降植烷、石蜡油、不完全佐剂诱导小鼠产生腹水型McAb的实验研究

用降植烷、石蜡油、不完全佐剂(以下称三种预处理药物)分别诱导小鼠产生腹水型MCAb。研究了三种预处理药物的致敏剂量,致敏后与接种杂交瘤的间隔时间、杂交瘤细胞接种数量,腹水产量,抗体效价和小鼠成活期等。实验结果表明三种预处理药物中的任何一种     

抗乙醇诱导的大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450单克隆抗体的制备及特性鉴别

从乙醇处理的大鼠分离细胞色素P-450(EtOH-P-450)。纯化后免疫BALB/c雌鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓癌细胞制备杂交瘤。应用固相放射免疫法筛选单克隆抗体(McAb)产生杂交瘤。试验中使用~(35)[S]蛋氨酸标记的大鼠抗小鼠k链McAb作为第二抗体(Yelton,D.E,etal:HYbriboma 1。5-11。1981)。分离31个单独的产生一种单一鼠免疫球蛋白     

分泌对小鼠H-2和Ⅰa抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞系

小鼠的免疫淋巴细胞与适当的骨髓瘤系细胞融合,可产生分泌对小鼠H-2或Ia抗原的抗体的杂交瘤细胞系。建立的11株克隆系中,9株产生抗H-2抗体,2株产生抗Ia抗体。此11株是用3个不同的骨髓瘤细胞系和不同的免疫接种技术进行了17次融合而建立的。作者总结了以下几点:(1)有效而良     

体外刺激小鼠脾细胞产生分泌IgG的杂交瘤

作者以刀豆脲酶和人黄体素为抗原建立一种体外刺激小鼠脾细胞方法,可产生分泌IgG的小鼠杂交瘤。 一般体外刺激小鼠牌细胞的方法优点在于节省时间及抗原用量,但杂交瘤产生及生长水平低,并且几乎均为IgM类。作者在评价了培养基的选择,补加血清,胸腺细胞条件培养基、抗原剂量、刺激时间,在刺激期间改变培养基、以及加入多克隆有丝分裂原等诸多理想化参数的效应后,认为加入PMA的10％胸腺细胞条件培养基(SDME)及补加5％免血清效果良好、其中可能含有白细间素α,几种β细胞分化生长因子(EL-BCDF-nek,BSF-pl,EL-BCGF-swa)等因子。抗原浓度及刺激时间对产生分泌特异性抗体杂交瘤及产生稳定分泌     

一种快速大量生产小鼠单克隆抗体腹水的方法

应用降植烷或不完全福氏佐剂诱导BALB/c小鼠产生腹水的方法已广为采用。但缺点是所得腹水量较少,收获时间较长,有时可诱发实体瘤等。为此,我们参照Kints等(J Immunol Meth,1989;119:241)以降植烷(P)和不完全佐剂(IFA)的混合物(PIFA)与杂交瘤细胞系同时注射大鼠制备腹水的方法,用PIFA+B4(抗SEB单克隆抗体杂交瘤细胞系)制备了BALB/c小鼠的腹水。并与以降植烷、IFA和PIFA的常规制备法作了比较。 实验方法是将实验小鼠分为降植烷、     

登革病毒血清型2 E蛋白Ⅲ区单克隆抗体的制备及其诊断特异性研究

本研究旨在制备抗登革病毒(dengue virus,DENV)血清型2 (DENV2)E蛋白Ⅲ区(envelope protein domainⅢ,EDⅢ)单克隆抗体(简称单抗)并研究其诊断特异性。合成编码DENV2-EDⅢ的基因并将其克隆入原核表达质粒pET21a;将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21;用重组表达的EDⅢ免疫小鼠;将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合;将可产生识别抗EDⅢ单抗的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔;采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化单抗;采用间接ELISA和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)评估所制备的单抗识别DENV血清型1～4 (DENV1～4)的能力。本研究成功表达了DENV2-EDⅢ,并制备出3株杂交瘤细胞,杂交瘤细胞所分泌的小鼠源性单抗既可识别DENV2,又可交叉识别DENV1、DENV3和DENV4。     

大鼠-小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株的建立

<正> 在建立针对小鼠共有抗原的单克隆抗体(McAb)的淋巴细胞杂交瘤细胞株时,若仍以小鼠(同种)作致敏淋巴细胞的供者,很难使小鼠对这类抗原致敏,因此有必要免疫异种动物以解决这问题。本文报道产生针对小鼠 IgE 决定簇的 McAb 的大鼠-小鼠淋巴细胞杂交瘤的建株。作者用小鼠抗天花粉蛋白的 IgE McAb TE-1(见顾华、叶敏,第三     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

经福氏不完全佐剂诱发的小鼠单克隆抗体腹水产量增加

制备单克隆抗体的传统方法是在小鼠腹腔内种植分泌抗体的杂交瘤细胞后诱发小鼠产生单克隆抗体腹水。为了提高小鼠腹水的产量,本文作者探讨了用福氏不完全佐剂(FIA)诱导小鼠及小鼠性别对小鼠腹水产生和单克隆抗体产量的影响。在BALB/c小鼠腹腔内注射0.1ml降植烷或FIA间隔7d后再接种10~6杂交瘤细胞V2.6E4。小鼠腹部呈高度     

大鼠抗胃癌杂交瘤株的建立及特性的分析

大鼠杂交瘤技术至少有三大优点:(1)单克隆抗体产量可高于小鼠的10倍;(2)大鼠的免疫反应性与小鼠不同;(3)县有特异有效的、快速、简便易行的抗体纯化方法。所谓小鼠杂交瘤体系的良好补充。本文报道利用大鼠杂交瘤技术制备大鼠抗胃癌单克隆抗体(RAG     

分泌抗绵羊红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞的建立

自1975年Kohler和Milstein建立了杂交瘤技术以来,免疫学已进入了一个新的时代。通过杂交瘤技术产生的单克隆抗体具有专一、均匀和大量的优点。其应用范围几乎已深入到生物学的各个领域。我组采用绵羊红细胞(SRBC)作抗原免疫小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,得到了分泌抗SRBC单克隆抗体的杂交瘤细胞,方法和结果报道如下。     

腹水内高产量单克隆抗体的产生

单克隆抗体作为研究工具和免疫试剂已被广泛应用。致敏脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合而产生的小鼠杂交瘤细胞系,在组织相容性鼠系以腹水瘤形式快速生长,同时分泌特异性单克隆抗体,一只带瘤小鼠能产生10-20mg单克隆抗体。本文报告将杂交瘤细胞注射于BALB/C鼠与SW/HPD鼠杂交产     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备和应用

目的:获得高效价、高特异性的促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体,为建立高灵敏度的促甲状腺激素水平的测定方法奠定基础。方法:采用细胞融合技术,以TSH抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合。通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人TSH单克隆抗体杂交瘤细胞株。并对所建立的单抗进行了鉴定。结果:细胞融合率达100%,阳性率15%。共建立了5株杂交瘤细胞株,均属IgG1 类。且与FSH、HCG、LH无交叉反应。McAb腹水效价在1∶5×105 ~1∶1×107。6个月液氮冻存后复苏培养测定细胞株的稳定性好。结论:本实验的融合率高,阳性率较高,所建立的细胞株的特异性高,McAb腹水效价高。为提高TSH检测的灵敏度和简便性提供了重要条件。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

人催乳素单克隆抗体制备及其临床应用研究

为获得人脑垂体催乳素单克隆抗体，用ＰＲＬ粗制品免疫了ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。利用杂交瘤技术，将免疫小鼠的脾淋巴细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞株，经过筛选，选出了２株能分泌催乳素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＰＲＬＨ６和ＰＲＬＡ２。     

用一种单克隆抗体快速简易地检出细胞培养中的支原体(文摘)

检测支原体污染是细胞培养中有待解决的一个问题。作者应用常见几种污染细胞培养的支原体(口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体,莱氏无胆甾原体及唾液支原体,几种支原体占污染细胞培养支原体的96％)。为抗原,免疫了雌性BALB/c小鼠。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Xg3Ag 865融合成杂交瘤细胞,建立了30种抗支原体单克隆抗体杂交瘤细胞等。应用ELISA,     

大鼠单克隆抗体——Ⅶ.用降植烷和福氏佐剂预处理大鼠后腹水产生及单克隆抗体产量的增加

作者研究了腹腔注射降植烷、福氏不完全佐剂(IFA)以及上述两种佐剂的混合物(V/V)(称PIFA)对Louvain大鼠腹水产生及单克隆抗体(McAb)产量的影响。当腹腔注射杂交瘤或免疫细胞瘤细胞的同时注射2ml PIFA可获得最佳结果。若与未经处理的对照大鼠相比,腹水产生增加4.7倍,单克隆抗体产量增加6倍多。 大鼠-大鼠杂交瘤系统有以下优点:①在小鼠系统不适宜的情况下,可用大鼠代     

小鼠形成腹水性肿瘤和产生单克隆抗体的影响因素

杂文瘤细胞注入小鼠腹腔内诱发腹水性肿瘤,并产生含有高滴度单克隆抗体的腹水。为确定形成腹水和产生单克隆抗体的最佳条件,研究了影响分泌免疫球蛋白肿瘤生长的几个因素。用SP2/0骨髓瘤。胞和免疫小鼠脾细胞融合产生杂交瘤细胞,作者证明:(1)诱发腹水性肿瘤需要的最佳杂交瘤细胞数在6—32×15~5细胞之间;(2)每只小鼠最多用0.5ml降植烷致敏;(3)用降植烷致敏后14天才可注射杂交瘤细胞;(4)用雄性小鼠形成腹水和产生单克隆抗体明显优于雌性鼠;(5)小鼠年龄应在43～78天之间。在上述条件下最多在6天过程中,平均每鼠产生7～10ml腹水,其中含有高滴度的抗体。这些动物在注射肿瘤细胞后通常活存11～16天,在第5和第9天之间开始产生腹水。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)的单克隆抗体(mAb).方法:利用从人工流产刮宫物中提取的HCG免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞同NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合, 采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞株, 并对mAb的亚型、亲和力及特异性进行鉴定.结果:共获得26株能稳定分泌抗HCG特异性mAb的杂交瘤细胞株.mAb的亚类均为IgG1, 亲和力介于1.14×108～2.0×108 mol/L之间, 其中4株mAb与HCG的β亚基有较强的反应, 而与黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)均无交叉反应.结论:成功获得4株鼠抗人HCG mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的mAb能特异识别人HCG的β亚基, 可用于早孕、肿瘤等诊断的进一步研究.     

杂交瘤细胞系产生单克隆抗体稳定性研究

大文对10株乙肝表面抗原(HBsAg)的McAbs细胞系在BALB/c小鼠体内连续传代和体外连续传代产生HBsAg单克隆抗体(McA-HBs)的稳定性进行了研究。表明10株杂交瘤细胞在体外连续传代12周各株细胞分泌McAb的稳定性是有明显差别的,而在BALB/c小鼠体内连续传3代其产生McA-HBs的能力均较稳定。 Sr-6和Sr-19在37℃和33℃两种不同培养温度下,以及在液氮中长期冻存复苏后对杂交瘤细胞产生McA-HBs的能力也无明显影响。