早期缺氧对小鼠心肌细胞miR-34a表达及凋亡的影响

目的 探讨早期缺氧对小鼠心肌细胞miR-34a表达及凋亡的影响。方法 原代培养小鼠乳鼠心肌细胞并培养,缺氧6 h造模,使用anti-miR-34a纳米颗粒干预。将其随机分为三组:对照组(C组)、缺氧组(Ⅰ组)和缺氧+anti-miR-34a纳米颗粒组(Ⅰ+NP组)。采用qRT-PCR检测miR-34a的表达,Western blot检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)、caspase 3的表达。结果 Ⅰ组的miR-34a表达、caspase 3表达均高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ组的ALDH2表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+NP组的miR-34a表达、caspase 3表达均低于Ⅰ组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+NP组的ALDH2水平高于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 早期缺氧上调小鼠心肌细胞miR-34a表达,下调下游ALDH2蛋白的表达;Anti-miR-34a纳米颗粒可以进入心肌细胞缓解早期缺氧引起的凋亡。     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a （miR-34a）在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响。方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况。体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响。依据细胞转染情况,分为Control组（不转染任何基因）、Mock组（转染miRNA-neg序列）和miRNA-34a mimic组（转染miRNA-34a mimic序列）。结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为（0.35±0.07）,低于正常人脑组织的（1.00±0.13）,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为（1.00±0.08）、（0.98±0.11）和（6.19±0.34）,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为（90.53±5.84）个、（88.21±5.04）个和（27.46±2.76）个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。     

miR125a对胆管癌细胞株QBC939增殖、凋亡影响及可能机制

目的探讨miR125a对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测52例经手术和病理证实的肝外胆管癌,31例癌旁组织及10例正常胆管组织标本miR125a的表达,免疫组化检测MMP-9蛋白表达。miR125a转染胆管癌细胞株QBC939,MTT法检测细胞增殖,流式细胞分析法检测细胞周期,Caspase-3试剂盒检测凋亡,Western blot检测MMP-9蛋白表达。结果胆管癌组织miR125a表达明显下调,低于正常胆管组织(P<0.05),MMP-9明显高于正常胆管组织(P<0.05)。与对照质粒组比较,转染miR125a胆管癌细胞QBC939增殖受到抑制,流式细胞分析法表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939导致G1阻滞,Caspase-3试剂盒检测显示凋亡增加,Western blot分析表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939中MMP-9的表达出现明显的下调。结论miR125a在肝外胆管癌中低表达,它们可能与胆管癌的发生有关。胆管癌细胞株QBC939 miR125a表达上调,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和G1阻滞,miR125a的作用可能与MMP-9的表达相关。     

黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响

目的 研究黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法 体外培养Eca109细胞,用不同浓度(0、20、60和120μmol·L^-1)的黄芪甲苷处理细胞,并把细胞随机分为4组：Control组、AST组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理)、AST+pcDNA-NC组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-NC)、AST+pcDNA-SATB1组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-SATB1)。用细胞计数法-8（CCK-8）检测各组细胞增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测各组细胞SATB1、Bcl-2、Bax和Cl-caspase-3蛋白表达量。结果 Control组、AST组、AST+pcDNA-NC组、AST+pcDNA-SATB1组的SATB1的蛋白表达量分别为0.89±0.11,0.34±0.06,0.38±0.06,0.76±0.09,72 h OD值分别为1.16±0.14,0.57±0.08,0.64±0.08,0.89±...     

萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响

摘要：目的:探讨萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响。方法:设结肠癌HT-29细胞组、氟尿嘧啶组(20.0μg·ml-1)、萝卜硫素低(100.0μg·ml-1)、高(1 000.0μg·ml-1)剂量组,置于37℃、5%CO2的环境中培养72 h,培养结束后,细胞计数试剂盒-8测定法测定细胞增殖能力,Giemsa溶液染色细胞计算集落总数,BD Matrigel基质培养测定结肠癌HT-29细胞相对总血管长度、相对总血管数目,流式细胞仪测定凋亡率,RT-PCR法及Western blot测定miR-34a、Notch1 mRNA及Notch1蛋白水平。结果:与结肠癌HT-29细胞组比较,氟尿嘧啶组、萝卜硫素低、高剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;随着萝卜硫素剂量的增加,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;与氟尿嘧啶组比较,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著升高（P<0.05）,凋亡率显著降低（P<0.05）。结论:萝卜硫素能抑制结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成,并能促进HT-29细胞凋亡,其机制与萝卜硫素抑制miR-34a、Notch1基因和蛋白的表达有关。     

MiR-34a通过调控Fra-1影响人胃癌细胞侵袭转移

目的 探讨过表达miR-34a对胃癌细胞侵袭转移增殖能力的影响,以及其可能的作用机制.方法 通过转染miR-34amimics上调其表达,利用划痕迁移实验、transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-34a对SGC-7901,BCG-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响.采用生物信息学预测及双荧光素酶实验考察miR-34a对靶基因Fra-1的靶向调控机制.结果 转染miR-34amimics过表达miR-34a能显著抑制胃癌细胞SGC-7901,BCG-823的迁移、侵袭和增殖能力.miR-34a能够靶向负性调控Fra-1的表达,影响下游侵袭转移相关蛋白分子MMP9、Cyclin D1的表达.结论 过表达胃癌细胞系中miR-34a可靶向抑制Fra-1的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭转移增殖能力,影响胃癌进展.     

口腔鳞癌中miR-661的表达及其与增殖、凋亡的关系研究

目的 检测口腔鳞癌中miR-661的表达,探讨其与细胞增殖和凋亡的相关性.方法 收集我院收治的口腔鳞癌手术患者51例,留取肿瘤组织和距肿瘤边缘>2 cm的远端组织进行研究.采用实时荧光定量PCR检测肿瘤组织和远端组织中miR-661的表达;免疫组化法检测肿瘤组织中Ki67、Bcl-2和Bax的表达;Western bl...     

miR-26a通过Notch信号通路对NSCLC细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-26a通过Notch信号通路对NSCLC细胞增殖、凋亡的影响。方法将NSCLC细胞分为Fz组(未处理)、Fm组(转染miR-26a模拟物)、Fi组(转染miR-26a抑制物)。RT-PCR检测Notch、miR-26a水平,Western blotting检测Notch蛋白表达,Transwell实验检测细胞侵袭,TUNEL检测细胞调亡,免疫组化检测Notch阳性表达。结果RT-PCR结果显示,三组细胞中,Notch mRNA水平为Fi组>Fz组>Fm组,miR-26a水平为Fi组Fz组>Fm组(P<0.05)。Transwell侵袭实验发现显微镜下三组细胞计数为Fi组>Fz组>Fm组,细胞侵袭能力Fi组>Fz组>Fm组(P<0.05)。TUNEL检测发现细胞凋亡水平为Fi组Fz组>Fm组。结论miR-26a抑制剂可通过调控Notch蛋白表达诱导NSCLC细胞凋亡。     

常春藤皂苷通过活性氧-p38/JNK通路调控食管鳞癌细胞迁移和凋亡的研究

目的 探究常春藤皂苷(α-Hederin)对人食管鳞状细胞癌KYSE-30细胞的增殖、迁移及凋亡的影响及其潜在机制。方法 将KYSE-30细胞分为4组：空白对照组(常规培养)和低、中、高剂量组(5、10、20μmol·L^-1常春藤皂苷)。细胞用常春藤皂苷处理24 h,用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的迁移能力，用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化C-Jun氨基末端激酶蛋白(p-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶蛋白(p-ERK)、磷酸化p38蛋白(p-p38)、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型多聚ADP核糖聚合酶(Cleaved PARP)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase 3)的表达水平，用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 空白对照组和低、中、高剂量组细胞24 h增殖抑制率分别为(2.07±0.35)%、(12.73±3.52)%、(27.37±5.50)%和(51.02±6.35)%;细胞凋亡率分别为(5...     

CDCA7基因在食管鳞癌细胞系中的表达及其对细胞增殖凋亡的影响

目的明确CDCA7基因在食管鳞癌各种细胞系中的表达量及其对细胞表型的影响。方法 (1)实时聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞系及永生化食管上皮细胞系中的CDCA7基因的表达水平;(2)构建CDCA7基因的敲除载体pLKO.1-purosh RNA-CDCA7;(3)将pLKO.1-puro-sh RNA-CDCA7和对照空载体pLKO.1-puro转染到内源性高表达CDCA7基因的食管鳞癌细胞系ECA109中;(4)用real-time PCR和蛋白质印迹法验证筛选出的单克隆细胞;(5)四甲基偶氮唑盐(MTT)试验、克隆形成试验、细胞凋亡试验验证CDCA7基因敲除后对细胞表型的影响。结果 (1)在食管鳞癌的各种细胞系中,ECA109是内源性高表达CDCA7基因的细胞系之一;(2)成功构建了pLKO.1-puro-sh RNA-CDCA7的敲除质粒,并筛选出稳定敲除CDCA7基因的单克隆细胞株;(3)MTT、克隆形成试验结果显示,敲除CDCA7基因可以降低食管鳞癌细胞的增殖能力和克隆形成能力;(4)细胞凋亡试验结果显示,敲除CDCA7基因能够加速食管鳞癌细胞的凋亡。结论 CDCA7基因的敲除能够对食管鳞癌细胞系的细胞表型产生影响,会抑制癌细胞的增殖能力和克隆形成能力,加速癌细胞的凋亡。     

姜黄素抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞的凋亡

目的 探讨姜黄素对人食管癌A549细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定不同浓度姜黄素对人食管癌A549细胞的增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 在一定的浓度范围内,随着姜黄素浓度的增加,细胞增殖的抑制率显著增加,呈明显量-效关系(r＝0.992, P＜0.01);姜黄素对人食管癌A549细胞的凋亡率为(18.89±0.58)%,明显高于对照组的(4.25±0.19)%(P＜0.01).结论 姜黄素可抑制人食管癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡.     

肿瘤坏死因子受体相关因子 6的表达对食管鳞状细胞癌预后的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TRAF6)在食管鳞状细胞癌( ESCC)组织中的表达与复发和生存的关系。方法选取 2012年 12月至 2014年 2月在云南省第三人民医院接受根治性切除术治疗的经病理证实为 ESCC的病人 478例作为研究对象。采用免疫组织化学法检测 ESCC病人癌组织中 TRAF6的表达。并探讨 TRAF6的表达与 ESCC病人复发和生存的相关性。结果 478例 ESCC病人中, 341例( 71.3％)符合 TRAF6表达阳性标准。 TRAF6表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P＞0.05)但是与 ESCC病人的 TNM分期、淋巴结转移、复发和死亡状况显著相关( P＜0.05)。淋巴结转移、较高临床分期、发生复发或死,亡的病人 TRAF6阳性表达率高。进一步分析发现, TRAF6阳性表达的 ESCC病人复发和死亡风险增加［ HR(95%CI):2.47(1.63~3.84),3.05(2.37~3.48)］。结论 TRAF6在 ESCC癌组织中的表达参与 ESCC的发生发展, TRAF6表达阳性病人复发和死亡的风险增加; TRAF6可作为 ESCC潜在的治疗靶点。     

纳米颗粒对人食管癌EC-9706、EC-109细胞增殖和凋亡的影响

目的研究氧化铜(CuO)、氧化锌(ZnO)、二氧化钛(TiO_2)纳米颗粒在体外对人食管鳞状癌细胞系EC-9706和EC-109增殖的影响及其部分作用机制。方法使用透射电镜(TEM)、动态光散射(DLS)鉴定纳米颗粒物的理化性质,然后将不同浓度的TiO_2、CuO、ZnO(5~80 mg·L~(-1))与体外培养的EC-9706和EC-109细胞孵育,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)法检测细胞周期及凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白免疫印迹法检测细胞中Bcl-2和caspase-3蛋白表达情况。结果实验所用的纳米CuO、ZnO、TiO_2颗粒为球形,粒径分别为12、20.6、12 nm。在水中与细胞培养液中聚集成较大颗粒并带负电。随着纳米颗粒浓度的增加,纳米CuO和ZnO颗粒可剂量依赖性抑制食管鳞癌细胞的增殖,G_0/G_1期细胞的比率上调,G_2/M期的比率下降,并促进凋亡率增加,侵袭力下降;纳米颗粒处理48 h后,与对照组相比,活化caspase-3表达量明显升高,Bcl-2表达量明显下降(P<0.05)。纳米TiO_2颗粒对食管鳞癌细胞的增殖、凋亡和侵袭能力无明显的影响。结论与纳米TiO_2相比,一定浓度的CuO和ZnO纳米颗粒可有效抑制食管鳞癌细胞的生长,阻滞细胞周期于G_0/G_1期,并诱导其凋亡,这可能是其抑制食管癌细胞功能的作用机制之一。     

雷公藤甲素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究雷公藤甲素对人肺腺癌‰细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人肺腺癌A谢细胞增殖的影响，运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带检测细胞凋亡，采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-9，3的活化。结果：雷公藤甲素对体外培养的A谢细胞具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示雷公藤甲素可以显著诱导‰细胞凋亡，DNA电泳显示雷公藤甲素作用于A谢细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。雷公藤甲素作用后‰细胞caspase-9，caspase-3活性明显升高。结论：雷公藤甲素可能通过线粒体信号通路抑制肺腺癌A谢细胞的生长并诱导其凋亡。     

电磁场对肝癌细胞凋亡基因表达的影响

目的 研究电磁场对肝癌细胞凋亡基因表达的影响,探索电磁场在治疗原发性肝癌(肝癌)中的作用.方法 通过基因芯片技术检测经电磁场处理过的肝癌细胞系BEL-7402和胎肝细胞(I.-02)的凋亡基因表达情况,分析其凋亡基闪表达谱筹异.结果 在检测的54 614个探针组中,BEL-7402细胞经电磁场处理后促进凋亡基因明显(细胞色素C释放相关基因)上调,抑制凋亡基因表达下降.结论 电磁场能够促进肝癌细胞凋亡基因的上调,抑制凋亡基因表达下降,提示电磁场在促进肝癌细胞凋亡方面具有重要作用.     

紫草素促进食管癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制研究

目的研究紫草素促进食管癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用及机制。方法 2019年 1月至 2020年 6月期间开展细胞实验,培养食管癌 Eca109细胞,分为不含药物杜氏改良 Eagle培养基( DMEM)处理的对照组,含不同剂量紫草素 DMEM处理的紫草素组,含 2.0 μmol/L紫草素和 10 μg/L胰岛素样生长因子 -1(IGF-1)DMEM处理的 2.0 μmol/L紫草素 +10μg/L IGF-1组。检测细胞凋亡率、细胞周期及凋亡基因活化的胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、磷酸化磷酸肌醇 3激酶( PI3K)、蛋白激酶 B(AKT)的表达量。结果 0.5 μmol/L紫草素组、 1.0 μmol/L紫草素组、 2.0 μmol/L紫草素组的细胞凋亡率、细胞周期 G1期比例、 cleaved caspase-3的表达量［ 0.5 μmol/L紫草素组( 0.64±0.14)、 1.0 μmol/L紫草素组( 0.81±0.19)、2.0 μmol/L紫草素组( 1.02±0.24)］高于对照组 0.41±0.07,细胞周期 S期、 G2期比例及 cyclin D1［0.5 μmol/L紫草素组( 0.80±0.16)、 1.0 μmol/L紫草素组( 0.68±0.13)、 2.0 μmol/L紫草素组( 0.45±0.09)］、 p-PI3K、p-AKT表达量低于对照组［ cyclin D1表达量(0.91±0.18)］(P<0.05); 2.0 μmol/L紫草素 +10 μg/L IGF-1组的细胞凋亡率、细胞周期 G1期比例、 cleaved caspase-3的表达量低于 2.0 μmol/L紫草素组,细胞周期 G2期比例及 cyclin D1、p-PI3K、p-AKT表达量高于 2.0 μmol/L紫草素组( P<0.05)。结论紫草素具有促进食管癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用,该作用与抑制 PI3K/AKT通路激活有关。     

全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（a11．transretinoicacid,ATRA）对体外培养的胃癌BGC-823细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RT．PCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化。结果全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。TUNEL检测显示：以5Ixmol／L的全反式维甲酸对BGC-823细胞处理0、24、48、72h后细胞凋亡率逐渐增加（P〈0．05）,呈时间依赖性。RT-PCR检测显示BGC-823细胞Survivin基因的mRNA表达呈时间依赖性下调。结论全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞株具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Survivin基因表达有关。