脂质体介导外源基因转入人晶体上皮细胞的实验研究

目的确定外源基因能否由脂质体携带进入人原代晶体上皮细胞（ｐｒｉｍａｒｙｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ,ＰＨＬＥＣｓ）。方法体外培养人原代晶体上皮细胞,用阳离子脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎｒｅａｇｅｎｔ,ＬＲ）携带重组质粒报道基因（β半乳糖苷酶）,向人原代晶体上皮细胞转移,在转移１２、２４、３６小时,分别表达２天和６天时,用以Ｘｇａｌ为底物的酶显色方法,检测报道基因对人原代晶体上皮细胞的转移率。结果脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）介导的外源基因可以转入人原代晶体上皮细胞,在转移２４小时,表达２天时转移率可达４８％。结论稳定的外源基因可由脂质体介导转入生长中人原代晶体上皮细胞,作为晶体上皮细胞基因类药物介入的基础研究和应用研究的介导体,脂质体显示出有希望的前景。借此方法也可以从外源基因入手,对晶体上皮细胞的生理和病理活动,进行机制研究。     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子—Ⅰ及其协同作用对？…

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子－１（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１,ＩＧＦ－１）及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ,ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法 ＢＬＥＣ原代培养,取第４例细胞种入２４孔板,加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－１,     

碱性成纤维细胞生长因子对牛眼晶体上皮细胞的促增殖作用

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对牛眼晶体上皮细胞的作用。方法首先进行牛眼晶体上皮细胞原代与传代培养；在第２代培养细胞中添加ｂＦＧＦ，浓度１０－２～１０２ｎｇ／ｍｌ，借助甲基噻唑基四唑（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）测定方法观察ｂＦＧＦ对晶体上皮细胞增殖的影响。结果牛眼晶体上皮细胞体外具有易于贴附、细胞融合较快以及生长迅速等特点。添加ｂＦＧＦ后，可促进晶体上皮细胞的增殖，尤其是１０２ｎｇ／ｍｌ显示出明显的促增殖作用。结论ｂＦＧＦ在促进白内障术后晶体上皮细胞的增殖及后囊混浊上起了重要作用。     

细胞外ATP诱导晶体上皮细胞的钙内流和钙动员

目的观察细胞外ＡＴＰ对离体晶体上皮细胞内钙离子的影响。方法钙指示剂ｆｌｕｏ－３着染离体晶体上皮细胞，用激光扫描共聚焦显微镜观察不同条件下细胞内荧光强度的变化。结果正常离体晶体上皮细胞对ＡＴＰ的刺激反应表现为双波型。对不同浓度的ＡＴＰ反应不同。乙二醇双（２－二氨基乙基）乙醚－四乙酸［ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｂｉｓ（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）ｅｔｈｅｒｔｅｔｒａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，ＥＧＴＡ］螯合细胞外钙后，ＡＴＰ刺激晶体上皮细胞出现单波型。结论ＡＴＰ能刺激离体晶体上皮细胞，引起细胞外钙内流和细胞内钙动员，晶体上皮细胞对ＡＴＰ的刺激反应有剂量依赖性，晶体上皮细胞膜中可能存在ＡＴＰ的特殊受体（Ｐ２－嘌呤受体）。     

人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化

目的　研究人原代晶状体上皮细胞中,下调色素上皮衍生因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ）的表达对波形蛋白和αＢ－晶状体蛋白表达的影响。方法　取２０～３５岁青年人晶状体上皮细胞进行原代培养。构建三种短发卡ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ,ｓｈＲＮＡ）以特异性下调原代人晶状体上皮细胞中的ＰＥＤＦ基因ＲＮＡ表达水平。感染细胞后,用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ检测ＰＥＤＦ基因ｍＲＮＡ的表达水平,确定ＲＮＡ干扰效率。人原代晶状体上皮细胞ＰＥＤＦ基因ＲＮＡ干扰４８ｈ后,用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测其中波形蛋白以及αＢ－晶状体蛋白表达水平的变化,以ｓｈＲＮＡ－ｓｃｒａｍｂｌｅ组为阴性对照组。结果　人原代晶状体上皮细胞被成功分离培养,带有绿色荧光蛋白的表达ＰＥＤＦｓｈＲＮＡ的病毒载体对人原代晶状体上皮细胞的感染效率都在８０％左右。Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ结果显示ＰＥＤＦ基因ｍＲＮＡ的表达明显被三种ｓｈＲＮＡ下调。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示ＰＥＤＦ基因的表达下调引起了波形蛋白的表达下降（在三个实验组中分别下降了７２％、７９％和９３％）以及αＢ－晶状体蛋白的表达增加（在三个实验组中分别增加了２１９％、２０４％、９３％）。结论　人原代晶状体上皮细胞中ＰＥＤＦ基因下调可引起维持晶状体透明性的两种重要蛋白的改变,提示ＰＥＤＦ与白内障形成有一定的联系。     

碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA基因在人晶体上皮细胞内的检测研究

为研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理,采用原位杂交,用合成的寡核苷酸探针来检测人晶体上皮细胞内的ｂＦＧＦ高亲和力受体—成纤维细胞生长因子受体１（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ１,ＦＧＦＲ１）的ｍＲＮＡ基因,并用图像分析进行相对定量。结果：表明了人晶体上皮细胞表达ＦＧＦＲ１的ｍＲＮＡ基因。结论：人晶体上皮细胞存在ＦＧＦＲ１,当ｂＦＧＦ与其高亲和力受体结合后,对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊的形成具有重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在人晶体上皮细胞的蛋白检测研究

研究成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对人晶体上皮细胞（ｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ,ＨＬＥＣｓ）的促增殖作用。方法：采用免疫组织化学检查（ＡＢＣ法）来检测人晶体上皮细胞上ｂＦＧＦ蛋白水平,并用图像分析进行相对定量。结果：定性及定量地证明了人晶体上皮细胞有ｂＦＧＦ蛋白存在。结论：阐明了人晶体上皮细胞本身存在的ｂＦＧＦ以蛋白的形式参与了术后后囊混浊的形成。     

巨噬细胞增强兔晶体上皮细胞c－fos原癌基因的表达

目的验证关于人工晶体表面沉着的炎细胞可刺激残留的晶体上皮细胞增生的推测。方法将巨噬细胞及巨噬细胞调理液与培养的兔晶体上皮细胞共同孵育，用纯化的抗人Ｆｏｓ蛋白抗体做免疫细胞化学染色（ＡＢＣ法）。结果经巨噬细胞及其调理液作用的晶体上皮细胞较对照组生长迅速。在巨噬细胞作用后４小时，及巨噬细胞调理液作用后１小时，晶体上皮细胞核呈Ｆｏｓ蛋白染色阳性反应，而对照组为阴性。结论上述结果表明巨噬细胞能增强晶体上皮细胞ｃ－ｆｏｓ原癌基因的表达，而且这种作用可能是通过巨噬细胞分泌的生物活性因子介导的。     

人视网膜色素上皮细胞c－fos癌基因的表达及其影响因素（摘要）

人视网膜色素上皮细胞ｃ－ｆｏｓ癌基因的表达及其影响因素（摘要）胡明，惠延年，梅琦，郝燕生，汤朝武，陈健康我们采用免疫组化方法，观察了巨噬细胞调理培养液（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍ，ＭＣＭ）、表皮生长因子（ｅｐｉｔｈｅｌｉ...     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-I及其协同作用对牛晶体上皮细胞增殖的影响

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子Ｉ（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒＩ，ＩＧＦⅠ） 及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法　ＢＬＥＣ原代培养，取第４ 代细胞种入２４ 孔板，加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦⅠ、ｂＦＧＦ＋ ２０ μｇ／ＬＩＧＦⅠ，２０ ｈ 后加入３ＨＴＤＲ，１６ ｈ 后作液闪计数。结果　一定浓度的ｂＦＧＦ（１～１００ μｇ／Ｌ） 、ＩＧＦⅠ（２０～１００ μｇ／Ｌ） 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖的作用（ Ｐ＜ ０－０１ ） ，２０ μｇ／Ｌ的ＩＧＦⅠ可增加ｂＦＧＦ的促ＢＬＥＣ增殖作用。结论　生长因子及它们之间的协同作用在促进晶体上皮细胞异常增殖的过程中起重要作用。     

MTT比色法测定药物对晶体上皮细胞增殖的影响

目的筛选防治后囊混浊的药物。方法进行人胚胎晶体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＬＥＣ）的培养并用ＭＴＴ比色法检测了肝素、氟脲嘧啶、双氯灭痛、顺铂对人胚胎晶体上皮细胞增殖的影响。结果肝素１００～２５００Ｕ／ｍｌ，氟脲嘧啶０．１～１００μｇ／ｍｌ，顺铂１０～５００μｇ／ｍｌ作用２４ｈ和７２ｈ对胚胎晶体上皮细胞增殖有明显抑制作用（Ｐ＜０．０５）。作用７２ｈ抑制率高于２４ｈ（Ｐ＜０．０５）。双氯灭痛和对照组相比无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论肝素、氟脲嘧啶、顺铂均为剂量依赖型和时间依赖型药物，均能有效抑制晶体上皮细胞的生长；双氯灭痛对晶体上皮细胞增殖无明显抑制作用。     

晶体上皮细胞在体外的分化规律及血清和眼组织对其增殖的影响

目的从细胞培养水平探讨后囊混浊形成机理和术后血－房水屏障破坏、晶体皮质残留等对其的影响。方法用考马斯亮蓝（ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢＢ）染色、倒置显微镜和电镜观察培养的牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＢＬＥＣ）的增殖和分化规律，用Ｇｉｅｍｓａ染色比色法观察胎牛血清、房水、晶体皮质等对ＢＬＥＣ增殖的影响。结果在体外培养条件下ＢＬＥＣ可在第１～７代内分化为晶体纤维细胞，表现为细胞体积增大，形状渐趋长条形和梭形，细胞骨架逐渐增多；胎牛血清呈浓度依赖性促进ＢＬＥＣ增殖（Ｐ＜０．０５）；高浓度房水（占培养液１／３）抑制ＢＬＥＣ增殖（Ｐ＜０．０１），晶体皮质、晶体核、玻璃体均促进ＢＬＥＣ增殖（Ｐ＜０．０１）。结论晶体上皮细胞的分化在后囊混浊形成中起重要作用；术后血－房水屏障破坏、晶体皮质残留和玻璃体脱出可通过刺激晶体上皮细胞增殖促进后囊混浊形成。     

应用激光扫描共聚焦显微镜观察晶体上皮细胞中的游离钙

目的用钙的荧光指示剂ｆｌｕｏ－３和激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＬＳＣＭ）观察大白鼠的晶体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ，ＬＥＣ）中的游离钙。方法ｆｌｕｏ－３着染细胞后，应用ＬＳＣＭ观察细胞内ｆｌｕｏ－３与钙螯合后的荧光分布，最后用钙离子载体Ａ２３１８７和重金属离子Ｍｎ＋＋作校正，将ｆｌｕｏ－３与钙结合显示的荧光强度转换为［Ｃａ＋＋］ｉ值。结果ＬＥＣ中的游离钙主要分布在细胞核中。大白鼠晶体上皮细胞中的［Ｃａ＋＋］ｉ为２５９．７９±４９．２４ｎｍｏｌ／Ｌ。结论ｆｌｕｏ－３与ＬＥＣ孵育后能着染细胞。用ＬＳＣＭ能直观地观察细胞内钙的分布，并能通过校正得到细胞内游离钙的绝对值。这种成熟的方法，为进一步对ＬＥＣ中游离Ｃａ＋＋的研究提供技术准备     

正常和白内障晶体上皮环磷酸腺苷与钙－钙调蛋白的研究

目的探讨晶体上皮钙－钙调蛋白（ｃａｌｃｉｕｍ－ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，Ｃａ－ＣａＭ）与环磷酸腺苷（ｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｃＡＭＰ）信使系统的关系以及可能的致白内障作用。方法采用酶促和放射免疫法，测定正常人和白内障晶体上皮ｃＡＭＰ、Ｃａ和ＣａＭ的含量。结果发现老年性白内障晶体上皮ｃＡＭＰ含量下降、Ｃａ－ＣａＭ含量升高。结论Ｃａ的升高是白内障形成的重要原因，ＣａＭ则“放大”了Ｃａ的作用，而ｃＡＭＰ含量降低可能使Ｃａ含量进一步升高。     

兔晶体上皮细胞培养的技术改进

对兔晶体上皮细胞培养方法作了改进，为控制后发性白内障的预防提供实验手段，取新西兰家兔晶体前囊膜作细胞培养，在原代培养中，以吸管转移囊膜，细胞融合后，用胰酶消化转代，结果：原代培养４８～７２小时后，可见晶体上皮细胞长出，以后细胞呈贴壁单层，铺砌型向外生长，传代后６～８小时细胞贴壁生长。方法经济简便，可为各种实验提供兔晶体上皮细胞。     

过氧化氢致大鼠晶体上皮细胞DNA损伤与修复的研究

目的采用原代培养的大鼠乳鼠晶体上皮细胞，经Ｈ２Ｏ２损伤后，检测ＤＮＡ单链断裂（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ，ＳＳＢｓ）和修复，并探讨其影响因素。方法利用将放射性核苷酸掺入ＤＮＡ单链断裂位点的缺口移位法定量测定ＤＮＡ损伤。结果３７℃下ＤＮＡ单链断裂较４℃下多（Ｐ＜０．０１），４℃下经３６．４μｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２损伤后即可有ＳＳＢｓ（Ｐ＜０．０５）。轻度损伤后，ＤＮＡ修复立即开始，并于６０分钟内基本完成，而经毒剂量Ｈ２Ｏ２严重损伤后则不能恢复。微量硒与晶体上皮细胞恒温孵育２４小时后，可降低ＳＳＢｓ数量（Ｐ＜０．０１）。结论３７℃下细胞内Ｈ２Ｏ２可诱导ＳＳＢｓ产生。Ｈ２Ｏ２诱导体外培养的大鼠晶体上皮细胞ＤＮＡ单链断裂，随Ｈ２Ｏ２浓度升高而增加。ＤＮＡ严重损伤后可不修复。微量硒能降低大鼠乳鼠晶体上皮细胞的氧化易感性。     

后囊混浊的发生机制及防治现状

后囊混浊是白内障囊外摘出术的首要并发症，晶体上皮细胞的增殖，移行和纤维化在后囊混浊的发生中起了重要作用。目前，后囊混浊的预防以手术中彻底清除晶体上皮细胞及皮质，植入双凸或后凸的后房型人工晶体为主，其治疗主要靠激光后囊膜切开，研究发现，Ｄｉｓｐａｓｅ（一种中性蛋白酶），依地酶（ＥＤＴＡ）肝素及抗代谢药５－氟尿嘧啶，柔红霉纱，秋水仙碱，丝裂霉素等对晶体上皮细胞的移行和／或增殖的抑制作用，多种细胞因子对     

碱性成纤维细胞生长因子受体基因在牛眼晶体上皮细胞内的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理。方法从培养的第二代牛眼晶体上皮细胞提取ＲＮＡ，经逆转录反应合成ｃＤＮＡ。借助从人体胎盘纤维细胞ｂＦＧＦ受体序列合成的寡核苷酸引物，聚合酶链反应体外扩增ｃＤＮＡ。扩增的ｃＤＮＡ片段克隆后，Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其序列。结果探测出牛眼晶体上皮细胞ｂＦＧＦ受体的ｍＲＮＡ，测序后发现其氨基酸序列片段中仅３个氨基酸与人体不同。结论晶体上皮细胞存在ｂＦＧＦ受体，当ｂＦＧＦ与其受体结合后，对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊具有重要作用。     

肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞原癌基因表达的作用

目的研究肿瘤坏死因子α （ＴＮ－α）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞中原癌基因 ｆｏｓ，ｊｕｎ， ｍｙｂ， ｍｙｃ， ｒａｓ等蛋白产物表达的作用。方法细胞经 １０ Ｕ／ｍｌ ＴＮＦ－α作用不同时间后，采用卵白素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫酶标技术测定蛋白表达。结果经ＴＮＦ－α作用后，几种原癌基因表达的阳性细胞百分率均明显增高（Ｐ＜０．０１）。 ｆｏｓ，ｊｕｎ，ｍｙｂ，ｒａｓ在刺激１ｈ后即达到顶峰，ｍｙｃ在刺激２ｈ后达到顶峰，随后很快下降，恢复至正常水平。同时，细胞的阳性反应强度增加，细胞核内变化更为明显。结论ＴＮＦ－α通过激活细胞内原癌基因的表达而促进晶状体上皮细胞的增殖。     

有晶体眼前房型人工晶体植入术矫正高度近视眼

有晶体眼前房型人工晶体植入术矫正高度近视眼上海医科大学金山医院眼科李军，胡磊，汪芳润有晶体眼前房型人工晶体植入术治疗近视眼（ａｎｔｅｒｉｏｒｃｈａｍｂｅｒｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｌｅｎｓｉｍｐｌａｎｔｆｏｒｐｈａｋｉｃｍｙｏｐｉａ，ＡＣ－ＩＯＬ－ＰＭ）...