抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用提此的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB／c小鼠，脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合，用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选，以有限稀释法克隆化，阳性率选100％，建立了1D8，5D7，4B1，2B3，1A4五株杂交瘸细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D8 1：1280^x，5D7 1：640^x，4B1 1：320^x 2B8 1：320^x，1A4 1：640^x，腹水效价寿1D8 10^-7，5D7 10^-7、4B1 10^-7，2B8 10^-5，1A4 10^-4。用免疫双扩散试验结果，五株单抗中有一株属IgG类。四株属IgG类。将单抗提此后用ELISA央心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6神冠状病毒进行了特异性鉴定，除猪流行腹泻病毒外，不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D8，5D7，4B1细胞系单克隆抗体做IFA及直接EISA试验初步证明该McAb具有敏感性高，特异性强的优点，可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。     

分泌抗MCG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗ＭＣＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立周昌奎蓝兰张云峰＊＊（福建省计划生育科学技术研究所，福州３５００１１＊福建省立医院生物治疗中心＊＊福建省福港生物工程研究中心）谢弘王放（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）以苯甲酸－丙酮一步法，从...     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

EPF单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文用纯化的早孕因子免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，通过鼠－鼠杂交瘤技术，成功地建立了２株分泌ＥＰＦ单克隆抗体的杂交瘤细胞。经检测，它们所分泌的抗体亚类均为ＩｇＧ１，毁交瘤染色体数目１００－１０６条，ＥＩＳＡ检测诱生腹水抗体效价为１：１．２８＊１０＾５，连续培养生物学性状稳定。抗ＥＰＦ抗原的单克隆抗体的建立，为深入研究ＥＰＦ的生物学性质、特征提供了有力的工具。     

抗层粘蛋白（Laminin）杂交瘤细胞株的建立及临床应用

本文用纯化的层粘蛋白作为免疫原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，获得５株能稳定分泌高效价抗层粘蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。并建立了检测血清中层粘蛋白的简便、快速和稳定的酶联免疫吸附试验．用其建立的检测技术，检查了急性肝炎、慢迁肝、慢活肝、肝硬化病人和正常人血清中的层粘蛋白含量。表明除慢迁肝外，各型肝炎及肝硬化病人血清层粘蛋白的浓度明显高于正常人，病人血清中层粘蛋白升高与肝脏纤维化程度呈正相关．本研究为诊断肝纤维化、肝硬化及门脉高压症等疾病提供了一种血清学指标。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用（简报）

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2／0融合，获得4A5，4C2，5C0．6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA)，测知培养上清抗体滴度为1：16—1：128，接种同系小鼠腹腔诱生的腹水，     

6株抗rhlL－8单克隆抗体识别表位的鉴定及双单克隆抗体夹心法ELISA检测IL－8方法的建立

采用酶标抗体竞争结合试验对６株抗ＩＬ－８单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同可将６株单克隆抗体分为两组，一组包括２Ｇ２、４Ｃ３和４Ｅ１，识别相同或相近的表位；另一组包括４Ｄ７、５Ｃ９和５Ａ４，识别相同或相近的表位。在表位鉴定的基础上，选择识别不同表位的单克隆抗体用于建立双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－８，其中以４Ｄ７为包被抗体，４Ｃ３为酶标抗体的组合可获得最高的敏感性，对单核细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＭＩＬ－８）及内皮细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＥＩＬ－８）检测的敏感性可分别达到１５６ｐｇ／ｍｌ及３１２ｐｇ／ｍｌ。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备和应用

目的:获得高效价、高特异性的促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体,为建立高灵敏度的促甲状腺激素水平的测定方法奠定基础。方法:采用细胞融合技术,以TSH抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合。通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人TSH单克隆抗体杂交瘤细胞株。并对所建立的单抗进行了鉴定。结果:细胞融合率达100%,阳性率15%。共建立了5株杂交瘤细胞株,均属IgG1 类。且与FSH、HCG、LH无交叉反应。McAb腹水效价在1∶5×105 ~1∶1×107。6个月液氮冻存后复苏培养测定细胞株的稳定性好。结论:本实验的融合率高,阳性率较高,所建立的细胞株的特异性高,McAb腹水效价高。为提高TSH检测的灵敏度和简便性提供了重要条件。     

体外免疫法抗MG7人源性单抗的研制及其意义

本文建立了人淋巴细胞体外致敏技术,用本文作者既往制备的鼠抗人胃癌单抗MG7作为免疫原,在体外致敏人淋巴细胞获得成功。经与本文作者在建立的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1进行人鼠人双杂交,获得一株能与鼠源性抗体反应,但不与人、羊、马、兔等其他种属动物产生的抗体相反应的人源性单抗HMG7。本文讨论了HMG7可能的应用价值,以及在人淋巴细胞体外致敏过程中应注意的几个环节。     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

抗人IL-11单克隆抗体的研制及生物学特性研究

以rhIL 11作为免疫原常规免疫BALB/c小鼠 ,采用细胞融合、ELISA检测和杂交瘤细胞克隆筛选等方法获得了 2株鼠抗人IL 11的单克隆抗体 (5A4、 1G12 ) ,分别属于IgG1亚类和IgG2a亚类。MTT法和细胞增殖试验分析表明 ,5A4、 1G12均不同程度地抑制IL 11对其依赖株细胞B9 11的增殖效应。表明成功地研制成了 2株鼠抗人IL 11的中和功能性单克隆抗体     

鼠抗HCV单克隆抗体研制及初步应用探讨

交联HCV 合成多肽抗原,用鼠一鼠杂交瘤技术获得8株稳定分泌抗HCV 的特异性单抗,分别命名为YLCV 系1—8。经初步研究结果表示,抗HCV 抗体阳性血清可抑制酶标YLCV-1和YLCY-5单抗与抗原的反应。抗原测定结果6份血清中有一份呈强阳性反应,由此提示单抗在HCV 抗体抗原检测系统中应用的可能性,同时为HCV 抗原成份的分析提供了必要的条件.     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单机与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

应用单克隆抗体测定纤维连结蛋白ELISA方法的建立

本文介绍用McAb作为包被和检测抗体进行双抗体夹心ELISA来测定人血浆纤维连结蛋白。通过实验找出最佳条件,即两种McAb混合使用,在McAb和酶结合物稀释液内加入4％PEG及使用TMBI底物的最适浓度等,该法敏感性可达80ng/ml,可作为临床常规方法使用。     

抗人肺腺癌单克隆抗体与N-乙酰消瘤芥结合物的制备及其选择性细胞毒的研究

本文报道了鼠抗人肺腺癌单克隆抗体-N-乙酰消瘤芥结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用,经化学修饰后的N-乙酰消瘤芥活性酯与抗体偶合,结合物的克分子结合比为1:79,且不影响抗体活力,在相似浓度下比较了单抗结合物、单抗、正常鼠IgG及其结合物与药物对靶细胞的毒性试验。结果表明:单抗结合物能显著抑制[~3H]-胸腺嘧啶核苷参入细胞量,其抑制率分别为92％、60％、40％、45％与15％。提示N-乙酰消瘤芥单抗结合物的抑制作用是由单抗导向的。