褐藻糖胶药理活性研究进展

褐藻糖胶是一类来自于海洋褐藻和无脊椎动物的杂多糖,主要成分为硫酸化的岩藻糖及少量的半乳糖、甘露糖、木糖及糖醛酸等。现有研究表明,褐藻糖胶具有诸多药理活性,如抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、免疫调节、抗菌抗病毒、降糖降血脂、神经保护等。本文对褐藻糖胶目前研究的主要药理活性进行了总结,以期为其进一步研究和开发提供参考。     

褐藻糖胶的免疫调节作用

观察了从海带中提取的褐藻糖胶对小鼠免疫功能的影响，褐藻糖胶在体外可诱导白细胞介素１（ＩＬ－１）和丙型干扰素（ＩＦＮ－γ）产生；体内给药可增强Ｔ细胞，Ｂ细胞，巨噬细胞（Ｍ）和自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）功能，促进对绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）的初次抗体应答。     

褐藻糖胶抗血栓研究进展

褐藻糖胶是一种酸性硫酸化多糖，有多种生物活性和药理作用，其抗血栓活性尤为明显。褐藻糖胶能够抑制凝血酶的产生及活性，提高组织型纤溶酶原活化剂对纤溶酶原的激活作用，从而具有抗血栓形成和溶栓功能。     

羊栖菜褐藻糖胶CSFP-1抗肿瘤活性及机制研究

目的 分离纯化制备羊栖菜褐藻糖胶（CSFP-1）,并对其抗肿瘤活性及可能作用机制进行初步研究。方法 通过冷水浸提法制备羊栖菜褐藻糖胶（CSFP）,经超滤系统分离获得CSFP-1,并采用苯酚-硫酸比色法、PMP衍生化、高效液相色谱法、红外光谱分析等多种方法对其理化性质进行分析;采用MTT法评价CSFP-1（0、10、100、300 μg/mL）对宫颈癌细胞（HeLa）、肺癌细胞（A549）和肝癌细胞（Hep3B）生存能力的影响;应用流式细胞术评价CSFP-1对HeLa细胞细胞周期的影响;应用Western blotting技术评价CSFP-1对HeLa细胞凋亡和自噬相关蛋白表达的影响。结果 CSFP-1的糖含量为84.18%,糖醛酸含量为14.28%,硫酸根含量为10.02%,平均相对分子质量为5.6×10⁴,主要由半乳糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和木糖组成。CSFP-1具有选择性细胞毒性,对HeLa细胞生长发挥显著抑制作用（P<0.05、0.001）,对A549和Hep3B细胞存活率没有明显影响。与对照组比较,HeLa细胞经CSFP-1处理24 h后,G1期细胞比例明显增加（P<0.001）;经CSFP-1处理48 h后,S期细胞比例显著增加（P<0.05、0.01、0.001）,G2期细胞比例显著减少（P<0.01、0.001）,均呈现剂量相关性。与对照组比较,CSFP-1 100、300 μg/mL剂量组处理24 h,300 μg/mL剂量组处理48 h Bcl-2蛋白表达显著减少（P<0.05）;100、300 μg/mL剂量组处理24、48 h Beclin-1蛋白表达显著增加（P<0.05、0.01）,且存在时间和剂量相关性。结论 CSFP-1具有选择性抑制HeLa细胞增殖作用,作用机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡相关。     

褐藻糖胶的抗肿瘤作用及构效关系研究进展

作为1种天然来源的海洋硫酸多糖,褐藻糖胶因其复杂的化学结构和独特的生物学功能,引起众多科学工作者的高度关注,近年来已成为海洋天然药物研究的热点。本文就褐藻糖胶的抗肿瘤作用及其相关机制进行综述。     

从海带中提取褐藻糖胶工艺的研究

目的以海带为原料研究褐藻糖胶的提取工艺。方法通过单因素和正交试验,摸索海带粒度、提取温度、提取溶剂、提取时间、料液比和醇沉体积分数对提取纯化褐藻糖胶的影响。结果提取纯化褐藻糖胶的最佳条件为:在20目的海带粉中加入15倍pH2的15g·L-1CaCl2溶液,在60℃下提取1.5h,提取液浓缩后加乙醇至体积分数为65%,使褐藻糖胶沉淀、离心、洗涤并干燥。结论采用该工艺从海带中提取纯化褐藻糖胶,成本低且效果较好。     

硫酸钡-比浊法测定褐藻糖胶中硫酸根的含量

目的 运用硫酸钡比浊法测定日高昆布中褐藻糖胶硫酸根的含量。方法 采用硫酸钡比浊法,通过分光光度计检测到最大吸收波长为360 nm;在此波长下测定褐藻糖胶中硫酸根的含量。结果 硫酸根在60~120 μg范围内线性关系良好(r²=0.990 9),测得褐藻糖胶中硫酸根的含量为(20.52±0.57)％;方法学符合测定要求。结论 该方法简单、准确、快速、灵敏度较高,适用于海藻多糖硫酸根含量的测定。     

不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响

目的 比较不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响。方法 分别采用稀盐酸法和氯化钙从6种褐藻粗多糖中获得 12 种褐藻糖胶(Fucoidan),并进一步对其理化性质进行分析和比较。采用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成,离子色谱法(IC)测定其硫酸基含量,Folin-酚法测定其粗蛋白含量,高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用法(HPGPC-MALLS)测定其绝对分子量。结果 稀盐酸法提取褐藻糖胶的得率显著高于氯化钙法,但所得褐藻糖胶的硫酸基含量和绝对分子量都明显降低。结论 稀盐酸法提取褐藻糖胶造成糖链断裂及硫酸基脱落,破坏褐藻糖胶的结构,因此采用氯化钙法更适合褐藻糖胶的提取。     

选育羊栖菜与野生羊栖菜中褐藻胶与褐藻糖胶组成分析

目的比较选育羊栖菜(H.fusiformis)与野生羊栖菜中褐藻胶与褐藻糖胶的组成差异。方法采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分析多糖相对分子量,用核磁共振氢谱法测定褐藻胶中G/M比,并用高效离子色谱(HPIC)法分析褐藻糖胶中单糖组成。结果选育羊栖菜和野生羊栖菜中褐藻胶和褐藻糖胶含量分别为29.23%,1.89%和32.18%,2.40%;褐藻胶中G/M比分别为2.62和1.05;褐藻糖胶均含有8种单糖,分别为岩藻糖,半乳糖,甘露糖,葡萄糖醛酸,葡萄糖,木糖,葡萄糖胺和甘露糖醛酸,其摩尔比分别为34.62,18.55,14.17,12.72,10.60,5.79,2.42,1.13及34.76,19.26,10.21,12.70,5.49,10.22,0.70,6.66。结论选育羊栖菜褐藻胶中古罗糖醛酸含量以及褐藻糖胶中葡萄糖,甘露糖和氨基葡萄糖含量均明显高于野生羊栖菜。     

褐藻糖胶调节肠道菌群改善2型糖尿病

目的 探讨褐藻糖胶（fucoidan,FPS）对2型糖尿病（Type 2 diabetes millitus,T2DM）大鼠的疗效及肠道菌群的调节作用。方法 采用高脂饮食（high fat diet,HFD）联合链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导T2DM大鼠模型,灌胃给予FPS。给药2个月后取血清,测定空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、空腹胰岛素（fasting serum insulin,FINS）及血脂四项;取大鼠新鲜粪便样本进行16S r DNA测序,分析大鼠肠道菌群。结果 与空白组比较,模型组大鼠的FBG、FINS、血脂及肠道菌群都发生紊乱（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,FPS给药可以明显改善大鼠FBG、FINS和血脂四项等指标。16S r DNA分析表明,FPS可以提高菌群Alpha多样性,如丰富度和多样性;Beta多样性分析表明,FPS与空白组更为接近,表明FPS可以显著改善T2DM大鼠粪便菌群的整体结构。物种组成方面,在门水平上,FPS显著增加厚壁菌门（Firmicutes）丰度,并降低拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）和变形菌门（Proteobacteria）丰度;在属水平上,FPS显著富集乳杆菌属（Lactobacillus）和毛螺菌属（Lachnospiraceae-NK4A136-group）,并降低拟杆菌属（Bacteroides）丰度。LEfSe分析表明乳杆菌属是FPS关键的差异菌种,Spearman相关性分析进一步表明乳杆菌属与FBG及TG呈显著负相关,并与HDL-C极显著正相关。结论 FPS可显著改善T2DM的糖脂代谢,其作用机制可能与调节肠道菌群,特别是与乳杆菌属密切相关。     

海带岩藻聚糖硫酸酯对栓塞性脑缺血损伤的保护及作用机制的研究D

目的 对不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯对大鼠栓塞性脑缺血损伤的保护活性及其作用机制进行研究比较。方法 以海带高分子量和低分子量岩藻聚糖硫酸酯为研究对象,采用电刺激造栓法建立大鼠动脉栓塞性脑缺血损伤模型,观察岩藻聚糖硫酸酯对神经行为学评分、脑梗死体积、大脑皮层形态学、血液中花生四烯酸代谢产物（TXB2和6-kelo-PGF1α）、磷脂代谢产物（PA和LPA）和纤溶系统（t-PA和u-PA）的影响。结果 静脉注射高分子量和低分子量岩藻聚糖硫酸酯对大鼠栓塞性脑缺血损伤具有很好的保护作用,显著降低神经行为学评分、脑梗死体积和脑皮层神经细胞的损伤,低分子量岩藻聚糖硫酸酯的保护活性是高分子量组分的1/10。岩藻聚糖硫酸酯预防栓塞性脑缺血损伤的作用机理为：抑制TXB2生成,提高6-kelo-PGF1α的水平,抑制LPA的释放,从而抑制血栓的进一步发展;促进t-PA和u-PA的生成从而激活纤溶系统。结论：岩藻聚糖硫酸酯在预防栓塞性脑缺血损伤方面具有很好的应用潜质。     

褐藻多糖硫酸酯抗凝血活性的研究

本文对海带褐藻多糖硫酸酯的抗凝血作用进行了探讨。结果表明：小鼠一次灌胃给予褐藻多糖硫酸酯能明显延长CT，RT，PT，KPTT，TT的时间；小鼠连续灌胃3周能明显减少血浆Fib含量；大鼠连续灌胃1周，可明显减轻手术结扎静脉法及Chandler氏法体外血栓的形成，减轻血栓的湿重及干重，表明褐藻多糖硫酸酯具有抗凝血活性并对静脉血栓形成有明显的抑制作用。     

岩藻聚糖硫酸酯药理学活性研究进展

岩藻聚糖硫酸酯是一类来源于褐藻且结构复杂的海洋硫酸多糖,主要由硫酸化岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸及少量葡萄糖和木糖组成。研究表明,岩藻聚糖硫酸酯具有抗凝血与促凝血、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、免疫调节、降血脂、降血糖、抗补体及促进肠道益生菌生长等多种药理学活性。本文对岩藻聚糖硫酸酯的上述活性进行了综述,并对其应用前景进行展望,为其深度开发利用提供有用参考。     

阿司匹林抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞MMP-9表达及机制研究

目的:探讨阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其机制研究.方法:MTT法检测LPS诱导RAW264.7细胞作用下,阿司匹林对细胞毒性的影响.Q-RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,免疫蛋白印迹法(western blot)检测MMP-9、p38 MAPK及磷酸化p38(Phospho-p38,P-p38)蛋白表达.特异性抑制剂SB203580(SB)阻断p38MAPK通路后,分别应用Q-RT-PCR和Western blot检测MMP-9的基因和蛋白表达.结果:阿司匹林呈剂量依赖性抑制MMP-9基因和蛋白表达.与LPS组相比,阿司匹林可明显抑制P-p38MAPK蛋白的表达,而p38MAPK总蛋白无明显变化.抑制p38MAPK通路后,MMP-9 mRNA和蛋白水平均明显下调.结论:阿司匹林抑制LPS诱导RAW264.7细胞中MMP-9表达可能与抑制p38MAPK信号转导通路有关,进而发挥其抗AS药理作用.     

中分子质量岩藻聚糖硫酸酯的抗血栓活性及作用机制

目的观察中分子质量岩藻聚糖硫酸酯(MMWF)的抗血栓作用并探讨其作用机制。方法 50只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林组、MMWF0.25 mg·kg~(-1)组和0.1mg·kg~(-1)组,采用下腔静脉血栓模型,考察血栓湿重和血栓抑制率。酶联免疫吸附测试法(ELISA)测定动物血浆抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、蛋白质C(PC)、纤溶酶原(PLG)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)指标。另外50只大鼠按前述分组,通过大鼠血瘀模型考察血液流变学改变。结果在静脉血栓模型中,与正常对照组比较,模型组的AT-Ⅲ和PC活性、t-PA含量及t-PA/PAI-1比值均显著降低,PAI-1和PLG含量显著增加(均P<0.01)。与模型组和阿司匹林组比较,MMWF 0.25 mg·kg~(-1)组和0.1 mg·kg~(-1)组血栓湿重均显著减轻(均P<0.01),AT-Ⅲ和PC无显著改变(P>0.05),t-PA含量和t-PA/PAI-1比值显著升高,PAI-1和PLG含量显著降低(均P<0.01)。在血瘀模型中,与正常对照组比较,模型组的全血黏度、血浆黏度、血细胞比容、红细胞沉降率及红细胞沉降率方程K值等血液流变学指标均有明显升高(均P<0.01)。与模型组比较,MMWF 0.25 mg·kg~(-1)和0.1 mg·kg~(-1)组上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论 MMWF具有明显的抗血栓作用,其机制可能与增加纤溶作用和改善血液流变学性质有关。     

岩藻聚糖硫酸酯F2靶向SGLT2的抗糖尿病肾病活性研究

目的 旨在从细胞水平上探讨岩藻聚糖硫酸酯F2对SGLT2的抑制作用及抗糖尿病肾病(DN)活性,并阐述其抗DN机制.方法 通过Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析法对墨角藻来源岩藻聚糖硫酸酯(FvF)进行分离纯化,并采用高效液相、离子色谱等方法测定其分子量、单糖组成、硫酸根含量等基本理化性质,利用流...     

乙酰化海带褐藻多糖硫酸酯的制备及其抗氧化活性研究

目的 优选乙酰化海带褐藻多糖硫酸酯的制备方法,并测定不同条件下制备得到的乙酰化衍生物的体外抗氧化活性.方法 以甲酰胺为溶剂;乙酸酐为酰化试荆,N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)为催化剂,采用正交设计法,考察反应时间、反应温度及酰化剂用量对海带褐藻多糖硫酸酯酰化反应的影响,测定不同条件下乙酰化衍生物的清除超氧阴离子、羟自由基和有机自由基DPPH的能力,及还原能力.结果 酰化荆用量和反应温度对海带褐藻多糖硫酸酯乙酰化有显著影响(P＜0.05).不同条件下制备的乙酰化衍生物的清除超氧阴离子、羟自由基和有机自由基DPPH的能力,及还原能力不同.结论 NBS作为催化荆对海带褐藻多糖硫酸酯进行乙酰化是可行的,可以代替传统毒性较强的吡啶对海带褐藻多糖硫酸酯的羟基进行乙酰化.乙酰化后多糖的抗氧化活性明显增强,对其进行深入研究有重要意义.     

Paeoniflorin protects RAW 264.7 macrophages from LPS-induced cytotoxicity and genotoxicity

LPS is one of the major constituents of the outer membrane of Gram-negative bacteria. LPS-induced activation of macrophage results in the nitrite (NO) production and the secretion of a pro-inflammatory mediator such as PGE₂. Excessive NO reacts with the superoxide anion to generate a selective oxidant and nitrating agent, peroxynitrite, which interacts with biological molecules and damages the cell membranes of them, being able to result in the cell death. We evaluated the protective effects of paeoniflorin (PF) against LPS-induced toxicity by measuring its dose-dependent effects on cell viability in MTT assay, NO production in NO assay, PGE₂ production in prostaglandin E₂ (PGE₂) assay, and DNA damage in comet assay in LPS-treated RAW 264.7 macrophages. In the comet assay, we also analyzed tail length, tail DNA, and tail moment as the markers of DNA strand breaks. PF-treatment significantly protected RAW 264.7 macrophages against LPS-induced toxicity with the increase of viable cells, the decrease of NO and PGE₂, and the repair of DNA damage.     

低聚古罗糖醛酸磷酸酯的制备及其对RAW264.7细胞的激活作用

目的 研究低聚古罗糖醛酸磷酸酯对RAW264.7细胞的激活作用。方法 低聚褐藻胶依次通过pH分级、高压酸解纯化的方法制备低聚古罗糖醛酸,进而采用磷酸/尿素法对其进行磷酸化修饰,制备低聚古罗糖醛酸磷酸酯。在低聚古罗糖醛酸磷酸酯对RAW264.7细胞激活实验中,分别测定了对RAW264.7细胞增殖、吞噬能力、细胞因子(TNF-α、IL-1β)释放、胞内酶(酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶)活力的影响。结果 低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著促进RAW264.7细胞的增殖,提高其对中性红的吞噬,促进细胞因子的释放以及增强胞内酶的活性。结论 低聚古罗糖醛酸磷酸酯能够多层次、多水平的激活RAW264.7细胞,是一种潜在的免疫增强剂。