血管紧张素Ⅱ、卡托普利及氯沙坦对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管内皮细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦的影响。方法：采用流式细胞术测定在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下血管内皮细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦的影响。结果：血管紧张素Ⅱ可明显促进血管内皮细胞凋亡，且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性；单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用，卡托普利有一定的作用，二者合用时抑制作用较明显。结论：血管紧张素Ⅱ具有明显的促血管内皮细胞凋亡的作用；合用卡托普利和氯沙坦可明显抑制内皮细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对内皮细胞致凋亡效应及血脂康的保护作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖与凋亡的影响及血脂康对AngⅡ此效应的干预作用,探讨AngⅡ的致动脉粥样硬化作用及血脂康调脂之外的内皮保护作用。方法将体外培养内皮细胞株ECV304进行实验分组:空白对照组;AngⅡ诱导组,培养基中AngⅡ终浓度分别为10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L,与细胞共孵育18h。利用三磷酸腺苷生物素发光法(ATP法)检测AngⅡ对HU VECs生长增殖的影响,用电子显微镜观察AngⅡ(10-4mol/L)诱导后内皮细胞的超微结构特点,用流式细胞仪检测AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化,采用比色法检验AngⅡ(10-4mol/L)诱导后内皮细胞Caspase3活性的改变;血脂康干预组,培养基中AngⅡ浓度为10-4mol/L,同时加入血脂康500ng/ml与细胞共培养18h,检测该组内皮细胞凋亡率和Caspase3活性的变化。结果与对照组比较,不同浓度(10-8～10-4mol/L)的AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖(P<0.05),且其作用呈剂量依赖性;不同浓度(10-7～10-4mol/L)的AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡(P<0.05),同时Caspase3的活性在AngⅡ(10-4mol/L)作用后明显增加(P<0.01);透射电镜下可见AngⅡ诱导后内皮细胞呈明显凋亡改变;血脂康(500ng/ml)可抑制AngⅡ(10-4mol/L)所诱导的内皮细胞凋亡(P<0.05)。结论     

血管紧张素Ⅱ调控bax、bcl-2 mRNA表达诱导血管内皮细胞凋亡

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导细胞凋亡的机制。方法健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代，用不同浓度AngⅡ作用18h，用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导细胞凋亡及其量效关系；用RT—PCR检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果．AngⅡ与2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）激动剂CGP42112A一样可以诱导血管内皮细胞凋亡；并且凋亡强度与AngⅡ是典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP4211A作用18h后，bax mRNA显著增加，bcl-2 mRNA显著减少。结论AngⅡ通过在转录水平调节bax和bcl-2 mRNA的表达，从而诱导血管内皮细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ诱导人内皮细胞凋亡

为探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能否诱导人内皮细胞凋亡,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度AngⅡ培养不同时间,用TUNEL和ELISA检测细胞凋亡,并检验Caspase-3酶活性变化.用RT-PCR检测AngⅡ受体AT1和AT2的mRNA表达.发现AngⅡ可以诱导出典型的凋亡,凋亡细胞阳性率极显著高于对照组,凋亡强度与AngⅡ呈现剂量依赖关系.Caspase-3酶活性在AngⅡ作用后有极显著的增加.内皮细胞同时表达AT1和AT2的mR-NA.结果表明AngⅡ经AT1或(和)AT2可以诱导人内皮细胞凋亡,并且是Caspase-3依赖性的.这一结果有助于阐明AngⅡ的致病机制.     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 探讨AngⅡ诱导人血管内皮细胞Ⅱ凋亡的作用及其机制.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,用不同浓度AngⅡ及神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉素B1(fumonisin B1,FB1)处理细胞,采用TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA及蛋白进行表达分析.结果 AngⅡ处理组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P<0.05)且具有时间和剂量依赖性,对照组和10-7、10-6、10-5mol/L AngⅡ处理24 h后各组细胞凋亡率分别为(2.2±1.1)%、(6.0±1.2)%、(17.5±2.3)%、(27.4±4.5)%;终浓度10-6mol/L的AngⅡ处理6、24、48 h后细胞凋亡率分别为(6.2±2.3)%、(15.5±3.1)%、(21.6±2.5)%;FB1能显著抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡(P<0.05),AngⅡ处理组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P<0.05),FB1组bax mRNA和蛋白表达较对照组没有显著变化(P>0.05).结论 AngⅡ通过神经酰胺及bax诱导细胞凋亡,其中bax作为神经酰胺的下游基因起作用.     

脉平对血管紧张素II所致平滑肌细胞基质金属蛋白酶变化的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶（MMPs）变化的作用及药物对其影响。方法采用RT-PCR方法检测在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下血管平滑肌细胞MMPs的变化和卡托普利、氯沙坦及脉平对其影响。结果血管紧张素Ⅱ可诱导血管平滑肌细胞MMPs的表达,MMP-9表达较MMP-1和MMP-2出现早;应用药物后对血管紧张素Ⅱ的作用有明显的抑制作用。结论血管紧张素Ⅱ具有一定促进血管平滑肌细胞MMPs表达作用,尤其在大剂量作用较明显;脉平可明显抑制血管紧张素Ⅱ的作用。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的探讨氯沙坦(LT)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡和凋亡调控基因的影响.方法采用流式细胞技术测定在AngⅡ不同浓度和不同作用时间下VSMC凋亡率及凋亡调控基因Fas、bcl-2表达的变化和氯沙坦对其的影响.结果①随着AngⅡ作用浓度的增加,VSMC凋亡率及Fas,bcl-2基因的表达量均增加(2.35±0.56 vs 19.71±3.03;Fas1.36±0.32 vs 14.67±1.39;bcl-22.35±0.51vs 16.65±1.42,P<0.01);②LT可促进VSMC的凋亡,促进Fas基因的表达,但可抑制bcl-2基因的表达(19.71±3.03 vs 27.65±2.11,Fas14.67±1.39 vs 20.14±1.41;bcl-216.65±1.42 vs 7.17±1.38,P<0.05);③随着AngⅡ作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达均增加(1.43±0.21 vs 18.56±3.68,Fas1.21±0.32 vs 8.62±1.54,bcl-22.53±0.71 vs 15.41±1.63,P<0.01);④随着LT作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas基因的表达均增加,对bcl-2基因的表达则有抑制作用(18.56±3.68 vs 31.25±2.89,Fas8.62±1.54vs 17.46±1.47;bcl-215.41±1.63 vs 8.45±1.51,P<0.05).结论AngⅡ具有促进VSMC凋亡和凋亡调控基因表达作用;氯沙坦可调节AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用.     

黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的致凋亡效应及黄芪含药血清的保护作用。方法将培养的 ECV-304分为以下3组：（1）空白对照组;（2）AngⅡ诱导组,使培养基中 AngⅡ终浓度为0、1×10－6、1×10－5、1×10－4 mol／L,与细胞共孵育18 h。MTT 法检测 AngⅡ对 HUVECs 生长增殖的影响;流式细胞仪检测 AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化;电子显微镜观察 AngⅡ诱导后内皮细胞的超微结构特点;（3）黄芪含药血清干预组,培养基中加入不同浓度黄芪含药血清培养24 h 后,加入 AngⅡ（1×10－4 mol／L）孵育18 h,检测内皮细胞凋亡率的变化。结果不同浓度的 AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖。不同浓度的 AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡。透射电镜下可见 AngⅡ诱导后内皮细胞的凋亡形态。黄芪含药血清抑制 AngⅡ所诱导的内皮细胞凋亡。结论黄芪含药血清具有内皮保护作用。     

氯沙坦对血管紧张素II所致血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的:探讨氯沙坦(LT)对血管紧张素II(AngII)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡和凋亡调控基因的影响。方法:采用流式细胞技术测定在AngII不同浓度和不同作用时间下VSMC凋亡率及凋亡调控基因Fas、bcl-2表达的变化和氯沙坦对其的影响。结果:①随着AngII作用浓度的增加,VSMC凋亡率及Fas,bcl-2基因的表达量均增加(2.35±0.56vs19.71±3.03;Fas:1.36±0.32vs14.67±1.39;bcl-2:2.35±0.51vs16.65±1.42,P<0.01);②LT可促进VSMC的凋亡,促进Fas基因的表达,但可抑制bcl-2基因的表达(19.71±3.03vs27.65±2.11,Fas:14.67±1.39vs20.14±1.41;bcl-2:16.65±1.42vs7.17±1.38,P<0.05);③随着AngII作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达均增加(1.43±0.21vs18.56±3.68,Fas:1.21±0.32vs8.62±1.54,bcl-2:2.53±0.71vs15.41±1.63,P<0.01);④随着LT作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas基因的表达均增加,对bcl-2基因的表达则有抑制作用(18.56±3.68vs31.25±2.89,Fas:8.62±1.54vs17.46±1.47;bcl-2:15.41±1.63vs8.45±1.51,P<0.05)。结论:AngII具有促进VSMC凋亡和凋亡调控基因表达作用;氯沙坦可调节AngII对血管平滑肌细胞的作用。     

血管内皮生长因子对软骨细胞凋亡的作用

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对软骨细胞凋亡的影响。方法乳鼠关节软骨细胞体外培养成功后,实验分为三组。每组加入不同处理因素进行干预,对照组：不加任何处理因素;VEGF组：VEGF 10 ng/m L;白介素（IL）-1β组：IL-1β10 ng/m L,连续培养48 h。采用流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡率,采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达,通过硝酸还原酶法检测上清液中一氧化氮（NO）的含量。结果软骨细胞的凋亡率VEGF组[（9.28±2.35）%]及IL-1β组[（17.14±5.07）%]明显高于对照组[（2.83±0.77）%];软骨细胞PCNA蛋白表达VEGF组（0.86±0.24）及C组（0.72±0.05）明显低于对照组（1.01±0.11）;软骨细胞分泌的NO含量VEGF组[（112.31±12.73）μmol/L]及IL-1β组[（150.02±15.34）μmol/L]显著高于对照组[（49.35±6.68）μmol/L],差异均有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 VEGF能够介导软骨细胞凋亡,抑制软骨细胞的增殖活性。     

血管内皮生长因子对乙醇诱发大鼠肝窦内皮细胞凋亡的作用

目的 研究乙醇引起肝窦内皮细胞(SEC)死亡的类型和血管内皮生长因子(VEGF)对这种死亡的作用,以及涉及Ets-1和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8的作用机制.方法 按照Braet等的方法 并作改进,从Wistar雄性大鼠分离和培养SEC.然后,将SEC与乙醇(25～100 mmol/L)和VEGF(20～30 ng/ml)共同孵育6 h,采用缺口末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡.以Western印迹法测定Ets-1蛋白表达和FLICE/Caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定Caspase-8活性的变化.结果 相差显微镜下,培养3 d的SEC呈纺锤状并基本融合.而与乙醇孵育的过程中SEC趋于皱缩和死亡.荧光显微镜下,对照SEC绝大多数呈TUNEL染色阴性;添加乙醇(100 mmol/L)2 h后TUNEL染色阳性细胞开始增加,6 h后约75%细胞呈TUNEL染色阳性;并且,SEC与乙醇(25～100 mmol/L)共同孵育6 h,TUNEL染色阳性的SEC增加呈明显剂量依赖性关系(均P＜0.05).VEGF(20～30 ng/ml)明显抑制100 mmol/L的乙醇引起SEC凋亡,呈明显剂量依赖性关系(P＜0.05);加入VEGF(30 ng/ml)以后引起的TUNEL染色阳性细胞数只是单纯与乙醇孵育的71%(P＜0.05).加入100 mmol/L乙醇培养6 h后,SEC的Ets-1蛋白表达明显减少,VEGF(30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Ets-1蛋白减少.SEC与乙醇(100 mmol/L)孵育2 h时Caspase-8活性明显增加至44.9±14.3;VEGF(20和30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起SEC表达Gaspase-8活性增加(分别为30.4±2.0和25.2±2.2,均P＜0.05).结论 VEGF防止乙醇诱导的SEC凋亡,至少部分可能是通过抑制乙醇下调SEC表达Ets-1蛋白和乙醇上调Caspase-8活性表达.     

17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素（17-AAG）对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将实验组PC12细胞分成两组：实验一组分别加入不同终浓度（0.005、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L）17-AAG培养液;实验二组分别加入150μg/L VEGF（VEGF组）、0.1μmol/L17-AAG（17-AAG组）、0.1μmol/L17-AAG＋150μg/L VEGF（17-AAG＋VEGF组）培养液。另设DMSO组（阴性对照组）和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率;Wrights-Giemsa染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中VEGF-165蛋白的表达。结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞增殖（P〈0.05）;24 h半数抑制浓度（IC50）为0.1μmol/L。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h的细胞凋亡率均明显高于空白对照组（P〈0.01）。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h,VEGF-165蛋白表达逐渐降低;各时点VEGF-165蛋白表达量与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 HSP90抑制剂17-AAG能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

TRAIL和endostatin双基因-放射治疗对人血管内皮细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的：观察重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES携带的双基因TRAIL和endostatin联合X射线照射后,对血管内皮细胞ECV304增殖、周期和凋亡的影响。方法：实验分为对照组、空载体pshuttle转染组、TRAIL单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL转染组、endostatin单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shES转染组和TRAIL、endostatin双基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES转染组。细胞转染采用脂质体介导的方法进行,对照组不转染。细胞转染后给予X射线照射（照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy）,采用ELISA法检测转染细胞中TRAIL和endostatin蛋白的表达,并分别采用MTT及PI单染或/和Annexin Ⅴ双染流式细胞术（FCM）检测TRAIL、endostatin单/双基因治疗联合放射治疗对ECV304细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果：2.0 Gy X射线照射后与0 h比较,各时间点转染pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES的ECV304细胞上清中TRAIL和endostatin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,分别于12和24 h达峰值;不同剂量X射线照射可诱导TRAIL和endostatin蛋白表达,且蛋白表达水平随照射剂量的增加而明显升高（P<0.05或P<0.01）。MTT结果显示,X射线照射后, pshuttle-Egr1-shTRAIL、pshuttle-Egr1-shES和pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组ECV304细胞A490值均明显低于对照组和pshuttle组,并显示一定的时间-效应和剂量-效应关系,并伴有细胞凋亡率明显增加、G₂+M期细胞百分数明显上升和G₀/G₁期细胞百分数明显下降。上述细胞效应,尤以pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组变化最为明显,与pshuttle-Egr1-shTRAIL和pshuttle-Egr1-shES组比较差异有统计学意义（P<0.05 或 P<0.01）。结论： TRAIL和endostatin双基因联合放射治疗可抑制ECV304细胞生长,影响细胞周期进程,促进细胞凋亡,且其治疗效果优于单纯放射治疗或TRAIL/endostatin单基因-放射治疗。     

血管紧张素II、卡托普利及氯沙坦对血管内皮细胞凋亡的影响

目的 :探讨血管紧张素II在不同浓度和不同作用时间下对血管内皮细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦的影响。方法 :采用流式细胞术测定在血管紧张素II不同浓度和不同作用时间下血管内皮细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦的影响。结果 :血管紧张素II可明显促进血管内皮细胞凋亡 ,且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性 ;单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用 ,卡托普利有一定的作用 ,二者合用时抑制作用较明显。结论 :血管紧张素II具有明显的促血管内皮细胞凋亡的作用 ;合用卡托普利和氯沙坦可明显抑制内皮细胞凋亡     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株（ECV304细胞）增殖及分泌血管内皮生长因子（VEGF）功能的影响.方法以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12 h后细胞显微结构.结果不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12 h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用（P＜0.01）,低剂量兔血清作用1 h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF（P＜0.01）.结论生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一.     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的 探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)功能的影响。方法 以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12h后细胞显微结构。结果 不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用(P<0.01),低剂量兔血清作用1h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF(P<0.01)。结论 生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一。