TRPM8介导的冷刺激耐受机制

<正>大量流行病学研究已经证明,寒冷天气会引起或加重慢性气道炎症疾病,比如哮喘及慢性阻塞性肺疾病(COPD)的咳嗽、咳痰和喘息等症状[1-2]。近年来大量的研究关注于冷空气刺激作用于气道的分子生物学机制,其中介导冷感觉的瞬时受体电位M8型(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)引起了人们高度关注。     

经典瞬时受体电位通道在哮喘小鼠肺组织中的表达

目的探讨经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道在慢性哮喘小鼠肺组织中的表达。方法随机将BALB/c小鼠分成对照组和哮喘组。应用5%鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化激化的方法制备小鼠慢性哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA。最后一次激发24h后处死小鼠,取肺组织进行RT-PCR和免疫组织化学检测,观察哮喘小鼠肺组织TRPC mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-PCR结果显示,正常小鼠肺组织分别表达TRPC1、TRPC2、TRPC3、TRPC6mRNA;与对照组相比,哮喘小鼠肺组织TRPC1、TRPC6mRNA表达显著增高(P<0.05);免疫组织化学检测发现TRPC1、6蛋白在哮喘小鼠肺组织的支气管上皮细胞、血管平滑肌细胞及浸润的炎症细胞表达明显增强。结论 TRPC1、TRPC6可能与哮喘发病机制密切相关。     

TRPM7与肿瘤

瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道超家族。TRPM(transient receptor potential melastatin)7是TRPM亚族的一员,是具有离子通道和激酶活性双功能的膜蛋白。它对阳离子有通透性,使细胞去极化,可使自身和底物磷酸化。TRPM7可以介导感觉信号的传递,调节细胞钙镁平衡和影响发育,其表达及活性异常与多种疾病特别是肿瘤的发生具有相关性。TRPM7通道激酶在细胞的增殖、存活、分化、生长和迁移等一系列细胞活动中起重要作用。     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.     

TRPM及TRPV家族mRNA在大鼠生精细胞中的表达

目的 探讨瞬时受体电位M型(TRPM)及V型(TRPV)家族基因在大鼠牛精细胞中的表达.方法 采用机械法分离大鼠生精细胞,TRIzol法提取细胞总RNA,RT-PCR合成并扩增目的 基因,琼脂糖凝胶电泳检测目的 基因的存在,实时荧光定量RT-PCR技术检测目的 基因相对表达量.结果 在大鼠生精细胞中检测到TRPM3、TRPM4、TRPM7及TRPV5 mRNA的表达,未能检测到TRPM1、TRPM2、TRPM5、TRPM6、TRPM8、TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4及TRPV6 mRNA的表达.实时荧光定量RT-PCR技术检测显示TRPM家族在大鼠睾丸生精细胞中的表达以TRPM7表达量最高,相当于内参β-actin的(0.0430±0.0034)%,TRPM3和TRPM4表达相对较弱,分别相当于TRPM7 56%和63%.大鼠睾丸生精细胞中TRPV家族仅存在TRPV5的表达,其表达量相当于内参β-actin的(O.0157±0.0029)%.结论 大鼠生精细胞中存在多种TRPM及TRPV家族基因的表达,其中TRPM4及TRPM7 mRNA在大鼠生精细胞中呈相对较高表达.本研究结果 将为研究生精细胞中TRP通道的功能及TRP通道各亚型之间的相互关系提供参考依据.     

CCL1/CCR8在哮喘小鼠肺组织中的表达及地塞米松对其作用的研究

目的观察哮喘小鼠肺组织CCL1/CCR8 mRNA的表达及糖皮质激素对其表达的影响,探讨CCL1/CCR8在哮喘发病机制中的作用。方法30只小鼠随机分为对照组、哮喘组和地塞米松组,每组10只。哮喘组和地塞米松组用卵白蛋白致敏激发建立哮喘模型,地塞米松组给予腹腔注射地塞米松(2mg/kg),对照组均以生理盐水替代。测定BALF中细胞总数和分类计数,采用酶联免疫法检测BALF中IL-4水平,RT-PCR检测肺组织CCR8 mRNA和CCL1 mRNA的表达。结果对照组、哮喘组和地塞米松组BALF中嗜酸粒细胞百分比[(0.6±0.1)%、(32.4±3.4)%和(8.9±0.9)%,P0.01]、淋巴细胞百分比[(2.9±0.5)%、(14.0±3.0)%和(6.3±0.6)%,P0.01]、IL-4浓度[(5.16±1.23)pg/mL、(47.67±11.67)pg/mL和(19.76±4.72)pg/mL,P0.01]差异均有统计学意义,其中哮喘组较对照组显著增高(P0.01),地塞米松组较哮喘组显著降低但仍显著高于对照组(P0.01)。对照组、哮喘组和地塞米松组CCL1mRNA表达(0.11±0.06、0.76±0.16和0.53±0.13,P0.01)、CCR8 mRNA表达(0.18±0.09、1.26±0.13和0.79±0.12,P0.01)差异均有统计学意义,其中哮喘组较对照组显著增高(P0.01),地塞米松组较哮喘组显著降低但仍显著高于对照组(P0.01)。结论CCL1/CCR8在哮喘小鼠肺组织中的基因表达增强。糖皮质激素可能通过减少CCL1/CCR8的基因表达,减轻哮喘气道炎症。     

温度敏感TRP通道与重大慢病的防控

美国科学家David Julius和Ardem Patapoutian因辣椒素受体TRPV1和薄荷醇感受器TRPM8的突破性发现,揭示了温度感知的奥秘,由此获得了2021年诺贝尔生理学或医学奖.温度敏感性热通道TRPV1和冷通道TRPM8不仅在神经系统有丰富的表达,也存在于心血管、脂肪、肝脏和肌肉等组织器官,但其生物学...     

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

 【目的】 观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道(TRPM6) mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】 健康4 ~ 6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量(12 ± 2)g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。第1天(1 d)。21 d。34 d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA的表达。【结果】 1 d血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性:[(0.85 ± 0.07 vs. 0.89 ± 0.12) mmol/L。(2.48 ± 0.14 vs. 2.49 ± 0.07) mmol/L。0.51 ± 0.08 vs. 0.49±0.06, P均 > 0.05];21 d 哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平均显著低于对照组:[(0.84 ± 0.09 vs. 0.95 ± 0.07) mmol/L。(2.39 ± 0.14 vs. 2.44 ± 0.09) mmol/L。0.32 ± 0.06 vs. 0.52 ± 0.05,P均 < 0.05]; 34 d哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平亦显著低于对照组: [(0.67 ± 0.10 vs. 0.94 ± 0.10) mmol/L。(2.17 ± 0.08 vs. 2.43 ± 0.08) mmol/L。0.24 ± 0.05 vs. 0.53 ± 0.06,P均 < 0.05]。肾组织TRPM6 mRNA表达水平与血浆Mg2+浓度呈正相关(r = 0.630, P < 0.001);肾组织TRPM6 mRNA表达水平与红细胞内Mg2+浓度呈正相关(r = 0.715, P < 0.001)。 【结论】 肾组织TRPM6 mRNA的低表达可能是导致 C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

【目的】观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道（TRPM6）mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】健康4～6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量（12&#177;2）g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白（OVA）建立哮喘小鼠模型。第1天（1d）、21d、34d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA的表达。【结果】1d血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性：[（0.85&#177;0.07vs.0.89&#177;0.12）mmol/L、（2.48&#177;0.14vs.2.49&#177;0.07）mmol/L、0.51&#177;0.08vs.0.49&#177;0.06,P均〉0.05];21d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平均显著低于对照组：[（0.84&#177;0.09vs.0.95&#177;0.07）mmol/L、（2.39&#177;0.14vs.2.44&#177;0.09）mmol/L、0.32&#177;0.06vs.0.52&#177;0.05,P均〈0.05];34d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平亦显著低于对照组：[（0.67&#177;0.10vs.0.94&#177;0.10）mmol/L、（2.17&#177;0.08vs.2.43&#177;0.08）mmol/L、0.24&#177;0.05vs.0.53&#177;0.06,P均〈0.05]。肾组织TRPM6mRNA表达水平与血浆Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.630,P〈0.001）;肾组织TRPM6mRNA表达水平与红细胞内Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.715,P〈0.001）。【结论】肾组织TRPM6mRNA的低表达可能是导致C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

TRPV1、TRPM8通道在实验性结肠炎小鼠肠道和脊髓背根神经节中的表达及相关性研究

目的 研究瞬时通道蛋白V1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1,又称辣椒素受体)、瞬时通道蛋白M8(transient receptor potential melastatin member 8,TRPM8)在葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodiμm, DSS)诱导下的实验性结肠炎小鼠肠道和脊髓背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的表达,进一步探讨两者间的联系及相关通路。方法 选取C57BL/6雄性小鼠20只,随机分为空白对照组和DSS组,每组各10只。DSS组使用质量浓度为30g/L的DSS共7天构建结肠炎模型,每天同一时刻观察记录小鼠的毛发、体质量、粪便性状(颗粒状、稀便、血便等)、肛周情况(红肿、便血等),给予疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,根据病理切片进行组织病理学评分,Western blot法检测结肠组织TRPV1、TRPM8、Gαq蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测结肠组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达水平,免疫荧光检测结肠组织和DRG中TRPV1、TRPM8及Gαq的定位及表达。结果 与空白对照组比较,DSS组结肠病理下可见明显损伤,DAI评分明显上升(P＜0.05),炎性细胞因子IL-6、IL-1β及TRPV1、Gαq蛋白上调(P＜0.05),TRPM8表达下调(P＜0.05)。同时结肠黏膜及黏膜下层可见TRPV1与TRPM8、TRPV1与Gαq的共表达,TRPV1与TRPM8共表达于DRG,相较于空白对照组,DSS组结肠组织TRPV1表达增加,TRPM8表达减少。结论 实验性急性结肠炎小鼠结肠组织TRPV1表达升高,TRPM8表达降低,TRPV1/TRPM8可共表达于结肠组织及DRG,两者之间可能存在某种平衡机制以维持肠道功能稳定。     

急性宫颈扩张对脊髓TRPA1表达的影响

目的 探讨急性宫颈扩张(UCD)后胸腰段脊髓瞬时受体电位通道蛋白(TRPA1)表达的变化.方法成年雌性大鼠60只,随机分为5组:假手术组和UCD25、UCD50、UCD75、UCD100组.全凭吸入麻醉下,除S组外,各组大鼠分别采用25、50、75、100 g的砝码进行持续10 s的宫颈扩张,重复1次,间隔5 min;假手术组不作扩张.记录UCD时大鼠腹直肌肌电图及心率.待UCD结束后10 min处死大鼠,分别运用实时荧光定量PCR及Western blot法测定脊髓胸腰段TRPA1的变化.结果与假手术组相比,接受不同张力UCD的各组大鼠腹直肌肌电活动及胸腰段脊髓TRPA1表达均明显增加(P<0.05).组间两两比较:与UCD25组或UCD50组相比,UCD75组和UCD100组肌电图活动及脊髓TRPA1表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);但UCD25组与UCD50组间以及UCD75组与UCD100组之间差异无统计学意义(P>0.05);而且急性UCD后胸腰段脊髓TRPA1的表达变化与UCD对腹直肌肌电图的影响趋于一致.结论胸腰段脊髓TRPA1可能参与了急性UCD相关内脏痛的形成.     

芪仙汤对支气管哮喘小鼠肺组织FIZZ1 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察芪仙汤对哮喘小鼠肺组织中FIZZ1基因及蛋白表达水平的影响,探讨芪仙汤治疗哮喘的作用机制。方法:选用30只健康雌性BALB/c小鼠,采用随机数字表分为正常对照组(对照组)、支气管哮喘模型组(模型组)、芪仙汤治疗组(治疗组)。除对照组外均采用卵白蛋白(OVA)建立支气管哮喘小鼠模型。各组分别相应干预灌胃2周。从小鼠的一般情况、肺组织病理形态学(HE染色病理切片)指标评价支气管哮喘小鼠模型;采用RT-PCR检测肺组织FIZZ1基因mRNA表达水平,Western blot和免疫组化法检测肺组织FIZZ1蛋白表达水平。结果:HE染色结果显示,模型组小鼠肺组织较正常组嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润明显,气道壁及支气管平滑肌增厚明显;治疗组哮喘病理改变明显改善。RT-PCR、Western blotting、免疫组化结果均显示模型组FIZZ1表达水平显著高于对照组,治疗组小鼠肺组织中FIZZ1表达水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:芪仙汤可能是通过下调小鼠肺组织FIZZ1表达起到治疗支气管哮喘的作用。     

TRPM8在慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺组织的表达

将40只SD大鼠随机分成实验模型组和正常对照组,采用大鼠前列腺蛋白提取液与弗氏完全佐剂(FCA)建立慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型,荧光定量PCR检测瞬时受体电位通道M8(TRPM8)mRNA相对表达水平,比较两组间的差异。实验模型组与正常对照组SD大鼠前列腺组织内均见TRPM8 mRNA表达,分别为0.811±0.044、0.937±0.050,差异具有统计学意义(P<0.05)。     

TRPM8基因表达在前列腺癌中的意义

目的 检测TRPM8基因在前列腺癌及前列腺癌旁组织中的表达,探讨TRPM8基因与前列腺癌及前列腺癌旁组织的临床意义.方法 运用实时荧光定量PCR方法检测35例前列腺癌病理组织以及42例前列腺癌旁组织的TRPM8的基因表达水平.结果 TRPM8在前列腺癌组织中表达值为(7.732±0.512),在45例前列腺癌旁组织中表达值为(6.623±0.503),前列腺癌中TgPM表达值高于前列腺癌旁组织,差异有显著性(P<0.05).结论 前列腺癌组织中TRPM基因高表达值有助于前列腺癌的诊断.     

瞬时受体电位通道蛋白A1和V1在正常小鼠耳蜗中的定位表达

目的 研究瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位与表达.方法 选择12只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法和蛋白质印迹技术检测TRPA1和TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力.结果 TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPA1和TRPV1的表达.结论 TRPA1和TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入研究二者在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础.     

支气管哮喘患者气道巨噬细胞中瞬时受体电位通道M8的表达

目的：研究瞬时受体电位通道M8(TRPM8)在支气管哮喘患者气道来源的巨噬细胞中的表达及其临床意义。方法：收集支气管哮喘患者和志愿者的支气管肺泡灌洗液,分离其中巨噬细胞培养,通过RT-PCR和Western Blot技术检测TRPM8 mRNA和蛋白水平;通过ELISA技术检测细胞上清液中白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果：哮喘组患者支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞TRPM8 mRNA和蛋白水平均明显高于对照组（P<0.01）。哮喘组IL-10水平明显高于对照组（P<0.01）,然而两组TNF-α蛋白水平却差异无统计学意义（P>0.05）。通过Spearman相关分析,TRPM8蛋白与IL-10蛋白间存在相关性（r=0.969,P<0.01）。然而,TRPM8蛋白与CRP、IgE、FeNO、嗜酸粒细胞以及TNF-α蛋白浓度间均未发现明显相关性（P>0.05）。结论：哮喘患者气道巨噬细胞中TRPM8 mRNA和蛋白增多。其可能通过影响IL-10参与哮喘的发病机制。     

TRPM7在胆管癌组织中的表达及其与预后的关系

目的：探讨瞬时受体电位离子通道(TRPM7)在胆管癌组织中的表达及其与预后的相关性。方法应用免疫组织化学 SP 法检测 TRPM7在49例胆管癌、7例胆管良性病变组织和36例癌旁正常胆管组织的表达情况,分析其与胆管癌临床病理的关系。结果胆管癌组织中 TRPM7表达阳性率为77.6%(38/49),高于其在胆管良性病变组织的表达阳性率(0,0/7)及癌旁正常胆管组织中的表达阳性率(2.8%,1/36),差异均有统计学意义(P <0.05)。TRPM7蛋白的表达与胆管癌的 TNM 分期、淋巴结转移和脏器转移相关(P <0.05),但与患者的年龄、性别、部位、肿瘤分化程度及肝炎无相关性(P >0.05)。Kaplan-Meier 生存分析发现 TRPM7阳性表达患者的生存期低于 TRPM7阴性表达患者(P <0.05)。Cox 多因素分析显示,TRPM7的表达水平与生存预后显著相关(P <0.05),是影响预后的独立危险因素。结论TRPM7在胆管癌的发生、发展和浸润转移中发挥着重要作用,是影响胆管癌患者预后的重要因素。     

TRP亚家族mRNA在大鼠睾丸组织中的表达

目的 探讨瞬时受体电位(TRP)基因亚家族TRPV、TRPM家族mRNA在大鼠睾丸组织中的表达.方法 选用SD大鼠,处死后取其睾丸用常规RT-PCR检测TRPV和TRPM亚家族mRNA的表达.结果 TRPV4、TRPV5、TRPV6、TRPM3、TRPM4与TRPM8在睾丸有表达,其他TRPV和TRPM家族成员未见有表达.结论 TRPV4、TRPV5、TRPV6、TRPM3、TRPM4与TRPM8在睾丸组织上有表达,这为睾丸组织上TRPV和TRPM功能的研究奠定了基础,为进一步探讨TRP家族与睾丸相关疾病之间关系奠定基础.