鼻咽癌顺铂耐药细胞系的建立及其耐药性变化

目的通过顺铂（cDDP）浓度递增法建立鼻咽癌耐药的细胞株CNE2／cDDP,并研究其耐药性变化。方法采用cDDP浓度递增法建立鼻咽癌顺铂耐药细胞系CNE2／cDDP,倒置显微镜进行形态学观察,MTT检测CNE2／cDDP细胞系对不同化疗药物的耐药性。结果MTT研究发现在不同药物（顺铂、长春新碱、卡铂、紫杉醇、5-FU）作用下,CNE2／cDDP较CNE2的IC50值及耐药指数均有明显的增加,CNE2／cDDP细胞对顺铂的耐药性最强,增加到200．6倍,对5-Fu的耐药性最差,增加到2．8倍;耐药细胞株CNE2／cDDP较非耐药细胞株CNE2生长速度减慢,其细胞倍增时间由18h增加到24h;CNE2／cDDP细胞体积较CNE2为小,常呈克隆聚集现象。结论CNE2／cDDP具有多药耐药性,是一个理想的用于鼻咽癌的多药耐药研究的细胞系。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立

目的　探讨建立人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的方法。方法　人卵巢癌细胞株 3AO和顺铂耐药细胞株 3AO/cDDP细胞体外培养。 4× 10 6个 3AO、3AO/cDDP分别接种于裸鼠腹腔 96h后 ,各随机分为 2组 ,分别腹腔内注射生理盐水和顺铂 (cDDP) ,观察各组裸鼠的致瘤率、生存期和生存延长率。采用流式细胞技术观察转移瘤LRP、MRP基因的表达情况。转移瘤瘤体行病理学检查。结果　 3AO、3AO/cDDP细胞的裸鼠致瘤率差异无显著性 ,P >0 .0 5 ;cDDP能提高 3AO荷瘤鼠的生存期及生存延长率 ,与 3AO/cDDP荷鼠相比 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ;3AO/cDDP转移瘤的LRP、MRP基因的表达水平显著高于 3AO转移瘤 ,P <0 .0 5 ;病理学检查提示裸鼠腹腔转移瘤细胞具人恶性特征。结论　该方法建立裸鼠卵巢癌腹腔转移模型具有成瘤率高的特点 ,并能保持顺铂耐药特征。     

人肝癌顺铂耐药细胞株 HepG2的建立

目的：体外建立顺铂（ DDP）诱导的人肝癌耐药细胞株（ HepG2／DDP）,研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2／DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2／DDP的半数抑制浓度（IC50）和耐药系数（RI）,绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪（ FCM ）检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2／DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1．35μg／ml,HepG2／DDP的IC50为23．35μg／ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0／G1期细胞减少、S期与G2／M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2／DDP。     

人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2的建立

目的体外建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的：建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP,探讨其耐药的机制。方法：采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测各种抗癌药对COC1和COC1／DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果：历时5个月建立COC1／DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9．44;与COC1比较,COC1／DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降（P〈0．01）。结论：入卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH／GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。     

含奈达铂方案治疗顺铂耐药的晚期鼻咽癌

目的 观察奈达铂联合方案治疗顺铂耐药的晚期鼻咽癌的疗效及毒性反应.方法 对15例根治性放疗后远处转移并经含顺铂方案多程治疗失败的晚期鼻咽癌,予奈达铂联合方案化疗,化疗Ⅱ周期或以上者,评价客观疗效,全部病例评价毒副反应.结果 15例中没有CR病例,有效率（RR）66.7%.疾病进展时间（TTP）2～8个月,中位疾病进展时间为4.5个月.15例共接受38个周期化疗,主要毒性反应为骨髓抑制,Ⅰ、Ⅱ度白细胞下降为47.4%,Ⅲ度为52.6%;Ⅰ、Ⅱ度血小板下降为52.6%,没有Ⅲ、Ⅳ度血小板下降,恶心呕吐反应轻微.结论 奈达铂与顺铂无完全交叉耐药,对顺铂治疗失效的晚期鼻咽癌仍然有效,毒性反应可耐受,值得临床扩大使用.     

Dishevelled2在鼻咽癌顺铂耐药中的作用研究?

目的：探讨散乱蛋白2(Dishevelled2,DVL2)对鼻咽癌顺铂化疗敏感性的影响,为进一步研究 DVL2在肿瘤化疗耐药中的作用机制奠定前期基础。方法转染 pcDNA3.1-DVL2至鼻咽癌细胞5-8F,并用不同浓度(0,1,2,4,8,10,20μmol/L)的顺铂处理细胞,MTT 检测过转染 DVL2对5-8F 顺铂抑制率及半数抑制浓度(IC50)的影响,流式检测 DVL2高表达对顺铂的5-8F 细胞凋亡的影响,Western blotting 检测 DVL2对 Wnt/β-catenin 信号的影响。结果过表达 DVL2明显降低了顺铂对5-8F 的抑制率,提高了其 IC50,同时过表达 DVL2明显降低了顺铂诱导的5-8F 细胞的凋亡,进一步研究显示,过表达 DVL2明显增加了β-catenin 及其靶基因 P-gp 和 Survivin 的蛋白表达。结论过表达 DVL2可通过上调 Wnt/β-catenin 信号增强耐药相关蛋白 P-gp、Survivin 的表达,从而诱发鼻咽癌顺铂耐药。     

顺铂耐药人宫颈癌HeLa细胞株的建立及其相关耐药微小RNA的表达情况

目的 建立顺铂耐药的人宫颈癌HeLa细胞株,观察其耐药相关微小RNA(miRNA)的表达情况.方法 采用小剂量诱导法建立对顺铂耐药的人宫颈癌细胞株(HeLa/顺铂细胞).比较HeLa细胞株和HeLa/顺铂细胞株的细胞倍增时间、半数抑制浓度(IC50)、耐药指数(RI)、相关耐药基因表达情况及其细胞培养液中肿瘤标志物水平,并分析两种细胞株间异常表达的miRNA表达情况.结果 HeLa/顺铂细胞倍增时间及IC50长于或大于HeLa细胞(均P<0.05),RI值为7.14.HeLa/顺铂细胞培养液癌胚抗原、糖蛋白抗原-125水平均高于HeLa细胞(P<0.05);HeLa顺铂细胞中肺耐药蛋白-1、多药耐药相关蛋白-1及谷胱甘肽S-π的mRNA相对表达量均高于HeLa细胞(P<0.05).HeLa/顺铂细胞miR-29a和miR-34a相对表达量高于HeLa细胞,而miR-99a、miR-92a、miR-155、miR-375、miR-195的相对表达量低于HeLa细胞(均P<0.05).结论 成功建立顺铂耐药HeLa细胞株,其相关耐药miRNA的表达与HeLa细胞株存在差异.     

顺铂化疗鼻咽癌94例疗效观察

顺铂是近年来广泛应用于临床的抗癌药物之一。本文总结了我科自1989年以来用顺铂化疗的94例鼻咽癌患者,就其疗效及主要副作用作一评价。     

多西紫杉醇联合顺铂治疗晚期复发鼻咽癌

目的：评价多西他赛(DOC)联合顺铂(DDP)治疗复发、转移晚期鼻咽癌的疗效及其不良反应。方法：诊断明确的转移、治疗后复发的晚期鼻咽癌且对PF方案耐药的患者21例;第1天静脉滴注多西他赛75mg/m2,顺铂30mg/m2第(1~3)天静滴,21天为一周期所有患者均治疗2周期,观察不良反应并评价化疗疗效。结果：CR 1例(4.76%),PR 13例(57.14%),SD 5例(23.81%),PD 2例(9.52%)。总有效率66.67%。最常见不良反应是反应骨髓抑制的Ⅲ～Ⅳ度粒细胞减少(76.2%)和Ⅱ～Ⅲ度血小板减少(47.6)。其余毒副反应则可以耐受。结论：DOC联合DDP对复发、转移晚期鼻咽癌的疗效肯定,患者多能耐受其不良反应,此化疗运用于临床可行,值得进一步研究应用     

两种方法建立人宫颈癌细胞顺铂耐药细胞株及其耐药性的评价

目的:通过两种方法建立顺铂耐药的人宫颈癌细胞耐药细胞株,对其耐药性进行分析。方法:用小剂量诱导法和大剂量冲击法分别建立Hela细胞顺铂耐药细胞株。比较正常Hela细胞株和两种方法建立的顺铂耐药Hela细胞株的RI指数和相关耐药基因表达情况,评价耐药细胞株是否成功建立。绘制三种细胞的生长曲线,计算比较三种细胞的细胞倍增时间。结果:成功用两种方法建立了Hela细胞顺铂耐药细胞株,分别命名为Hela/DDP细胞株和Hela/DDPs细胞株,其耐药相关基因的表达、RI指数、细胞倍增时间表达均与亲代Hela细胞有明显差异。结论:成功用两种方法建立两株Hela细胞耐药细胞株,分别属低度或中度耐药。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期鼻咽癌临床应用

目的 评价紫杉醇联合顺铂治疗晚期鼻咽癌的临床疗效和毒副反应。方法 28例晚期局部复发或／和远处转移性鼻咽癌患者采用紫杉醇175mg／m^2，静脉滴注持续3h，第1天给药；DDP30mg／m^2，静脉滴注，第2～4天。21d为1周期，2周期后评价疗效。结果 全组均可评价，CR3例，PR15例。有效率（RR）为64．28％，主要毒副反应为骨髓抑制，周围神经炎，消化道反应，肌肉及关节痛，脱发等。结论 紫杉醇联合顺铂治疗晚期局部复发或／和远处转移性鼻咽癌有较高疗效，毒副反应较小，值得临床进一步研究。     

顺铂,氟尿嘧啶联合化疗治疗鼻咽癌172例的疗效观察

我院自１９８９年１月－１９９３年１２月对１７２例鼻咽癌病人放疗前用顺铂和氟尿嘧啶联合化疗。本组病人化疗后完全缓解，部分缓解１０２例，缓解率６３．４％，化疗的毒性副作用较轻，主要表现为胃肠道反应，对骨髓抑制作用轻。     

人舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP的建立及其生物学评价

目的: 建立人舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,探讨其顺铂耐药机制。方法: 采用顺铂浓度梯度法对人舌鳞癌CAL-27细胞株进行诱导,将细胞分为CAL-27组和CAL-27/DDP组。CAL-27组细胞株用普通培养液培养,CAL-27/DDP组细胞株用含有不同浓度顺铂的培养液培养,经过12个月的诱导形成生长良好的耐药细胞系株CAL-27/DDP。采用倒置显微镜观察细胞株形态表现;MTT法检测细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀)和耐药指数(RI);流式细胞术检测细胞株的细胞周期;RT-PCR法检测细胞株中多药耐药基因(MDR1)mRNA的相对表达水平;Western blotting法检测细胞株P糖蛋白(P-gp)的相对表达水平。结果: CAL-27/DDP组细胞株在一段时间内能在普通培养液中稳定生长,并维持其形态和耐药性状。与CAL-27组细胞株比较,CAL-27/DDP细胞略增大,细胞中出现颗粒和"空泡"样变,胞浆丰富,倍增时间延长(P<0.01),RI为18.09±0.30。与CAL-27组比较,CAL-27/DDP组G₁期和G₂期细胞比例减少,S期细胞比例升高,CAL-27/DDP组细胞株中MDR1mRNA和P-gp相对表达水平升高(P<0.01)。结论: 本研究建立了人舌鳞癌顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,其耐药机制与CAL-27/DDP细胞株中MDR1和P-gp的表达水平上调有关联。     

鼻咽癌患者单药顺铂同步放化疗临床研究

目的：探讨单药顺铂同步放化疗在鼻咽癌患者中的临床治疗效果。方法：选取2010年2月至2012年3月接受治疗的51例患者相关资料进行分析,将患者根据治疗方法不同分为治疗组与对照组,治疗组采用单药顺铂联合放化疗治疗,对照组采用常规放射治疗,比较两组治疗效果。结果：治疗组治疗后HAMD评分为（7．2±3．5）分,低于对照组（12．2±2．3）分（P＜0．05）;治疗组治疗后Fugl－Meye 评分为（40．2±40．5）分、MBI评分为（65．5±7．4）分,高于对照组（P＜0．05）;治疗组57．7％治疗效果理想,高于对照组（36％）（P＜0．05）;治疗组8例出现口腔黏膜炎,占30．8％,低于对照组（60％）（P＜0．05）;治疗组8例白细胞减少,占30．8％,低于对照组（60％）（P＜0．05）;治疗组7例出现皮肤反应,占28％,低于对照组（52％）（P＜0．05）。结论：鼻咽癌发病率较高,临床上采用单药顺铂同步放化疗治疗近期疗效理想,值得推广使用。     

人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立

目的建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系(MG63/R)并观察其生物学特性。方法以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63/R。MTT法检测药物敏感性;光镜、透射电镜观察MG63、MG63/R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P-pg、bcl-2、P53蛋白表达。结果经顺铂186d的诱导,建立了MG63/R,其对顺铂的耐药指数为83.557±4.841,对阿霉素、长春新碱、氨甲基蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63/R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63/R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63/R细胞P-pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,P53表达则明显降低。结论本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63/R,为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模型。     

紫杉醇脂质体联合顺铂治疗晚期鼻咽癌的临床观察

目的评价紫杉醇脂质体联合顺铂治疗晚期鼻咽癌的近期疗效和毒性。方法 48例晚期NPC患者分别采用TP方案（紫杉醇脂质体＋顺铂）和PF方案化疗（顺铂＋氟尿嘧啶）,2周期后评价两组疗效及不良反应。结果试验组（TP）和对照组（PF）总有效率分别为70.83%和54.17%;两组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少发生率相近,但口腔黏膜炎的发生率试验组明显低于对照组（P〈0.05）。结论紫杉醇脂质体联合顺铂治疗晚期鼻咽癌近期疗效较好,不良反应较轻。     

紫杉醇与顺铂同期放化疗治疗鼻咽癌的近期疗效观察

目的评估紫杉醇与顺铂同期放化疗治疗鼻咽癌的近期疗效。方法观察2008年6月至2010年5月收治的22例局部晚期鼻咽癌患者。行同期放化疗,一组紫杉醇化疗,60mg/次,另一组顺铂化疗,30mg/m2。结果总有效率均为100.0%,并且两组间完全缓解率无统计学差异。结论紫杉醇与顺铂同期放化疗能提高鼻咽癌的近期疗效。