妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘合体滋养细胞中白细胞介素18和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1表达及其意义

目的通过检测妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇胎盘合体滋养细胞中白细胞介素18(IL-18)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的定位和表达及caspase-1的生物学活性,探讨其与ICP发病的关系。方法 2011年3月至11月在重庆医科大学附属第一医院选择ICP孕妇40例为研究对象,包括ICP轻度组(20例),ICP重度组(20例),以同期行择期剖宫产术的20例正常孕妇为对照组。采用免疫组化检测IL-18和caspase-1的表达。结果 ICP重度组孕妇血清中IL-18及丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶水平显著高于轻度组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ICP重度组胎盘合体滋养细胞中IL-18和caspase-1表达水平显著高于轻度组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-18和caspase-1信号通路介导的免疫损伤可能参与了ICP孕妇的肝功能损害。     

人类白细胞抗原F在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘中的表达及意义

目的:研究人类白细胞抗原F(HLA-F)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织中的表达,并从免疫学角度探讨其与ICP发病的关系。方法:采用免疫组织化学技术对妊娠晚期(ICP组40例和正常对照组40例)胎盘组织中表达的HLA-F蛋白进行定位;再通过PCR及蛋白质免疫印迹技术,研究ICP患者(轻度20例,重度20例)胎盘组织中HLA-F在核酸分子(mRNA)及蛋白中的表达情况。结果:1妊娠晚期胎盘组织中仅蜕膜板绒毛外滋养细胞(EVCT)膜上有HLA-F蛋白表达。2正常对照组和ICP组间胎盘组织中HLA-F mRNA的表达差异无统计学意义(P0.05);正常对照组和轻度ICP、重度ICP3组间胎盘组织中HLA-F mRNA的表达差异均无统计学意义(P0.05);ICP组胎盘组织中HLA-F蛋白的表达水平低于正常对照组(0.6092±0.3370vs1.3451±0.5540),差异有统计学意义(P0.05);重度ICP胎盘组织中HLA-F蛋白的表达水平显著低于正常对照组(0.5328±0.2762vs 1.3451±0.5540)差异有统计学意义(P0.05);而轻度ICP和正常对照组间胎盘组织中HAL-F蛋白的表达量差异无统计学意义(P0.05)。3ICP非地塞米松组和ICP地塞米松组间胎盘组织中HLA-F mRNA及蛋白的表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:HLA-F蛋白表达于妊娠晚期胎盘组织蜕膜板EVCT细胞膜上;ICP患者胎盘组织中HLA-F蛋白表达水平降低可能是导致ICP患者妊娠免疫耐受平衡紊乱的重要机制之一。     

妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘组织中OATP-A基因表达的研究

目的:探讨有机阴离子转运多肽OATP-A在正常晚孕妇女及ICP孕妇胎盘组织的表达水平及意义。方法:收集正常晚孕胎盘组织(对照组)、轻度ICP胎盘组织及重度ICP胎盘组织各10例。采用免疫组化、Western blot分别检测胎盘组织中OATP-A的组织学定位及蛋白表达水平。结果:正常组及ICP组胎盘组织中OATP-A表达均定位于胎盘滋养细胞的细胞膜,血管内皮无表达。对照组、ICP轻度组及ICP重度组的OATP-A蛋白表达量分别为0.21±0.02、0.53±0.04、0.79±0.12,ICP轻度组及重度组OATP-A蛋白表达量均高于对照组,两两比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论:ICP胎盘组织中OATP-A表达明显升高,可能是对抗胆汁淤积的一种保护性反应,对降低胎儿部分胆汁酸及胆红素水平有重要作用。     

胎盘内质网应激相关分子伴侣ERdj1与子痫前期发病的关系

目的:探讨胎盘组织中内质网应激相关分子伴侣ERdj1的mRNA及蛋白的表达,及其与子痫前期发病的关系.方法:收集剖宫产分娩36例孕妇的胎盘,其中正常足月妊娠妇女12例(正常对照组),轻度子痫前期患者12例(轻度子痫前期组),重度子痫前期患者12例(重度子痫前期组).应用透射电镜扫描观察子痫前期胎盘组织中滋养细胞内质网超微结构改变,通过RT-PCR技术检测胎盘组织中ERdj1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测胎盘组织中ERdjl蛋白的表达.结果:①正常对照组胎盘滋养细胞中内质网体积无明显增大,内质网无肿胀;子痫前期组胎盘滋养细胞中内质网体积增大、扩张及液泡化.②轻、重度子痫前期组ERdj1 mRNA的表达水平(2.1327±0.4855,2.3064±0.1004)显著高于正常对照组(0.2809±0.0064),差异有高度统计学意义(P＜0.01);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).③轻、重度子痫前期组ERdj1蛋白表达水平(3.8412±0.8423,4.9421±0.9810)显著高于正常对照组(1.5678±0.2315),差异有高度统计学意义(P＜0.01);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:子痫前期胎盘滋养细胞内质网有明显扩张及肿胀性改变;内质网应激相关分子伴侣ERdj1参与了子痫前期的病理生理过程,可能是子痫前期发病的重要机制之一.     

子痫前期患者胎盘组织中降钙素受体刺激肽-3(CRSP-3)的表达及意义

目的:研究子痫前期患者胎盘组织中降钙素受体刺激肽-3(CRSP-3)的表达与正常妊娠者之间的差异及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测住院分娩的50例子痫前期患者(子痫前期组:轻度子痫前期25例,重度子痫前期25例)和30例正常晚期妊娠孕妇(对照组)胎盘组织中CRSP-3的表达定位,Real-time PCR及Western blotting方法检测胎盘组织中CRSP-3mRNA和蛋白的表达。结果:子痫前期和正常妊娠者胎盘组织细胞滋养细胞和合体滋养细胞中均表达CRSP-3。子痫前期患者胎盘组织中CRSP-3mRNA及其蛋白表达水平均高于正常妊娠组(P均0.05)。其中重度子痫前期患者胎盘组织中CRSP-3mRNA和蛋白表达水平显著高于正常对照组(P均0.01),虽重度子痫前期胎盘组织中CRSP-3表达略高于轻度子痫前期,但组间无统计学差异(P均0.05)。结论:CRSP-3上调可能参与子痫前期的发病,但是与疾病的进展及严重程度无关。     

脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系

目的 探讨脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系.方法 采用免疫组化链霉菌抗生物蛋白-过氧化物连接(SP)法及RT-PCR技术,检测20例正常足月妊娠孕妇(正常妊娠组)、12例轻度子痫前期(轻度子痫前期组)及22例重度子痫前期(重度子痫前期组)患者胎盘组织中脂联素蛋白及其mRNA的表达,并分析其与子痫前期发病的关系.结果 (1)3组孕妇胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞胞质内脂联素蛋白均呈阳性表达,且各组内胎盘母面及子面脂联素蛋白的表达水平相互比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)重度子痫前期组胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(30 984±14 604)低于轻度子痫前期组(58 360±8910)及正常妊娠组(53 246±17 554),差异均有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组中妊娠足月者胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(38 890±20 386)与未足月者(29 319±8997)比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但与正常妊娠组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)3组孕妇胎盘组织中均有脂联素mRNA的表达.其中重度子痫前期组胎盘组织中脂联素mRNA表达水平(1.0±0.2)低于轻度子痫前期组(2.9±0.8)及正常妊娠组(3.3±1.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重度子痫前期患者胎盘组织中脂联素mRNA表达水平下降导致其蛋白表达水平也下降,提示脂联素的异常表达参与了子痫前期的发病.     

地塞米松对羊水过少胎盘和胎膜水通道蛋白8的干预效应

目的:研究水通道蛋白8(AQP8)在正常妊娠和羊水过少孕妇胎膜和胎盘中的表达,和地塞米松对羊水过少胎盘、胎膜中AQP8的干预效应。方法:选择2009年10月至2010年10月在遵义医学院附属医院产科住院的足月孕妇30例,其中羊水过少组15例,正常对照组15例。采用RT-PCR技术和免疫组织化学法检测两组在羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞和绒毛膜滋养细胞中AQP8 mRNA和蛋白的表达,及分别加入不同剂量的地塞米松(0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml)孵育24小时后,检测两组产妇胎膜和胎盘组织中AQP8 mRNA的表达水平。结果:两组绒毛膜滋养细胞中AQP8 mRNA和蛋白的表达比较,差异均无统计学意义(P0.05),而羊水过少组中AQP8 mRNA和蛋白在羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞的表达低于正常对照组(P0.05)。两组羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞AQP8 mRNA的表达随着地塞米松浓度的增加有增加趋势。两组羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞在地塞米松(50μg/ml)作用24小时后,AQP8 mRNA的表达明显增加,与地塞米松0μg/ml浓度比较,差异有统计学意义(P0.05),而绒毛膜滋养细胞在不同浓度中的表达比较无差异(P0.05)。结论:羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞与羊水量有一定的关系;地塞米松对AQP8 mRNA表达水平有促进作用,地塞米松可能通过上调羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞中AQP8的表达而对羊水量的稳态产生一定的影响。     

妊娠期肝内胆汁淤积症诱发胎儿生长受限发病机制的探究

目的:探讨ICP诱发FGR发生的可能发病机制。方法:免疫组化和ELISA法检测对照组、ICP(轻、重度)组胎盘组织中Nrf2、3-NT、Ki67、PCNA、CD34的表达分布和血清TNF-α、IL-8、IL-10的水平。结果:CD34在对照组和轻、重度ICP组胎盘中表达无差异;PCNA、Ki67、Nrf2阳性细胞在对照组胎盘中表达较多,在轻度ICP组表达较少,在重度ICP组几无表达;3-NT阳性细胞在重度ICP组胎盘中表达较多,在轻度ICP组表达较重度组少,在对照组中几无表达。轻、重度ICP组孕妇血清TNF-α水平均显著高于对照组(P0.05),但轻、重度ICP组之间无明显差异(P0.05);轻、重度ICP组孕妇血清IL-8水平均显著高于对照组(P0.05),且重度ICP组血清IL-8水平显著高于轻度ICP组(P0.05);轻、重度ICP组孕妇血清IL-10水平均显著低于对照组(P0.05),但轻、重度ICP之间无明显差异(P0.05)。结论:ICP可能通过引起胎盘氧化应激、母体炎症导致胎盘发育受损和功能障碍,从而诱发FGR的发生。     

氧化低密度脂蛋白及其受体与子痫前期发病的关系

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与子痫前期发病的关系.方法 选择2007年6月至2008年1月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕妇73例,其中轻度子痫前期孕妇35例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女45例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇血浆中oxLDL水平;采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测各组孕妇胎盘组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平;采用RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平分别为(0.42±0.11)及(0.68±0.12)mg/L,明显高于对照组的(0.35±0.14)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1mRNA表达水平分别为0.70±0.10及0.84±0.08,明显高于对照组的0.58±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为0.79±0.15及0.90±0.12,明显高于对照组的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中caspase-3 mRNA表达水平分别为3.82±0.18及5.39±0.14,明显高于对照组的2.19±0.20,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(5)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平与胎盘组织中LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.93,P<0.05);胎盘组织中LOX-1 mRNA表达与胎盘组织caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.84,P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中oxLDL水平升高,并上调胎盘组织中的LOX-1表达水平,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

ALX-R在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与NF-κB p65的相关性

目的:观察子痫前期(PE)患者胎盘组织中脂氧素A4受体(ALX-R)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的变化,探讨两者在PE发生发展中的作用及相关性。方法:采用RT-PCR方法、免疫组化法检测PE组(轻度10例、重度20例)与对照组(20例)孕妇胎盘组织中ALX-R、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)胎盘组织中ALX-RmRNA表达水平随病情严重程度而明显下降,重度PE组低于轻度PE组、对照组(P<0.01);NF-κB p65 mRNA表达水平随病情严重程度而升高,重度PE组高于轻度PE组、对照组(P<0.05);(2)胎盘组织中PE组ALX-R蛋白的表达强度低于对照组(P<0.01);PE组NF-κB p65蛋白的表达强度高于对照组(P<0.01);(3)重度与轻度PE组胎盘组织中ALX-R与NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平无明显相关性;对照组胎盘组织中ALX-R与NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平呈负相关(r=-0.86,P<0.01;r=-0.63,P<0.01)。结论:ALX-R与NF-κB p65的表达,可能与PE发生发展的病理生理过程密切相关。     

Alteration in placental expression of bile acids transporters OATP1A2, OATP1B1, OATP1B3 in intrahepatic cholestasis of pregnancy

Purpose

To investigate whether bile acids transporters organic anion transporting polypeptides 1A2 (OATP1A2), organic anion transporting polypeptides 1B1 (OATP1B1), organic anion transporting polypeptides 1B3 (OATP1B3) were differently expressed in placenta of intrahepatic cholestasis of pregnancy (ICP).

Methods

Thirty pregnant women with ICP were recruited and 30 normal pregnant women served as control. The expression of mRNA and protein were analyzed by real-time PCR and Western blotting. The localization of OATP1A2, OATP1B1, OATP1B3 were investigated by immunohistochemistry.

Results

The expression of mRNA and protein of both OATP1A2 and OATP1B3 were significantly lower in ICP placenta than normal placenta (P?Conclusions The expression of OATP1A2 and OATP1B3 in placenta decreased in ICP. The down-regulation of these transporters may be involved in the pathophysiology of ICP.     

妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘OATP1A2和OATP1B3的表达及其多态性研究

目的:探讨胎盘OATP1A2和OATP1B3的表达水平及OATP1B3基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。方法:收集42例ICP胎盘和42例正常妊娠胎盘标本及母体静脉血,RT-q PCR和Western blot法分析OATP1A2和OATP1B3的mRNA及蛋白水平,测序法分析OATP1B3 c.334TG和c.699GA多态性位点基因型。结果:ICP胎盘中OATP1A2和OATP1B3的mRNA及蛋白表达水平均显著低于正常妊娠组(P0.05)。ICP组和正常妊娠组中,OATP1B3 c.334CT多态性纯合突变频率分别为50.0%和47.6%(P0.05),c.699GA多态性纯合突变频率分别为54.8%和45.2%(P0.05);两组的两种多态性的突变等位基因频率比较,差异均无统计学意义(70.2%vs 70.2%和73.8%vs 67.9%,P0.05)。ICP组OATP1B3不同基因型对其mRNA及蛋白的表达无显著影响(P0.05)。结论:ICP胎盘中OATP1A2和OATP1B3表达下调可能与ICP高胆汁酸的发生有关,而OATP1B3 c.334TG和c.699GA多态性不影响OATP1B3表达。     

子痫前期孕妇血清与胎盘尿紧张素Ⅱ的表达及意义

目的:检测子痫前期孕妇外周血和新生儿脐血血清中尿紧张素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)水平和UⅡmRNA在胎盘组织的表达水平,探讨其在子痫前期发生发展中的作用。方法:(1)ELISA测定30例子痫前期患者及15例正常晚期妊娠孕妇(对照组)外周血和新生儿脐血血清UⅡ水平;(2)用RT-PCR法检测各组孕妇胎盘组织中UⅡmRNA的表达水平。结果:(1)重度子痫前期组孕妇外周血血清UⅡ水平明显高于轻度子痫前期组和对照组,差异均有显著性(P<0.05)。轻度和重度子痫前期组的脐静脉血清UⅡ浓度均明显高于对照组(P<0.05,P<0.001)。(2)胎盘组织UⅡmRNA表达水平在轻度和重度子痫前期组均明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:UⅡ可能参与子痫前期全身小血管痉挛的机制并在胎盘组织缺血缺氧和动脉粥样硬化的发生起重要作用。     

妊娠肝内胆汁淤积症患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡调节基因表达的关系

目的　探讨妊娠肝内胆汁淤积症 (ICP)患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡的关系 ,进一步分析ICP患者胎盘功能减退的可能机制。方法　应用放射免疫方法 ,测定 30例ICP患者(ICP组 )及 2 7例正常孕妇 (对照组 )分娩前血清甘胆酸水平 ,应用免疫组化方法测定两组孕妇胎盘细胞凋亡调节基因bax和bcl 2的表达。结果　 (1)ICP组甘胆酸水平为 (5 1 8± 5 9) μmol/L ,对照组为(9 4± 5 6 ) μmol/L ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (2 )ICP组胎盘合体滋养细胞bax阴性 2例 ,弱阳性 9例 ,中等阳性 11例 ,强阳性 8例 ;bcl 2弱阳性 12例 ,中等阳性 12例 ,强阳性 6例。对照组bax阴性 9例 ,弱阳性 13例 ,中等阳性 4例 ,强阳性 1例 ;bcl 2弱阳性 3例 ,中等阳性 4例 ,强阳性 2 0例。两组比较 ,ICP组bax表达阳性率显著高于对照组 (P <0 0 0 0 5 ) ,而bcl 2的表达阳性率又显著低于对照组 (P <0 0 0 0 5 )。 (3)孕妇血甘胆酸水平与胎盘bax表达阳性率呈线性正相关 (P <0 0 0 5 ) ,与胎盘bcl 2表达呈线性负相关 (P <0 0 0 5 )。结论　ICP患者血中高水平的甘胆酸使胎盘合体滋养细胞bax基因过度表达 ,这可能是ICP患者胎盘功能减退的机制之一。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78( GRP78)在子痫前期孕妇胎盘组织中表达及其与子痫前期发病机制的关系.方法:选择2009年1 ～12月在青岛市市立医院及青岛市第八人民医院住院的子痫前期孕妇120例,其中早发型轻度子痫前期孕妇30例(早发轻度组),晚发型轻度子痫前期孕妇30例(晚发轻度组),早发型重度子痫前期孕妇30例(早发重度组),晚发型重度子痫前期孕妇30例(晚发重度组);另选同期健康孕妇30例为健康孕妇组.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胎盘组织中GRP78mRNA相对表达量;采用免疫组织化学方法、West-ern-Blotting检测胎盘组织GRP78蛋白的表达.结果:①子痫前期各组胎盘组织中GRP78 mRNA表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②子痫前期各组和健康孕妇组胎盘组织中都有GRP78蛋白表达,主要表达于细胞质,呈棕黄色染色.Western-Blotting检测结果显示,子痫前期各组胎盘组织中GRP78蛋白表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GRP78在子痫前期胎盘组织中表达升高,GRP78的表达水平变化可能与子痫前期发病有关.     

激活素A、Bax和XIAP在特发性胎儿生长受限患者的表达及意义

目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)患者母血和脐血激活素A(ActivinA)及胎盘组织中B细胞淋巴瘤因子相关x蛋白(Bax)和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达及意义。方法:选取剖宫产分娩的IFGR孕妇30例作为实验组,同期因社会因素剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组母血、脐血ActivinA水平;免疫组化法检测两组胎盘组织中Bax与XIAP的表达。结果:实验组母血、脐血ActivinA水平(102.659±16.467,57.752±13.498)ng/ml均明显高于对照组(75.927±10.519,29.870±5.992)ng/ml(P<0.05)。Bax、XIAP在胎盘合体滋养细胞中的表达,实验组Bax平均灰度值(146.513±10.611)明显高于对照组(113.672±9.631),差异有统计学意义(P<0.05);实验组XIAP平均灰度值(114.562±5.167)明显低于对照组(144.430±7.311),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组母血、脐血中ActivinA水平与胎盘组织中Bax表达均呈正相关(P<0.05),与胎盘组织中XIAP表达均呈负相关(P<0.05);实验组胎盘组织中Bax表达与XIAP表达呈负相关(P<0.05)。结论:母血、脐血中ActivinA升高及胎盘组织中Bax表达增加、XIAP表达降低可能是IFGR发病的重要环节之一。在IFGR中ActivinA可能通过上调Bax的表达、下调XIAP的表达,促进胎盘滋养细胞过度凋亡,影响胎盘的发育和功能,进而影响胎儿生长发育。