丙型肝炎病毒1b型5′非编码区基因变异及遗传进化分析

目的研究我所发现的丙型肝炎病毒（HCV）1b基因型5’非编码区（5’NCR）-222位C—T变异的病毒株，是否为1型中的其他亚型。方法对64例HCV 1b型的样本进行5’NCR扩增后作BamH Ⅰ酶切，并从有此BamH Ⅰ位点的样品中随机选取了6例样品扩增5’NCR和NSSB区，测序后对5’NCR进行序列分析，NSSB区序列分别与GenBank中1型的各亚型序列以及38株来自世界不同地区的1b型参考序列构建遗传进化树。结果6例样本与GenBank中1型的各亚型NSSB区遗传进化树分析结果显示这6株都属于1b型，而非1型的其他亚型，6株变异株与38株来自世界不同地区的1b型参考序列NSSB区的进化树分析结果显示，6例样品并未形成1b型中的独立分支，在遗传进化上与其他38株HCV 1b型病毒株没有明显差异。结论本文的研究证实了我们所发现的HCV 1b型5’非编码区有BamHI位点的病毒株确为1b型的变异株，并非1型的其他亚型。而这种变异与干扰素耐药是否具有相关陛，尚有待于进一步研究。     

郑州与北京地区HCV5′—非编码区酶切基因分型对比研究

目的　探讨郑州与北京地区丙型肝炎病毒 (HCV)基因型分布情况。方法　分别对郑州地区的 90例抗 -HCV阳性献血员及北京地区 2 6 9例肝炎患者血清采用逆转录套式聚合酶链反应 (RT- nested- PCR)进行 HCV RNA检测 ,其中郑州地区 80例呈 HCV RNA阳性 ,北京地区 5 6例呈 HCV RNA阳性 ,并对两地区病例的阳性 PCR产物进行5′-非编码区 (5′- NCR)酶切基因分型。结果　郑州地区 HCV 型感染 5 5例 (6 8.8% ) ,HCV 型感染 2 1例 (2 6 .2 % ) ,HCV / 型混合感染 4例 (5 .0 % )。北京地区 HCV 型感染 4 9例 (87.5 % ) ,HCV 型感染 7例 (12 .5 % ) ,无 HCV / 型混合感染。结论　 HCV 型感染是郑州地区的优势株 ,其次是 HCV 型 , / 型混合感染较少见。而北京地区主要以 HCV 型为主 ,HCV 型感染少见。     

中国HCV5''-非编码区复合酶切分型及其3b基因型序列分析

目的研究中国丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型感染分布情况,并对3b序列进行分析。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及187份HCV RNA阳性样品中cDNA。A应用BHH(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复合内切酶消化5‘-NCR cDNA,B应用BstUⅠ消化,C应用HaeⅢ消化,电泳检测片段大小。结果187例HCV RNA阳性患者A B C分型结果表明,1b型感染率占67．38％,2a型12．30％,1b/2a型为5．88％,3b型5．35％,2b型3．21％,2a/2b、1b/2b型各为2．14％,1a型1．07,6a型0．54％。3份3b基因型5’-NCR A-T克隆测序结果表明,3株3b型之间同源性为99．54％～100％。其中chiKQ50与G1514395 3a株为96．28％与G1676877 3b株同源性为98．6％,与1a型为93．49％,与1b型为94．88％,与2a型为91．63％,与2b型为89．30％,与4a型为95．35％,与6a型为93．4％,结论研究结果表明该项分型技术既保证了RT-PCR检测灵敏度,又具有良好的分型效果。提示：该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值。     

HCV 5'-NCR基因变异与干扰素免疫应答关系的探讨

目的 了解HCV 1b基因型5'-NCR基因变异株的感染状态.方法 应用限制性内切醇酶切分析检测119例1b型中5'-NCR基因变异.结果 在119例HCV 1b型中存在5种感染状态:①有Mbo I切点变异株占58.0%(69/119);②元Mbo I切点变异株占16.0%(19/119);③有Mbo I切点和无Mbo I切点混合感染株占10.9%(13/119);④有BamH I切点变异株占10.1%(12/119);⑤有Mbo 1双切点变异株占5.0%(6/119).1例干扰素治疗有效的丙型肝炎患者,HCV RNA持续阴性,未检测出5'-NCR变异(有Mbo I单一切点),而2例干扰素治疗12个月和26个月的丙型肝炎患者血清ALT反复升高,HCV RNA持续阳性样品中,1例检出5'-NCR Mbo I酶切位点变异.结论 研究结果提示,在丙型肝炎患者血清中存在HCV 1b型中5'-NCR基因单一的Mbo I切点的样品,58.0%可能是HCV野生株感染的状态.     

HCV5＇-NCR基因变异与干扰素免疫应答关系的探讨

目的了解HCV 1b基因型5’-NCR基因变异株的感染状态。方法应用限制性内切酶酶切分析检测119例1b型中5＇-NCR基因变异。结果在119例HCV 1b型中存在5种感染状态：①有Mbo I切点变异株占58．0％（69／119）;②无Mbo I切点变异株占16．0％（19／119）;③有Mbo I切点和无Mbo I切点混合感染株占10．9%（13／119）;④有BamH I切点变异株占10．1％（12／119）;⑤有Mbo I双切点变异株占5．0％（6／119）。1例干扰素治疗有效的丙型肝炎患者,HCV RNA持续阴性,未检测出5’-NCR变异（有Mbo I单一切点）,而2例干扰素治疗12个月和26个月的丙型肝炎患者血清ALT反复升高,HCV RNA持续阳性样品中,1例检出5’-NCR Mbo I酶切位点变异。结论研究结果提示,在丙型肝炎患者血清中存在HCV 1b型中5’-NCR基因单一的Mbo I切点的样品,58．0％可能是HCV野生株感染的状态。     

5'-非编码区型特异性引物检测HCV基因型

我们探索建立一种HCV基因分型方法,用5'非编码区(5'NCR)1,2,3,1b型特异性引物,应用逆转录套式PCR,对HCV RNA阳性血清进行分型 .对65份HCV RNA阳性血清的分型率为90.8%(59/65).59例中混合感染7例,1型50例,其中1b亚型46例;3型2例.从而认为:所用的型特异性引物可成功地对HCV基因分型,分型结果证实南京市HCV流行优势株为1b亚型.     

两种定量测定丙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应方法比较

目的：观察荧光定量聚合酶链反应（PCR）PE5700测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法：所用临床评价血清盘由36份血清组成,其中包括1个5倍倍比稀释系列（7份）、9份阴性血清和20份阳性血清。使用临床评价血清盘比较2种测定方法的重复性、线性和临床样本符合情况。结果：实时荧光定量方法和全自动PCR－ELISA内标法检测系统的线性回归系数分别为0．9732和0．9995。全自动PCR酶联免疫附（ELISA）内标法检测系统不同含量的样本批内变异系数（log10)均比实时荧光定量方法低。临床样本的检测实时荧光定量方法与全自动PCR－ELISA内标法检测系统的相关系数为0．845,结论：实时荧光定量方法具有良好的线性和重复性,同时与全自动PCR－ELISA内标法检测系统有良好的相关性。     

HCV分片段抗原EIA与重组免疫印迹法分析检测HCV抗体的比较研究

【目的】探讨国产丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体试剂的敏感性和特异性,为丙型肝炎的早期诊断和替代昂贵的进口重组免疫印迹法确认试剂(HCV RIBA3.0)提供实验依据。【方法】用HCV分片段抗体试剂检测经确认的标本中HCV-C、NS3、NS4、NS5抗体并与HCV RIBA3.0比较。【结果】82份样品中80份判定为阳性,阳性率为97.56%,2份判定为可疑,为2.4%,40份阴性样品中有2份判定可疑,为5.00%。【结论】国产分片段抗体检测试剂检测HCV抗体,与美国第三代RIBA3.0试剂的检测符合率基本一致,有低价高效的临床实用价值。     

国产与进口抗—HCV诊断试剂检测结果对比分析

目前我国临床使用的丙型肝炎病毒 (HCV)诊断试剂基本上是 ELISA第 3代产品 ,但不同厂家抗 - HCV诊断试剂对丙肝的检出率不完全一致。抗 - HCV EIA试剂质量较以前有很多提高 ,仍存在着漏检及假阳性等问题 [1 -2 ] 。为减少阳性的漏检率 ,确定使用哪个厂家的试剂是各单位必须考虑的问题 ,笔者对两家国产和一家进口抗 - HCV诊断试剂对相同已知被检物进行检测对比。1　对象和方法1 .1　对象　取 3家抗 - HCV阳性、阴性对照物 ,质控血清盘2 NCU/ ml(购于卫生部临床检验中心 )。一起组成参照品阳性39份 ,其中血清盘已知阳性 2 5份 ,质…     

天津地区住院腹泻患儿星状病毒感染情况及其型别分析

目的 调查天津地区5岁以下住院的腹泻患儿HAstV的感染情况及其分型特点.方法 收集天津市儿童医院2008年5月1日至2009年4月30日住院腹泻患儿的粪便标本837份,用ELISA进行HAstV抗原检测,将检测阳性的标本进行细胞培养,产生细胞病变(CPE)后,提取病毒RNA,RT-PCR扩增并对产物进行测序确证.同时用胶体金免疫层析法进行轮状病毒抗原检测.结果 HAstV抗原阳性检出率为3.0%(25/837),与轮状病毒共同感染者的检出率为0.7%(6/837);96%(24/25)的HAstV腹泻发生在2岁以下患儿,其中小于6月龄的患儿占HAstV阳性标本的48%(12/25);HAstV感染主要集中在2008年8月至2009年4月,与轮状病毒流行季节相似;21例接种的HAstV抗原阳性的标本中,由RT-PCR成功检出11例,经测序确证均为HAstV-1型.结论 HAstV是天津地区2008-2009年婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行型别以HAstV-1型为主.     

天津地区住院腹泻儿童轮状病毒的检测及其毒株型别分析

目的 了解天津地区5岁以下住院腹泻患儿A组RV的感染情况及其型别特点.方法 收集天津市儿童医院2008年5月至2009年4月837份住院腹泻患儿的粪便标本,用胶体金免疫层析法快速检测A组RV抗原,将检测阳性的标本进行细胞培养,产生细胞病变(CPE)后,提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒VP7基因,并将PCR产物阳性标本测序,证实其VP7(G)血清型.同时收集其临床相关资料.结果 837份标本RV抗原阳性率为26.3%(220/837);90.5%(199/220)的RV腹泻发生在24月龄以下患儿;发病高峰时间主要集中在2008年10月至2009年4月;208份接种的RV抗原阳性标本中,病毒分离后用PCR鉴定阳性95份,对其中35份电泳较好的PCR产物阳性标本作序列分析,除1份为G9型、2份为G3型外,其余均为RV G1型.结论 RV是天津地区婴幼儿腹泻的重要病原,流行的基因型以G1为主.     

自贡地区女性15种高危型人乳头瘤病毒感染情况分析

目的了解自贡地区15种高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)基因型感染的分布情况,为自贡地区HR-HPV分子流行病学研究提供科学依据。方法对371例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量PCR技术检测15种HR-HPV基因亚型,分析不同年龄段女性HR-HPV感染情况。结果 371例临床标本中共检出阳性56例,检出率15.09%;单一HR-HPV基因亚型感染41例(11.05%),复合感染15例(4.04%);其中HPV16、52、58、18是最常见的高危型,检出率分别为5.93%、3.23%、2.96%、2.43%。HR-HPV感染自贡女性人群的年龄分布以18~50岁年龄段为主,其中18~30岁年龄段的女性人群检出率最高(19.30%),高于其余年龄段,差异无统计学意义(P0.05)。结论自贡地区15种HR-HPV感染有年轻化趋势,HR-HPV基因型检测对于自贡地区HR-HPV感染的诊疗、预防性疫苗的使用及宫颈癌的早期干预和预防具有重要意义。     

在中国首次检出CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶基因

目的探讨湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)的检出率及其基因型。方法采用多重PCR法对产ES- BLs的142株临床分离的肠杆菌进行CTX-M酶基因检测,然后用组特异性引物对CTX-M酶整个开放阅读框进行扩增,PCR产物测序并确定其基因型。结果湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs检出率为76.8%(109/142):对109株产CTX-M型ESBLs肠杆菌科细菌进行特异性PCR扩增,进行分组,发现CTX-M-1组48株,CTX-M-9组48株,另外13株可能属于CTX-M-2组和CTX-M-8组。根据不同病室不同菌株来源,共测序25株,组特异性PCR产物测序后发现有三种基因型,分别为CTX-M-15型、CTX-M-3型和CTX-M-14型。其中CTX-M-15型6株,CTX-M-3型7株,CTX-M-14型11株。结论本地区CTX-M型ESBLs检出率较高,共检出三种CTX-M酶基因型,并且CTX-M-15型ESBLs是在国内首次被发现。     

庚型肝炎病毒NS3区聚合酶链反应RNA检测

2000—04～2003—12我们采用庚型肝炎病毒（HGV）NS3区逆转录-套式-聚合酶链反应法检测临床各型肝炎187例的血清HGV RNA，现将结果报告如下。     

Nogo基因3′端未编码区CAA插入／缺失突变与多发性硬化发病关系

目的分析Nogo基因3’端未编码区CAA插入／缺失（Ins／Del）突变以及等位基因频率在多发性硬化（MS）患者中的分布特点,探讨MS发病与Nogo基因3’端未编码区CAAIns／Del突变的相关性。方法应用聚合酶链反应（PCR）及聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）方法,检测42例MS患者和47例健康对照者Nogo基因3’端未编码区CAAIns／Del突变基因型及等位基因频率分布,采用SPSS16．0软件分析该基因多态性与MS的关系。结果MS组Del等位基因频率高于对照组,且两组间Nogo基因3’端未编码区CAAIns／Del突变Del型等位基因频率分布差异有统计学意义（X^2=4．077,P=0．043〈0．05）。结论Nogo基因3’端未编码区CAA片段Del等位基因频率的增高,可能增加MS发病风险,值得今后进一步研究考证。     

巢式PCR检测庚型肝炎病毒感染

目的探讨逆转录-巢式PCR研究庚型肝炎病毒(HGV)感染在我国南方人群中的分布。方法从HGV 5-′NCR区段设计了内、外引物对,运用逆转录-巢式PCR对来自我国南方深圳、广州和桂林三个城市总共403例,且来自不同人群组的血清/血浆标本中HGV RNA感染率进行了研究。结果献血员人群中HGV RNA的平均感染率为5.8%(11/189),其中职业献血员较义务献血员高〔9.7%(10/102)及1.1%(1/87)〕;静脉药瘾者、丙型肝炎、乙型肝炎患者人群中HGV感染率依次为50.8%(33/65)、24.0%(9/37)、2.5%(1/40);在具有严重程度不同的非A-E肝脏疾病患者中HGV RNA阳性检出率为12.5%(9/22)。结论HGV与HCV合并感染极其常见,可能与其具有共同的传播途径有关。追踪临床资料,发现HGV的感染并未加重丙型肝炎患者的病情;多次静脉滴注药物、输血/输液、血液透析所致医院感染均是引起我国人群中HGV分布较高的重要危险传播因素;HGV的致病性较弱,可能不是引起非A-E肝脏疾病的主要致病因素。     

HCV基因组5′端非编码区部分cDNA重组质粒的构建及应用

应用分子克隆技术将丙型肝炎病毒ＲＮＡ５＇端非编码区的部分ｃＤＮＡ片段连接至质粒载体上，构建成重组质粒，用作ＰＣＲ法检测血清ＨＣＶ－ＲＮＡ时的阳性对照。     

利用PTPS基因在外周血淋巴细胞中的逆转录分析其编码区核酸序列

从正常人外周血淋巴细胞中提取总ＲＮＡ，利用逆转录酶－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和固相核酸序列分析，对６－丙酮酰四氢生物蝶呤合成酶（ＰＴＰＳ）的ｃＤＮＡ进行了序列分析，获得了与皮肤成纤维细胞ＰＴＰＳ的ｃＤＮＡ序列相一致的结果。本研究成功地建立了一套完整的外周血淋巴细胞ＰＴＰＳ的ｃＤＮＡ序列分析方法，为进一步研究ＰＴＰＳ缺陷症的分子遗传学特征提供了一种途径。     

HPV16/18感染及其致癌基因与宫颈癌的关系

目的研究端粒酶活性、人乳头瘤病毒16/18(HPV16/18)感染及致癌基因与宫颈癌的相关性。方法对30例浸润型宫颈癌、58例宫颈内瘤形成(CINⅢ20例、CINⅡ20例、CINⅠ18例)及16例正常女性的宫颈新鲜组织,采用端粒酶重复序列扩增法(TRAP-PCR)检测端粒酶活性,用荧光定量多聚酶链式反应(FQ-PCR)检测HPV16/18DNA,用PCR方法对HPV16/18DNA阳性组织作HPV16型致癌基因E6、E7检测。结果宫颈癌组中端粒酶阳性22例(73.33%)(HPV16/18+15例,7例有E6、E7表达),端粒酶阴性8例(HPV16/18+1例,无E6、E7表达)。CINⅢ级中端粒酶阳性13例(46.4%)(HPV16/18+6例,2例有E6、E7表达),端粒酶阴性15例(无HPV16/18+);CINⅡ级中端粒酶阳性6例(25%)(HPV16/18+2例,1例有E6、E7表达),端粒酶阴性18例(无HPV16/18+);CINⅠ级中端粒酶阳性2例(10.00%)(HPV16/18+2例,无E6、E7表达)。而16例正常宫颈组织仅1例(6.25%)端粒酶活性表达,此例HPV也呈阳性而无E6、E7表达。宫颈癌和癌前病变(CINⅢ)组织端粒酶活性表达频率(P<0.01)和HPV16/18感染率(P<0.01)及其致癌基因表达(P<0.01)均显著高于良性损伤(CINⅠ和CINⅡ)和正常对照。结论端粒酶活性在宫颈癌发生中可能起到重要作用,在子宫颈损伤中端粒酶激活与HPV感染及其致癌基因的表达密切相关;对于探讨宫颈病变的进展和宫颈癌的发生具有重要意义。     

HLA-G基因3′非翻译区多态性与慢性丙型肝炎HCV病毒载量的相关性研究

目的探讨HLA-G基因3′非翻译区(UTR)多态性与慢性丙型肝炎病毒载量的相关性。方法收集2015年4月至12月于大连市第六人民医院诊治的慢性丙型肝炎患者标本共196例,采用PCR扩增及基因测序技术对慢性HCV感染患者的HLA-G基因3′UTR+296014 bp插入/缺失,+3003C/T,+3010C/G,+3027A/C,+3035C/T,+3142C/G,+3187A/G,+3196C/G等8个多态性位点进行检测,同时采用实时定量PCR方法测定患者血清HCV病毒载量。结果慢性HCV感染患者的HLA-G基因3′UTR+296014 bp插入/缺失、+3003C/T、+3027A/C、+3035C/T、+3187A/G、+3196C/G多态性位点的丙肝病毒载量的差异均无统计学意义(P>0.05)。+3010C/G、+3142C/G多态性位点的丙肝病毒载量的差异有统计学意义(P<0.05)。经Dunn′s多重检验进行两两比较,+3142位点基因型为C/G的患者血清HCV病毒载量要高于基因型GG(P<0.05))。结论 HLA-G基因3′UTR+3142位点基因多态性...