调衡方对Lewis肺癌细胞凋亡标志物bax及bcl-2表达的影响

目的探讨调衡方含药血清诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的含药血清（无特定病原体雌性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只,灌服给药,制备调衡方大、中、小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,调衡方大、中、小剂量含药血清组,中剂量含药血清＋AG490干预组,正常血清组）处理Lewis肺癌细胞,用溴化四唑蓝（MTT）法检测药物对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定碘化丙啶染色细胞周期的变化;采用实时聚合酶链式反应（PCR）法检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果调衡方含药血清处理Lewis肺癌细胞后,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢。流式细胞仪检测结果显示,调衡方含药血清使Lewis肺癌细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加,中、大剂与中剂量＋AG490组尤为明显（P〈0.01）。调衡方含药血清还能够促进细胞中bax mRNA表达,减少bcl-2 mRNA表达（P〈0.05,P〈0.01）,并呈浓度依赖性。结论调衡方含药血清能降低Lewis肺癌细胞内bcl-2含量及提高bax的表达,使bax/bcl-2比值升高,这可能是调衡方抗肿瘤诱导Lewis肺癌细胞凋亡的机制。     

蒿芩清胆加减方含药血清诱导Lewis肺癌细胞分化研究

目的:观察蒿芩清胆加减方含药血清对Lewis肺癌细胞的分化诱导作用,并初步探索其作用机制.方法:蒿芩清胆加减方含药血清,体外培养Lewis肺癌细胞,通过不同浓度血清作用于细胞进行干预.观察给药后细胞形态学变化.用MTT抑瘤实验,琥珀酸脱氢酶(SDH),乳酸脱氢酶(LDH)的测定,细胞周期的测定,观察细胞分化的情况.结果:光镜下血清组培养瓶中贴壁细胞数量呈减少趋势,以高剂量组细胞形态和数量改变趋势明显.MTT比色法显示含药血清浓度越高,抑制作用越强.SDH活性显示蒿芩清胆加减方血清组系使Lewis肺癌细胞内的SDH活性明显上升,并以高剂量组作用最为明显.LDH活性显示蒿芩清胆加减方血清高剂量组降低细胞内LDH活性最明显.结论:蒿芩清胆加减方含药血清作用于Lewis肺癌细胞株后,细胞具有向正常细胞生理状态分化成熟的趋势.     

复方阿胶浆对体外培养人肺癌PG细胞的凋亡作用实验

目的探讨含复方阿胶浆鼠血清对肺癌PG细胞周期和凋亡率作用影响。方法采用血清药理学方法,开展了复方阿胶浆含药血清对肺癌高转移株PG细胞体外培养,通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率(APO)的变化。结果复方阿胶浆含药血清可显著提高肺癌细胞凋亡比率,中、高剂量组与对照组相比有非常显著性差异(P<0.01),阻滞细胞分裂停止于G0期,各剂量组与空白组相比有非常显著性差异(P<0.01)。结论复方阿胶浆含药血清可显著诱导肺癌细胞凋亡,阻滞细胞分裂中止,因而具有抗肺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,可改善肺癌等实体瘤患者的预后。     

尖叶假龙胆醇提物含药血清对A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨尖叶假龙胆醇提物(EEGA,ethanol extract from Gentianella acuta)含药血清对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和影响细胞周期的作用。方法:采用四甲基偶氮盐(MTT)比色法检测EEGA含药血清对A549细胞作用24 h、48 h、72 h的增殖抑制率,使用流式细胞仪观察EEGA含药血清处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率和细胞周期阻滞率变化的检测。结果:MTT显示EEGA低、中、高剂量含药血清都能抑制A549细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间相关。低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后凋亡率显著高于空白组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较空白组增加(P0.01),提示EEGA含药血清可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。结论:尖叶假龙胆对人肺癌A549细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

软坚散结胶囊含药血清诱导人肾透明细胞癌7860细胞凋亡

目的:研究软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法:分别采用CCK-8检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察软坚散结含药血清处理7860细胞后细胞凋亡和细胞周期阻滞的发生。结果:软坚散结胶囊低、中、高剂量含药血清均能抑制7860细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间及血清含药浓度相关。中、高剂量含药血清处理7860细胞48h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理7860细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.01),提示软坚散结胶囊可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。激光共聚焦显微镜下可见经染色的凋亡细胞增多且细胞出现凋亡形态学改变。结论:软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

镰形棘豆脂溶性生物碱含药血清对人肺癌A549细胞活力、凋亡及周期的影响

目的研究藏药镰形棘豆脂溶性生物碱(OFLA)含药血清对人肺腺癌A549细胞活力、凋亡及生长周期的影响。方法将SD大鼠随机分为5组:空白对照组,OFLA低、中、高剂量组(90,135,270 mg·kg~(-1))和阳性药组(环磷酰胺,36 mg·kg~(-1)),连续给药5 d,制备含药血清。采用CCK-8法检测细胞活力;Annexin-VFITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果与空白对照组比较,OFLA各给药组的A549细胞活力在12,24,48 h均明显降低(P0.01),不同浓度的OFLA含药血清均对A549细胞的活力有不同程度的抑制作用,呈现剂量依赖性,并且与作用时间呈正相关趋势。作用24 h后,OFLA各给药组均出现不同程度的细胞凋亡,低、中、高剂量组的细胞凋亡率分别为41.1%、57.6%、60.9%,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01,P0.001)。与空白对照组比较,OFLA含药血清中、高剂量组的G0/G1期细胞比例显著提高(P0.05,P0.01),S期细胞比例显著降低(P0.05)。结论 OFLA可以抑制人肺癌A549细胞的活力,诱导细胞凋亡以及延缓细胞周期进程,将细胞生长周期阻滞在G0/G1期。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。     

地鳖纤溶活性蛋白含药血清对人肺癌A549细胞凋亡及凋亡相关表达的影响

目的 研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)含药血清对人肺癌A549细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的表达.方法 制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法检测EFP对A549细胞的增殖抑制效果;采用Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况;应用流式细胞术检测EFP对A549细胞周期的影响;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax表达水平的改变.结果 EFP含药血清各组对A549细胞有明显抑制作用;EFP使A549细胞发生细胞凋亡,细胞周期发生改变;随着药物浓度的增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱.结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;EFP可能通过调控Bcl-2,Bax基因表达而诱导凋亡.     

黄芪含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的实验研究

目的:研究不同浓度黄芪含药血清对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用以及Bcl-2蛋白表达的影响,初步探讨黄芪的植物雌激素效应情况.方法:采取MTT法观察不同含药血清组对人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间段(24h,48h,72h)的增殖活性,检测细胞周期及细胞凋亡率,检测细胞凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达.结果:黄芪含药血清可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并且呈现不同剂量的梯度性;不同浓度黄芪含药血清均不能诱导细胞的凋亡;但黄芪高剂量组可以明显的增加G0/G1期比例;黄芪含药血清可以上调Bcl-2蛋白的表达.结论:黄芪含药血清可以抑制MCF-7细胞的增殖;高剂量组可以使MCF-7固定在G0/G1期;可部分上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡.     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表达的影响。[方法]运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,用MTT法计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癥丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖,且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癥丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点,大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癥丸能显著降低其表达。[结论]消癥丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖,降低Bcl-2表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其临床抗肿瘤,抑制脑瘤的作用。     

当归补血口服液含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的：探讨当归补血口服液荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响。方法：应用当归补血口服液灌胃荷瘤WiStar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、凋亡。结果：当归补血口服液荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量、时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2／M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡。结论：当归补血口服液含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2／M期和诱导细胞凋亡而实现。     

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。     

消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表迭的影响。[方法]运用血清药理学方法，选择不同浓度的消癓丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育，用MTT法计算增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癓丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖，且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癓丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点，大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癓丸能显著降低其表达。[结论]消癓丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖，降低Bcl-2表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤，抑制脑瘤的作用。     

加味犀角地黄汤含药血清对人微血管内皮细胞增殖的影响

目的:探讨加味犀角地黄汤含药血清对人微血管内皮细胞(h MVECs)增殖的影响。方法:利用CCK-8检测h MVECs细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的改变。结果:加味犀角地黄汤含药血清能够抑制人微血管内皮细胞的增殖,随着浓度的增加抑制作用逐渐明显,加味犀角地黄汤含药血清能使人微血管内皮细胞阻滞在S期,含药血清组明显高于正常对照组;且能够促进其细胞的凋亡。结论:加味犀角地黄汤含药血清可以抑制人血管微内皮细胞的增殖,且能够引起细胞周期的改变,诱导细胞凋亡。     

益气通络解毒方和吉非替尼含药血清对H1975细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨不同剂量益气通络解毒方联合吉非替尼（gefitinib）含药血清对人非小细胞肺癌H1975细胞株的增殖抑制和凋亡作用。方法：应用中药血清药理学方法制备益气通络解毒方低、中、高剂量（15.75,31.5,63 g·kg^-1）及益气通络解毒方低、中、高剂量（15.75,31.5,63 g·kg^-1）联合吉gefitinib（22.5 mg·kg^-1）;gefitinib（22.5 mg·kg^-1）,0.9%氯化钠溶液（NS）含药血清;H1975细胞6×10⁴/mL单细胞悬液每孔100 μL接种于96孔板;H1975细胞1×10⁵/mL单细胞悬液每孔2 mL分别接种于6孔板及6孔板内盖玻片上,细胞贴壁后加入含有10%上述含药血清的RMPI-1640培养液分别干预24,48,72 h,CCK-8法检测各组含药血清作用不同时间后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组含药血清作用不同时间后对细胞凋亡的影响;免疫组化法检测不同时间凋亡细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果：除NS组外,各组含药血清对H1975细胞均有抑制增殖作用,益气通络解毒方高剂量含药血清作用72 h抑制率为23.81%,益气通络解毒方高剂量联合gefitinib含药血清抑制率最高为42.86%;与NS对照组比较,各组含药血清对H1975细胞均有诱导其凋亡作用,益气通络解毒方高剂量及其联合gefitinib含药血清作用72 h,H1975细胞凋亡率分别为10.29%,25.77%;凋亡蛋白Caspase-3表达与药物剂量、作用时间呈正相关,益气通络解毒方高剂量联合gefitinib含药血清的作用最强。结论：益气通络解毒方联合gefitinib可有效的抑制肺腺癌H1975细胞增殖并诱导其凋亡,增加Caspase-3蛋白表达可能是其促进H1975细胞凋亡的机制之一。