巢蛋白的表达模式及其功能

巢蛋白 (Nestin)属于第Ⅵ类中间丝蛋白 ,主要由胚胎期和成年的神经前体细胞一过性表达 ,在中枢神经系统各种损伤条件下 ,脑中反应性星形胶质细胞和神经元又再现其表达。然而 ,本实验室首次观察到 ,在正常成年大鼠和成人基底前脑存在一个有别于胆碱能神经元的Nestin免疫反应阳性神经元簇 ,并证明了这些Nestin -IR神经元的Nestin表达受卵巢雌激素的影响。Nestin的功能与维持神经前体细胞的正常形态结构有关 ,也可能与其它的中间丝蛋白如神经丝共聚形成多聚体 ,此外 ,尚可能在影响其它蛋白的功能方面发挥作用。     

巢蛋白在垂体和垂体腺瘤中表达的研究进展

巢蛋白(nestin)是第Ⅵ类中间丝蛋白,主要在胚胎期神经前体细胞和神经干细胞一过性表达。在正常细胞演变成肿瘤细胞过程中,巢蛋白又呈现返祖性表达。近年来研究发现nestin阳性细胞散在的分布于垂体的前叶、中间部和神经部。但这些nestin阳性细胞是否包括了垂体前体细胞还不清楚。在垂体腺瘤的部分毛细血管内皮细胞中也检测到nestin的表达,推测它可作为垂体血管发生的一种检测指标。     

巢蛋白在脑内的表达

巢蛋白是第Ⅵ型中间丝蛋白,常作为神经前体细胞的标志物。但近期的研究发现在成年大鼠及成人的脑内存在广泛的巢蛋白表达,巢蛋白可在具有神经生发功能的区域、神经胶质细胞及成熟的神经元中表达。本文对巢蛋白的结构、功能及巢蛋白在脑内的表达情况进行综述,供脑功能研究者参考。     

中间丝蛋白在胎肺发育分化中的表达

中间丝蛋白作为细胞骨架的主要成份,对于它们与细胞其他结构的相互关系,尤其在细胞发育分化过程中,这些蛋白的表达及其生物学意义,人们的理解远不如微管和微丝.本文用抗中间丝蛋白的单克隆抗体的免疫组化反应,对人胎肺发育分化过程中间丝蛋白的表达进行观察.结果表明,胎肺发育分化阶段中间丝蛋白在一定的时期表现出两种或两种以上种类的共同表达,这与成体细胞中间丝蛋白的高度特异性存在显而易见的差异.本文对于中间丝蛋白在细胞发育分化中的表达特征及其意义进行初步讨论.     

干细胞常用词汇（续七）

Nestin——巢蛋白，存在于神经和胰腺前体细胞等的一种中间丝蛋白。     

中间丝蛋白在胎肺发育分化中的表达

中间丝蛋白作为细胞骨架的主要成份，对于它们与细胞其他结构的相互关系，尤其在细胞发育分化过程中，这些蛋白的表达及其生物学意义，人们的理解远不如微管和微丝，本文用抗中间丝蛋白的单克隆抗体的免疫组化反应，对人胎肺发育分化过程中间丝蛋白的表达进行观察，结果表明，胎肺发育分化阶段中间丝蛋白在一定的时期表现出两种或两种以上种类的共同表达，这与成体细胞中间丝蛋白的高度特异性存在显而易见的差异，本文对于中间丝蛋白     

Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响

目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。     

神经干细胞有丝分裂过程中nestin表达变化

在哺乳动物胚胎早期发育过程中 ,中枢神经系统的神经干细胞 ( NSCs)首先通过对称分裂进行自身复制 ,然后通过不对称分裂产生神经元和胶质细胞的前体细胞 ,这些细胞都表达一种中间纤维蛋白 ( IF) -神经巢蛋白 ( nestin)。nestin的表达是暂时的 ,一旦前体细胞分化成终末分化细胞如神经元或胶质细胞 ,nestin则被其他中间纤维蛋白所取代。不同中间纤维在体内不同时期表达的原因和执行的功能还不清楚 ,但可以肯定的是 nestin与 NSCs的多潜能性有关。本实验通过缩时显微成像和免疫组织化学技术观察了 NSCs在对称分裂过程中 nestin的表达变化 ,发现 nestin在前、中、后、末四期的荧光强度表达有不同程度的变化 ,分裂前期与分裂间期相同 ,前中期荧光强度有明显增强 ,到中期荧光强度反而有些下降 ,到末期荧光强度达到最大值 ,胞质分裂后荧光强度逐渐下降。这种波动表达现象将有助于揭示 NSCs维持其多潜能性的奥秘     

Nestin的结构及生物学活性研究

Nestin是一种由胚胎期神经前体细胞一过性表达的Ⅵ型中间丝蛋白,作为神经前体细胞的特异性蛋白,能使神经元有较强的生理活性和可塑性。近年来Nestin发现与干细胞增殖、分化、迁移联系密切,调控着神经干细胞的定向诱导分化。本文复习近年来国内外有关文献,对Nestin的结构及生物学活性研究综述如下。     

大鼠视神经吸断伤后相关分子表达的变化

目的：研究视神经损伤后神经胶质细胞去分化的程度及相关分子的表达。方法：成年雄性大鼠视神经吸断伤后,采用免疫组织化学、原位杂交组织化学结合计算机图像分析,检测视神经巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经纤维丝(NF)以及 Nogo-A mRNA 在伤后3、7、14和28 d 4个不同时相点的表达。结果：视神经伤后,巢蛋白表达上调,在28 d 时表达最高;GFAP 表达先下调,7 d 时最低,随后逐渐上调; MBP 表达上调,呈先上升后降低的趋势;NF 表达呈明显下降趋势;Nogo-A mRNA 表达呈上升趋势,3 d 到7 d 的变化最显著。结论：视神经损伤后相关分子表达提示其神经胶质细胞可去分化为神经前体细胞或神经干细胞,但这些前体细胞或干细胞呈不利于神经再生的状态。     

脑nestin-ir神经元的发现-形态、化学、投射和功能

<正>巢蛋白(nestin)属于中间丝蛋白家族,由于其主要在胚胎期和成年的神经前体细胞表达的特性,自发现以来,一直被视为神经前体细胞的标志物。然而,本实验室首次观察到,正常成年大鼠和成人一些脑区内的神经元也呈nestin免疫阳性反应。关于这些nestin免疫反应阳性神经元(nestin-ir神经元)的许多特性尚需阐明,如这些nestin-ir神经元的化学属性是什么?是否为投射神经元?投射的靶区何在等。近几年来,本实验室针对这些神经元的分布、形态及其可能的特性和功能进行了一些相关的研究,现将已取得的研究成果作一综述。     

Vim及其在中枢神经系统的分布与作用

简要描述了中间丝Vim分子的外显子、内含子以及Vim的基因调控 ,总结了Vim蛋白及其亚单位的结构、装配、磷酸化调节和Vim与其它中间丝的相互作用。在发育时期的CNS ,Vim广泛表达于胶质细胞、神经元 ,成年期则特异地表达在少数胶质细胞和神经元内 ,并表达于整个星形胶质细胞的培养时期。Vim参与了神经元的芽生和某些特殊胶质细胞的构筑、形态和功能 ,并与部分CNS恶性肿瘤的行为学有关     

波形蛋白阳性细胞在人胚脑中的分布

波形蛋白 (Ｖｉｍｅｎｔｉｎ)是中间丝蛋白的一种 ,其表达在神经系统发育过程中有一定的时间性 ,主要表达于尚未发生终末分化的细胞 ,即神经祖细胞 /前体细胞。神经祖细胞 /前体细胞是一类尚保留有分化潜能的细胞 ,是神经系统发育到一定阶段的细胞群体 ,具有有限的自我更新 (增殖 )和分化能力[1～ 3 ] 。该细胞移植后可以发生增殖和分化 ,为治疗神经系统退行性疾病开辟了一条新的途径[1] 。目前关于人胚胎神经干细胞 /祖细胞或前体细胞分布的研究尚少 ,本研究用2 7+ 2 周人胚脑 ,通过对Ｖｉｍｅｎｔｉｎ阳性细胞形态特征及其分布情况的研究 …     

水通道蛋白4在大鼠脑垂体中的表达

目的：研究水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA在脑垂体中的表达,探讨其在脑垂体激素分泌过程中的作用。方法：应用免疫组织化学和原位杂交技术,观察成年Wistar大鼠脑垂体中AQP4及其mRNA的正常分布。结果：AQP4及其mRNA在成年大鼠神经垂体的垂体细胞上表达呈阳性,分布在毛细血管窦周围的垂体细胞表达尤为强烈。腺垂体的所有细胞均有AQP4的表达,胞质中AQP4 mRNA表达呈阳性。中间叶所有细胞AQP4及其mRNA的表达呈弱阳性,其中滤泡星形细胞表达较内分泌细胞强烈。结论：AQP4广泛分布于脑垂体的各种组织细胞表面,可能在垂体激素的正常分泌过程中起重要的调节作用。     

角蛋白在喉的表达

所有哺乳动物细胞的骨架都由三种基本的结构蛋白和相关蛋白组成 ,它们是微丝、中间丝和微管。中间丝是构成细胞骨架的主要成分 ,其直径为 7～ 10 nm,分子量为 40～ 70 μ。而组成中间丝的多肽亚单位有 :角蛋白、神经微丝、波形蛋白、结合蛋白、神经胶质蛋白。其中角蛋白家族是最大和变化最多的一类。角蛋白是上皮及上皮源性细胞主要的分化产物 ,不仅具有维持细胞稳定性和运输功能 ,而且在细胞内外信息传导、基因调控和细胞行为方面发挥着重要作用。近年来 ,随着免疫学和分子生物学的进展 ,对角蛋白的结构功能、表达调控有了进一步的认识 ,同…     

细胞骨架蛋白巢蛋白在人肾足细胞中的表达及意义

目的 检测细胞骨架蛋白巢蛋白在成人正常及病理状态肾组织中的表达,并观察其表达水平与患者尿蛋白的关系,初步探讨巢蛋白与足细胞损伤的关系.方法 正常对照肾组织(外科手术切除)6例,应用免疫组织化学(SP法)和免疫电镜检测巢蛋白的表达;病理状态肾组织:IgA肾病(无蛋白尿,电镜观察无足突融合,IrA-np)4例;IgA肾病(有蛋白尿,IgA-P)17例;膜性肾病8例;局灶性节段性肾小球硬化3例.应用免疫组织化学及即时RT-PCR的方法检测巢蛋白在肾组织中的表达并进行半定量、定量分析,与患者尿蛋白水平进行比较,分析两者之间相关关系.结果 巢蛋白表达在成人正常肾组织的足细胞初级足突中;免疫组织化学半定量及即时RT-PCR结果显示:IgA-np中巢蛋白的表达水平与正常肾组织差异无统计学意义;IgA-P、局灶性节段性肾小球硬化、膜性肾病中,巢蛋白的表达比正常肾组织显著降低(P<0.05),并与24 h尿蛋白呈负相关(r=-0.43,P<0.05).结论 巢蛋白在足细胞中低表达与肾小球中足细胞的损伤有关.     

脂肪基质细胞诱导分化为神经元细胞的实验

背景:寻找合适的种子细胞是移植治疗脑血管疾病及其他中枢神经系统疾病的关键。目的:观察人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元细胞的能力。方法:脂肪组织取自要求去除腹部多余脂肪的健康成人,供者无传染性疾病和内分泌疾病。分离培养脂肪组织来源的基质细胞,采用神经诱导培养基加GM1对其进行诱导培养。倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,免疫组织化学法鉴定神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的表达情况。结果与结论:①经神经诱导培养基加GM1诱导后,分化后的细胞大部分呈典型的神经元样细胞形态。②倒置相差显微镜下可见,于诱导后1h出现神经巢蛋白表达阳性,5h出现神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2表达阳性。提示脂肪基质细胞可分化为神经元细胞,分化后的神经元细胞具有表达神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的功能。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca2+浓度的变化

背景：单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。 目的：探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。 方法：分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50 mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24 h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和Realtime PCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。 结果与结论：①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P < 0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P < 0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。     

碱性成纤维细胞生长因子和环磷酸腺苷对神经前体细胞内源性端粒酶反转录酶基因转录水平的调控

目的 探讨人类神经前体细胞中内源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的转录活性及增殖与分化相关调控机制.方法 采用系列hTERT基因启动子的荧光素酶报告载体和β-半乳苷酶表达载体,瞬时共转染HeLa细胞和hNPCs-G3细胞,检测不同长度启动子的活性.分析碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进增殖过程中hTERT基因启动子活性,分析cAMP诱导分化过程中hTERT基因启动子活性.结果 hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,主要依赖近端启动子区.bFGF上调hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,其调控主要作用在-2 098～-1 099bp区域和-3 216bp～-2 098bp区域内;cAMP 抑制hNPCs-G3神经前体细胞hTERT基因的转录,其调控主要作用在近端启动子区.结论 神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,bFGF可上调神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,cAMP则可抑制hTERT基因的转录.     

Sertoli细胞对大鼠大脑皮质神经前体细胞的诱导分化作用

目的:研究Sertoli细胞对体外培养大鼠皮质神经前体细胞生长发育的促进作用,及向多巴胺能神经元分化的诱导作用.方法:将大鼠Sertoli细胞与14 d大鼠皮质神经前体细胞体外共培养,免疫细胞化学检测神经干细胞标记物巢蛋白,神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞标记物βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(GalC),及多巴胺能神经元标记物酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况.结果:随着共培养时间的延长,神经前体细胞中GFAP阳性细胞数量逐渐减少,而β-Ⅲ tubulin 阳性细胞数增多,并出现TH阳性神经元.结论:Sertoli细胞抑制体外培养的大鼠皮质神经前体细胞的生长,但具有显著促神经元分化作用,并能够诱导与其共培养的大鼠皮质神经前体细胞分化为多巴胺能神经元.