钩吻提取液对Hela细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 探讨钩吻(Gelsemium elegang Benth)提取液对Hela细胞生长增殖以及细胞周期的影响。方法 采用XTT法分析细胞增殖，Timelapse显微镜形态观察，流式细胞仪检测凋亡和细胞增殖状态，综合评价钩吻提取液抗Hela细胞生长和增殖的作用。结果 钩吻B组分具有明显的抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡。且存在明显的剂量和时间-效应关系。经钩吻B处理的Hela细胞周期发生明显变化，G0／G1期细胞比例降低，S期细胞比例增加，而G2/M期细胞比例变化不明显。结论 钩吻B组分可抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡，具有明显的抗肿瘤细胞的作用；钩吻B组分主要阻止细胞由G1期向S期转化，并在此阶段诱发凋亡。     

钩吻提取液对HL-60细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨钩吻提取液对HL 6 0细胞生长和增殖以及细胞周期的影响。方法 :采用XTT法分析细胞殖 ,Timelapse倒置显微镜摄取细胞影像形态学分析 ,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期状态 ,综合评价钩吻提取液抗HL 6 0细胞生长和增殖的作用。结果 :钩吻醇提水沉组分具有明显的抑制HL 6 0细胞增殖的作用 ,且存在明显的剂量和时间 -反应关系 ;经钩吻醇提水沉组分处理的HL 6 0细胞周期状态发生明显变化 ,表现为G0 G1期细胞比例降低 ,S期细胞比例增加 ,并出现较明显的亚二倍体细胞峰型。结论 :钩吻醇提水沉组分对HL 6 0肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用 :引起细胞死亡和抑制细胞增殖 ;诱导细胞周期阻滞 ,干扰细胞G1期向S期转化 ,并在此阶段诱发凋亡     

钩吻总碱对肺腺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 以人肺腺癌细胞（A549、SPCA1）为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱（TAG）研究其抗肿瘤作用。方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG,利用薄层色谱法鉴定TAG的提取,通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态,采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡,碘化丙啶单染法检测细胞周期,Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG。Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0 μg/mL,由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150 μg/mL,且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少。CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖（P <0.05）。Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂;流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加,检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G₂/M期;Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调,Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加,通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡（P <0.05）。结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

钩吻碱类提取物对小鼠脾细胞增殖反应的影响

钩吻碱类提取物在浓度大于１．２５μｇ／ｍｌ以上时对混合淋巴细胞培养反应均有不同程度的抑制作用，具 统计学意义的最低抑制浓度为２．５μｇ／ｍｌ，抑制率为１８．３％。单独采用Ｃ５７ＢＬ’／６ｊ小鼠脾细胞进行，促有丝分裂剂为细菌脂多糖，在钩吻碱类提取物浓度为４０μｇ／ｍｌ才出现抑制作用，抑制率为１８％。     

TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖

目的 探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响.方法 使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响; Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白CyclinB1、Cyclin E表达水平的影响.结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加.结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖.     

钩吻碱类提取物对小鼠脾细胞增殖反应的影响

钩吻碱类提取物在浓度大于１．２５μｇ／ｍｌ以上时对混合淋巴细胞培养反应（ＭＬＲ）均有不同程度的抑制作用，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）的最低抑制浓度为２．５μｇ／ｍｌ，抑制率为１８．３％。单独采用Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠脾细胞进行实验，促有丝分裂剂为细菌脂多糟（ＬＰＳ５μｇ／ｍｌ），在钩吻碱类提取物浓度为４０μｇ／ｍｌ才出现抑制作用（Ｐ＜０．０５），抑制率为１８％，改用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ２μｇ／ｍｌ）刺激，钩吻碱类提取物最低抑制浓度为２０μｇ／ｍｌ，抑制率为１２．４％（Ｐ＜０．０５）．脾细胞先经ＣｏｎＡ活化．后用白细胞介素２（５ｕ／ｍｌ）维持培养，此时钩吻碱类提取物的最低抑制浓度为４０μｇ／ｍｌ．抑制率为１７．１％（Ｐ＜０．０５）。     

高速逆流色谱分离纯化钩吻中钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱

目的 建立高速逆流色谱技术分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱的方法。方法 采用高速逆流色谱分离技术分离纯化钩吻生物碱单体,以氯仿-甲醇-0.1 mol/L HCl(4∶4∶2)为溶剂体系;高效液相色谱技术分析所提产物的质量分数;核磁共振谱、质谱分析确证单体的化学结构。结果 从300 mg钩吻总碱中经过一次高速逆流色谱技术分离纯化获得19.4 mg钩吻素己和21.2 mg 1-甲氧基钩吻碱,质量分数分别为95.4％、98.6％;经过电喷雾质谱及核磁共振的结构鉴定分析,证实分离得到的两种生物碱分别是钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱。结论 高速逆流色谱技术可高效分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱,为钩吻生物碱的研发提供了制备技术。     

姜黄素对Hela细胞周期各时相的影响

目的：探讨姜黄素对Hela细胞(人宫颈癌细胞)增殖周期各时相的影响,为宫颈癌化疗寻求有 效药物。 方法：应用MTT比色法和流式细胞术测定不同浓度姜黄素（0、10、20和40 mg·L^-1） 对Hela细胞增殖的抑制率和细胞周期各时相的变化,并应用电子显微镜观察Hela细胞的亚细胞改变。 结果：0、10、20和40 mg·L^-1姜黄素对Hela细胞增殖的抑制率分别为3.0%、21.4%、32.8%和49.2%,且呈剂量依赖性;流式细胞术显示,G₁期细胞增多,S期细胞减少,G ₂／M期细胞相对增多;细胞结构显示,细胞空化、染色质凝集、凋亡小体增多。 结论：姜黄素能够抑制HeLa细胞增殖,阻止G₁期细胞向S期转化的进程,促进Hela细胞凋亡。     

闽产钩吻根茎叶中钩吻碱甲和钩吻素子及葫蔓藤碱甲的含量测定

钩吻[Gelsemium elegans(Gardn.et Champ.)Benth.]为马钱科葫蔓藤属植物,又名断肠草、猪人参等。钩吻始载于《神农本草经》,性温味辛、苦,有大毒,全草可入药,主要分布于福建、浙江等地,是我国传统的药用植物,也是世界著名的剧毒药物。我国民间以其毒性大,一直以外用为主,功能祛风散瘀,消肿止痛,攻毒杀虫。近年来的药理研究表明,钩吻还具有镇痛、镇静、抗炎、散瞳、抗肿瘤、减慢心率、抑制心脏收缩、升压、抑制平滑     

2例钩吻中毒的护理

1　病例简介2例患儿 ,系姐弟 ,男 ,1ａ ,女 ,9ａ。 2 0 0 0年 7月10日与其母亲吃一种当地称为“水猛藤”的植物。 4ｄ后出现精神反应差 ,嗜睡 ,呕吐胃内容物 ,腹痛。当地医院诊断为“食物中毒” ,治疗不详。进食后第7天男患儿出现双眼上翻 ,唇周发绀 ,呼之不应 ,2ｍｉｎ后缓解 ,体温 38.5～ 39.5℃之间 ,病人被急转入我院。体查 :男Ｔ 39.7℃ ,Ｐ 140次 ｍｉｎ ,Ｒ 38次 ｍｉｎ ,ＢＰ 82 5 2ｍｍＨｇ ,嗜睡状 ,反应差 ,颈抵抗 (+ ) ,前囟、眼眶稍凹陷 ,双侧瞳孔等大等圆 ,对光反射正常 ,呼吸急促 ,心音可 ,节律齐 ,肝右肋下 2ｃｍ ,质软 …     

Hela培养上清液对hUVEC细胞增殖的影响

目的研究子宫颈癌细胞（Hela）的培养上清液对人脐静脉内皮细胞（hUVEC）增殖的影响。方法以Hela细胞培养上清液和DMEM培养基的等比例混合液培养的hUVEC细胞为实验组,以纯DMEM培养基培养的hUVEC细胞为对照组。MTT法检测细胞增殖情况的变化;流式细胞术检测细胞周期的改变;PCR法检测CDK和CyclinD调控基因的表达情况。结果hUVEC经Hela细胞培养上清液作用96 h后,细胞数明显增加,S期细胞的比例明显上升,CDK和CyclinD调控基因表达明显上调。结论Hela细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制之一可能是通过上调CDK和CyclinD调控基因来诱导更多的细胞进入S期,从而导致细胞的快速增殖。     

一起大学生误饮用断肠草花茶中毒的调查

目的 调查该批大学生中毒事件的原因。方法 对中毒事件发生地广东省松山职业技术学院进行流行病学调查、现场采样检测。结果 该事件发生中毒者共9例，死亡2例，中毒者均为在校就读的男生。年龄19-22岁；中毒的临床表现以发病急（中住数潜伏期为0．5h）、头晕、恶心、呕吐、视物模糊、呼吸困难、紫绀、昏迷等神经系统毒性作用为特点；经鉴定，中毒者均饮用了误认为“金银花”的断肠草花茶。结论 该事件为一起误饮断肠草花茶中毒事件。     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

吉西他滨诱导自噬对HepG2细胞增殖和周期的影响

目的:研究吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞自噬以及使用自噬抑制剂后对HepG2细胞增殖、周期的影响.方法:通过CCK-8法检测不同浓度的吉西他滨以及在吉西他滨的基础上加入自噬抑制剂后对HepG2细胞的增殖的影响.应用流式细胞术检测细胞周期各时相变化.结果:自噬诱导剂吉西他滨对HepG2细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05),同种情况下加入一定量的自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后,培养24 h后,细胞的抑制率与吉西他滨诱导组相比较明显升高(P<0.05).流式细胞术的结果显示吉西他滨组与对照组相比较细胞周期中G1期细胞明显增多,S期明显减少;加入自噬诱导剂后G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P<0.05).结论:吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞发生自噬对细胞的增殖有明显的抑制作用,并且吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞发生自噬多停留在细胞周期的G1期.     

RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响

目的研究RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响。方法采用RNAi方法,将AURKB RNAi转入A2780细胞,RT-PCR、Western blot检测Aurora B mRNA和蛋白的表达,MTT检测A2780细胞增殖情况,流式细胞术检测A2780细胞周期改变。结果①通过RT-PCR、Western blot检测到人类5种卵巢癌细胞株A2780、SKOV3、CAOV3、A2780/taxol及AD6中均明显表达Aurora B mRNA和蛋白;②A2780细胞转染AURKBRNAi后,Aurora B mRNA和蛋白的表达明显下降,转染浓度至200 pmol/L RNAi 48 h后,Aurora B mRNA和蛋白的表达被完全抑制;③MTT检测和锥虫蓝染色结果显示,于转染200 pmol/L AURKB RNAi第4天开始,A2780细胞增殖明显受到抑制,吸光度值与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);④Flow cytometry检测显示,转染200 pmol/L AURKB RNAi 24 h,大量A2780细胞进入有丝分裂期,并形成多倍体细胞,于72 h多倍体细胞比例达到峰值20.54%,转染后96 h转染组细胞凋亡率(11.67%)显著高于对照组(0.57%);⑤Hoechst 33258染色观察细胞凋亡结果显示,与A2780对照和阴性对照相比,转染200 pmol/L浓度AURKB RNAi 96 h后A2780细胞凋亡明显增多。结论 Aurora B的抑制使A2780细胞增殖受到明显抑制;导致多倍体形成,使细胞基因组严重不稳定,最终导致细胞凋亡,Aurora B可能是卵巢癌治疗的有效分子靶点。     

均匀设计与正交设计在钩吻生物总碱提取工艺筛选研究中的应用

目的优选简便高效的钩吻生物总碱的提取工艺,考察不同提取条件下的提取率。方法分别用均匀设计和正交设计两种方法对钩吻生物总碱的提取工艺中溶剂种类、提取系统中固液比例和回流时间3个因素进行优选。结果两种方法的结果均为采用氯仿作为溶剂、固液比例为1.0∶7.5、回流时间3 h×3,所得总碱含量最高。结论正交设计与均匀设计试验所得结果相近,结论基本一致。     

柚皮甙对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴结细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究柚皮甙(NG)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结细胞增殖和细胞周期的影响。方法无菌分离小鼠肠系膜淋巴结细胞,以50、100和200μmol/L的柚皮甙作用于刀豆蛋白A刺激和非刺激的淋巴结细胞,运用MTT法检测淋巴结细胞的增殖率和存活率;以相同浓度的NG作用于ConA刺激的淋巴结细胞,运用流式细胞术和Western-blot分别检测淋巴结细胞的细胞周期分布和P21WAF1的表达。结果50、100和200μmol/L NG对淋巴结细胞增殖无明显作用,并无药物毒性作用,但显著抑制ConA诱导的淋巴结细胞增殖(P<0.01),抑制率分别为24.5%、49.1%和72.4%,使细胞周期停滞在G0/G1期,并诱导P21WAF1的表达,具有浓度依赖性。结论NG可能通过诱导P21WAF1表达,使淋巴结细胞的细胞周期停滞于G0/G1期,从而抑制ConA诱导的淋巴结细胞的增殖。