体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）,分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组（P＜0.05）。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80％,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85α siRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞（P＜0.05）。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组（P＜0.05）。Transwell实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组（P＜0.05）。结论 通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

AKR1C1 在非小细胞肺癌的表达及功能分析

目的 探讨醛酮还原酶家族1成员C1（AKR1C1）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织和细胞株中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测50例NSCLC组织芯片中肿瘤及癌旁组织中AKR1C1的表达。选取NCI-H460细胞分别转染AKR1C1 siRNA（AKR1C1干扰组）和AKR1C阴性对照siRNA（阴性对照组）慢病毒载体,Western blotting验证转染效率, MTT法、低密度细胞集落形成实验、Transwell实验和划痕试验检测干扰AKR1C1表达对细胞增殖、集落形成、侵袭能力的影响,同时另设空白对照组（未转染慢病毒）。结果 NSCLC组织中AKR1C1的高表达率为94.0％（47／50）,高于癌旁组织的6.0％（3／50）,差异有统计学意义（P＜0.05）。AKR1C1干扰组细胞中AKR1C1表达量较阴性对照组下调（P＜0.05）。MTT法显示AKR1C1干扰组与阴性对照组细胞增殖率无显著性差异（P＞0.05）;AKR1C1干扰组、阴性对照组和空白对照组NCI-H460细胞的克隆数分别为69.60±4.03、69.00±1.63和70.33±2.05,组间差异无统计学意义（P＞0.05）;Transwell实验显示,AKR1C1干扰组穿膜细胞数为15.30±2.50,低于阴性对照组的30.00±2.20和空白对照组的31.30±2.40,差异有统计学意义（P＜0.05）。划痕试验显示,AKR1C1干扰组细胞迁移相对距离为0.13±0.05,低于阴性对照组的0.56±0.05和空白对照组的0.60±0.08,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 AKR1C1在NSCLC组织中高表达,其可能与NSCLC转移相关。     

FAM21对绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响

目的 探讨FAM21对人绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响。方法 设计并合成2条FAM21特异性小分子干扰RNA（siRNA 1和siRNA 2）及1条随机序列siRNA（control siRNA）,瞬时转染JEG-3细胞,依次设为siRNA1组、siRNA 2组和control siRNA组。同时选取未行转染的JEG-3细胞作空白对照（空白组）。普通PCR法检测正常胎盘滋养细胞株HTR-8/Sveno和JEG-3细胞中FAM21 mRNA水平。分别于转染后24、48h采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测各组FAM21的mRNA和蛋白水平,Transwell法检测各组转染24h后的细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测各组转染24h后的迁移侵袭相关基因（KISS 1、BRMS1和INSL4）的mRNA水平。结果 JEG-3细胞的FAM21 mRNA水平高于HTR-8／Svneo细胞（P＜0.05）。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的FAM21 mRNA和转染48h后的FAM21蛋白水平均低于control siRNA组和空白组（P＜0.05）,转染24h后的迁移和侵袭能力均低于control siRNA组和空白组（P＜0.05）。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的KISS-1和BRMS1 mRNA水平降低,而INSL4 mRNA水平升高,与其余两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;control siRNA组和空白组上述指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 FAM21在人绒毛膜癌JEG-3细胞中具有调节迁移和侵袭的功能,在绒毛膜癌的病理机制中发挥了重要的作用。     

c-Met siRNA 对食管鳞癌细胞CE81T-4生物学特性的影响

[目的]探讨c-Met siRNA对食管鳞癌细胞CE81T-4生物学特性的影响.[方法]利用siRNA技术,采用带有荧光的慢病毒包装的c-Met siRNA稳定转染CE81T-4,并设立转染慢病毒包装的c-Met siRNA的CE81T-4为实验组,转染空慢病毒作为阴性对照,未转染CE81T-4细胞作为空白对照.于荧光倒置显微镜下观察转染效果.采用qRT-PCR检测三组细胞中c-Met mRNA的表达量,Western blot检测c-Met蛋白表达.利用MTT、划痕实验、Transwell及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、周期及凋亡.[结果]转染c-Met siRNA后,荧光倒置显微镜下可见广泛绿色荧光表达;实验组c-Met mRNA的表达量(0.1758±0.0150)显著低于阴性对照组(0.3384±0.0346)和空白对照组(0.3759±0.0252)(P＜0.05).实验组c-Met蛋白表达显影较空白对照组及阴性对照组低;实验组细胞的增殖能力显著降低,与阴性对照组和空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell体外侵袭实验提示实验组的侵袭迁移个数为135±11.79,显著低于空白对照组(186±14.98)及阴性对照组(178±12.53)(P＜0.05).实验组细胞凋亡率(17.87％±1.60％)高于阴性对照组(4.93％±2.49％)及空白对照组(4.37％±1.60％)(P＜0.05).实验组G0/G1期细胞比例(48.57％±4.91％)较阴性对照组(38.13％±3.23％)和空白对照组(37.07％±2.32％)显著增多(P＜0.05).[结论]c-MetsiRNA可增加食管鳞癌细胞的凋亡率,阻滞细胞周期在G0/G1期,降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

沉默mGluR5对卵巢癌SKOV3细胞生物学特性的影响及其机制研究

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响及可能的机制。方法 采用靶向mGluR5表达的特异siRNA 转染卵巢癌SKOV3细胞（转染组）,同时设置转染无义序列的阴性对照组。转染48 h,采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测siRNA对mGluR5的沉默效果;采用CCK-8法、EdU细胞荧光染色实验、Hoechst 33342细胞染色实验、划痕实验检测沉默mGluR5表达后SKOV3细胞的活性、增殖、凋亡和迁移情况;采用Western blotting检测PTEN／Akt信号通路相关蛋白的表达情况。结果 QPCR检测显示,转染组中mGluR5 mRNA的表达水平降至（18.3±2.3）％,显著低于阴性对照组（P＜0.05）。CCK-8法检测显示,转染72 h阴性对照组的吸光值为4.1±0.2,高于转染组的2.4±0.3（P＜0.05）。EdU免疫荧光染色实验显示,转染48 h阴性对照组的细胞增殖率为（22.4±2.3）％,高于转染组的（9.2±1.2）％（P＜0.05）。Hoechst 33342细胞染色实验显示,转染48 h阴性对照组的细胞凋亡率为（6.2±1.3）％,低于转染组的（28.2±2.2）％（P＜0.05）。划痕实验显示,阴性对照组的相对划痕愈合比例为（100.0±2.1）％,显著高于转染组的（48.6±4.3）％（P＜0.05）。Western blotting检测显示,转染组PTEN蛋白的表达增加,p-Akt蛋白的表达降低（P＜0.05）;而Akt蛋白无明显变化（P＞0.05）。结论 沉默mGluR5表达能显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞迁移能力,该过程可能与激活PTEN／Akt信号通路有关。     

沉默S100A4基因对人膀胱癌T-24细胞生物学特性的影响

目的:探讨应用siRNA 技术沉默S100A4基因表达后,对人膀胱癌细胞系T-24增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响。方法:设计并合成S100A4 基因特异性的siRNA 序列,转染人膀胱癌细胞系T-24,48h后应用RT-PCR 和Western blot法检测在mRNA 和蛋白水平siRNA 对S100A4的影响,MTT 法检测T-24细胞增殖能力,流式细胞术检测转染S100A4 siRNA 后T-24细胞凋亡率,Transwell 法观察siRNA 抑制S100A4 后对人膀胱癌细胞系侵袭能力的影响。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组T-24细胞的S100A4基因和蛋白表达降低(P＜0.05)。MTT法检测发现S100A4 siRNA转染组细胞增殖率明显下降（P＜0.01）;流式细胞术检测siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Transwell小室实验检测发现T-24细胞侵袭能力明显下降（P＜0.05）。结论:膀胱癌细胞中S100A4 表达与癌细胞侵袭、增殖和凋亡能力有关。S100A4 siRNA 能够抑制T-24细胞S100A4的表达,进而抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。S100A4基因和蛋白表达与膀胱癌的生物学特性密切相关,可能成为预测其发生转移和复发,以期指导临床治疗的重要指标。     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

HMGB1在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:检测高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)在胶质瘤组织和细胞中的表达情况,了解HMGB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移以及细胞周期的影响。方法:将HMGB1 siRNA真核表达质粒在脂质体介导下转染胶质瘤细胞U373、U87（HMGB1 siRNA组）,以转染无关序列siRNA质粒的细胞（negative control,NC）和未转染的胶质瘤细胞（Control,Con）作为对照。采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,通过CCK-8实验、Transwell实验和细胞划痕实验分别检测胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力,用流式细胞仪检测胶质瘤细胞周期的变化。结果:HMGB1 mRNA在胶质瘤组织和细胞水平上都较非肿瘤性脑组织和正常胶质细胞明显高表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,CCK-8和划痕实验提示HMGB1 siRNA组细胞增殖和迁移能力受到明显抑制（P＜0.05）,Transwell实验显示HMGB1 siRNA组穿膜侵袭到基质胶的细胞数明显低于Con组和NC组,细胞侵袭能力减弱（P＜0.05）,流式细胞分析提示HMGB1 siRNA组位于S期细胞比例较Con和NC组明显减少（P＜0.05）,提示细胞周期发生S期阻滞。结论:应用RNAi能有效抑制HMGB1基因表达,HMGB1低表达后能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,并使得细胞周期中进入S期的细胞比例明显减少,细胞周期发生阻滞,这可能为胶质瘤的基因治疗提供了新思路。     

Cathepsin B表达对肝癌细胞系HepG2转移潜能影响的观察

目的:探讨小干扰RNA降低组织蛋白酶B(Cat B)基因表达对HepG2细胞增殖、运动及侵袭能力的影响。方法:将肝癌HepG2细胞分为Cat B siRNA干扰组、阴性对照siRNA干扰组(阴性对照组)、空脂质体组和空白对照组。脂质体转染法将Cat B siRNA转染入HepG2细胞;半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后48hCat B的表达变化;收集转染后48h的细胞,再分别以CCK-8法、划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞增殖、运动及侵袭能力的变化。结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测Cat B mRNA和蛋白水平表达变化,Cat B siRNA干扰组较其余各组均明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。CCK-8法测细胞生长曲线示,将转染后48h的细胞种入96孔板后12h,Cat B siRNA干扰组增殖能力较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。划痕实验中,Cat B siRNA干扰组细胞迁移距离较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。Transwell侵袭实验中,Cat B siRNA干扰组穿膜细胞数较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。结论:特异性干扰Cat B基因表达可抑制HepG2细胞的增殖、运动及侵袭能力。     

沉默RAI14表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成

目的:探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默维甲酸诱导蛋白14（RAI14）表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成的影响。方法:首先向胃癌细胞株MKN-45随机转染成功构建的靶向沉默RAI14表达的shRNA载体片段（沉默组）或无义shRNA片段（对照组）,然后采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组转染后的RAI14 mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测各组转染后的RAI14蛋白和磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）的表达情况,克隆形成及细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测增殖情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,体外细胞成管实验分析RAI14对胃癌肿瘤血管生成的影响。结果:qRT-PCR和Western blotting结果显示沉默组的RAI14 mRNA和蛋白表达水平分别显著低于对照组（P＜0.05)。沉默组的胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成能力显著低于对照组（P＜0.05)。沉默组的p-AKT蛋白相对表达量为0.44±0.01,低于对照组1.00±0.08,差异有统计学意义（P＜0.05)。结论:沉默RAI14表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成,可能与下调p-AKT蛋白表达有关。     

重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响

目的 观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞株SKOV3／DDP增殖及侵袭转移的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SKOV3／DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3／DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）为（37.62±2.63）μg／ml,10、20、40 μg／ml 融合蛋白作用后,DDP的IC50分别降低至（17.07±0.88）、（11.08±0.57）和（1.96±0.31）μg／ml（P＜0.001）;以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3／DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3／DDP自噬情况的比较：融合蛋白组、融合蛋白+3 MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义（P＜0.05）。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加（10、20、40 μg/ml）,其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3／DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0876±0023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 融合蛋白可抑制SKOV3／DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。     

RNA干扰乙醛脱氢酶1A1表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 研究小RNA干扰乙醛脱氢酶1A1基因（ALDH1A1）表达对胃癌细胞生物学行为包括增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。方法 构建表达ALDH1A1的siRNA的PGPU6／GFP／Neo-ALDH1A1真核细胞表达载体,转染人胃癌细胞系MKN-45细胞为实验组,同时设阴性对照组和空白对照组,Western blotting检测干扰ALDH1A1基因表达的效果。MTT法、克隆形成实验、Transwell 小室侵袭实验检测ALDH1A1表达下降后MKN-45细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的情况。结果 Western blotting检测显示实验组MKN-45细胞ALDH1A1蛋白表达低于阴性对照组（0.36±0.04 vs. 0.72±0.08,P＜0.05）;MTT法显示实验组MKN-45细胞的增殖抑制率高于阴性对照组［（52.56±1.81）％ vs.（30.32±2.23）％,P＜0.05］;克隆形成实验显示实验组MKN-45细胞的克隆形成能力低于阴性对照组（21.67±2.00 vs. 36.78±3.53,P＜0.05）;Transwell 小室侵袭实验显示实验组胃癌细胞的侵袭能力低于阴性对照组（55.11±7.98 vs. 84.78±6.00,P＜0.05）。结论 通过RNA干扰技术可明显下调ALDH1A1蛋白在MKN-45细胞中表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。ALDH1A1有望成为胃癌治疗的一个新的靶点。     

下调HDAC6表达对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制探讨

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）表达的下调对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制。方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为三组,即未处理组、对照siRNA组和HDAC6 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和HDAC6 siRNA。采用半定量反转录-聚合酶链反应、蛋白印迹方法检测各组细胞中细胞增殖和周期相关因子p21 mRNA和蛋白以及细胞迁移相关因子E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果:HDAC6 siRNA组中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平分别是0.440±0.120、0.840±0.070和0.580±0.090、0.450±0.080,且均明显高于未处理组（0.165±0.090、0.090±0.020;0.088±0.009、0.054±0.011）和对照siRNA组（0.163±0.021、0.070±0.040;0.820±0.070、0.066±0.007）中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平,其表达差异均具有统计学意义（P均<0.05）,而未处理组和对照siRNA组之间p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达无差异（P＞0.05）。结论:HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响可能与p21表达的升高相关;对细胞迁移的影响可能与E-cadherin表达的上调有关。     

siＲNA 介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siＲNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组（转染eIF3b-siRNA组）。应用qＲT-PCＲ和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mＲNA和蛋白表达水平;运用Matrigel 胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组（1.09±0.19）、II组（1.05±0.17）相比,III组eIF3b 蛋白表达水平（0.45±0.06）明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义（P＜0.05）,I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P＜0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P＜0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。     

RNA干扰抑制Dicer对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:观察应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Dicer基因,对人乳腺癌MCF-7细胞生物学特征的影响。方法:选取人乳腺癌MCF-7细胞株,应用脂质体法转染Dicer siRNA序列,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测转染后Dicer基因的表达。应用MTT法和Transwell方法评价人乳腺癌细胞Dicer基因抑制前后生物学行为的变化。结果:RNAi可显著抑制MCF-7细胞Dicer基因的表达;和对照组比较,转染siRNA实验组Dicer mRNA水平在转染后24、48、72h明显降低(分别为0.00152、0.00063、0.00096,P＜0.01),且在转染后48h降低最明显,并且Dicer蛋白水平在转染后48h也明显降低(2.581±0.028,P＜0.01)。转染siRNA序列组的MTT吸光度值在转染后明显增高,Transwell穿膜细胞数在转染后48h也明显增多。结论:抑制Dicer基因在人乳腺癌细胞中表达后,人乳腺癌细胞增殖能力和细胞迁移能力明显增强。     

RNA干扰Dub3表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制去泛素化酶3（Dub3）基因表达对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 优化siRNA转染条件,将2条靶向抑制Dub3基因的siRNA载体片段（siRNA-1、siRNA-2）分别高效转染人鼻咽癌CNE-2细胞,同时设转染无义序列的空转染组及无任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时定量PCR（qPCR）检测Dub3表达水平以筛选抑制率高的感染载体用于后续试验。噻唑蓝法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡和细胞周期情况,采用Western blotting检测各组转染96 h后细胞分裂周期蛋白25A（Cdc25A）的表达情况。结果 转染组的Dub3 mRNA水平均低于空转染组和对照组（P＜0.05）,且选择干扰效率高的siRNA-1载体进行功能学研究;与其余两组相比,抑制组转染后的增殖抑制率、凋亡率及caspase-3活化率均升高,且G0/G1期细胞比例升高,但S期和G2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;抑制组转染后的Cdc25A 水平降低,与空载体组和对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）。空载体组和对照组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 通过siRNA抑制Dub3基因表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对鼻咽癌的防治有一定价值。     

RNA干扰卷曲螺旋结构域蛋白34表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨卷曲螺旋结构域蛋白34（CCDC34）的表达对膀胱癌细胞生物学行为包括增殖、凋亡、克隆形成和侵袭能力的影响。方法 选取膀胱癌5637细胞分别转染阴性对照siRNA（阴性对照组）和CCDC34 siRNA（CCDC34干扰组）慢病毒载体,荧光显微镜观察慢病毒感染效率;实时荧光定量PCR和Western blotting验证CCDC34的干扰效率;BrdU掺入实验、流式细胞术、克隆形成实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰CCDC34表达对5637细胞增殖、凋亡、克隆形成及侵袭能力的影响。结果 阴性对照组与CCDC34干扰组的慢病毒感染效率均在85％以上。与阴性对照组相比,感染CCDC34 siRNA的细胞中CCDC34 mRNA表达水平受到显著抑制（1.00±0.06 vs. 0.16±0.01,P＜0.01）,且CCDC34蛋白表达下降。BrdU实验显示,CCDC34干扰组的细胞增殖能力较阴性对照组受到显著抑制（P＜0.05）,且细胞凋亡显著增加［（28.09±0.39）％ vs.（9.50±0.01）％,P＜0.01）］。克隆形成实验显示,CCDC34干扰组的克隆形成能力显著低于阴性对照组（22±4 vs.310±5,P＜0.01）。Transwell小室侵袭实验显示,CCDC34干扰组膀胱癌细胞的侵袭转移率显著低于阴性对照组（0.53±0.03 vs.2.58±0.10,P＜0.01）。结论 慢病毒介导的RNA干扰技术可下调CCDC34蛋白在膀胱癌5637细胞中的表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力;CCDC34有望成为膀胱癌的生物标记物和治疗的新靶点。     

CUL4A促进人胃癌细胞增殖、侵袭和转移的机制

目的:探讨CUL4A基因在胃癌增殖、侵袭和转移中的机制。方法:siRNA干扰胃癌SCG-7901细胞中CUL4A基因的表达;CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;Transwell小室观察各组细胞的侵袭能力;Annexin-V-FITC/PI法检测各组细胞的凋亡情况,分析CUL4A对细胞凋亡的影响;Real time-PCR分析上皮间质转化（EMT）相关基因的表达情况。结果:siRNA有效干扰了胃癌SCG-7901细胞中CUL4A基因的表达（P＜0.05）;干扰CUL4A基因有效抑制了胃癌细胞的增殖（P＜0.05）;Transwell小室结果显示,干扰CUL4A基因阻碍了SCG-7901细胞的侵袭能力（P＜0.05）;细胞凋亡结果显示,干扰CUL4A基因促进了细胞的凋亡（P＜0.05）;Real time-PCR结果显示,干扰CUL4A基因后Snail mRNA和ZEB1 mRNA的表达降低（P＜0.05）,E-cadherin mRNA的表达升高（P＜0.05）。结论:CUL4A基因促进胃癌细胞的增殖,抑制凋亡和侵袭,且影响了EMT相关基因的表达。     

siRNA干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5表达对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）表达后对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响。方法 设计靶向抑制PRMT5表达的特异siRNA（siRNA-1、siRNA-2）,瞬时转染胃癌SGC7901细胞（干扰组）,同时设置转染无义序列的阴性对照组。在瞬时转染48 h后采用Western blotting实验评估siRNA对PRMT5的干扰效果;采用CCK-8法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的增殖情况;采用EdU法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的DNA复制情况;采用平板克隆形成实验检测siRNA抑制PRMT5表达后对胃癌SGC7901细胞克隆形成能力的影响。结果 在胃癌SGC7901细胞中,瞬时转染siRNA-1和siRNA-2后PRMT5蛋白的表达水平均显著低于阴性对照组（P＜0.01）,表明两个siRNA具有良好的干扰效果,可用于后续实验。与阴性对照组相比,PRMT5表达干扰后的胃癌SGC7901细胞增殖速率显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。转染siRNA序列后,PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的EdU阳性细胞百分比为（16.0±2.0）％和（19.5±3.0）％,远低于阴性对照组的（38.0±4.0）％,差异有统计学意义（P＜0.01）。PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的克隆形成数分别为（50±6）个和（68±7）个,远低于阴性对照组的（120±11）个,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 通过siRNA抑制PRMT5表达后可显著抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和克隆形成能力,为胃癌的临床治疗提供新的策略和理论依据。