一种新的小胶质细胞分离纯化方法

目的 建立一种高效率的原代小胶质细胞体外分离纯化方法.方法 以McCarthy等经典的小胶质细胞原代培养培养方法为基础,并进行改进,使用低浓度胰酶消化法帮助小胶质细胞从混合培养的胶质细胞分离下来,用OX42抗体免疫组化染色鉴定.结果 获得了高纯度的小胶质细胞.结论 低浓度胰酶消化法分离小胶质细胞与经典的振摇分离法所获得的纯度相当,但提高了细胞的分离效率.     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的 对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法 新生1~2 d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8 d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2 d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果 光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论 通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞（OPCs）。方法新生1～2d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

胎大鼠脑内小胶质细胞的分离纯化和鉴定

 摘要：目的 分离纯化和鉴定胎大鼠脑内小胶质细胞,为小胶质细胞的研究奠定基础。方法 利用盐酸利多卡因注射液联合震荡培养法分离纯化胎大鼠脑内小胶质细胞,免疫荧光技术及流式细胞技术鉴定小胶质细胞的纯度。结果 通过盐酸利多卡因注射液联合震荡培养法,得到98%纯度的小胶质细胞。结论 盐酸利多卡因注射液联合震荡培养法是一种能获得较高纯度胎大鼠脑内小胶质细胞的方法。     

星形胶质细胞纯化方法改良及脂多糖刺激后一氧化氮系统的表达

目的 对BALB/c小鼠大脑皮层星形胶质细胞分离纯化的方法进行改良和优化,并进一步研究经脂多糖(LPS)刺激后其一氧化氮(NO)的产生及一氧化氮合酶(NOS)表达情况.方法 星形胶质细胞采用温和胰酶与定轨摇床振荡相结合的方法进行分离,采用抗GFAP抗体鉴定其纯度;再采用LPS刺激分离培养的星形胶质细胞,检测培养上清中N...     

新生大鼠神经干细胞的体外分离和培养

目的改进大鼠神经干细胞的分离和培养方法。方法用出生1～3d的新生大鼠，取脑用刀片剁碎和吸管吹打的机械分离法代替酶消化法。用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果用机械分离法从新生大鼠脑组织分离神经干细胞的获得率较高，并培养出较多的神经球，还能分化成神经元和星形胶质细胞。结论该方法简便，能得到较多的神经球，细胞获得率也较高。     

新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养

目的在体外培养条件下获取纯度较高的O-2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法根据星形胶质细胞、O-2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同，采用振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液，培养、分离纯化O-2A祖细胞。结果纯化的O-2A祖细胞胞体呈椭圆形，具有典型的双极突起；经免疫细胞化学染色鉴定，细胞的纯度达90％。在有血清的情况下，O-2A祖细胞定向分化为2型星形胶质细胞；在无血清的情况下，定向分化为少突胶质细胞。结论通过振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O-2A祖细胞具有双分化潜能。     

培养胚胎神经干细胞向少突胶质细胞诱导分化的实验研究

目的培养大鼠胚胎神经干细胞,诱导分化获得较高纯度的少突胶质细胞。方法取孕11.5 d的胚胎大鼠神经管尾段制备单细胞悬液,无血清条件培养基培养,获得神经干细胞;加入胎牛血清诱导分化,利用神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞不同的生长特性进行分离,获取较高纯度的少突胶质细胞。结果本实验得到纯度达90%以上的少突胶质细胞。结论利用培养大鼠胚胎神经干细胞诱导分化可以获取较多较高纯度的少突胶质细胞,以进行进一步研究。     

大鼠脑海马神经元原代培养方法的建立及其纯度的鉴定

目的：为建立一种稳定的大鼠胎鼠海马神经元培养方法并能够有效的鉴定其纯度。方法：分离Wista大鼠胚胎并取海马组织,比较两种常用酶,胰酶和木瓜酶消化效果对海马神经元产量的影响及两种不同培养方法对海马神经元纯度的影响。结果：培养的神经元胞体清晰晕光明显,应用两种不同的酶消化对神经元的产量影响无明显统计学意义,而应用无血清方法培养神经元在纯度上要优于应用阿糖胞苷去除神经胶质细胞的培养方法。结论：采用木瓜酶消化并用无血清培养的方法培养大鼠胎鼠海马神经元,稳定可靠,提高了原代神经元培养的产量和纯度。     

小鼠小胶质细胞原代培养的高产改良方法

目的探索与改良建立简单高效的小鼠原代小胶质细胞的培养与分离纯化方法。方法选用新生1～2 d的近交系C57BL/6小鼠,结合与改进营养剥离法并在恒温震摇法纯化后差速贴壁以分离纯化小胶质细胞。用Iba1免疫细胞化学染色方法对分离纯化的小胶质细胞纯度进行鉴定。结果共收获2批小胶质细胞,经免疫细胞化学染色法鉴定,纯化分离的是小胶质细胞,并稳定获得超过1.59×105/25 cm2个,纯度达97%。结论改良过后的胶质细胞的培养纯化方法,操作简单,所需时间短且产量高,提高了原有的分离纯化效率。获得的细胞稳定,活性强纯度高。为体外研究培养小胶质细胞提供了更稳定的基础。     

新生鼠下丘脑结节乳头核组胺能神经细胞的原代培养

目的 探讨新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)组胺能神经细胞的体外培养方法。方法 从新生鼠(24h内)下丘脑后部分离出TM神经细胞，采用含有B27的Neurobasal Medium培养液进行体外原代培养。应用免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定。结果 从新生鼠下丘脑中分离的TM神经细胞，在本实验条件下生长良好。原代培养7～9d的神经细胞在形态上趋向成熟。免疫细胞化学染色结果表明培养的神经细胞呈组胺免疫反应阳性。为组胺能神经细胞。结论 新生鼠下丘脑TM神经细胞可进行体外原代培养，它可作为研究中枢组胺神经系统的体外细胞模型。     

高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定

目的：建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元（DRGn）的培养模型.方法：在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节（DRG）,通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal （NB）培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn.采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度.结果：原代培养的DRGn在含有神经生长因子（NGF）的NB培养基中生长良好,存活时间可达45 d,纯度可达到95％以上.结论：该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn.     

胚胎大鼠背根神经节神经元的原代培养

目的 原代培养胚胎大鼠背根神经节神经元(DRGn),并观察其生长特性。方法 取E15 SD胎鼠的背根神经节,用胰蛋白酶消化法分离成单细胞,通过密度梯度离心法和差速贴壁法进行分离纯化,在无血清培养基中培养,用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体鉴定神经元。结果 纯化培养神经元生长状态良好,纯度可达93%左右。结论 该方法具有较好的可操作性和可重复性,用于DRGn的相关实验研究。     

一种改良小胶质细胞的培养方法

目的建立一种简便高效的小胶质细胞的原代培养及纯化方法。方法无菌环境下采取雄性新生SD大鼠（24h内）全脑,清洗、剪碎,以0.25%胰蛋白酶消化,200目滤网过滤,混合培养。9d后,利用盐酸利多卡因注射液代替传统机械振摇纯化分离小胶质细胞;采用免疫细胞化学方法检测CD11b/c的表达情况,观察小胶质细胞形态。结果改良方法可获得高产量和高纯度的小胶质细胞。显微镜下可见刚贴壁的小胶质细胞多为圆形,边缘不规则;培养4～5d后小胶质细胞形态多呈阿米巴样,折光不均。结论该方法步骤简便,可有效地提高小胶质细胞的产量和纯度,具有较高的实用价值,为研究与小胶质细胞相关的疾病提供了基础。     

SD大鼠脑皮层星形胶质细胞的原代培养及纯化方法改良

目的:探讨大鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养方法,以获得纯度高的细胞进一步对其进行体外实验研究。方法:在Mc-Carthy方法基础上改用出生后1d的SD大鼠的大脑皮层,结合机械分离和胰酶消化后制备单细胞悬液接种,差速贴壁1h,培养14d以后上摇床以去除混杂细胞,细胞融合后传代,每次传代前都经历胰酶冲洗和差速贴壁,传3代后利用GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果:经过原代传代及纯化,大脑皮层星形胶质细胞体外培养成功,并有较高的纯度。GFAP-FITC免疫荧光染色阳性。结论:经过合理取材、改良纯化方法后,可以更为简便得到纯度很高的星形胶质细胞。     

人大肠癌细胞原代培养方法的改进

目的:建立一种简单方便但高效的人大肠癌细胞原代培养方法。方法:无菌条件下切取肿瘤组织,比较不同培养基、细胞培养方法和细胞纯化方法对大肠癌细胞原代培养过程的影响,通过免疫细胞化学方法检测表面标记物的表达情况,观察原代的生物学特性。结果:采用改良的DMEM培养基,用组织块培养法和胰酶消化法纯化培养的细胞,大肠癌细胞原代培养的成功率较高。免疫细胞化学检测培养细胞来源于上皮组织。结论:应用改进的人大肠癌细胞原代培养方法,操作简便,重复性好,可满足实验要求。