双氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡的信号通路研究进展

双氢青蒿素作为青蒿素的重要衍生物,是我国自行研制出的抗疟新药。近些年来,人们对双氢青蒿素进行了多方面的研究,在抗肿瘤研究方面有许多新进展,发现其诱导肿瘤细胞凋亡的机制与多条信号通路有关,例如PI3K/Akt、MAPK、STAT3、Wnt/β-catenin、NF-κB等信号通路。通过对作用机制的深入研究和阐述有望发现双氢青蒿素的新适应症,使其在临床上的应用更加广泛。     

双氢青蒿素诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:研究双氢青蒿素诱导人白血病细胞凋亡作用及其机制。方法:用双氢青蒿素处理K562细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,蛋白印迹技术(Western blot)检测线粒体、胞浆细胞色素C的表达。结果:双氢青蒿素处理K562细胞48h后MTT检测,570nm波长处测定半数细胞抑制浓度为8×10-5mol.L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞增殖抑制表现;RT-PCR检测到caspase-3的表达,Western-blot检测线粒体细胞色素C表达下调,胞浆中细胞色素C表达阳性。结论:双氢青蒿素能够在体外抑制人白血病细胞增殖并诱导其凋亡,而促进细胞色素C的释放,激活caspase-3可能是其作用机制之一。     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的作用机制初步研究

目的　探讨姜黄素对人肺腺癌细胞 (SPC A1 )抗癌作用机制。方法　采用细胞培养、荧光显微镜、原位末端标记、放射免疫、原位杂交等技术 ,探讨姜黄素抗癌作用及其机制。结果　①姜黄素作用于癌细胞后 ,光镜下可见有细胞脱壁 ,悬浮培养液中 ;荧光镜下可见细胞核破碎 ,裂解成大小不等的凋亡小体 ,原位末端标记法进一步证实 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用 2 4h凋亡率达 42 67%。②姜黄素作用于癌细胞后 ,使细胞内cAMP浓度升高。③ 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用于癌细胞 2 4h后 ,使人肺癌细胞半胱氨酸蛋白酶 8(Caspase 8)mRNA表达明显增高。结论　姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡 ,其作用机制可能与细胞内cAMP浓度升高、Caspase 8表达增高有关     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究低浓度乙醇对肝癌细胞的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝比色法观察乙醇对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪法观察乙醇对肝癌细胞内活性氧的影响；采用琼脂凝胶电泳法观察DNA片断化条带。结果低浓度乙醇可明显抑制细胞增殖；乙醇作用于细胞后2h内引起活性氧产生，24h后细胞出现典型的凋亡表现。结论乙醇能够通过诱导细胞内活性氧的产生引起细胞凋亡，呈明显的剂量依赖性。     

苦参碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的研究不同浓度的苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用。方法将不同浓度的苦参碱作用于培养的SMMC-7721肝癌细胞,通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测各浓度的药物对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析其对肝癌细胞的诱导凋亡作用。结果浓度为2.01,4.02,6.04和8.05mmol·L-1苦参碱对SMMC-7721肝癌细胞都有不同程度的抑制增殖作用,抑制增殖作用随药物浓度的增加及作用时间的延长而加强(P<0.001)。光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰。结论苦参碱对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,诱导作用具有明显的量效和时效关系。     

氧化苦参碱诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用的实验研究

目的　探讨氧化苦参碱对卵巢癌细胞SKOV3诱导凋亡作用。方法　采用MTT法、DNA凝胶电泳、生长曲线、荧光染色等实验技术研究氧化苦参碱在体外对SKOV3细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果　氧化苦参碱对SKOV3细胞生长有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度依赖性。细胞经 0 189mmol·L-1和 0 3 78mmol·L-1的氧化苦参碱作用 48h后 ,即呈现典型的细胞凋亡形态学变化和DNA片段的梯形条带。结论　氧化苦参碱在一定浓度下能诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡     

热疗对人肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨热疗对人肺癌A549、H1299细胞生长与凋亡的影响。方法 MTT法检测热疗对人肺癌A549、H1299细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察热疗对人肺癌A549、H1299细胞周期和凋亡的影响;RT-PCR检测凋亡相关基因p53及Casepase-3的表达。结果热疗对人肺癌A549、H1299两种细胞的生长均有抑制作用。热疗可以明显改变人肺癌A549细胞生长周期的分布,G0/G1期细胞明显减少;但对人肺癌H1299细胞生长周期的分布影响不大。热疗能使A549细胞p53蛋白的表达明显增强,但不能诱导H1299细胞p53蛋白的表达。热疗能同时诱导A549、H1299两种细胞Caspase-3蛋白表达的增强,并且以A549细胞的表达尤为明显。结论热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用,可以增加细胞凋亡。p53基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。     

双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用研究

目的 观察双氢青蒿素对肺腺癌A549细胞的体外抑瘤效应，并对其抗癌机理作出初步探索。方法 双氢青蒿素对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT检测法，细胞凋亡率检测用流式细胞术，并用荧光显微镜及透射电镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果 双氢青蒿素半数抑瘤浓度为230nM，双氢青蒿素作用后细胞出现凋亡形态改变，流式细胞术结果出现凋亡峰。结论 双氢青蒿素有较明显抑瘤效应，其抗癌机理可能与诱导细胞凋亡有关。     

姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞脱落凋亡作用的研究

目的检测姜黄素诱导人肺腺癌细胞(A549)脱落凋亡的作用。方法采用DNA ladder法,流式细胞仪(FCM)技术结合PI及AnnexinV-FITC双标记染色试验方法及W estern-b lot法观察姜黄素是否能诱导A549脱落凋亡。结果A549细胞具有抗脱落凋亡的特性,而10μmol.L-1的姜黄素即可引起悬浮培养的A549细胞发生脱落凋亡。结论姜黄素可诱导人肺腺癌细胞(A549)脱落凋亡。     

双氢青蒿素对恶性胶质母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对人恶性胶质母细胞瘤(U87)细胞增殖和凋亡的影响。方法将10,25,50,100,125μmol.L-1DHA分别作用于体外常规培养的U87细胞24,48和72 h,CCK-8细胞增殖试剂盒实验检测细胞增殖情况并计算DHA不同作用时间半数抑制浓度(IC50);97.04μmol.L-1DHA作用U87细胞24 h后倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞分析细胞周期变化,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,检测Caspase-3蛋白含量变化,双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)变化。结果 DHA浓度、作用时间不同,U87细胞存活率不同,差异有统计学意义(P<0.05),DHA对U87细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖性。DHA作用24 h时IC50为97.04μmol.L-1,48 h为59.76μmol.L-1,72 h为33.20μmol.L-1;97.04μmol.L-1DHA作用24 h后S期细胞减少,G0～G1期细胞增多,凋亡细胞增多,细胞内ROS增多。Caspase-3表达量较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DHA对U87增殖有抑制作用,可诱导细胞凋亡。其机制可能与DHA改变细胞周期,激活Caspase-3通路以及增加细胞内ROS有关。     

黄芩素联合紫杉醇对人肺癌细胞的生长抑制作用

目的 探讨黄芩素联合紫杉醇对人肺癌细胞株QG-56的影响。方法 以不同浓度的黄芩素、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的空白对照组,分别作用于QG-56细胞24,48,72和96 h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测各组对QG-56细胞的增殖抑制作用,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的改变。结果 不同浓度的各实验组作用后细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。黄芩素、紫杉醇单用与联用均能抑制QG-56细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联用组细胞抑制率较单药组明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。黄芩素、紫杉醇单用与联用均能诱导QG-56细胞凋亡,联合组更为明显（P〈0.05）。结论 黄芩素可显著抑制人肺癌细胞株QG-56细胞生长,并能有效增强紫杉醇对人肺癌QG-56细胞的增殖抑制作用;两者具有协同作用。     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖凋亡和周期的影响

［摘要］目的探讨染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡和周期的影响及机制。方法50 mol&#8226;mL 1染料木素处理Siha细胞,用噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、周期及周期蛋白cyclin A和cyclin B表达的变化。结果染料木素作用于Siha细胞后,增殖抑制率比对照组明显升高（P＜0.05）;染料木素处理48 h后,实验组凋亡率较对照组升高,分别为（67.45±1.54）%和（45.37±1.65）%（P＜0.01）。染料木素处理后的Siha细胞G2/M期的细胞比例显著上升,由（9.55±0.71）%升至（79.54±1.09）%（P＜0.01）;cyclin A和cyclin B表达上调,分别由（1.84±0.11）%升至（37.38±0.71）%（P＜0.01）,由（69.44±1.84）%升至（97.70±1.20）%（P＜0.01）。结论染料木素在体外可有效抑制人宫颈癌细胞生长,其抗肿瘤机制可能是上调cyclin A和cyclin B蛋白表达和引起G2/M期细胞周期阻滞。     

双氢青蒿素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及放疗增敏的影响

目的观察双氢青蒿素(DHA)对非小细胞肺癌A549细胞的影响。方法通过CCK-8法测定双氢青蒿素的IC10,选择低毒剂量IC10作实验浓度,CCK-8法测定DHA对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测DHA对细胞周期及凋亡的影响,平板克隆形成实验检测DHA对放疗敏感性的影响。结果双氢青蒿素的IC10为23.47μmol·L-1,双氢青蒿素能抑制A549细胞增殖,阻滞细胞周期,将细胞周期控制在S期,增加放疗敏感性。结论青蒿素能明显抑制细胞增殖,增加放疗敏感性。     

Lentivirus‐Mediated Silencing of Myosin VI Inhibits Proliferation and Cell Cycle Progression in Human Lung Cancer Cells

Myosin VI (MYO6) is a unique actin motor, which moves toward the pointed ends of actin filaments. In this study, we found that MYO6 is overexpressed in lung cancer tissues and associated with lung cancer progression, particularly lymph node metastasis. To investigate its functions in lung cancer cells, we generated recombinant lentivirus taking shRNA of MYO6. Using two lung cancer cell lines, A549 and 95D, we found that Lv‐shMYO6 could infect lung cancer cells with high efficiency and downregulate MYO6 on both mRNA and protein levels. After knockdown of MYO6, the proliferation rates of lung cancer cells were decreased significantly. The colony‐formation ability of MYO6‐silenced lung cancer cells was also impaired with reduced colony numbers and fewer cells per colony. Flow cytometry showed that cell cycle progression was stuck at the G₀/G₁ phase, especially at the sub‐G₁ phase, which represents apoptotic cells. Moreover, knockdown of MYO6 downregulated the phosphorylation of ERK1/2. Further experiments using another shRNA of MYO6 confirmed the above results. These results suggest that MYO6 is crucial in maintaining cell cycle and cell growth of lung cancer cells. MYO6 may serve as a potential therapeutic target for lung cancer treatment.     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

Dihydroartemisinin is an inhibitor of ovarian cancer cell growth

Aim： To investigate the anticancer activity of dihydroartemisinin （DHA）, a derivative of antimalaria drug artemisinin in a panel of human ovarian cancer cell lines. Methods： Cell growth was determined by the MTT viability assay. Apoptosis and cell cycle progression were evaluated by a DNA fragmentation gel electro-phoresis, flow cytometry assay, and TUNEL assay; protein and mRNA expression were analyzed by Western blotting and RT-PCR assay. Results： Artemisinin and its derivatives, including artesunate, arteether, artemether, arteannuin, and DHA, exhibit anticancer growth activities in human ovarian cancer cells. Among them, DHA is the most effective in inhibiting cell growth. Ovarian cancer cell lines are more sensitive （5-10-fold） to DHA treatment compared to normal ovarian cell lines. DHA at micromolar dose levels exhibits a dose- and time-dependent cytotoxicity in ovarian cancer cell lines. Furthermore, DHA induced apoptosis and G2 cell cycle arrest, accompanied by a decrease of Bcl-XL and Bcl-2 and an increase of Bax and Bad. Conclusion： The promising results show for the first time that DHA inhibits the growth of human ovarian cancer cells. The selective inhibition of ovarian cancer cell growth, apoptosis induction, and G2 arrest provide in vitro evidence for further studies of DHA as a possible anticancer drug in the clinical treatment of ovarian cancer.     

奥曲肽与氟尿嘧啶联合对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的研究

目的:研究奥曲肽单用及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10-7～10-10mol.L-1)奥曲肽单用及其与5-FU(12.5、25、50μg.mL-1)联合作用SW480后的吸光度值后计算抑制率。结果:奥曲肽各浓度中,以10-10mol.L-1抑制率最高,10-12mol.L-1以下对细胞增殖无抑制作用;奥曲肽与5-FU联合使用对细胞增殖的抑制率明显高于单用组(P<0.01)。结论:奥曲肽能抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,并与5-FU有协同作用。     

基于caspase-3/bcl-2/bax信号通路的槐定碱诱导胰腺癌细胞株capan-1凋亡机制研究

目的 探讨槐定碱对人胰腺癌细胞株capan-1作用及机制。方法 MTT法检测细胞增殖;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡;流式检测细胞凋亡和细胞周期百分率;Western blot法检测caspase-3/bcl-2/bax表达。结果 槐定碱可以成浓度依赖性诱导capan-1细胞增殖抑制和凋亡,增加S/G2期细胞比例,下调bcl-2和pro-caspase-3表达水平,上调bax蛋白的表达。结论 槐定碱能通过调节caspase-3/bcl-2/bax信号通路而诱导细胞凋亡。