海藻酸诱导复杂部分发作癫痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的表达

目的:研究海藻酸(KA)致痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的动态表达水平以及加巴喷丁(GBP)干预对它们的影响,探讨复杂部分发作癫痫(CPS)的发生机制,为开发针对GABA受体亚单位水平的新型抗癫痫药物(AEDs)提供理论依据。方法:成年雄性Wistar大鼠海马CA3区注射2μgKA建立复杂部分发作模型,采用免疫组化SABC法检测癫痫大鼠海马各区GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)的动态表达水平,并用GBP干预癫痫的发作观察GBP对GABAARα1表达的影响。结果:KA致痫后海马CA1区、CA3区GABAARα1表达呈先升后降趋势,齿状回(DG)表达水平则逐渐增加。GBP对癫痫早期GABAARα1表达无直接影响。结论:在KA诱导的CPS模型中,GABAARα1表达减少和由此所引起的抑制功能减弱,可能是癫痫发生的一种分子机制。     

动态观察红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡与wtp53表达的意义

目的：探讨红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p53(wtp53)蛋白表达的关系。方法：采用KA诱导痛痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段，原位检测凋亡细胞；免疫组化SP法检到wtp53蛋白。结果：注射KA72h后，癫痫发作大鼠海马CAl区凋亡神经细胞达高峰及wtp53蛋白表达在24h大量出现；wtp53蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。结论：癫痫神经细胞凋亡与wtp53表达密切相关；痫性发作使wtp53表达上调，从而诱导神经细胞凋亡。     

AntisenseGAD67ODN对戊四氮所致慢性癫痫大鼠作用的研究

目的：探讨谷氨酸脱羧酶（GAD）的抗癫痫作用。方法：采用戊四氮制备大鼠慢性癫痫模型，利用反义寡脱氧核苷酸技术，通过选择性地抑制海马GAD基因的表达来观察其对慢性癫阐述 大鼠行为、发作阈值及脑电图的影响；同时，采用高效液相色谱法检测其对海马组织内γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响。结果：给予AntisenseGAD67ODN处理后，GAD67mRNA表达下降、GABA浓度下降、痫性发作潜伏期缩短、发作程度加重及脑电图痫波频率增加。结论：从反面进一步说明GAD基因可能是抗痫基因，为GAD基因治疗癫痫提供实验依据。     

Antisense GAD67 ODN对戊四氮所致慢性癫痫大鼠作用的研究

目的　探讨谷氨酸脱羧酶(GAD)的抗癫痫作用。方法　采用戊四氮制备大鼠慢性癫痫模型，利用反义寡脱氧核苷酸技术，通过选择性地抑制海马GAD基因的表达来观察其对慢性癫痫大鼠行为、发作阈值及脑电图的影响；同时，采用高效液相色谱法检测其对海马组织内γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响。结果　给予Antisense GAD67 ODN处理后，GAD67 mRNA表达下降、GABA浓度下降、痫性发作潜伏期缩短、发作程度加重及脑电图痫波频率增加。结论　从反面进一步说明GAD基因可能是抗痫基因，为GAD基因治疗癫痫提供实验依据。     

γ-氨基丁酸受体基因转染对癫痫大鼠海马缝隙连接蛋白43表达的影响

目的： 探讨下丘脑乳头体上核内转染γ-氨基丁酸(GABA)受体基因对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马区缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响。 方法：将24只Wistar雄性大鼠分为4组：正常对照组（n=2）、手术对照组（n=2）、KA对照组（n=10）及GABA受体基因转染组（n=10），正常对照组未经任何处置，手术对照组在右侧杏仁核注射生理盐水1 μL，KA对照组在杏仁核注射KA 1 μL（1　μg），GABA受体基因转染组则在KA注射前48 h预先将GABA 受体mRNA 400 nL (40 ng)注射到下丘脑的乳头体上核。采用原位杂交法观察4组大鼠各个时程（3 h、6 h、24 h、3 d、7 d）海马区形态及CX43阳性细胞数变化。 结果：正常对照组和手术对照组大鼠海马神经元结构完整；KA对照组海马神经元肿胀变性，其程度随时间延长而加重；GABA受体基因转染组海马神经元变性坏死程度相对于KA对照组减轻。CX43表达阳性细胞数定量分析显示，正常及手术对照组CX43表达阳性细胞数较少，KA对照组随时间延长CX43阳性表达细胞数逐渐增多， GABA受体基因转染组大鼠CX43阳性表达细胞数在各个时程均比KA对照组减少。 结论: 下丘脑内转染GABA受体基因可以下调海马区CX43的表达。     

戊四氮致痫大鼠海马c-FOS蛋白表达及钙拮抗剂的影响

目的：探讨戊四氮（PTZ）致痫后大鼠的海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS蛋白表达情况，和钙拮抗剂尼莫地平对c-FOS蛋白表达的影响。方法：大鼠腹腔注射PTZ 60mg/kg建立急性癫痫动物模型，测定痫性发作潜伏期、发作强度，用免疫组化LSAB法检测2h和4h后c-FOS的表达。结果：对照组大鼠无癫痫发作，干预组痫性发作潜伏期较致痫组明显延长（P＜0．01），且发作强度明显减弱（P＜0．01）；对照组海马各区c-FOS仅低水平表达，致痫后表达明显增高（P＜0．01），干预组2h比致痫组2h的c-FOS阳性率明显降低（P＜0．01），4h干预组与致痫组无显著性差异（P＞0．05）。结论：大剂量PTZ可诱发大鼠全面阵挛发作，诱导海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS表达增高，海马结构涉及PTZ致痫引起阵挛发作的发展或传播的病理生理机制，尼莫地平可延缓癫痫的发生，减轻发作强度，降低c-FOS的表达。     

红藻氨酸致病后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化

目的 研究红藻氨酸(Kainieacid，KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法 立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作。用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法，分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况。结果 KA诱导大鼠癫痫发作后，海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。癫痫发作30min后GFAP开始增多，1h达高峰；1h后Fos阳性产物开始增多，2h达高峰。结论 海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加，反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节。     

白藜芦醇对慢性癫痫大鼠脑组织中氨基酸类递质含量的影响

目的:测定慢性癫痫大鼠脑组织谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量,分析白藜芦醇抗癫痫作用机制。方法:动物分为生理盐水组(NS组)、癫痫组(KA组)、低剂量白藜芦醇组(L-Res组)和高剂量白藜芦醇组(H-Res组)。利用立体定位技术,在大鼠右侧海马CA3中心区注射海人草酸,建立癫痫大鼠模型,以高、低剂量白藜芦醇干预10 d,利用高效液相色谱法测定慢性癫痫大鼠海马和皮层Glu和GABA含量。结果:与NS组比较,KA组大鼠海马和皮层Glu含量、Glu/GABA比值均明显升高(P<0.05);与KA组比较,L-Res组大鼠海马Glu含量、Glu/GABA比值均明显降低(P<0.05),但皮层Glu含量、Glu/GABA比值却明显高于NS组(P<0.05);H-Res组大鼠海马和皮层Glu含量、Glu/GABA比值均明显高于NS组(P<0.05)。结论:白藜芦醇通过维持海马Glu/GABA平衡达到抗癫痫作用效果。     

大鼠颞叶癫痫点燃后海马NR2A mRNA、NR2B mRNA的时空表达变化

目的：探讨海马NMDA受体NR₂A、NR₂B亚单位的时空表达变与颞叶癫痫后脑损伤的关系。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为3组，正常对照组5只，假手术组和海人酸(KA）致痫组各30只，采用KA杏仁核微量注射方法建立经典的大鼠颞叶癫痫点燃模型；假手术组和KA致痫组分别按点燃后6、24、72 h和7、14、21 d时间点分为6组，每组5只。采用原位杂交方法检测海马神经元NR₂A mRNA、NR₂B mRNA时程表达变化。结果：癫痫组海马各区NR₂A mRNA阳性细胞表达率均高于假手术组(P<0.05)，于点燃后21 d逐步恢复正常。NR₂B mRNA在癫痫组海马DG和CA₁区阳性细胞表达率总体上高于假手术组(P<0.05)，在CA3区与假手术组比较差异无显著性。回归分析显示NR₂A mRNA和NR₂B mRNA的阳性细胞表达率与颞叶癫痫存在明显的正相关关系（β=0.154，P=0.0001），NR₂B mRNA表达与颠叶癫痫的发生存在正相关关系(β=0.102，P=0.0001)。结论：颞叶癫痫大鼠海马NR₂A mRNA、NR₂B mRNA存在时空差异性表达改变可能与颞叶癫痫及其脑损伤过程有关。     

KA致痫大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶关系的研究

目的：探讨红藻氨酸（kainicacid，KA）诱导的癫痫大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶在不同部位和致痫后不同时间的变化情况。方法：50只SD大鼠随机分为对照组、KA组，KA组再按癫痫发作后1d、1周、2周、3周和4周不同时点分为5个亚组。注射KA后，观察大鼠癫痫发作后的行为学变化，采用原位细胞凋亡检测法观察海马神经元凋亡情况；采用免疫组化的方法观察3种不同一氧化氮合成酶（iNOS、nNOS和eNOS）的表达。结果：KA注射后，大鼠出现严重的惊厥，癫痫发作后1d、1周即有大量的凋亡细胞出现在海马齿状回、CA1，CA2和CA3区，2、3周时下降，第4周出现另一个高峰，凋亡在齿状回和cA3区最明显。癫痫发作后早期即有大量的eNOS，iNOS和nNOS出现，另一方面，nNOS在齿状回表现为低表达，eNOS阳性细胞在齿状回、CA1、CA2区的表达也与凋亡的出现基本同步，而在CA3区却表现为癫痫发作后1d和1周出现少，在2周后才随时间的推移有逐渐增加，结论：凋亡参与KA致病大鼠癫痫发作后神经元死亡过程，eNOS，iNOS和nNOS与癫痫发作后早期的神经原凋亡相关，iNOS与齿状回癫痫后迟发的神经原凋亡可能有关；nNOS与CA2和CA3区的癫痫后迟发的神经原凋亡可能有关；eNOS对KA致痫大鼠癫痫发作后CA3区神经元凋亡可能有神经保护作用。     

N-酰基葡糖胺衍生物对GABA转运体功能的影响

为筛选GAT蛋白活性抑制剂,以稳定表达GAT1蛋白的人胚胎肾细胞(HEK-293)为模型,利用GABA摄取定量测试测定N-酰基葡糖胺衍生物对该蛋白功能的影响。同时,由于GAT1蛋白的功能与其N-糖链结构尤其是末端唾液酸密切相关,再通过定量该蛋白糖链末端唾液酸的表达分析衍生物对蛋白糖链修饰的作用。结果显示,10 mmol/L 3-O-甲基-N-乙酰基葡糖胺(3-O-Met-GlcNAc)通过抑制GAT1蛋白的唾液酸化(降至66.8%)将GABA摄取活性减弱到到53%(P<0.01);而10 mmol/L N-丙酰基葡糖胺(GlcNProp),N-环丙甲酰基葡糖胺(GlcNCyclo),N-己酰基葡糖胺(GlcNHex),N-乙酰氨基乙酰基葡糖(GlcNAc-acetamido)则通过抑制蛋白糖链末端修饰分别将GABA摄取活性减弱到54%、63%、63%和67%(P<0.01)。因此,N-酰基葡糖胺衍生物可用于进一步筛选研究GAT蛋白活性抑制剂或唾液酸生物合成抑制剂。     

Ethanol, GABA and epilepsy

Ethanol exerts its behavioral effects largely by interacting with receptors to brain neurotransmitters. The molecular mechanisms involving these interactions are still not well known since an ideal model for their study is currently unavailable. In addition, responses to alcohol may vary due to factors such as genetic predisposition, ethanol concentration consumed, and stimuli such as stress, socialization, etc. The chronic consumption of alcohol, similar to that of other drugs such as benzodiazepines and barbiturates, is linked to GABAergic neurotransmission. GABA is the predominant inhibitory neurotransmitter in the brain. In a context of substance abuse, these three drugs first cause a gratifying effect, later tolerance and finally, physical and psychological dependence. If consumption is interrupted abruptly, a withdrawal syndrome occurs. The Alcohol Withdrawal Syndrome (AWS) is a state of hyperexcitability characterized by anxiety, fear, muscular rigidity and tonic-clonic seizures with epileptiform-type characteristics. The epileptic seizures seen during AWS are often similar to those seen in experimental epilepsy models such as "kindling" or GABA Withdrawal Syndrome (GWS) models. A possible correlation between these models and AWS will allow for a better understanding of the cellular and molecular effects that alcohol exerts on the brain.     

GABA受体对谷氨酸受体的调控机制研究

目的 研究γ-氨基丁酸（GABA）受体对离子型谷氨酸受体的调控机制。方法 采用细胞膜片钳电生理技术,以GABA、谷氨酸（Glu）刺激记录GABA受体及Glu受体离子通道介导的全细胞电流（IGABA,IGlu）,观察GABA对谷氨酸受体离子通道活性的调控;并以荷包牡丹碱（Bic）抑制IGABA、以SO2-4或葡萄糖酸根（gluconate-）代替Cl-,研究其抑制作用的分子机制。结果 相同浓度GABA与Glu共给药诱导IGABA+Glu较单独给药诱导电流IGABA与IGlu之和小,该差异随浓度升高而降低;不同浓度GABA对Glu 30μmol/L诱导电流IGlu抑制作用随GABA浓度升高而增强,该抑制作用可以被Bic、SO2-4与gluconate-消除。结论 GABAA受体能抑制谷氨酸受体介导的全细胞电流,该作用具有浓度依赖性,其抑制机制可能与Cl-的通透性有关。     

GABA及GABAα受体在大鼠前额叶执行控制中的作用机制研究

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)及GABA受体(GABA αR)在大鼠前额叶执行控制功能中的作用机制.方法用氨基酸分析技术、免疫组化技术和原位杂交技术研究执行控制能力不同的大鼠(执行控制能力好组及差组)前额叶GABA含量、GABA免疫阳性神经元数量和GABA αR mRNA表达.结果与执行控制能力好组大鼠相比,执行控制能力差组大鼠GABA含量较少[(6.52±3.03)μmol/g vs (4.03± 1.17)μmol/g,P ＜0.05 ]、GABA免疫反应阳性神经元数量较少(208±77 vs 143±59,P ＜0.01)、GABA αR mRNA表达较高(139±36 vs 182±51,P ＜0.05).结论 GABA及GABA αR在前额叶执行控制中起重要作用.     

Rapid Release of GABA Inhibiting Epilepsy in Vivo

Objective：Epilepsy is a multi-etiological brain dysfunction syndrome characterized by synchronously repeated spontaneous discharges from neuronal cells. Itspathogenesis involves excitatory / inhibitory imbalance,ion channel abnormalities and may be related to the abnormal structure and function of neurotransmitter receptors. The research was to observe the effects of rapid increase inhbitory neurotransmitter GABA on the excitatory /inhibitory imbalance,ion channel abnormalities and abnormal neurotransmitter receptors in living epileptic mice from the level of free moving animal,cell,sub-cell and receptor. Methods： The techniques of fiber photometry and laser uncage of Rub-GABA for epileptic free moving mice induced by administration of Kainic acid （KA） or 4-AP,local field potentials （LFP）,multicell bolus lording of calcium （OGB-1AM）,virus transfection of calcium-sensitive protein GCaMP6f, transfection of fluorescent labeled AMPA receptors in cortical neurons by in utero electroporation,two-photon uncage of Rubi-GABA,two-photon imaging,two-photon calcium imaging,twophoton cell attach,two-photon targeted patch clamp and two-photon shadow patch clamp in living epileptic mice induced by 4-AP were used. Results： Laser photolysis of Rubi-GABA in hippocampal CA1 could immediately alleviate KA induced acute epileptic seizures in living mice. In cellular level,two-photon uncage Rub-GABA or rapid release of GABA significantly decreased the number of neurons releasing the calcium signals by multicell bolus lording of calcium,inhibited spikes recording by LFP and immediately inhibited both calcium signals and spikes using two-photon cell attaching technique in the living epileptic mice induced by 4-AP. Two-photon uncage Rub-GABA significantly decreased spikes induced by 4-AP recording with two-photon shadow patch clamp in vivo. In sub-cellular level,two-photon Rubi-GABA uncage of dendritic spines of cortical neurons transfected with GCaMP6f obviously decreased the frequency and amplitude of calcium signal on those dendritic spines in 4-AP induced epileptic living mice. Two-photon targeted patch clamp and shadow patch clamp were performed separately to both the cortical neurons transfected fluorescent labeled AMPA receptors in the mice by in utero electroporation and the cortical neurons with no fluorescent labeled AMPA receptors in control mice. The results showed that there was no difference in the electrophysiological indices between the two kinds of cortical neurons,meaning that there was no obvious change of electrophysiological characteristics in the cortical neurons transfected fluorescent labeled AMPA receptors. Further study showed that rapid disappearance of the AMPA receptors was found before disappearance of dendritic spines in epileptic living mice induced by high concentration of 4-AP,and the disappearance of the AMPA receptors was significantly delayed or the AMPA receptors even reappeared after rapid release of GABA with the different concentration of 4-AP in the living mice. Conlusion： Rapid release of GABA can rectify the excitatory / inhibitory imbalance and ion channel abnormalities of epilepsy,and rapidly inhibits epilepsy in free moving mice,and from cellular and sub-cellular level in vivo. It also protects the structure and function of
neurotransmitter receptors during epilepsy in vivo.     

老年大鼠耳蜗核γ-氨基丁酸免疫反应的变化

目的检测老年大鼠耳蜗核组织γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应的变化,研究其与老年性耳聋的发病关系。方法采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,对成年（２～３月龄）和老年（２０～３６月龄）Ｗｉｓ－ｔａｒ大鼠耳蜗核组织进行免疫组织化学染色,并利用计算机图像分析系统对ＧＡＢＡ免疫反应阳性细胞进行计数。结果发现ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元主要分布于背侧核（ＤＣＮ）的表层,老年大鼠耳蜗背侧核ＧＡＢＡ阳性细胞数目低于成年组（Ｐ＜０．００１）。结论耳蜗核ＧＡＢＡ含量的降低可能与老年性耳聋的发病具有一定的相关性。     

r-氨酪酸和谷氨酸与胃癌关系的研究

目的 :探讨γ 氨酪酸 (GABA)和谷氨酸 (Glu)在胃癌组织、正常胃黏膜组织含量的差异。　方法 :采用高效液相色谱法 ,用异硫氰酸苯酯 (PITC)作衍生剂 ,紫外检测波长 2 5 4nm ,检测 30例胃癌组织、正常胃黏膜组织中GABA和Glu含量。　结果 :与正常胃黏膜组织比较 ,胃癌组织中GABA和Glu含量明显增加 (P <0 .0 5 ) ,但与胃癌的组织分型及淋巴结转移无显著性相关 (P >0 .0 5 )。　结论 :GABA和Glu参与胃癌的发生 ,有望成为胃癌诊断、治疗的新方向。     

γ-氨基丁酸转氨酶的动力学特征及其测定法的改良

对γ－氨基丁酸转氨酶（ＧＡＢＡ－Ｔ）的催化反应动力学进行了系统研究。结果显示,ＧＡＢＡ－Ｔ的催化反应属于双底物乒乓机制,最适反应温度和反应时间分别为３０℃和１５ｍｉｎ,ｐＨ值为８．７５,Ｋα－ＫＧｍ和ＫＧＡＢＡｍ分别为２．９７和２．４３ｍｍｏｌ／Ｌ。故底物α－酮戊二酸（α－ＫＧ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）浓度分别为４．８和１８ｍｍｏｌ／Ｌ。此改良法建立了测定大鼠脑组织ＧＡＢＡ－Ｔ活性的微量紫外分光比色法,灵敏度比国外同类方法提高１．９倍。     

γ-氨酪酸和谷氨酸与胃癌关系的研究

目的:探讨γ-氨酪酸(GABA)和谷氨酸(Glu)在胃癌组织、正常胃黏膜组织含量的差异.方法:采用高效液相色谱法,用异硫氰酸苯酯(PITC)作衍生剂,紫外检测波长254 nm,检测30例胃癌组织、正常胃黏膜组织中GABA和Glu含量.结果:与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中GABA和Glu含量明显增加(P＜0.05),但与胃癌的组织分型及淋巴结转移无显著性相关(P＞0.05).结论:GABA和Glu参与胃癌的发生,有望成为胃癌诊断、治疗的新方向.