HPLC同时测定人血清中4种非苯二氮(艹卓)类镇静催眠药物

目的　建立一种同时测定多种非苯二氮类镇静催眠药物的方法 ,用于临床中毒的定性与定量分析。方法　血样用乙醚一步萃取 ,二极管阵列检测器检测 ,波长为 2 5 4nm ,采用外标法 ,对血样中的佐匹克隆、扎莱普隆、唑吡坦、甲喹酮进行定性与定量分析。结果　血浆中 0 .1～ 2 μg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系 ,血浆回收率均大于 90 % ,日内、日间RSD均小于 10 %。结论　本方法简单、灵敏、准确、干扰小 ,适用于低浓度生物样本的测定。     

人血浆 6 种中枢神经系统药物气相色谱 - 质谱法测定及临床应用

 目的 建立人血浆苯巴比妥、酰胺咪嗪、地西泮、硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑等药物的气相色谱 - 质谱 (GC-MS) 定性、定量分析方法,并用于指导中枢神经系统药物中毒的临床抢救。 方法 血浆样品经乙酸乙酯提取,以保留时间、特征离子和谱库检索为定性指标,咖啡因为内标,采用选择离子模式定量。 结果 酰胺咪嗪、地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑在 0.05 ～ 20.0 mg·L^-1 内均呈良好线性关系,最低检出浓度为 0.008 mg·L^-1 。苯巴比妥、硝西泮在 0.1 ～ 40.0 mg·L^-1 内均呈良好线性关系,最低检出浓度为 0.02 mg·L^-1 。回收率为 97.78%~109.32% ,日内 RSD<9.62% ,日间 RSD<9.70% 。 结论 所建立方法系统性好,快速、准确,能准确测定血浆中苯巴比妥、酰胺咪嗪、地西泮、硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑等药物含量。     

同位素标记示踪法测定神经生长因子血药浓度

 目的：建立测定小鼠血浆中神经生长因子(NGF)浓度的放射性核素(¹²⁵I)示踪测定法。方法：¹²⁵I-NGF采用氯胺T法标记，血浆中NGF的浓度采用同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或SDS-PAGE电泳法测定，并比较其测定结果。结果：TCA沉淀法和SDS-PAGE电泳法同时对照测定50份NGF血浆样品，结果呈良好的相关性，r=0.9948。两种方法的最低检测浓度均为2.0ng·ml^-1，日内、日间RSD均小于10%,血浆在12.5ng·ml^-1-400ng·ml^-1浓度范围内均呈良好的相关性,相关系数分别为r=0.9990和r=0.9997，血浆中NGF的平均回收率分别为(95.21±3.70)%和(94.30±4.60)%。结论：同位素示踪法与沉淀法或电泳法结合，方法稳定、可靠、灵敏度较高，两法相辅相成，适于NGF血药浓度的测定。     

薄层色谱法对6种常见麻醉药品的定性定量分析

 目的建立血浆中6种常见麻醉药品快速定性、定量TLC检测方法。方法血样经碱化、萃取等处理后，以正己烷-氯仿醋酸乙酯-乙醇-氨水 (5∶2∶2∶2∶0.2)为展开剂，标准对照定性，薄层扫描法定量。结果吗啡、O⁶单乙酰吗啡、哌替啶、可待因、乙酰可待因和可卡因在该薄层色谱条件下能完全分离。样品最小检出量为0.32～0.89μg，线性关系良好。结论本法简便、快速、可靠，可用于以上常见麻醉药品的定性和定量检测。     

G蛋白抑制性多肽-27药动学测定方法的建立

 目的建立测定小鼠血浆中G蛋白抑制性多肽-27(GCIP-27)浓度的放射性核素(¹²⁵I)示踪测定法。方法¹²⁵I-GCIP采用Iodogen法标记,血浆中GCIP的浓度采用同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或低相对分子质量SDS-PAGE电泳法测定,并比较其测定结果。结果TCA沉淀法和电泳法同时对照测定60份GCIP血浆样品,结果呈良好的相关性,r=0.9554。2种方法最低检测浓度均为2.0μg·L^-1,日内、日间RSD均小于10%,血浆在3.75～480μg·L^-1内均呈良好的相关性,相关系数分别为r=0.9977和0.9964,血浆中GCIP的平均回收率分别为(92.72±4.55)%和(91.77±5.21)%。结论同位素示踪法与沉淀法或电泳法结合,方法稳定、可靠、灵敏度较高,两法相辅相成,适于GCIP-27血药浓度测定。     

气质联用法同时测定人血浆中4种非胆固醇类固醇含量

 目的 建立同时测定人血浆中植物固醇和胆固醇合成前体物质的气相色谱-质谱（GC-MS）定量分析方法,为研究患者胆固醇代谢提供检测手段。方法 色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 μm×0.25 mm）,初始柱温200 ℃,保持2 min,程序升温15 ℃·min^-1至280 ℃,保持30 min,不分流进样。血浆经碱性醇溶液皂化后用正己烷萃取,再用衍生化试剂（BSTFA+1%TMCS）衍生后进样,采用全扫描（Scan）定性,选择离子监测（SIM）内标法定量。结果 胆固醇、2,4-脱氢胆固醇、7-烯胆固醇、菜油固醇、β-谷固醇线性关系良好,日内日间精密度均分别小于7.9%与9.8%,加样回收率分别在89.5%~106.3%之间。应用本方法分别测定20名高血脂患者中非胆固醇类固醇的含量,其中2,4-脱氢胆固醇的含量为（0.39±0.08） mg·L^-1,7-烯胆固醇的含量为（3.41±0.83） mg·L^-1,菜油固醇的含量为（3.12±0.53） mg·L^-1,β谷固醇的含量为（4.22±0.67） mg·L^-1。结论 GC-MS法可同时测定人血浆中4种非胆固醇类固醇含量,并具有良好的准确度与精密性,适用于患者胆固醇代谢个体差异的分析。
     

毛细管气相色谱-电子捕获法测定5-单硝酸异山梨酯血药浓度的研究

 目的：建立毛细管气相色谱-电子捕获法(GC-ECD)测定人血浆中的5-单硝酸异山梨酯(IS-5-MN)的浓度，为研究该药物在人体内的药动学和生物利用度提供依据。方法：以2-单硝酸异山梨酯(IS-2-MN)为内标，血样经正己烷-乙醚(1:4)提取液两次萃取后，分离有机相，氮气下浓缩，甲苯溶解进样。采用Altech SE-30毛细管柱(ECONO)，15m×0.25mm，程序升温测定血药浓度。结果：标准曲线在24ng·ml^-1～1200ng·ml^-1浓度内，r=0.9993，日内、日间变异RSD为3.29%～9.50%，平均回收率为(101.66±1.11)％。结论：该方法测定血浆中5-单硝酸异山梨酯浓度准确度高，专一性强，简便易行，可以满足血药浓度测定及药动学研究的需要。     

HPLC测定还原型谷胱甘肽的血浆浓度

 目的建立测定人血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的HPLC方法。方法采集血样,立即注入预加衍生化试剂DTNB 的真空采血管中,25min内分离血浆。以青霉胺为内标,10%高氯酸沉淀蛋白,上清液进样20μL。色谱柱为SUPELCOSIL^TM LC-18(150mm×4.6mm,5μm) 流动相为0.05mol·L^-1醋酸钠缓冲液(pH5.6)-甲醇(100:8),流速1 mL·min^-1 检测波长320nm 结果在2～200μmol·l^-1内,标准曲线线性良好,r=0.9997(n=6)。检测限为1μmol·L^-1。日内误差和日间误差均在10%以内低、中、高3个浓度的质控样品回收率均在95%～105%之间。结论该方法准确、快速、精密,可用于GSH的人体药动学研究。     

大鼠血浆中告达庭的LC-MS-MS测定方法学研究

 目的建立大鼠血浆中告达庭浓度的LC-MS-MS测定方法。方法取待测大鼠血浆0.2mL,加入炔诺酮(内标),乙酸乙酯提取、浓缩,取上清液20μL进样分析。流动相为乙腈-水(70∶30),色谱柱为江苏汉邦C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流速为1.0mL·min^-1,LC-MS-MS多反应离子检测,正离子模式,用于定量分析的离子分别是告达庭:m/z514.1→385.4[M+Na⁺]和炔诺酮:m/z299.7→108.9[M+H⁺]。结果告达庭的线性范围为2.5～1000μg·L^-1,方法的回收率大于80%,批内和批间的精密度均小于15%,稳定性符合生物样品测定要求。结论该方法经考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于血药浓度的测定和药动学研究。     

重症肌无力患者吗替麦考酚酯的血药浓度监测

 目的建立一种高效液相色谱法测定人血浆中吗替麦考酚酸的新方法,以进行吗替麦考酚酯的血药浓度监测。方法采用Phenomenex C₁₈(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱;甲醇-10mmol·L^-1醋酸铵水溶液(95%水-5%甲醇)为流动相,比例为60:40;流速:1mL·min^-1;柱温:25℃;紫外检测波长:250nm。结果当吗替麦考酚酸浓度在0.5～60mg·L^-1时,其峰面积与浓度的线性关系良好(r=0.9995);高、中、低3个浓度的绝对回收率分别为93.80%,95.82%和98.14%,相对回收率分别为88.20%,99.50%和101.36%,日内及日间精密度的RSD均小于5%。目前采用此方法已测定20例重症肌无力患者谷浓度血样52份,大多数在1～3.5mg·L^-1。临床观察的结果显示,吗替麦考酚酯可以改善患者的临床症状,85%患者的合并用药减少,一些患者有轻度的不良反应,但是所有患者未发生严重的不良反应。结论本方法测定结果准确、方法简便,可用于患者的血药浓度监测。     

近红外光谱法快速测定女贞子药材中水分含量

目的:采用近红外光谱技术(NIRS)结合偏最小二乘法(PLS)建立一种女贞子药材中水分含量快速环保的测定方法。方法:利用烘干法测定样品中水分含量,并以其作为参考值,运用近红外漫反射光谱技术采集女贞子的近红外漫反射光谱,结合PLS建立女贞子药材中水分含量的定量分析模型,并用未知样品验证该模型。结果:所建水分定量模型的校正集内部交叉验证相关系数(R2),校正均方差(RMSEC),内部交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.986 87,0.199,0.246 41;验证集预测相关系数(R2)与预测均方差(RMSEP)分别为0.956 6和0.220。结论:该方法操作简便,快速无污染,结果准确,可用于女贞子药材中水分含量的快速测定。     

筋骨痛消丸水浸出物含量的近红外光谱快速测定

目的:运用近红外光谱技术(NIRS),结合偏最小二乘法(PLS),对筋骨痛消丸中水浸出物进行快速测定。方法:将近红外光谱图与筋骨痛消丸水浸出物的含量进行关联,对光谱预处理方法和建模区间进行考察;采用近红外光谱技术结合偏最小二乘法,建立测定筋骨痛消丸中水浸出物含量的近红外光谱定量分析模型。结果:98份样品所建立的定量分析模型内部交叉验证决定系数(R2)为0.983 26,校正均方根偏差(RMSEC)为0.21,预测均方根偏差(RMSEP)为0.22。18份验证集样品真实值和预测值的平均相对偏差为0.09%。结论:近红外光谱技术结合偏最小二乘法建立的定量分析模型可用于对筋骨痛消丸中水浸出物含量的快速测定。     

近红外漫反射光谱法快速测定注射用丹参多酚酸中的水分

目的:利用近红外漫反射光谱分析技术对注射用丹参多酚酸中的水分进行无损、快速的定量分析.方法:以注射用丹参多酚酸为分析对象,用光纤测定近红外漫反射光谱,采用偏最小二乘法( PLS)建立定量校正模型.结果:53份样品的原始光谱经二阶导数预处理,选取11 993.1 ～6 098.8 cm-1和5450.7～4 598.2 cm-1谱段,建立注射用丹参多酚酸(冻干)水分定量校正模型并分析,结果R2为0.9911,内部交叉验证均方差(RMSECV)为0.210,最佳维数为4.10份样品用于外部验证,预测误差均方差(RMSEP)为0.243.结论:该方法分析快速、简便,结果准确可靠,可实现大批量样品的快速测定,对中药制剂的质量分析有一定的参考价值.     

麦角菌发酵物中 a麦角隐亭的RP-HPLC 测定方法

 目的：建立麦角菌发酵产物a麦角隐亭的RP-HPLC定量测定方法，对在一定条件下a麦角隐亭发酵生产的峰值进行初步探索。方法：色谱柱(250 mm×4.6 mm，填料：YWG-C，10μm)；流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(pH7.0)-乙酸乙酯(75：25：1)；流速为1.0 ml·min；检测波长为312 nm。建立回归方程，进行方法精密度测定和加样回收率试验。结果：回归方程A=19058.54M+1352.66，r=0.9997，在0.6375～6.4375μg范围内线性关系良好；日内和日间相对标准偏差(RSD)分别为1.15%和0.44%；标准品浓度为122，244和488μg·ml时加样回收率分别为108.48%，105.15%，109.53%。用该方法测得a麦角隐亭发酵生产的峰值一般在发酵的第15～17d。结论：该方法在定量测定麦角菌发酵产物a麦角隐亭方面灵敏、准确。     

基于近红外光谱技术的黄柏药材定量分析

目的:建立一种能够同时快速测定黄柏药材中小檗碱和黄柏碱含量的方法。方法:以HPLC所测样品中小檗碱和黄柏碱的含量为参考值,利用近红外光谱分析技术,将参考值与样品的近红外光谱进行关联,采用偏最小二乘法(PLS)建立黄柏中小檗碱和黄柏碱的定量分析模型。结果:所建立的小檗碱和黄柏碱的定量分析模型的内部交叉验证决定系数(R2)分别为0.997 13,0.989 23,校正均方差(RMSEC)分别为0.082 3,0.021 5,验证均方差(RMSEP)分别为0.071 7,0.016 6,性能指数PI分别为95.6,93.5。结论:利用近红外光谱技术建立的定量分析模型,能够对黄柏药材中小檗碱和黄柏碱的含量进行无损快速测定。     

高效液相色谱法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量

 目的 建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法,对2010年版《中国药典》相关测定方法进行有益补充。方法 采用Waters Alliance系统、Waters 2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN-H₂O（70∶30）作为流动相,流速1.4 mL·min^-1,柱温30 ℃测定人纤维蛋白原中的蔗糖。并用该方法平行测定13批含有蔗糖的重组人凝血因子Ⅷ,与药典IEC-HPLC方法进行方法学比较。结果 HPLC测定蔗糖对照品的保留时间RSD (n=6)为0.17%,峰面积RSD (n=6 )为0.09%。蔗糖在低（5 mg·mL^-1)、中（10 mg·mL^-1)、高（15 mg·mL^-1)3个质量浓度的回收率分别为96.2% ,98.8% ,100.3%,平均回收率为98.4%。蔗糖在2~20 mg·mL^-1（r=1.000 0）内与峰面积呈良好的线性关系。2批人纤维蛋白原中的蔗糖含量分别为48.8,45.0 g·L^-1,均符合其40~60 g·L^-1的质量范围。平行测定的13批重组人凝血因子Ⅷ的蔗糖结果与药典IEC-HPLC测定结果的相关系数r为1.000 0,两种方法无显著性差异（P>0.05）。结论 新建HPLC测定蔗糖含量方法的准确性和精密度良好,能够规避药典IEC-HPLC色谱条件下枸橼酸和蔗糖互相干扰的问题,本法可以适用于干热病毒灭活条件下人纤维蛋白原中蔗糖检测。     

近红外光谱法快速测定逍遥丸(浓缩丸)中水分含量

目的: 应用近红外光谱法建立一种逍遥丸(浓缩丸)中水分含量的快速测定方法。方法: 利用烘干法测定样品中水分含量,并以其作为参考值,运用偏最小二乘法(PLS)建立水分含量与近红外光谱之间的多元校正模型,对未知样品进行含量预测。结果: 所建水分定量分析模型的相关系数(R²),校正均方差(RMSEC),预测均方差(RMSEP)分别为0.953 52,0.132,0.177。结论: 方法操作简便,无污染,结果准确可靠,可用于逍遥丸(浓缩丸)中水分含量的快速测定。     

HPCE测定治疗哮喘中药中非法添加的氨茶碱药物成分

 目的建立治疗哮喘中药中可能非法添加化学药物成分氨茶碱的HPCE检测方法。方法以100mmol·L^-1磷酸盐缓冲液(磷酸调节pH7.0)为电泳介质,未涂层弹性石英毛细管(50μm×48cm,有效长度40cm)为分离通道,检测波长270nm,压力进样(5kPa×10s),内标法测定含量。结果2种治疗哮喘中药中检测到化学药物成分氨茶碱;氨茶碱在10～250mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9996),样品加样回收率为98.05%,RSD为1.32%。结论方法简便快捷,准确可靠,可作为治疗哮喘中药中非法掺入化学药物成分氨茶碱的有效检验方法。     

RP-HPLC同时测定独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量

 目的 建立同时测定独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量的反相高效液相色谱法。方法 Shiseido C₁₈ MG（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,流动相乙腈-水(49∶51),检测波长330 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃。结果 蛇床子素在0.008 2~0.656 mg·mL^-1内呈良好线性,r=1.000 0,平均回收率99.6%（RSD=2%）;二氢欧山芹醇当归酸酯在0.003 6~1.536 mg·mL^-1内呈良好线性,r=0.999 9,平均回收率99.4%（RSD=2.2%）。结论 通过对22批不同来源独活药材与饮片的含量测定,证明该方法简单,准确可靠,重复性好。在重庆巫山地区以海拔1 600~1 700 m、向阳、黑土的生长条件下,独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量均较高。     

基于UPLC指纹图谱的逍遥片批次一致性评价研究

目的优选出一种指纹图谱相似度评价方法,并结合多变量统计分析技术对逍遥片批次质量一致性进行全面、系统和科学评价。方法采集多批次逍遥片UPLC指纹图谱数据,通过相关系数、夹角余弦、欧氏距离、宏定性宏定量相似度,等同系数等方法进行相似度分析,根据各种计算方法特点,优选出一种相似度评价方法用于产品质量评价。同时,采用主成分分析(PCA)模式识别技术对逍遥片的总体质量进行分析评价,Hotelling’s T2和DModX统计量监测不同批次产品质量。采用相似度计算与多变量统计分析综合评价批次产品质量一致性。结果通过对14批次逍遥片样品22个共有峰指纹图谱数据分析,传统的相似度计算方法评价出产品质量一致性较高。加权的等同系数评价方法相比较传统相似度评价方法,应用时根据峰面积信息及药理药效作用,不同指标设置不同权重系数,反映的信息更加全面、合理,更适用于产品质量评价。PCA分析中14批样品无异常批次,表明逍遥片批次一致性较高。Hotelling’sT2和DModX的控制上限分别为25.1453和1.75。等同系数法从整体宏观评价批次间产品质量一致性,多变量统计分析根据评价结果可具体分析各色谱峰的贡献,二者结合起来能够更加全面的评价批次间产品质量一致性。结论建立的基于指纹图谱的相似度评价研究和多变量统计分析方法,能够更加全面系统的评价批次质量一致性,为中药生产质量控制研究提供借鉴。