碱性成纤维细胞生长因子在人晶体上皮细胞的蛋白检测研究

研究成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对人晶体上皮细胞（ｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ,ＨＬＥＣｓ）的促增殖作用。方法：采用免疫组织化学检查（ＡＢＣ法）来检测人晶体上皮细胞上ｂＦＧＦ蛋白水平,并用图像分析进行相对定量。结果：定性及定量地证明了人晶体上皮细胞有ｂＦＧＦ蛋白存在。结论：阐明了人晶体上皮细胞本身存在的ｂＦＧＦ以蛋白的形式参与了术后后囊混浊的形成。     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞促增殖作用研究

研究了碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的促增殖作用。方法胎儿晶状体上皮细胞原代与传代培养。第２代培养细胞中添加ｂＦＧＦ，浓度１０＾－３－１０＾３ｎｇ／ｍｌ，用甲基噻唑基四唑测定法观察ｂＦＧＦ对ＨＬＥＣｓ的影响。结论ｂＦＧＦ在后囊混浊发生上起了生要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA基因在人晶体上皮细胞内的检测研究

为研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理,采用原位杂交,用合成的寡核苷酸探针来检测人晶体上皮细胞内的ｂＦＧＦ高亲和力受体—成纤维细胞生长因子受体１（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ１,ＦＧＦＲ１）的ｍＲＮＡ基因,并用图像分析进行相对定量。结果：表明了人晶体上皮细胞表达ＦＧＦＲ１的ｍＲＮＡ基因。结论：人晶体上皮细胞存在ＦＧＦＲ１,当ｂＦＧＦ与其高亲和力受体结合后,对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊的形成具有重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对牛晶状体上皮细胞增殖的影响及其在牛晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ） 在体外对牛晶状体上皮细胞（ＢＬＥＣ） 增殖的影响及确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 方法　ＢＬＥＣ 原代培养。用不同浓度的ｂＦＧＦ 及３Ｈ胸腺嘧啶（３ＨＴＤＲ） 处理ＢＬＥＣ３６ ｈ 后，液闪测定ｂＦＧＦ 对ＢＬＥＣ３ＨＴＤＲ 掺入率的影响。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹（ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ） 法确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 结果　ｂＦＧＦ 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖作用，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法表明ＢＬＥＣ 可表达低分子量（１８ ０００）ｂＦＧＦ 蛋白。 结论　ｂＦＧＦ 可能通过晶状体上皮细胞的自分泌，促进白内障术后残留晶状体上皮细胞的增殖，导致后发性白内障     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子—Ⅰ及其协同作用对？…

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子－１（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１,ＩＧＦ－１）及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ,ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法 ＢＬＥＣ原代培养,取第４例细胞种入２４孔板,加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－１,     

碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA基因在人晶体上皮细胞内 …

为研究碱性成纤维细胞生长因子对晶体上皮细胞促增殖作用的机理。采用原位杂交，用合成的寡核苷酸拆穿为检测人晶体上皮细胞内的ｂＦＧＦ高亲和力受体－成纤维细胞生长因子受体１的ｍＲＮＡ基因，并用图像分析进行相对定量。结果表明了人晶体上皮细胞表达ＦＧＦＲ１的ｍＲＮＡ基因。结果：人体晶上皮细胞存在ＦＧＦＲ１，当ｂＦＧＦ与其高亲和力受体结合后，对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊的形成具有重要作用     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状？…

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎ ｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ,ＨＬＥＣ）增殖的影响并探讨机制。方法 将白内障手术中取出的晶状体前囊膜在１０ｕｇ／ＬｂＦＧＦ中培养４８ｈ,免疫组织化学法染色后,采用医 功能图像分析软件测定增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉ９ｆｅｒａｔｉｎｇ     

细胞生长因子对人晶体上皮细胞转铁蛋白mRNA表达的影响

目的 分析转化生长因子－β２和碱性成纤维细胞生长因子对培养的人晶体上皮细胞转铁蛋白ｍＲＮＡ表达的影响,方法 人晶体前囊膜取和于３岁以下各种原因死亡２４ｈ内的２０例（４０只眼）婴和眼球。晶体上皮细胞原代培养和传代培养,选用传代汇合后２周的细胞,分别用ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ作用天,用异硫氰酸胍、酚、氯仿、异戊醇等抽提细胞总ＲＮＡ,选择转铁蛋白的核酸探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,分析转铁蛋白ｍＲＮＡ的表     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-I及其协同作用对牛晶体上皮细胞增殖的影响

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子Ｉ（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒＩ，ＩＧＦⅠ） 及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法　ＢＬＥＣ原代培养，取第４ 代细胞种入２４ 孔板，加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦⅠ、ｂＦＧＦ＋ ２０ μｇ／ＬＩＧＦⅠ，２０ ｈ 后加入３ＨＴＤＲ，１６ ｈ 后作液闪计数。结果　一定浓度的ｂＦＧＦ（１～１００ μｇ／Ｌ） 、ＩＧＦⅠ（２０～１００ μｇ／Ｌ） 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖的作用（ Ｐ＜ ０－０１ ） ，２０ μｇ／Ｌ的ＩＧＦⅠ可增加ｂＦＧＦ的促ＢＬＥＣ增殖作用。结论　生长因子及它们之间的协同作用在促进晶体上皮细胞异常增殖的过程中起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对牛眼晶体上皮细胞的促增殖作用

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对牛眼晶体上皮细胞的作用。方法首先进行牛眼晶体上皮细胞原代与传代培养；在第２代培养细胞中添加ｂＦＧＦ，浓度１０－２～１０２ｎｇ／ｍｌ，借助甲基噻唑基四唑（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）测定方法观察ｂＦＧＦ对晶体上皮细胞增殖的影响。结果牛眼晶体上皮细胞体外具有易于贴附、细胞融合较快以及生长迅速等特点。添加ｂＦＧＦ后，可促进晶体上皮细胞的增殖，尤其是１０２ｎｇ／ｍｌ显示出明显的促增殖作用。结论ｂＦＧＦ在促进白内障术后晶体上皮细胞的增殖及后囊混浊上起了重要作用。     

bFGF小干扰RNA表达质粒抑制人晶状体上皮细胞增殖的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)表达质粒体外转染人晶状体上皮细胞LEC-B3对其增殖的影响,为防治晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床研究提供思路.方法 实验研究.以永生化的人晶状体上皮细胞LEC-B3为研究对象,首先用针对αB-晶状体蛋白的免疫组织化学方法鉴定LEC-B3细胞来源.在此基础上,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LEC-B3细胞中bFGF及其受体1(FGFR1)的mRNA表达.然后,构建bFGF siRNA表达质粒及其对照质粒,并在体外稳定转染LEC-B3细胞,干扰其bFGF基因表达,再用实时定量PCR和Western blot法检测转染后LEC-B3细胞中bFGF基因和蛋白表达,并以流式细胞术检测LEC-B3细胞中细胞增殖核抗原(PCNA)表达.将bFGF siRNA表达质粒及其对照质粒转染后LEC-B3细胞中PCNA表达水平分别设为实验组和对照组,用成组设计的t检验比较两组PCNA表达差异.结果 bFGF和FGFR1的mRNA在LEC-B3细胞中均有表达;bFGF siRNA表达质粒稳定转染LEC-B3细胞后,其bFGF基因和蛋白表达降低,实验组PCNA表达明显降低,和对照组相比差异具有统计学意义(t=-5.0011,P=0.0005).结论 LEC-B3细胞组成性表达bFGF和FGFR1的mRNA;干扰bFGF基因表达可有效抑制LEC-B3细胞增殖.     

Age-related changes in fibre differentiation of rat lens epithelial explants exposed to fibroblast growth factor

Epithelial cells explanted from neonatal rat lenses undergo changes characteristic of fibre differentiation when cultured with neural retina, neural retina-conditioned medium (RCM), or acidic and basic fibroblast growth factor (FGF). In neonates fibre differentiation is marked by cell elongation, the accumulation of alpha-crystallin, and the appearance of beta- and gamma-crystallins. To analyze the fibre differentiation response of lens epithelial cells in later life, we compared the fibre differentiation responses of lens epithelia from 3-, 10- and 21-day- 14-week-, and 6-month-old rats to basic fibroblast growth factor (bFGF). Explants of the central epithelium were used to maintain consistency between ages. Crystallin composition of explants was analyzed by immunofluorescence and ELISA methods. Only explants from 3-day-old rats demonstrated any ability to synthesize gamma-crystallin in response to bFGF. Central lens epithelia explanted from rats up to 14 weeks old accumulated alpha- and beta-crystallins when exposed to bFGF. The onset of crystallin accumulation, however, was increasingly delayed, and the amount of crystallin accumulated by the end of the culture period declined as the age of the donor rat increased. The diminished ability of lens epithelial explants from older rats to undergo fibre specific changes in response to bFGF is also demonstrated in the reduced degree of morphological changes characteristic of fibre differentiation. Cell elongation and multilayering in response to bFGF was observed in explants from 3-day-old rats but was substantially reduced in explants from 14-week-old rats. Explants from 6-month-old rats failed to demonstrate any evidence of morphological change or crystallin accumulation in response to bFGF.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

碱性成纤维细胞生长因子受体基因在牛眼晶体上皮细胞内的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理。方法从培养的第二代牛眼晶体上皮细胞提取ＲＮＡ，经逆转录反应合成ｃＤＮＡ。借助从人体胎盘纤维细胞ｂＦＧＦ受体序列合成的寡核苷酸引物，聚合酶链反应体外扩增ｃＤＮＡ。扩增的ｃＤＮＡ片段克隆后，Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其序列。结果探测出牛眼晶体上皮细胞ｂＦＧＦ受体的ｍＲＮＡ，测序后发现其氨基酸序列片段中仅３个氨基酸与人体不同。结论晶体上皮细胞存在ｂＦＧＦ受体，当ｂＦＧＦ与其受体结合后，对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊具有重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在牛晶状体上皮细胞中的表达和调控

目的　探讨牛晶状体上皮细胞 (BLEC)中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达和胎牛血清对表达的调控作用 ,推测白内障摘除术后血 房水屏障破坏对bFGF的影响。方法　采用免疫组化法和Westernblot法检测体外培养的BLEC中bFGF的表达 ,以及不同浓度胎牛血清 (0 1%、1 0 %及 10 0 % )作用 2 4h、10 0 %胎牛血清作用不同时间 (4、8、12及 2 4h)对bFGF相对表达量的影响。结果　免疫组化法检测显示绝大部分BLEC胞浆中可见bFGF表达。Westernblot法检测显示BLEC中表达的bFGF相对分子质量为 180 0 0 ;bFGF的表达随胎牛血清浓度的增加而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;随胎牛血清作用时间的延长而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　BLEC中可见低相对分子质量bFGF的表达 ;胎牛血清可诱导BLEC中bFGF表达 ;白内障摘除术后血 房水屏障的破坏可导致房水中血清浓度改变 ,引起晶状体上皮细胞中bFGF表达增强。     

bFGF在体外培养的晶状体上皮细胞中的表达及对细胞周期的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外培养的不同阶段小鼠晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,及其对细胞周期的影响并探讨其机制。方法将昆明健康小鼠的晶状体前囊膜取出,做体外培养并传代。利用免疫组织化学法和Westernblot法检测bFGF在体外培养的不同阶段LECs中的表达情况,并利用流式细胞法检测相应阶段LECs的细胞周期情况。结果bFGF蛋白在LECs的原代、传第1、2代中明显表达,在传第3、4代中表达较弱。这与流式细胞法检测的细胞周期中有丝分裂相所占比例相符。结论bFGF参与LECs的增殖分化过程;并随着传代的递增,其促LECs增殖作用减弱,提示它与临床儿童后发性白内障发生率高有关。