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目的探讨姜黄素活化caspase-3诱导食管癌Ec-109细胞凋亡的作用机制。方法20、40、80mmol/L姜黄素作用于食管癌Ec-109细胞,流式细胞仪检测细胞亚二倍体凋亡峰变化及线粒体膜电位变化;Western-blot检测细胞色素C释放及caspase-3表达。结果姜黄素呈剂量依赖性诱导食管癌Ec-109细胞凋亡,20、40、80mmol/L姜黄素作用后,细胞亚二倍体凋亡峰分别为(16.07±1.71)%、(25.54±1.25)%、(37.67±1.09)%,对照组为(3.65%±0.56)%,比较有统计学意义(F=6.14,P〈0.01)。上述浓度姜黄素作用6小时后线粒体膜电位出现降低,比较均有统计学意义(F=5.37,P〈0.05);12小时出现细胞色素C表达,24小时检测到caspase-3表达,且姜黄素浓度越高,细胞色素C及caspase-3表达越明显。结论姜黄素通过损伤细胞线粒体,使之释放出细胞色素C,激活caspase-3,而且其呈剂量依赖性诱导食管癌细胞凋亡。 相似文献
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活性氧在顺铂诱导食管癌细胞EC-109凋亡中的作用 总被引:4,自引:0,他引:4
背景与目的:活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是体内氧化代谢产物,是重要的信号分子,在细胞凋亡过程中担当着重要角色。本研究旨在探讨活性氧在顺铂(cisplatin,DDP)诱导食管癌细胞EC-109凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:不同浓度DDP(0、1、5、10、15μg/ml)处理EC-109细胞,应用MTT法检测DDP对EC-109细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况;并观察加入抗氧化剂-过氧化氢酶(CAT)后细胞凋亡的变化。结果:DDP可明显抑制EC-109细胞增殖;0、1、5、10、15μg/ml的DDP作用于EC-109细胞2h后,细胞内活性氧分别为(3.3±1.0)%、(21.6±2.0)%、(32.6±3.2)%、(44.7±2.2)%、(53.1±3.6)%,12h后Δψm分别为(97.2±1.9)%、(90.6±1.9)%、(85.5±1.4)%、(67.8±2.0)%、(62.4±3.0)%,24h后可见细胞凋亡率分别为(3.4±1.2)%、(16.2±2.3)%、(28.1±1.5)%、(33.2±3.9)%、(45.5±3.8)%;CAT能明显抑制DDP诱导的EC-109细胞凋亡。结论:DDP能够通过刺激EC-109细胞内活性氧的产生、损伤线粒体,使其膜电位下降,引起EC-109细胞凋亡。 相似文献
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顺铂诱导鼻咽癌 CNE-2Z细胞凋亡并降低其线粒体膜电位 总被引:5,自引:0,他引:5
鼻咽癌是我国华南地区高发的恶性肿瘤,放疗是其治疗的基本方法,由于中晚期鼻咽癌治疗后有较高的远处转移率及局部复发率,化疗具有十分重要的作用。到目前为止,国内外研究报道均认为鼻咽癌化疗方案中以含有顺铂( cisplatin,cDDP)的联合化疗方案疗效较好 [1]。本文以人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE-2Z为体外模型,经 cDDP处理后,通过荧光染色、流式细胞仪等检测手段发现, cDDP能诱导鼻咽癌细胞凋亡,同时伴有线粒体膜电位的降低。 相似文献
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目的:研究冬凌草甲素(Oridonin,ORI)诱导食管癌细胞凋亡的过程中线粒体超微结构和功能的变化。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和透射电镜法检测细胞凋亡和超微结构改变;罗丹明123(Rhodamine 123,Rho123)荧光探针标记流式细胞仪检测和分析线粒体跨膜电位(MTP,△Ψm)的改变。结果:32μg/ml ORI作用2h后电镜下SHEEC细胞线粒体增多,4h后线粒体肿胀空泡化、内部结构消失,8h后细胞核染色质成块状边集,细胞凋亡。ORI作用24h后,代表线粒体膜电位的Rho123荧光强度降低。结论:在ORI诱导下,SHEEC细胞线粒体有明显的形态和功能改变伴随线粒体△Ψm降低,线粒体改变可能是ORI诱导食管癌细胞凋亡过程的重要环节。 相似文献
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目的:观察槲皮素(quercetin)体外对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用。方法:以10、30、60和100μmol/L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色法观察细胞凋亡时形态变化;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)变化。结果:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,并呈现量效和时效关系。10、30、60和100μmol/L槲皮素作用72h引起的细胞抑制率(F=343.71,P<0.01)和凋亡率(F=234.17,P<0.01)明显高于对照组。槲皮素作用48h后,AO染色图片可见细胞膜呈泡状膨出和凋亡小体等。凋亡过程中线粒体膜电位下降。结论:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡发生,线粒体膜电位下降在细胞凋亡过程中可能起到重要作用。 相似文献
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姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用及其相关机制。方法 以不同浓度的姜黄素作用于胃癌SGC-7901细胞,利用倒置相差显微镜观察细胞生长形态变化,通过MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot 检测胃癌细胞中Fas及survivin的表达情况。结果 姜黄素能显著抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长并呈量-效和时-效关系,流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加,Western blot结果提示经姜黄素作用后Fas表达率上升,survivin表达率下降。结论 姜黄素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡,姜黄素可能通过上调Fas及下调survivin的表达而诱导凋亡。 相似文献
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目的:探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)抑制剂吡喃阿霉素(THP)、阿霉素(ADM)诱导鼻咽低分化鳞癌细胞株SUNE-1细胞凋亡的作用;并检测药物作用后SUNE-1线粒体膜电位及Livin表达水平的变化。方法:采用MTT法检测THP、ADM对SUNE-1细胞的生长抑制,Annenxin V FITC染色检测凋亡早期细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位改变和Livin的表达情况。结果:ADM和THP对SUNE-1具有较强的体外抗肿瘤作用,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率增高,其IC50分别为0.004 1±0.000 3"g/ml和0.003 8±0.000 8"g/ml(P=0.542)。随着药物作用时间的增加,SUNE-1细胞凋亡率逐渐增高,同时伴有线粒体内膜电负性逐渐增加。ADM、THP诱导SUNE-1细胞凋亡中出现Livin的表达上调,但THP作用后表达上调的程度较ADM低。结论:TopoⅡ抑制剂蒽环类药物THP、ADM具有抑制细胞增殖和诱导鼻咽低分化鳞癌细胞株SUNE-1细胞凋亡的作用。TopoⅡ抑制剂作用鼻咽癌细胞后诱导IAP蛋白中的Livin表达上调,但THP作用后所引起的Livin表达上调不如ADM显著,因此THP在治疗鼻咽癌时可能具有更好的应用价值,需在临床中进一步证实。 相似文献
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TRAIL诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位(ΔΨm)关系。方法 MTT法测定TRAIL对HOS-8603细胞的抑制率; 将HOS-8603细胞分别用TRAIL、TRAIL + 1.0μg/ml 环孢菌素A(CsA)处理, 然后用透射电镜观察HOS-8603细胞形态学变化;用流式细胞术分别测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。 结果 MTT还原试验表明:作用24小时后, 2.5μg/mlTRAIL的抑制率为29%;5μg/mlTRAIL的抑制率为83%. HOS-8603细胞经TRAIL作用后, 透射电镜下观察到典型的凋亡形态特征;随着TRAIL作用时间增加, HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm 降低(F=33.831 P〈0.01) , 两者呈直线相关.CsA不仅能抑制TRAIL诱导HOS-8603细胞ΔΨm 降低。而且能减少凋亡细胞数的增加(t=7.103 ,P〈0.01)。结论 TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡的线粒体依赖途径是通过使线粒体膜通透性转运孔开放, ΔΨm降低来实现;CsA能部分抑制这些效应。 相似文献
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目的:研究Smac表达下调对吲哚美辛诱导的食管癌EC109细胞凋亡的影响,并探索其内在分子机制。方法:使用Smac-siRNA脂质体法转染食管癌EC109细胞,将细胞分为空白对照组, siRNA-control阴性对照组和siRNA-Smac组。使用不同浓度的吲哚美辛处理各组细胞,MTT检测细胞活力变化,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测Caspase-9、3以及XIAP、survivin表达情况。结果:采用不同浓度吲哚美辛处理后,细胞活力明显受到抑制;Smac siRNA可明显降低Smac在RNA水平和蛋白水平的表达;吲哚美辛可引起各组凋亡率明显增加,单纯导入siRNA-Smac片段并不能引起细胞凋亡变化,siRNA-Smac联合药物能明显降低EC109细胞凋亡率(P<0.05)。在蛋白水平,siRNA-Smac组的survivin表达无明显变化,XIAP表达明显增强;Caspase-9及Caspase-3的活性片段明显表达减弱(P<0.05)。结论:NSAIDs药物吲哚美辛可诱导食管癌EC109细胞凋亡,这种作用一定程度上依赖于Smac的正常表达;Smac表达降低后其对XIAP的抑制减弱,Caspase-9和Caspase-3的活化受到抑制,而survivin在其中并不起决定性作用。 相似文献
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目的:探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的手霉素(10、20、40、80、120txmol/L)处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果:不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P〈0.05);Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol/L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4.520%±1.035%、14.490%±1.707%、28.883%±4.299%、35.107%±2.276%、47.940%±8.126%,与对照组凋亡率(1.370%±0.028%)相比,差异均具有统计学意义(p均〈0.05);且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2/M期细胞显著增多。结论:手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。 相似文献
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目的:探讨不同浓度的芬太尼对食管鳞癌细胞株Eca109增殖和凋亡的影响。方法:选用不同浓度的芬太尼(0.5、5、50、500ng/ml)干预细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MMT)法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V/PI 双染色法测定细胞凋亡。结果:各组芬太尼孵育Eca109细胞24h后,对细胞的增殖无明显影响;孵育48h后,与对照组相比,各浓度组均能显著抑制细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。芬太尼孵育Eca109细胞48h,与对照组相比,各浓度组均能诱导早期凋亡和晚期凋亡,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:芬太尼可抑制食管鳞癌细胞株Eca109的增殖并诱导凋亡。 相似文献
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目的:观察姜黄素对人肺癌A549细胞凋亡的诱导作用及凋亡细胞骨架的改变。方法:选用不同剂量的姜黄素处理A549细胞,应用MTT法、透射电镜、FCM法检测姜黄素对细胞生长影响及对凋亡的诱导作用。应用荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞微丝的结构。结果:MTT法显示姜黄素抑制A549细胞的生长,具有时间和剂量的效应关系。FCM法显示,>10μmol/L浓度姜黄素作用24h后可诱导细胞凋亡,并出现凋亡峰(亚二倍体峰)。透射电镜观察发现,20μmol/L姜黄素作用24h后细胞数明显减少,并出现典型的凋亡形态。激光共聚焦显微镜观察显示,在细胞凋亡过程中,F-肌动蛋白(F-actin)发生聚集和重排,并出现细胞内F-actin含量逐渐减少。结论:姜黄素对人肺癌A549细胞具有抑制生长及诱导凋亡的作用,微丝的改变在凋亡形态变化中起着重要的作用。 相似文献
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目的:研究微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞活力及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响,为探讨其诱导凋亡的途径提供依据。方法:分别用不同浓度(1、3.75、7.5、15、30、50 μg/mL)微囊藻毒素-LR处理人正常食管上皮HEEC细胞24 h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,计算半数抑制浓度(IC50)以确定后续实验的MC-LR浓度。进一步用0、6、12、24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞,采用PI-Annexin V双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,3.75~50 μg/mL的微囊藻毒素-LR均可使人正常食管上皮细胞活力降低(P均 < 0.01),测定得出IC50为24 μg/mL。因此,选择6、12和24 μg/mL的MC-LR用于后续实验。用6~24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞24 h后,细胞凋亡率升高(P < 0.05或P < 0.01),Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加(P均 < 0.01)。结论:微囊藻毒素-LR可以诱导人正常食管上皮细胞凋亡,且可能与细胞凋亡相关的信号分子Caspase-3和Caspase-9的激活有关。 相似文献
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目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响。方法:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪(FCM)分别分析细胞周期和细胞凋亡。结果:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制(P〈0.05);流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少(P〈0.01),S期细胞明显增多(P〈0.01);转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%。结论:过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的研究奈达铂(NDP)联合顺铂(DDP)对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法检测NDP联合DDP对Eca-109细胞的增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析Ki-67及Bax表达的变化。结果NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应;IC50浓度的NDP、DDP和1/2IC50(NDP)+1/2IC50(DDP)对Eca-109细胞的抑制率分别为(41.9±4.1)%、(47.4±2.9)%和(52.5±0.9)%;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67基因(蛋白)表达显著降低,而Bax基因(蛋白)表达显著增高。结论1/2IC50浓度NDP和DDP联合应用与两药IC50浓度单独应用相比,对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。 相似文献