雌激素与孕激素对卵巢癌耐药细胞系OVCAR-3生长及耐药的影响

目的研究雌、孕激素对卵巢癌耐药细胞系OVCAR-3生长及对阿霉素（ADM）耐药的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法,计算细胞生存率,以比较不同浓度雌、孕激素对细胞生长的影响,及雌、孕激素与异搏定对卵巢癌耐药细胞系OVCAR-3耐药性的影响。结果高浓度的苯甲酸雌二醇（E2,10．00~100．00μmol/L）和安宫黄体酮（MPA,100．00μmol/L）可抑制OVCAR-3细胞的生长,且二者联合抑制作用增强;而较低浓度的E2（0．01－1．00μmol/L和MPA（0．01~10．00μmol/L）对该细胞的生长无明显影响;异搏定可增加ADM对OVCAR-3细胞的抑制作用,即逆转该细胞对ADM的耐药;E2或MPA均可增加ADM对OVCAR-3细胞的抑制作用,即逆转该细胞对ADM的耐药,且其作用强于异搏定。结论超生理浓度的雌、孕激素可抑制OVCAR-3细胞的生长,而较低浓度的雌、孕激素对其生长无影响;雌、孕激素可逆转OVCAR-3细胞对ADM的耐药,且作用强于异搏定,可望成为临床化疗的辅助用药。     

人子宫内膜癌耐醋酸甲羟孕酮细胞株的建立

目的建立人子宫内膜癌孕激素耐药细胞株Ishikawa（ISH）/醋酸甲羟孕酮（MPA）,为子宫内膜癌耐孕激素的发病机制提供基础。方法采用逐步递增MPA浓度方法进行Ishikawa细胞株耐药体外诱导。采用MTS法测定药物敏感性;绘制细胞生长曲线和计算群体倍增时间。结果 （1）成功建立了MPA诱导的人子宫内膜癌耐MPA细胞株ISH/MPA,其对MPA耐药指数为3.35;（2）ISH/MPA在含MPA 10μmol/L的培养基中的细胞倍增时间与Ishikawa在普通培养基中的倍增时间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,两者生长曲线比较一致。结论成功建立人子宫内膜癌MPA耐药细胞模型ISH/MPA细胞系,为进一步研究子宫内膜癌耐孕激素机制提供了基础。     

卵巢癌细胞对顺铂耐药及其逆转的实验研究

目的：探明卵巢癌对顺铂耐药的发生机理，并筛选出逆转其耐药性的有效调节剂。方法：建立对顺铂耐药的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３／ｃｐ，采用微囊包裹肿瘤细胞技术建立人类卵巢癌小鼠异种移植耐药模型。比较耐药细胞和非耐药细胞生化特征的差异，采用相应的耐药调节剂来进行耐药逆转实验。结果：在ＳＫＯＶ３细胞内，铂（Ｐｔ）累积浓度、Ｐｔ－ＤＮＡ加合物、ＤＮＡ链间交联指数（ＩＳＣ）分别是ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞的５．１、２．４和４．８倍（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；二性霉素Ｂ（ＡｍＢ）和新生霉素（ＮＶＢ）能提高ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞内铂浓度或Ｐｔ－ＤＮＡ加合物浓度，从而完全或部分逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。结论：导致ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度下降和对Ｐｔ－ＤＮＡ清除能力增强。ＡｍＢ和ＮＶＢ能够逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。     

甲羟孕酮对人卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞株放射敏感性的影响

目的 研究人卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞株对放射治疗的影响,及应用醋酸甲羟孕酮( Medroxyprogesterone Acetate,MPA)于SKOV3/DDP细胞株,探讨其对放射敏感性的影响及其可能机制。方法 以人卵巢癌SKOV3细胞株及其耐顺铂SKOV3/DDP细胞株为研究对象接受不同剂量的放射线照射,采用MTT法、克隆形成实验分析细胞相对存活率及放射抗拒性;应用非细胞毒性剂量MPA联合不同剂量放射线照射于SKOV3/DDP细胞,同法测定联合MPA作用后SKOV3/DDP细胞放射敏感性的变化,采用 Sigma Plot 10.0版软件,利用多靶单击模型S =1-(1-eD0/D)n拟合细胞存活曲线,计算放射相关参数。并采用流式细胞技术 (FCM) 检测细胞周期及凋亡情况。结果 随着放射剂量增大,SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞的相对存活率下降,以SKOV3细胞明显;二者的平均致死剂量(D0)分别为3.186和7.794,D0越大,放射抗拒性越强,表明耐药SKOV3/DDP细胞的放射抗拒性强于SKOV3细胞;同法测定MPA联合放疗组细胞的克隆形成率明显低于单纯放疗组,二者D0分别为4.040、7.794,放射增敏比为1.929。MPA联合放疗作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论 人卵巢癌SKOV3/DDP细胞具有放化疗交叉耐受性;MPA可以逆转SKOV3/DDP细胞对放射的抗拒性,其可能机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

米非司酮和甲羟孕酮对耐药性卵巢癌作用机制的研究进展

卵巢癌化疗耐药是卵巢癌复发和治疗失败的主要原因,探索化疗耐药机制,寻找低毒的化疗增敏剂是提高疗效的有效手段。甲羟孕酮和米非司酮为孕激素及其受体拮抗剂,临床上主要用于避孕、终止早孕、激素替代治疗等。研究发现这两种药物可以抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡,并可以在一定程度上逆转卵巢癌化疗耐药。现就其对耐药性卵巢癌作用机制的研究进展进行综述,以期指导临床用药。     

醋酸甲羟孕酮增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞抗癌作用的研究

目的:观察醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢癌CoC1/cDDP细胞移植瘤的生长抑制作用及对DDP的耐药逆转作用,并分析其作用机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组5只。(1)对照组:腹腔注射等体积生理盐水;(2)DDP治疗组:每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg。(3)MPA治疗组:每只每次灌胃30mg/kg;(4)联合治疗组:每只每次灌胃MPA 30mg/kg,1h后每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg,每隔2天给药1次,共4次,于治疗第1、5、10、15、20天分别测瘤体积,20天后处死裸鼠,完整剥出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率;通过流式细胞仪检测亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞鉴定细胞凋亡,分析移植瘤细胞周期;用半定量RT-PCR法检测移植细胞组织Survivin-ΔEx3、caspase-3、P21WAF1/CIP1及GST-π4基因mRNA表达。结果:(1)MPA组、MPA+DDP组治疗第10天起皮下移植瘤体积明显小于DDP组和对照组,且进行性缩小(P<0.01);抑瘤率分别为51.63%、62.21%,均明显大于DDP组的6.84%(P<0.01),并且两组间有显著差异(P<0.01);(2)流式细胞仪分析显示,移植瘤出现亚G1期峰及AnnexinV+/PI-细胞均证实MPA能诱导CoC1/cDDP细胞凋亡,并显著高于对照组及DDP组,并出现G1期阻滞;与DDP合用除出现G1期阻滞外又出现G2/M期阻滞,S期明显减少,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞进一步上升;(3)半定量RT-PCR检测显示,MPA组Survivin-ΔEx3、GST-πmRNA下调,而P21WAF1/CIP1、caspase-3 mRNA上调,与DDP合用后,对Survivin-ΔEx3、P21WAF1/CIP1及GST-πmRNA的表达无协调作用,而对caspase-3 mRNA有协同上调作用。结论:MPA通过阻滞G0/G1期明显抑制了CoC1/cDDP移植瘤生长,并有很强的致凋亡作用,同时下调GST-πmRNA,从而逆转对顺铂耐药。     

米非司酮治疗子宫内膜异位症研究

米非司酮（mifepristone）代号RU486，1980年法国Rousel—Uclaf公司研制并用于临床，商品名息隐，含珠停，为抗孕激素（antiprogesstin）类激素药物，化学结构为176-羟-116-r4-N，N-二甲氨基苯胺]-17α[1-丙炔基]-雌甾-4，9双烯-3-酮，是19-去甲基睾酮衍生物，为强孕酮受体阻断剂，通过妨碍孕酮与孕酮受体的特异结合而显示出抗孕酮活性。     

微小RNA－16参与上皮性卵巢癌细胞周期调控的实验研究

目的：研究微小RNA－16（miR－16）调控靶基因CCNDl及其蛋白表达产物一细胞周期相关蛋白DI（cyclinDl）在卵巢肿瘤细胞系SKOV3及其耐药株SKOV3／DDP中的表达,并初步探讨其逆转卵巢癌耐药的可能机制。方法：脂质体Lipofectamine2000介导miR－16成体模拟物（mimics）及其阴性对照片段（NC）成功转染人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3／DDP;流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化;Western blot法检测转染前后cy—clinDl表达的变化。结果：（1）成功转染miR－16后,SKOV3／DDP细胞系G1期细胞所占比例显著升高（P〈0．01）;（2）SKOV3／DDP细胞的cyclinDl蛋白相对表达量显著高于SK—OV3细胞：转染miR－16后,cyclinDl相对表达量显著下降（P〈0．01）。结论：miR－16很可能通过下调靶基因CCNDl及cyclinDl蛋白的表达,阻止细胞由C,期向S期转换,抑制肿瘤细胞无限增殖与生长。     

哺乳妇女单次注射迪波盖司通长效避孕针后血清和乳液中MPA浓度变化

目的：探讨中国妇女哺乳期使用迪波盖司通后血清和乳液醋酸甲羟孕酮（MPA）浓度变化。方法：10名产后哺乳妇女单次注射迪波盖司通（含MPA 150mg），在注射后的第1、2、4、6、8、10和12周采集血样和乳液样本，用放射免疫方法测定MPA。结果：血清MPA浓度于注射后第1周最高，到第2、4周时下降明显，第4周后浓度下降趋势逐渐缓慢。乳液MPA浓度在第1周为最高，第2周比第1周降低了约1／2，之后10周平均浓度变化波动在5．09—8．15ng／ml之间。观察期间乳液／血清MPA浓度比值和曲线下浓度面积比值均为0．55。对象之间和同一对象不同时间点乳液／血清MPA浓度存在明显个体差异。结论：哺乳期使用迪波盖司通，将导致血液和乳液中含有一定量的MPA。     

奥曲肽逆转人耐顺铂卵巢癌细胞耐药性及其机制研究

目的观察奥曲肽(octreotide,OCT)逆转人耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的作用,并探讨其机制。方法 2009年7月至2010年1月于东南大学医学院中心实验室进行本实验。MTT法及流式细胞术观察顺铂、奥曲肽联合作用后人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP增殖与凋亡的变化。实时荧光定量PCR检测奥曲肽对SK-OV3/DDP细胞生长抑素受体-2(somatostatin receptor-2,SSTR2)、多药耐药基因-1(multiple drug resistance-1,MDR1)、多药耐药相关蛋白-2(multidrug resistance related protein-2,MRP2)mRNA表达的影响。结果奥曲肽与顺铂有协同抗卵巢癌耐顺铂细胞增殖的效应,奥曲肽在质量浓度2.5～20mg/L能显著降低顺铂的IC50(P<0.05),提高细胞的凋亡率(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞有SSTR2mRNA表达,但奥曲肽对SSTR2mRNA表达的调节作用不明显,奥曲肽显著降低SKOV3/DDP细胞MRP2mRNA的表达(P<0.05),作用呈剂量依赖性,但对MDR1mRNA的表达没有影响。结论奥曲肽可以与卵巢癌细胞表面SSTR2结合,发挥抗增殖、促凋亡等作用,并可能通过降低卵巢癌细胞MRP2的表达逆转顺铂耐药性。     

顺铂对人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780影响的差异表达蛋白质分析

目的:比较不同浓度的顺铂作用人卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP和敏感系A2780 48h的双向凝胶电泳(2-DE)图谱的变化,从整体蛋白质水平对卵巢癌顺铂耐药机制进行初步探讨。方法:MTT法观察顺铂对A2780/DDP和A2780细胞系生长的抑制效果。利用2-DE分离顺铂培养48h的A2780/DDP和A2780细胞总蛋白,Image master图像分析系统分析,从中选取部分分离较好的差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析获取肽质量指纹图谱,PeptIdent软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果:获取重复性和分辨率较好的顺铂作用人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780的2-DE图谱。获取5张肽质量指纹图谱。初步鉴定3种可能影响顺铂抑制A2780/DDP或A2780细胞系生长的蛋白质。结论:建立了5μmol/L和20μmol/L顺铂作用A2780/DDP和A2780的2-DE图谱,并识别鉴定出部分差异表达蛋白质,为阐明卵巢癌顺铂耐药机制提供了实验依据。     

小干扰RNA抑制多药耐药基因表达并逆转耐药

目的探讨小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）影响卵巢癌耐药细胞株MDRl基因的表达并逆转其多药耐药的功能。方法2004年10月至2005年6月于山东省立医院中心实验室采用浓度梯度诱导法建立人卵巢癌阿霉素耐药细胞株OVCAR／AR。根据MDRl基因的编码区域设计了2个含19个碱基的MDR1基因特异性siRNA，脂质体介导下转染OVCAR／AR细胞。RT—PCR分析MDR1 mRNA的表达；流式细胞术（FCM）检测P-糖蛋白（P-gp）的表达；MTT法检测OVCAR／AR细胞的多药耐药性。结果MDR1特异性siRNA转染后，OVCAR／AR细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达减少，分别以转染后48h和72h下降最著；转染mdr1a和mdr1b siRNA可不同程度地逆转OVCAR／AR细胞对阿霉素、泰素的耐药性，但对非P-gp介导耐药的顺铂无影响。结论阿霉素所致的卵巢癌细胞多药耐药与MDR1基因过度表达有关，体外实验中应用MDR1特异性siRNA能部分逆转OVCAR／AR细胞的多药耐药。     

异搏定等药物对耐阿霉素人卵巢癌细胞系逆转耐药性的研究

目的：探讨异搏定、潘生丁、丹参、黄体酮、环孢菌素Ａ和他莫西芬等药物对耐阿霉素人卵巢癌细胞系Ａ２７８０／ＡＤＭ逆转的耐药性。方法：用ＭＴＴ法和高效液相色谱仪测定异搏定等６种药物分别对阿霉素耐药细胞的敏感性和耐药细胞内阿霉素的剂量。结果：单用异搏定等６种药物对Ａ２７８０／ＡＤＭ几乎无体外抑制作用。异搏定和环孢菌素Ａ对Ａ２７８０／ＡＤＭ有明显的增效作用，可增加ＡＤＭ在Ａ２７８０／ＡＤＭ细胞内的潴留浓度。结论：除丹参外，其它５种药物均能增强ＡＤＭ对Ａ２７８０／ＡＤＭ耐药细胞细胞毒作用，并克服ＡＤＭ的耐药性，可作为ＡＤＭ的增效剂用于临床治疗卵巢癌患者     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

ATP7B siRNA阳离子纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的体内外实验研究

目的:探讨负载P型铜转运ATP酶(ATP7B)、小干扰RNA (siRNA)阳离子纳米脂质体( ATP7B/DC-Lip)逆转卵巢癌细胞株SKOV3顺铂(DDP)耐药的作用及意义.方法:通过DDP梯度诱导法构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,利用细胞增殖抑制实验测定其耐药指数.薄膜分散法制备ATP7B/DC-Lip并测定其各项纳米表征.利用细胞增殖抑制实验和裸鼠体内实验分别检测ATP7B/DC-Lip的体内外抗肿瘤效果.结果:成功构建了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,ATP7 B/DC-Lip在体外条件下可以分别沉默75％(48小时)和78％(72小时)的ATP7B蛋白表达.在体内外抑制肿瘤生长实验的结果显示,当转染ATP7 B/DC-Lip后,体外条件下SK-OV3/DDP的IC50显著下降为3.51±0.93 μg/ml(n=6);体内DDP耐药型肿瘤模型中DDP+ATP7B/DC-Lip组的肿瘤大小较其他组明显更小(P＜0.05).结论:ATP7B/DC-Lip可以逆转卵巢癌细胞株SKOV3的DDP耐药,可能作为一种有效的纳米药物用于治疗DDP耐药性卵巢癌.     

异搏定等药物地耐阿霉素人卵巢癌细胞系逆转耐药性的研究

目的：探讨异搏定，潘生丁，丹参，黄体酮，环孢菌素Ａ和他莫西芬等药物对耐阿霉素人卵巢癌细胞系Ａ２７８０／ＡＤＭ逆转的耐药性，方法；用ＭＴＴ法和高效液相色谱仪测定异搏定等６种药物分别对可霉素耐药细胞的敏感性和耐药细胞内阿霉素的剂量。结果：单用异搏定等６种药物对Ａ２７８０／ＡＤＭ几乎无体外抑制作用，异搏定和环孢菌素Ａ对Ａ２７８０／ＡＤＭ有明业的增效作用，可增加ＡＤＭ在Ａ２７８０／ＡＤＭ细胞内的潴留浓度，     

二甲双胍降低人子宫内膜癌裸鼠移植瘤孕激素耐药及其机制的初步研究

目的:研究二甲双胍对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药性的逆转作用,并初步探讨其可能机制。方法:将40只裸鼠随机分为2组,分别建立人子宫内膜癌ishikawa及孕激素不敏感ishikawa/GLOI细胞裸鼠皮下移植瘤模型,每组各随机分成4个亚组,每亚组各5只小鼠:对照组(生理盐水)、二甲双胍组(二甲双胍200mg/kg灌胃给药,0.1ml/只)、孕激素(MPA)组[甲羟孕酮(MPA)100mg/kg腹腔注射,0.1ml/只]、二甲双胍+MPA组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和MPA腹腔注射)。治疗期间定期测量肿瘤大小及裸鼠质量。实验结束时取出移植瘤,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算药物对肿瘤生长的抑制率。应用免疫组化检测肿瘤GLOI、CyclinD1、mTOR、pmTOR蛋白的表达。结果:接种ishikawa细胞株的裸鼠中,二甲双胍组、MPA组、二甲双胍+MPA组的抑瘤率分别为36.63%、55.92%和75.38%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。接种ishikawa/GLOI细胞株的裸鼠中,二甲双胍+MPA组的抑瘤率为41.77%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);而二甲双胍组、MPA组的抑瘤率分别为12.58%和2.79%,与对照组的差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,接种ishikawa/GLOI细胞的MPA组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的表达与对照组无明显差异(P0.05),余各实验组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的阳性表达率均低于对照组(P0.05)。结论:二甲双胍能逆转人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的孕激素耐药性,其逆转机制可能与下调GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1表达有关。     

苯基棕榈酰胺吗啡丙醇对卵巢癌多药耐药调节的实验研究

目的 研究葡糖酰基鞘氨醇合酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇（PPMP）对耐阿霉素卵巢癌细胞亚株SKOV3／AdrR的多药耐药基因mdrl1及P－糖蛋白的调节。方法 应用细胞培养技术对SKOV3／AdrR细胞进行PPMP处理,采用逆转录－聚合酶链反应技术分析mdrl mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞内罗丹明的荧光强度。结果 浓度为5、5μmol/L的PPMP可部分抑制SKOV3／AdrR细胞mdrl mRNA的表达,25μmol/L的PPMP可完全抑制KOV3／AdrR细胞mdr1 mRNA的表达,调节作用呈浓度依赖性。PPMP可增加SKOV3／AdrR细胞内罗丹明的荧光强度,随着PPMP浓度（分别为5、15、25μmol/L）的增加,细胞内罗丹明的荧光强度逐渐增高（分别为301．22、389．98、426．08）。结论 PPMP可逆转SKOV3／AdrR的多药耐药性。     

ERCC1基因与卵巢上皮癌细胞铂类耐药相关性探讨

目的 检测切除修复交叉互补1（ERCC1）基因在人卵巢上皮癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3／DDP及其亲本细胞株SKOV3中的表达,探讨ERCC1基因在卵巢上皮癌顺铂耐药中的意义以及有效沉默ERCC1基因能否有效逆转SKOV3／DDP细胞对DDP耐药。方法 于2013-2014年在南方医科大学采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测 ERCC1 mRNA和蛋白在SKOV3／DDP及SKOV3细胞中的表达。人工构建3个靶向沉默ERCC1基因的短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体,慢病毒载体法转染至SKOV3／DDP细胞,RT-PCR和Western印迹法检测ERCC1基因水平并挑选沉默效果最佳的表达载体。RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染后SKOV3／DDP细胞中ERCC1基因的表达,CCK-8法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果 SKOV3／DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达量明显高于SKOV3,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染ERCC1 shRNA后的SKOV3／DDP细胞,ERCC1的mRNA及蛋白的表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞活性检测提示特异性沉默ERCC1基因能增加SKOV3/DDP 细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论 ERCC1基因在SKOV3／DDP细胞中的表达明显升高,有效沉默ERCC1 基因能有效逆转SKOV3/DDP细胞对DDP耐药,增加卵巢上皮癌DDP耐药细胞对DDP的敏感性,为卵巢上皮癌耐药的治疗提供新靶点。     

共载STAT3 siRNA与顺铂纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株耐药的实验研究

目的探讨共载信号转导和转录激活子3(STAT3)si RNA与顺铂(DDP)纳米脂质体(STAT3/DDP-Lip)对耐药性SKOV3/DDP卵巢肿瘤的逆转与治疗作用。方法采用薄膜法制备共载脂质体并测定其纳米表征,利用Western-blot及RT-PCR法检测STAT3/DDP-Lip体外对STAT3的干扰效果,通过细胞杀伤实验与裸鼠体内抑瘤实验分别评价STAT3/DDP-Lip的体内外抗肿瘤作用。结果成功构建了共载si RNA和DDP的纳米脂质体,体外条件下STAT3/DDP-Lip处理后耐药细胞的STAT3蛋白相对表达量下降为0.225;STAT3/DDP-Lip对SKOV3耐药细胞的IC50值为3.75μg/ml,耐药逆转倍数为7.51;体内耐药卵巢癌治疗中,STAT3/DDP-Lip能显著抑制肿瘤体积[(215±122)mm3],与空白对照组[(1 316±140)mm3]比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 STAT3/DDP-Lip可以在体内外抑制DDP耐药性卵巢癌SKOV3细胞株生长。