宁夏汉坦病毒分离株M基因片段的序列分析

目的比较它们与已知汉坦病毒的同源性和亲缘关系。方法用RT－PCR扩增了宁夏汉坦病毒分离株的M基因330hP片段,通过PGEM－T载体质粒将基因片段克隆进入大肠杆菌JM109,并进行核苷酸序列的测定;与其它汉坦病毒核苷酸序列的同源性比较。结果NX－143株病毒与HTN型毒株核着酸序列的同源性在79．4％～82．4％之间,与其它血清型毒株的同源性为57．6％～71．5％。表明NX－143属于HTN型病毒。结论NX－143属于HTN病毒新的基因亚型,国内可能同时存在多种亚型的HTN型病毒。     

一株汉坦病毒的分离及基因鉴定

目的分离汉坦病毒并采用分子生物学方法进行基因鉴定.方法组织细胞培养法和RT-PCR法.结果在黑线姬鼠体内分离出一株汉坦病毒,分别用HTN型和SEO型的特异引物对其进行基因扩增,同时以76-118株和L99株作对照,结果分离株经HTN型引物扩增出一条明亮带并同76-118株结果一致.结论分离株经基因鉴定为HTN型病毒.     

一例输入性鼠类携带汉坦病毒的分子遗传学分析

目的 对1例在境外输入褐家鼠中分离的汉坦病毒DX1101株进行分子遗传学特征分析.方法 剖取鼠肺组织,提取病毒RNA,用简并RT-PCR和巢式RT-PCR分别扩增汉坦病毒L基因和M基因片段,对扩增产物测序并构建系统发生树进行分型与系统发生分析.结果 2个基因的扩增片段序列同源性系统发生树分析均显示该病毒株为汉城型汉坦病毒;M基因的系统进化树显示与英国分离株IR461基因距离最为接近.结论 证实入境集装箱中截获的鼠类携带汉坦病毒,加强入境集装箱的卫生检疫有重要意义.     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD10株分子生物学特征研究

[目的]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的1株汉坦病毒SD10株的分子生物学特征,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别。[方法]用RT－PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型,并与其他相关毒株比较。[结果]经M片段部分序列分析表明,该毒株为汉坦病毒汉城型（SEO）第3亚型（S3）。与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性。[结论]山东省家鼠型疫区毒株稳定。     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD_(10)株分子生物学特征研究

[目的 ]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的 1株汉坦病毒SD10 株的分子生物学特征 ,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别。 [方法 ]用RT PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型 ,并与其他相关毒株比较。 [结果 ]经M片段部分序列分析表明 ,该毒株为汉坦病毒汉城型 (SEO)第 3亚型 (S3)。与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性。 [结论 ]山东省家鼠型疫区毒株稳定。     

广西汉坦病毒全S基因核苷酸序列测定

目的 查明广西汉坦病毒的基因型及其基因亚型.方法 用夹夜法捕获宿主动物,用免疫吸附试验(ELISA)检测鼠肺标本.对汉坦病毒抗原阳性标本用RT-PCR法扩增,产物直接测序,拼接后获得全S基因序列,用生物软件进行核苷酸及氨基酸系列分析和病毒的系统进化分析.结果 应用ELISA法检测鼠肺抗原792份,阳性6份,RT-PCR测定其中5毒株.基因型为汉城病毒,进一步的核苷酸序列分析均为S2亚型.结论 广西汉坦病毒基因型为汉城型汉坦病毒,亚型为S2.     

广西汉坦病毒全S基因核苷酸序列测定

目的查明广西汉坦病毒的基因型及其基因亚型。方法用夹夜法捕获宿主动物,用免疫吸附试验（ELISA）检测鼠肺标本,对汉坦病毒抗原阳性标本用RT-PCR法扩增,产物直接测序,拼接后获得全S基因序列,用生物软件进行核苷酸及氨基酸系列分析和病毒的系统进化分析。结果应用ELISA法检测鼠肺抗原792份,阳性6份,RT-PCR测定其中5毒株,基因型为汉城病毒,进一步的核苷酸序列分析均为S2亚型。结论广西汉坦病毒基因型为汉城型汉坦病毒,亚型为S2。     

121株金黄色葡萄球菌临床分离株的分子流行病学及遗传学特征

目的 研究临床分离的金黄色葡萄球菌株的分子及遗传学特征。方法 收集中国科学技术大学附属第一医院及安徽中医药大学第一附属医院2018-2019年临床检出的非重复金黄色葡萄球菌121株,检测其δ溶血、mecA基因、Agr系统分型、Spa分型等,并对mecA基因阳性菌株进行SCCmec分型。结果 121株金黄色葡萄球菌中有甲氧西林耐药菌株(MRSA)67株,甲氧西林敏感菌株(MSSA)54株;MRSA菌株主要携带Ⅲ型SCCmec元件(18,26.86%)和Ⅳ型SCCmec元件(24,35.82%);Agr系统主要为Ⅰ型和Ⅱ型;121株临床菌株中共有Spa类型54种,最为常见的是t437(15,12.40%)和t034(9,7.44%);在12株δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌中有11株(91.67%)为MRSA菌株,δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌携带的Agr系统类型主要为Ⅱ型(50.00%),携带的SCCmec元件主要为Ⅱ型(占58.33%),δ溶血阴性的金黄色葡萄球菌中共有Spa类型8种,最为常见的是t18363(41.67%)。结论 本研究阐述了医院分离的金黄色葡萄球菌分子及遗传学特征信息,有助于...     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD10株分子生物学特征研究

[目的]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的1株汉坦病毒SD10株的分子生物学特征,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别.[方法]用R-PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型,并与其他相关毒株比较.[结果]经M片段部分序列分析表明,该毒株为汉坦病毒汉城型(SEO)第3亚型(S).与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性.[结论]山东省家鼠型疫区毒株稳定.     

我国SEO型汉坦病毒L基因核苷酸序列测定研究

目的：为各基因型或亚型病毒生物学表型研究打基础,对疫苗的选择使用提供科学依据。方法：将获得SEO型病毒分离、MCABS分型RT－PCR扩增及核苷酸序列测定。结果：首次测出我国SEO型病毒部分L基因核苷酸序列,并与76－118、C4、L99、Seoul株的核苷酸及氨基酸同源性进行比较,分别为70．8％、72％、95．3％、95．9％及75．6％、751％、97．7％、97．3％。结论：病毒基因组间的重排不是造成发病高峰的原因。     

山东省汉坦病毒分子流行病学研究

目的探讨山东省汉坦病毒（HV）的分子流行病学特点。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热（HFRs）监测点的阳性鼠肺标本进行目的基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析。结果有15份标本扩增出汉城（SEO）型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3％,其推导的氨基酸序列同源性（JN5-153S和DY1S除外）≥96．8％;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97．5％,其推导的氨基酸序列同源性为98．6％～100％。结论近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主。同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定。     

大林姬鼠中汉坦病毒的分离及其S片段的序列分析

目的 分析吉林省大林姬鼠携带的汉坦病毒(HV)在进化过程中的系统发生关系。方法采用病毒分离技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、克隆以及测序技术对中国大林姬鼠携带的HV进行研究。结果从4只大林姬鼠Hv抗原阳性的肺组织标本中分离到2株HV(CJ189和CJ193)，对其中CJ193病毒株的S片段进行克隆、测序以及分析，基因分型结果为汉滩型(HTN)汉坦病毒。根据S片段的核苷酸序列同源性分析，CJ193与Aa2499核苷酸序列的同源性最高(94．3％)，而与Ap61、Ap63的同源性最小(83．3％，82．9％)。由全S片段构建的HTN型汉坦病毒的系统发生树表明CJ193与Aa2499等俄罗斯黑线姬鼠携带的HV的亲缘关系最近，其次为中国的HTN型病毒，然后才是Ap61、Ap63等俄罗斯大林姬鼠携带的HV。结论从我国吉林省大林姬鼠分离到的CJ193株是HTN型汉坦病毒的新亚型。     

2007年浙江省鼠类感染汉坦病毒监测及病毒分离

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒（HV）情况和病毒型别,为肾综合征出血热（HFRS）防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺Hv抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero—E6细胞分离病毒,用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果共捕获鼠形动物1129只,其中黑线姬鼠为优势种,鼠肺HV抗原阳性率为3．0％,鼠血标本IgG抗体阳性57份,阳性率8．0％。分离到6株汉滩（HTN）型病毒,其中来自黑线姬鼠5株,褐家鼠1株。结论浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,HV主要流行型别为HTN型。     

浙江省慈溪市啮齿动物中汉坦病毒分子流行病学研究

目的 研究浙江省慈溪市啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别.方法 采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增阳性样品中HV的部分S片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型.结果 在慈溪市肾综合征出血热(HFRS)疫点共捕获啮齿动物243只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中4只为褐家鼠,3只为黄胸鼠,病毒携带率为2.88%.用汉城型病毒(SEOV)特异性引物从6份HV抗原阳性样品中扩增出部分S片段(620～999 nt)并测定了序列.对扩增出的部分S片段核苷酸序列分析表明,6株病毒与现有的SEOV有最高的同源性,均为SEOV.用部分S片段核苷酸序列所构建的系统进化树显示,6株病毒构成两个单元支,其中由褐家鼠携带的3株病毒与BjHD01株病毒的亲缘关系最近,分在同一分支,由黄胸鼠携带的3株病毒构成另一分支,与L99、R22及Hb8610株的亲缘关系较近.结论 慈溪市的褐家鼠与黄胸鼠分别携带一种不同亚型的SEOV,表现出SEOV在同一地区的遗传多样性,并支持宿主与汉坦病毒共进化的理论.     

浙江省2008-2011年啮齿动物中汉坦病毒的分离及鉴定

目的 分析浙江省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠形动物携带汉坦病毒状况及其型别.方法 应用直接免疫荧光试验和RT-PCR方法检测汉坦病毒抗原和核酸,阳性者用长爪沙鼠和Vero-E6细胞进行病毒分离,对分离株的M片段基因进行序列测定和分析.结果 2008-2011年在浙江省HFRS疫区捕获的鼠形动物中以黑线姬鼠为优势鼠种;从该鼠鼠肺中共分离到6株汉坦病毒,序列分析表明分离株均为汉滩型汉坦病毒,其中Z521、524、534为H7亚型,TT-27、T-43、R88可能为新亚型;6株分离株之间的基因同源性较高,并与以往浙江省分离株具有较高同源性.结论 2008-2011年浙江省HFRS疫区鼠间存在汉滩型汉坦病毒流行.     

2012年大连地区鼠携带汉坦病毒状况及基因特征分析

目的分析大连地区鼠携带汉坦病毒（HV）情况及基因特征。方法用间接免疫荧光方法检测大连地区2012年采集的鼠肺,用特异性引物扩增阳性标本中M基因片段,测序后进行生物信息学分析,构建系统进化树,以明确其型别和亚型。结果检测鼠肺188份,其中黑线姬鼠3份,褐家鼠185份,检出HV抗原阳性6份,阳性率为3．19％。所携带的病毒均为汉城型病毒（SEOV）,S3亚型。结论大连地区鼠携带HV呈地区聚集性分布,并且可能存在除S3外的其他亚型,后续应系统、连续地开展HV的分子流行病学研究以进一步明确其亚型及分布。     

汉坦病毒S基因在原核细胞中高效表达的研究

目的通过基因工程的方法从鼠肺中扩增出汉坦病毒的S基因，并实现其蛋白的体外表达。方法应用RT—PCR方法扩增汉坦病毒汉城型（SEO）的YZG-Changchun株S基因，然后克隆到pMD18-T载体中，经序列分析后，定向克隆入原核表达载体pET-28a中，转化大肠埃希菌Rosetta用IPTG诱导表达后，将全菌裂解，用SDS-PAGE和Westem—blot检测重组菌中外源蛋白的表达情况和免疫反应性的分析。结果S基因在原核细胞中得到了高效表达，表达的蛋白占菌体蛋白总量的37％，且具有良好的免疫反应性。结论汉坦病毒S基因蛋白可通过基因工程手段获得体外高效表达，这将对其功能的研究及为汉坦病毒疫苗的研究提供基础。     

湖北省武汉地区啮齿动物汉坦病毒S基因的特征分析

目的 了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法 2000-2003年、2009-2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本,采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列,构建系统发生树并进行基因分型。结果 2000-2003年捕获啮齿类动物437只,HV抗原阳性鼠肺标本24份,病毒携带率为5.49%。2009-2011年捕获啮齿类动物173只,HV抗原阳性鼠肺标本7份,病毒携带率为4.05%。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠,4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt 588~1147）,分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615-1141）,分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论 武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV,并发现新的基因亚型,SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。     

辽宁省葫芦岛地区鼠类汉坦病毒的分离与鉴定

目的研究葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的感染流行情况以及病毒的型别.方法采用夹夜法捕捉鼠类,间接免疫荧光法检测鼠肺中的汉坦病毒抗原,阳性较强的标本接种到Vero E6细胞分离病毒,RT-PCR对分离的病毒与阳性样品扩增核苷酸片段并测序,构建系统发生树进行分型与系统发生分析.结果在200份鼠肺标本中共检测到11个样品阳性,阳性率为5.5%.选择阳性较强的标本,接种到Vero E6细胞并连续传代后分离到3株病毒.用S片段（620～999 nt）与M片段G1区（180～580 nt）的核苷酸构建的系统发生树,结果表明葫芦岛分离的3株病毒均为S3亚型.用G2区的2003～2302 nt的核苷酸序列构建的系统发生树将来自不同地区的SEO型病毒可分为7个亚型,其中从葫芦岛地区分离的3株病毒与北京地区分离株CP211、ch302、dc501和山东省分离株SD10、SD227株的亲缘关系最近.结论葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的携带率较高,主要流行S3亚型SEOV.