两种肺炎支原体检测方法结果分析

目的 比较间接免疫荧光法(IFA)和被动凝聚法两者结果 之间差异.方法 先用IFA法检测112份患儿肺炎支原体MP-IgM阳性标本,再用被动凝集法检测这112份阳性标本,对两种方法 测定的结果 进行分析.结果 112份IFA法MP-IgM阳性的标本,被动凝集法阳性91份.结论 IFA法检测肺炎支原体的敏感性和特异性高于被动凝聚法.     

不同检测方法对儿童肺炎支原体感染诊断价值分析

目的探讨间接免疫荧光法(IFA)、被动凝集法、化学发光法对儿童肺炎支原体(MP)感染的诊断价值。方法回顾性分析2019年1—3月沈阳市儿童医院收治的162例呼吸道感染患儿的临床资料。依据检测方法将患儿分为A组(IFA检测)、B组(被动凝集法检测)及C组(化学发光法检测),每组各54例。比较3种检测方法的免疫球蛋白M(IgM)阳性检出率,以及诊断MP感染的灵敏度、特异度、准确度。结果 A组、B组检测的IgM阳性率明显高于C组,差异有统计学意义(P<0.05);而A、B两组检测的IgM阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A、B两组检测MP感染的灵敏度、特异度、准确度均高于C组,且A组检测MP感染的特异度高于B、C两组,B组检测MP感染的灵敏度高于A、C两组,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与化学发光法相比较,IFA法、被动凝集法对儿童MP感染的诊断价值更高。IFA法、被动凝集法联合检测,同时结合临床症状、体征观察,或可提高儿童MP感染的早期诊断率。     

SARS病毒抗体间接免疫荧光检测方法的建立

目的　建立快速检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中特异抗体的间接免疫荧光方法 ,为SARS的临床确诊提供参考依据。方法　用本实验室新分离的SARS冠状病毒BJ0 1和GZ0 1株感染Vero E6细胞 ,待 2 5 %细胞出现病变时 ,用胰蛋白酶消化细胞后以 2× 10 7/ml浓度 4 0 μl的细胞滴到 10孔镀膜的玻片上 ,CO2 温箱培养 4h后丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光检测了从北京和广州地区采集的 15 4例临床诊断为SARS的患者和 14例非SARS呼吸系统疾病和 10 0份健康人血清。结果　成功地建立了检测SARS冠状病毒抗体的间接免疫荧光染色方法 ,并对 15 4例临床诊断为SARS的患者的血清标本进行检测 ;SARS冠状病毒抗体阳性 14 2例 ,阳性率为 92 3% ,而 14例非SARS呼吸系统疾病患者和 10 0名健康人血清检测均为阴性。结论　本方法具有良好的特异性和灵敏度 ,可作为SARS实验室诊断的可靠方法     

结核病4种实验室检测方法的评价

结核病４种实验室检测方法的评价１０００９１北京解放军第３０９医院李晓明王巍张敦熔李国利夏湘萱吴雪琼关键词结核，肺；聚合酶链反应；抗酸染色；酶联免疫吸附试验；细菌培养中国图书资料分类号Ｒ３７８．９１在结核病病原学诊断的方法中，抗酸染色和细菌培养是较传统...     

双抗体夹心ELISA检测生殖支原体抗原方法的初步建立及临床应用

目的 :建立检测生殖支原体 (Mycoplasmagenitalium ,Mg)抗原的双抗夹心ELISA方法 ,探讨其临床应用的可行性。方法 :采用不同株Mg单抗用ELISA双抗夹心法检测Mg抗原 ,摸索该方法检测Mg抗原的最佳实验条件。对Mg标准株及 10 8份临床标本进行平行测定 ,观察双抗夹心ELISA方法的敏感性和特异性及该方法与PCR检测方法的符合率。结果 :包被单抗量为 2 0 μg ml,酶标记单抗 1∶2 0 0稀释时 ,P N值最大 ;检测Mg抗原敏感度达 2 μg ml;10 8份临床标本PCR检测阳性率 8.2 6 % (10 10 8) ;双抗夹心ELISA法检测阳性率 7.4 1% (8 10 8) ,两者符合率达 89.71%。结论 :建立的双抗夹心ELISA法检测Mg抗原具有快速、敏感、经济、简便易行等优点     

利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究

目的：利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体。方法：将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色。结果：本法的敏感性和特异性分别为93．33％和100％,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94．87％。结论：本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景。     

Nested-RT-PCR技术检测CEA mRNA的方法及敏感性

癌胚抗原 (ＣＥＡ)自 196 5年应用于临床以来已作为胃肠道肿瘤的诊断和判断预后的监测指标。ＣＥＡ的检测方法较多 ,但常用的有放射免疫法 (包括间接法、直接法 )、固相放免法和酶免疫法。ＣＥＡ在所有肿瘤中大肠癌的表达是最高的 ,但用上述检查方法大肠癌患者血清ＣＥＡ的阳性率ＤｕｋｅｓＡ、Ｂ期仅为 36 % ,ＤｕｋｅｓＣ、Ｄ期也只有 74%。无论血清放免、固相免疫、酶免疫还是单克隆抗体放射显影法的敏感性都较低。1　材料与方法1.1　材料　①人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞株 (中科院上海细胞所提供 ) ;②血液细胞总ＲＮＡ提取试剂盒和Ｔａｑ酶、…     

北京地区1942例儿童急性呼吸道感染病原体检测结果分析

目的分析北京地区儿童急性呼吸道感染的病原学流行特点,为临床诊疗提供病原学依据。方法采用间接免疫荧光法检测人血清中8种呼吸道病原体的Ig M抗体,根据不同性别、不同年龄和不同季节的病原体阳性率以及合并感染情况进行统计学分析。结果本组1 942例患儿,检出病原体者528例,阳性率27.2%。其中,甲型流感病毒检出阳性率(22.6%)最高,其他依次为乙型流感病毒、腺病毒、嗜肺军团菌、肺炎支原体、副流感病毒、肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒。检出病原体的528例阳性患儿中,感染双重病毒者134例(25.4%),感染三重及三重以上病毒者39例(7.4%)。全部1 942例患儿中,男性患儿病原体阳性率(27.9%)和女性患儿阳性率(25.9%)之间,差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄组中,≤1岁组病原体阳性率(19.0%)显著低于其他3个年龄组,差异均有统计学意义(P<0.05);不同季节病原体的阳性率有差异,春、秋季的病原体阳性率(42.6%和39.7%)显著高于夏、冬季的阳性率(27.2%和27.5%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论年龄和季节是北京地区儿童呼吸道病原体感染的特异性因素,病原体混合感染率较高,病原体全年以甲型流感病毒为主,其他病原体流行有季节性特点。     

小儿肺炎支原体检测方法的评价和存在的问题

通过对肺炎支原体(Mp)感染患者的三种检测方法的评价和分析,协助临床早期诊断Mp感染,及早治疗,缩短病程.并对检测中存在亟待解决的问题进行剖析,同时通过跟踪走访观察,就支原体的三种检测方法而言,目前的支原体检测方法还是比较实用的.     

牛分枝杆菌ESAT-6蛋白抗体间接ELISA方法的建立

利用分子克隆技术,提取结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6基因,然后对其进行克隆表达,获得高效表达的ESAT-6蛋白,Westem blot证实ESAT-6蛋白可与结核牛阳性血清发生特异性反应.以纯化复性的ESAT-6重组蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA特异性为94%、敏感性为63.35%.交叉反应试验表明,该抗原只与牛副结核病阳性血清有交叉反应,而不与其他5种常见的牛病阳性血清发生交又反应.用间接ELISA方法对285份PPD阳性牛血清、对74份PPD阴性牛血清、79份牛γ-干扰素(IFN-γ)检测阳性血清进行检测,其负荷率分别为62.1%、98.64%、83.5%.实验结果表明建立的间接ELISA方法可以用于牛结核病感染和免疫抗体检测,且具有很好的开发和应用前景.     

单克隆抗体免疫荧光法检测孕妇生殖道沙眼衣原体

沙眼衣原体(CT)是性传播疾病和眼结膜炎的主要病原微生物，孕妇生殖道CT感染与胎膜早破、早产、产后盆腔炎、新生儿肺炎与结膜炎等疾病有关。由于沙眼衣原体感染无典型的 临床症状，而往往不被注意［1］，因此，在临床上建立敏感特异的CT检测方法意义 重大。本文采用单克隆抗体免疫荧光法测定CT，以了解孕妇生殖道CT感染情况，为临床提供 诊断依据，现报道如下。     

单克隆抗体免疫荧光法检测孕妇生殖道沙眼衣原体

沙眼衣原体(CT)是性传播疾病和眼结膜炎的主要病原微生物，孕妇生殖道CT感染与胎膜早破、早产、产后盆腔炎、新生儿肺炎与结膜炎等疾病有关。由于沙眼衣原体感染无典型的 临床症状，而往往不被注意［1］，因此，在临床上建立敏感特异的CT检测方法意义 重大。本文采用单克隆抗体免疫荧光法测定CT，以了解孕妇生殖道CT感染情况，为临床提供 诊断依据，现报道如下。     

磁共振扩散加权成像监测恩度与贝伐单抗抗肿瘤血管生成的实验研究

目的 评价磁共振扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)早期监测抗肿瘤血管生成药物疗效的可行性.方法 将20只荷人肺腺癌裸鼠随机分为3组,对照组和恩度(Endostar)组各7只,联合贝伐单抗(Bevacizumab,Avastin)组6只.治疗第3天对照组和恩度组行DWI成像并测量ADC值,采用t检验比较2组ADC值.扫描完成后每组各取1只裸鼠肿瘤组织行透射电镜观察.治疗第10天3组均行DWI成像,采用方差分析比较各组的ADC值.扫描完成后剖取肿瘤组织行病理学检查.结果 治疗第3天,恩度组的ADC值明显高于对照组,两者差异有统计学意义(t=-5.505,P<0.01),此时2组肿瘤体积没有明显差异.透射电镜结果显示恩度组肿瘤组织内部分细胞发生变性,并出现凋亡现象.治疗第10天恩度组和联合贝伐单抗组的ADC值均高于对照组(P值分别为0.018和0.001),联合贝伐单抗组ADC值高于恩度组,差异没有统计学意义(P=0.211).此时恩度组和联合贝伐单抗组肿瘤体积均小于对照组,差异有统计学意义(P值分别为0.000和0.003),联合贝伐单抗组体积小于恩度组,差异无统计学意义(P=0.100).病理学HE染色显示恩度组可见少部分坏死区域,联合贝伐单抗组的坏死区域范围较大.免疫组化结果显示对照组、恩度组及联合贝伐单抗组肿瘤组织MVD值和VEGF的表达均呈下降趋势,其中MVD值两两之间差异均有统计学意义(P<0.05),各组间VEGF差异无统计学意义(χ2=3.455,P=0.178).结论 DWI成像能够提供肿瘤组织的微观结构和水分子扩散信息,可以无创地早期监测给予抗肿瘤血管生成药物后肿瘤微环境的变化.     

贝伐单抗抑制骨肉瘤血管生成及与放疗的协同作用研究

目的 观察贝伐单抗及其联合放疗对骨肉瘤裸鼠移植瘤血管生成的抑制作用.方法 人骨肉瘤细胞系9901接种的裸鼠16只,随机均分为4组.贝伐单抗组(每周注射贝伐单抗2mg/kg,1次/周,共2次),放疗组(5Gy/周,共2次),联合组(联用贝伐单抗和放疗)和对照组(无菌生理盐水注射).治疗过程中测量肿瘤长径、短径,并计算肿瘤体积,治疗第13天计算抑瘤率(TIR).通过病理观察和免疫组织化学染色法观察肿瘤的坏死、微血管密度(MVD)以及肿瘤细胞的增殖和凋亡情况.结果 贝伐单抗组、放疗组和联合组的TIR分别为32.87%、26.39%和87.50%(P<0.01),3组的肿瘤坏死率分别为11.49%±0.20%,10.30%±0.12%和27.15%±1.08%(P<0.01).对照组的MVD及增殖指数高于、凋亡指数低于其余各组(P<0.01),联合组的MVD及增殖指数低于、凋亡指数高于放疗组和贝伐单抗组(P<0.01).结论 贝伐单抗能显著抑制骨肉瘤的血管生成和肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且贝伐单抗与放疗具有协同作用.     

小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因转染胃癌GC9811细胞的功能研究

通过RT—PCR从BALB／c小鼠腹腔巨噬细胞扩增出编码小鼠α1，3—半乳糖基转移酶基因的全长cDNA并构建其真核表达载体pCDNA3．1／V5—HisAα1，3GT，pCDNA3.1／V5-HisAα1，3GT通过脂质体转染胃癌GC9811细胞，使胃癌细胞表达Galα(1，3)Gal糖表位，G418筛选2个月内的阳性克隆，RT—PCR鉴定转染细胞，间接免疫荧光染色检测转染真核表达载体的癌细胞Galα(1，3)Gal的表达，利用人体血清内针对Galα(1，3)Gal糖表位的天然抗体对癌细胞进行杀伤。结果表明，成功构建了α1，3—半乳糖基转移酶基因真核表达载体，转染α1，3—半乳糖基转移酶基因的癌细胞高表达Galα(1，3)Gal糖表位，人血清对表达该表位的癌细胞具有杀伤作用。     

间接ELISA法测定猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的含量

目的建立猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的测定方法,为药代动力学研究提供简单快速的方法。方法采用EGFR包外区包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测抗EGFR单克隆抗体的间接ELISA法,并对其特异性、精密度、准确度、稳定性和稀释效应进行确证。结果在0.46～14.56ng·mL^-1浓度范围内,测定方法具有较好的logistic曲线拟合关系,最低检测限为0.46ng·mL^-1,组内及组间精密度的RSD分别为6.10%～9.81%,10.17%～11.93%。结论该方法简便、准确、特异性强,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中抗EGFR单克隆抗体的检测。     

两种方法检测肺炎支原体抗体结果分析

肺炎支原体是5-35岁儿童和成人肺部感染常见的病原体,通过呼吸道飞沫传染,除引起肺炎外,还可使心脏、气道、肾脏、脑等多脏器受累[1].儿童得了支原体肺炎,症状往往不太典型,容易引起误诊.临床上早期诊断,早期治疗可明显缩短M.D感染病程.发达国家已将肺炎支原体的实验室诊断列为呼吸道感染性疾病的常规检测项目.目前实验室常用的肺炎支原体IgM抗体的检测方法主要有ELISA法和金标免疫斑点法.金标免疫斑点法操作简便,快速,单人份即可操作,很快在临床得到广泛应用.但由于结果是由目测决定,有一定的主观性,使得结果的判断出现了差异.为了规范我室的判断标准,特将33份标本分别用ELISA法和金标免疫斑点法两种方法进行检测,以ELISA法为标准,来规范金标免疫斑点法的判断标准.     

小鼠胚胎成纤维细胞复制性衰老模型的构建及衰老溶酶体功能检测

目的 构建小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）复制性衰老模型,检测衰老溶酶体相关功能改变,为衰老相关溶酶体疾病提供有效的细胞模型。方法 通过酶消化法分离提取MEF,体外连续传代培养构建MEF复制性衰老模型,实时定量PCR(qPCR)检测衰老标志物p16和p21,衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色方法进一步验证衰老状态;通过溶酶体探针类染料LysoTracker Red DND-99探针及LysoSensor Yellow/Blue DND-160双激发探针追踪酸性溶酶体定性检测溶酶体酸碱性及定量检测溶酶体pH值;通过偶联自淬BODIPY?染料的牛血清白蛋白（DQ-BSA）检测衰老溶酶体的降解能力。结果 qPCR和SA-β-gal染色结果显示,MEF复制性衰老模型构建成功。与年轻P3代MEF相比,衰老P9代MEF溶酶体的酸性明显丧失,差异有统计学意义（P<0.0001）,衰老P9代MEF溶酶体的降解能力明显降低（P<0.05）。结论 成功构建MEF复制性衰老细胞模型,并证明衰老MEF溶酶体的酸性丧失以及降解能力下降。     

PreSlAg、HBeAg和HBV—DNA的对比检测与分析

目的：通过对比检测和分析739份血清中preS1蛋白、HmAg和HBV—DNA的检测阳性率，为临床正确选用实验室指标防治乙型肝炎提供依据。方法：应用ELISA法对739份血清进行PreSlAg和HBV血清标志物检测，并与实时荧光定量PCR检测HBV—DNA结果进行比较。结果：所有739份血清中，PmSlAg阳性率为34．6％（256／739），HmAg阳性率为觚7％（227／739），HBV—DNA阳性率为58.9％（435／739）。227份HBeAg阳性血清中，PreSlAg阳性率55．9％（127／227），HBV-DNA阳性率96．0％（218／227）；512份HBeAg阴性血清中，PreSlAg阳性率25．2％（129／512），HBV—DNA阳性率为42．4％（217／512）。HBeAg、HBV—DNA和PreSl的阳性率有显著差异（P〈0．05），阳性率高低依次为HBV—DNA〉PreSl〉HBeAg；HBeAg阳性血清中PreSlAg（55．9％）阳性率显著高于HmAg阴性血清PreSlAg（25．2％）阳性率（x^2=36．5，P〈0．01）；HBV—DNA阳性血清的PreSlAg检出率58．9％（256／435）显著高于HBV—DNA阴性血清的PreSlAg检出率1＆4％（56／304）（P〈0.01）；PreSl抗原与HBV—DNA阳性符合率为（200／256）7＆1％，阴性符合率为（248／483）51．3％。598份HBeAg阳性血清（阳性率为80．9%，598／739）中HBeAg、PreSl和HBV—DNA阳性数（率）分别是224（37．5%）、253（42．3oA）、417（69．7％）。结论：PreSlAg、HBV—DNA、HBeAg的阳性率有显著性差异（P〈0．05）。作为HBV感染和复制的指标，以检测HBV—DNA最为可靠，而PmSlAg可能较HBeAg更敏感。在HBV感染的不同时期，如何理解和使用上述指标对防治乙型肝炎有重要意义。