA处理细胞8 h没有抑制细胞增殖,处理12 h显著抑制增殖（P=0.006）, 24 h抑制效应更明显（P=0.002）; SAHA（P=0.001）, M344（P=0.008）或VPA（P=0.002）处理细胞12 h均抑制了细胞增殖。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过抑制MKK7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性,进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平;采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞,分为miR-147 mimics组和NC组,检测两组转染效率;进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织;与NC组比较,miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低,但是,miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力,并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

miR-192在胶质瘤U251细胞中的表达及对其增殖、迁移及凋亡能力的影响

目的 探讨miR-192在胶质瘤U251细胞中的表达及对其增殖、迁移及凋亡等生物学能力的影响.方法 采用RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、LN18、U373和正常人脑胶质细胞株中HEB的表达水平.采用脂质体转染法将miR-192类似物(miR-192 mimics)和阴性对照(miR-negtive control...     

FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞凋亡的影响

目的：研究FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法：Real-time PCR检测35例脑胶质瘤及相应癌旁组织中FUBP1 mRNA的表达。设计并合成FUBP1基因特异性的siRNA,转染U251细胞。转染后,western blot检测转染后FUBP1蛋白的表达,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果：与癌旁组织相比,FUBP1 mRNA在脑胶质瘤组织中表达明显上调。转染后,U251细胞中的FUBP1蛋白表达明显降低,同时,凋亡率明显增加。结论：FUBP1基因在脑胶质瘤中存在表达异常,其表达降低能够促进细胞凋亡。     

FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞凋亡的影响

目的:研究FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法:Real-time PCR检测35例脑胶质瘤及相应癌旁组织中FUBP1 mRNA的表达。设计并合成FUBP1基因特异性的siRNA,转染U251细胞。转染后,western blot检测转染后FUBP1蛋白的表达,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果:与癌旁组织相比,FUBP1 mRNA在脑胶质瘤组织中表达明显上调。转染后,U251细胞中的FUBP1蛋白表达明显降低,同时,凋亡率明显增加。结论:FUBP1基因在脑胶质瘤中存在表达异常,其表达降低能够促进细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对神经胶质瘤的作用研究

正常细胞的分化以及代谢行为的调节依赖组蛋白乙酰基转移酶和组蛋白去乙酰化酶之间的平衡。一旦这种平衡关系被打破,细胞或组织就容易发生癌变,神经胶质瘤也不例外。神经胶质瘤是一种恶性度高且预后极差的颅内肿瘤,其作用机制尚不明确且呈浸润性生长。因此在治疗手段方面尚无行之有效的方法。组蛋白去乙酰化酶抑制剂作为一种新型的化疗药物为胶质瘤的治疗提供了新的方向。它通过阻碍细胞周期、诱导细胞分化和凋亡以及抑制肿瘤血管生成来抑制神经胶质瘤的生长和增殖。本文旨在从化学结构特点和对神经胶质瘤作用机制两方面阐述组蛋白去乙酰化酶抑制剂．并对新的一类组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸及其衍生物的研究作一综述．     

RNAi抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

  目的   构建针对PIAS3的RNAi质粒载体,初步探讨抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。   方法   目的:方法:构建3个RNAi载体,用脂质体法将其转染胶质瘤细胞系CHG-5,通过半定量RT-PCR筛选干扰效率最高的重组RNAi质粒。将该RNAi质粒转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株,用半定量RT-PCR和Western blot检测PIAS3的表达。Annexin V2 FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。   结果   转染干扰质粒的细胞株PIAS3基因和蛋白表达均有减弱。流式细胞仪分析,抑制PIAS3表达能够诱导胶质瘤U251细胞拮抗凋亡（P < 0.01）,同时出现细胞周期改变,表现为G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低,具有显著性差异（P < 0.05）。   结论   下调PIAS3基因表达使U251阻滞在G2期,拮抗细胞凋亡。       

DNA甲基转移酶抑制剂对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的体外研究

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 取对数生长期LoVo细胞,实验组加入终浓度分别为0.1、1、5、10 μmol／L SGI-1027的培养液,对照组用含10％胎牛血清的RPMI 1640 培养基同步培养。MTT法检测SGI-1027作用于LoVo细胞24、48、72 h的增殖抑制率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;SGI-1027处理后每个浓度收集细胞1×106个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）／碘化丙啶（PI）双染或PI单染流式细胞术分别检测SGI-1027处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况;Western blotting检测SGI-1027对PI3K／Akt通路的影响。 结果 倒置相差显微镜观察显示,随SGI-1027浓度和作用时间的增加,LoVo细胞的凋亡形态学改变更为显著。除0.1 μmol／L SGI-1027处理24 h后的LoVo细胞增殖抑制率与对照组无差异外,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,SGI-1027对LoVo细胞的增殖抑制作用不断增强。与对照组比较,SGI-1027（0.1～10 μmol／L）处理LoVo细胞24、48 h的凋亡率均升高,且各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,1～10 μmol／L SGI-1027处理后G0／G1期细胞比例及PTEN水平均高于对照组,S期和G2／M期细胞比例及Akt水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 SGI-1027可抑制LoVo细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0／G1期阻滞,可能与其抑制PI3K／Akt通路激活有关,且SGI-1027作用的时间和浓度均对LoVo 细胞恶性行为有影响。     

miR-125a表达对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响分析

目的 探讨microRNA-125a（miR-125a）对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）法检测人肝癌HepG2细胞及人正常肝细胞7702中的miR-125a水平,同时采用真核表达载体pGenesil-1质粒制备过表达miR-125a的重组质粒pGenesil-miR-125a及表达随机序列的阴性对照pGenesil-NC,根据实验设计将HepG2细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组和过表达组,其中空白对照组未进行转染,阴性对照组和过表达组分别成功转染pGenesil-NC和pGenesil-miR-125a,待3组转染24、48、72及96 h后采用qPCR法检测各组的miR-125a水平,噻唑盐比色法检测各组转染24、48、72及96 h的细胞增殖率,分别采用Hoechst染色和流式细胞术检测转染24、48 h后的凋亡指数和caspase-3活化率来评价凋亡情况,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞周期,同时采用免疫印迹法检测转染48 h后对凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）表达的影响。结果 HepG2细胞中miR-125a水平为（0.24±0.06）,低于正常肝细胞7702细胞（P<0.05）;与阴性表达组相比,过表达组转染24、48、72及96 h的miR-125a水平升高,增殖率降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与其余两组相比,过表达组转染后的凋亡指数、caspase-3活化率、G0/G1期细胞比例及Bax和Cleaved caspase-3水平均升高,S和G2/M期细胞比例及Bcl-2水平均降低,以上差异有统计学意义（P<0.05）。     

抗癌生物活性肽-S对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨抗癌生物活性肽-S(ACBP-s)对人胃癌细胞MGC-803细胞周期和凋亡的影响.方法 (1)体外实验:以不同浓度ACBP-S处理人胃癌MGC-803细胞,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率;电镜下观察细胞凋亡现象;流式细胞术分析细胞周期与凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测p27基因mRNA和蛋白表达的变化.(2)动物体内实验:建立裸鼠胃癌移植瘤模型,每只裸鼠经尾静脉注射7μg ACBP-S,隔日给药,2周后处死,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)5.0、10.0和15.0μg/ml的ACBP-S均能抑制MGC-803细胞的生长,且随浓度增加和作用时间延长抑瘤率增加.电镜下可见,MGC-803细胞经15.0μg/ml ACBP-S作用48h后,呈现典型的凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,5.0和20.0μg/ml ACBP-S作用MGC-803细胞24h的凋亡率较高,分别为(5.7±0.2)%和(13.9±0.6)%(P<0.05);20.0μg/ml ACBP-S可使G0/G1期MGC-803细胞的构成比明显上升.ACBP-S上调MGC-803细胞p27基因mRNA和蛋白的表达.(2)ACBP-S能抑制胃癌移植瘤的生长,抑制率达34.2%.镜下可见,治疗组肿瘤组织中出现大片坏死及大量凋亡细胞,异型细胞及核分裂相减少.免疫组化分析结果显示,治疗组Bcl-2和PCNA表达降低,Bax表达增高.结论 ACBP-S能抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,其作用机制与调控胃癌细胞的细胞周期和凋亡有关.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰-双羟肟酸对乳腺癌细胞增殖的影响

背景与目的:目前乳腺癌发病率仍居首位,是严重威胁女性健康的主要肿瘤之一。组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰双羟肟酸(suberic bishydroxamate,suberoyl bishydroxamic acid,SBHA)能够抑制组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)中的HDAC1和HDAC3的活性,选择性抑制某些肿瘤的生长而对正常细胞无不良反应。本实验旨在研究SBHA对人乳腺癌细胞增殖及周期的影响。方法:将不同浓度的SBHA以不同时间作用于乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞,用WST-8法检测其对细胞增殖能力的影响;用相差显微镜观察药物对细胞形态学变化;用流式细胞仪分析细胞周期。结果:SBHA呈时间和剂量依赖性抑制乳腺癌细胞增殖,使细胞形态发生明显变化,明显使G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P>0.05)。结论:SBHA具有抑制人乳腺癌细胞增殖作用,使细胞阻滞在G0～G1期。     

SK-7041, a new histone deacetylase inhibitor, induces G2-M cell cycle arrest and apoptosis in pancreatic cancer cell lines

A novel hybrid synthetic histone deacetylase inhibitor, SK-7041, was synthesized from hydroaxamic acid of trichostatin A (TSA) and pyridyl ring of MS-275. TSA and SK-7041 both induced apoptosis and G2-M cell cycle arrest in pancreatic cancer cell lines. The expressions of p21 and cyclin D2 were up-regulated and that of cyclin B1 was down-regulated by TSA or SK-7041. The expression levels of Mcl-1 and Bcl-XL but not those of Bcl-2, Bax, and Bak were suppressed by TSA or SK-7041 treatment. SK-7041 or TSA induced apoptosis and G2-M cell cycle arrest by up-regulating p21 and down-regulating cyclin B1, Mcl-1, and Bcl-XL.     

Genistein对绒毛膜癌细胞增殖、分化、细胞周期和凋亡的影响

目的：研究genistein对绒毛膜癌细胞形态学、增殖、分化、细胞周期和凋亡的影响。方法：在绒毛膜癌细胞JAR的培养基中加入不同浓度的genistein,每隔24h吸培养上清,测人绒毛膜促性腺激素(HCG)的含量。采用MTT比色法检测不同浓度genistein对JAR细胞增殖的影响。采用HE染色、电镜和流式细胞术检测JAR细胞经genistein处理72h,细胞形态学和超微结构的变化以及genistein对细胞周期和凋亡的影响。结果：Genistein能抑制绒毛膜癌细胞JAR的增殖和诱导凋亡。100nmoI/mL genistein使JAR细胞HCG分泌量增加,并呈时间依赖性；与对照组G_2/M为(17.44±6.1 6)%比较,100 nmoL/m1L genistein使细胞周期阻滞在G_2/M期,G_2/M期比例为(67.14±1.02)%；Annexin-V和PI双染色提示100nmol/L genistein作用JAR细胞72h后,能导致大部分细胞发生晚期凋亡和坏死。结论：Genistein能抑制肿瘤细胞增殖,诱导分化和凋亡,导致细胞周期阻滞。     

The effect of antisense epidermal growth factor receptor (EGFR) RNA on the proliferation of human glioma cells and induction of cell apoptosis

Malignantgliomaisoneofthemostdevastatingdiseases.Theprognosisofpatientshasnotbeenimprovedevenwhenthecurrentlyavailablec0mbinedtherapiesareused.Astheknowledge0ftumorbi0l0gyandmoleculargeneticshasgreatlyincreasedoverthepastdecades,ithasbeenshownthattumorigenesisbasicallyresultsfromtheactivation0fprotooncogenesandinactivati0n0ftumorsuppressorgenes.Sincegenesencodinggrowthfactorsandtheirreceptorsarecloselyrelatedtooncogenes,muchattentionhasbeenfocusedontheroleofgrowthfactorsandtheirreceptorsinthep…     

MicroRNA-27a对U251胶质瘤细胞的影响

目的 探讨microRNA-27a(miR-27a)对U251胶质瘤细胞的影响。方法 采用体外瞬时转染的方法过表达或抑制U251细胞中的miR-27a,MTT方法检测细胞的增殖情况,Transwell侵袭试验测定U251胶质瘤细胞的侵袭能力,Real-time PCR方法测定U251细胞中miR-27a和PPARγ的含量。结果 抑制miR-27a可降低U251胶质瘤细胞增殖能力,减弱U251胶质瘤细胞侵袭能力,增加PPARγ的含量;过表达miR-27a促进U251胶质瘤细胞增殖能力,提高U251胶质瘤细胞侵袭能力,减少PPARγ的含量。结论 抑制miR-27a有利于降低U251胶质瘤细胞的增殖能力和侵袭能力。