生长分化因子5在小鼠肢体骨骼发育中的表达规律

目的：检测生长分化因子5在小鼠肢芽组织的表达，分析该基因在肢体骨骼发育中的表达变化，从而进一步认识生长分化因子5基因在肢体发育过程中的作用。方法：实验于2005-05／07在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。选取清洁级2—3月龄昆明种小鼠30只，雌性20只，雄性10只，于每天下午6时按雌雄2：1合笼，次日展8时取出，查见阴道栓者定为孕期第0．5天。分别在胚胎11．5，12．5，13．5，14．5，15．5d颈椎脱臼处死孕鼠，无菌条件下分离出胚胎，解剖显微镜下用眼科剪取肢芽组织备用。分别采用反转录聚合酶链反应和Western blotting免疫印迹法检测生长分化因子5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果：①小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5mRNA的表达：孕11．5，12．5,13．5，14．5，15．5d胚胎肢芽组织均可见一条219bp的生长分化因子5特异扩增条带，其与β-actin吸光度的比值分别为0．521&;#177;0．023，1．210&;#177;0．014．1．221&;#177;0．008，0．556&;#177;0．014，0．510&;#177;0．019。孕12．5d和孕13．5d生长分化因子5 mRNA的相对含量与孕11．5，14．5，15．5d相比有极显著性差异（P〈0．01）。②小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5蛋白的表达规律：孕11．5，12．5，13．5，14．5：15．5d胚胎肢芽组织均观察到相对分子质量为13700的蛋白条带，其与β-actin蛋白吸光度的比值分别为0．589&;#177;．021，1．103&;#177;0．124，1．112&;#177;0．041，0．601&;#177;0．015，0．552&;#177;0．006。孕12．5d和孕13．5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11．5，14．5．15．5d相比有极显著性差异（P〈0．01）。结论：生长分化因子5mRNA及其蛋白表达的变化趋势一致，在小鼠肢体骨骼发育早期阶段持续表达，孕12．5d和孕13．5d呈高表达，继而减弱。表明生长分化因子5是肢体骨骼发育早期的一个关键因子，在小鼠肢体骨骼发育和关节形成中具有重要作用。     

核因子κB受体活化剂配体在小鼠前牙根发育中的表达

背景：研究表明小鼠不断生长的切牙是由于切牙仅有颈环而无上皮根鞘的形成,但是破骨细胞分化因子核因子κB受体活化剂配体和破骨细胞与不断生长的牙根发育是否相关,目前研究较少。目的：观察核因子κB受体活化剂配体在已萌出的小鼠切牙牙根周围的表达情况。设计、时间及地点：单一样本观察,于2007—03／09在解放军第四军医大学口腔病理实验室完成。材料：选用同窝生出生10d的清洁级昆明小鼠10只。方法：每只小鼠均取其下颌骨,应用免疫组织化学染色的方法进行小鼠切牙破骨细胞分化因子蛋白染色。主要观察指标：切牙牙根核因子κB受体活化剂配体表达。结果：切牙牙根周围核因子κB受体活化剂配体蛋白染色强阳性。结论：不断生长的小鼠切牙牙根核因子κB受体活化剂配体的强阳性表达,说明此时可能破骨细胞功能活跃。     

小鼠阴道黏膜干细胞生长相关因子的初步研究

目的对小鼠阴道黏膜干细胞培养上清中的细胞因子进行初步鉴定。方法收集稳定传代后的小鼠阴道黏膜干细胞培养上清,进行SDS-PAGE电泳和W estern-b lot检测,鉴定培养上清中阴道黏膜干细胞分泌的细胞因子。结果小鼠阴道黏膜干细胞培养上清中含有一种分子量约为84KD的细胞因子,经W estern-b lot方法检测该细胞因子为干细胞生长因子(HGF)。结论小鼠阴道黏膜干细胞可以分泌有活性的HGF。     

生长分化因子5真核表达质粒转染小鼠骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化

背景:生长分化因子5是软骨与骨组织形成、发育的重要调解因子,在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌健韧带损伤修复方面发挥重要作用.目的:小鼠骨髓基质干细胞体外转染真核表达质粒pcDNA 3.1(+),生长分化因子5,检测与软骨形成分化相关的细胞外基质及蛋白多糖的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在武汉协和医院中心实验室完成.材料:雄性昆明种小鼠20只,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.生长分化因子5真核表达质粒pCDNA 3.1(+)/生长分化因子5为自备.方法:全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞接种到6孔板,在细胞生长到90%融合时开始转染.设立3组:转染组采用Lipofectamine<'TM>2000进行脂质体介导pcDNA3.1(+)/生长分化因子5重组质粒瞬时转染;空质粒组转染窄质粒pcDNA 3.1(+);空白对照组只加入等量脂质体,其余步骤相同.主要观察指标:转染后72 h通过RT-PCR及免疫细胞化学检测生长分化因子5基因与蛋白的表达鉴定转染是否成功,同法检测软骨基质Ⅱ型胶原的表达,转染后14 d阿尔辛蓝染色检测蛋白聚糖的表达.结果:转染组有一大小为219 bp的特异性扩增条带,骨髓基质干细胞胞浆内呈棕色阳性染色;而空质粒组、空白对照组均未发生生长分化因子5基因转录,无特异性扩增条带,且细胞胞浆未见明显染色.转染组町检测到Ⅱ型胶原基因的表达,基因大小225 bp,Ⅱ型胶原细胞胞浆中可见棕黄色染色;空质粒组、空白对照组均未检测到Ⅱ型胶原基因的表达,SP染色均无明显染色.阿尔辛蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、空白对照组均未见明显异染性着色.结论:pcDNA3.1(+)/生长分化因子5转染骨髓基质干细胞能显著增加Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达,促进骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化.     

B超在早期诊断胚胎停止发育中的应用

目的:探讨超声早期诊断胚胎停止发育的方法,及时诊断出胚胎停止发育,又可及早筛查出流产史高危人群中的正常胚胎,及时采取合理治疗措施,减少产妇并发症。方法:孕龄>6周用腹部超声,≤6周用阴道超声检查,首次超声和必要时二次超声检查有胎心搏动为正常胚胎,无胎心搏动为胚胎停止发育。结果:1456例妊娠5~9 6周孕妇首次超声诊断胚胎停止发育107例,可疑胚胎停止发育196例,复查后诊断胚胎停止发育98例,共诊断胚胎停止发育205例,发生率为14.1%;可疑的196例中未见卵黄囊147例,其中,胎囊<20 mm胚胎停止发育率31.3%,胎囊≥20 mm胚胎停止发育率为95.3%,胎囊≥25 mm全部胚胎停止发育。结论:超声能早期、快速、准确地诊断出早期胚胎停止发育,以选择正确的临床处理方法,避免稽留流产和不全流产的发生。     

生长分化因子-15在心血管疾病中的研究进展

生长分化因子15（GDF-15）是转化生长因子-β（TGF-β）超家族的一个远支。其在心血管疾病的发生发展过程中具有一定的生理作用和临床意义,不仅可作为心血管疾病发生及进展的生物标志物,而且对于疾病的风险分层及远期预后亦具有一定意义。通过回顾GDF-15在心血管疾病方面的临床研究及基础实验,阐述GDF-15在动脉粥样硬...     

生长分化因子11在衰老中的研究进展

生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)是转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族的一员。GDF11在多种器官和组织中表达。生长发育期间,GDF11通过可逆性地阻滞细胞周期来调节发育进程;在衰老方面,GDF11可延缓心脏、骨骼肌、大脑、骨骼、血管等多个器官和组织的衰老进程。本文就GDF11在生长发育及衰老中的作用及其机制作一综述,以期为GDF11在衰老方面的研究提供指导。     

生长分化因子-15在垂体腺瘤中的表达及意义

目的探讨生长分化因子(GDF)-15在垂体腺瘤中的表达及意义。方法选择100例垂体腺瘤患者组织标本,根据是否具有侵袭性分为侵袭性垂体腺瘤63例和非垂体腺瘤37例,并选择同期在本院接受体检的健康人员50例作为对照组。比较各组受试者GDF-15的表达,并分析GDF-15和垂体腺瘤侵袭性的相关性。结果泌乳素垂体腺瘤与生长激素垂体腺瘤患者GDF-15均显著高于无功能性垂体腺瘤患者(P0.50);侵袭性垂体腺瘤患者GDF-15水平显著高于非侵袭性组及对照组(P0.05);GDF-15和侵袭性垂体腺瘤呈正相关(r=0.328,P=0.001)。结论在垂体腺瘤患者中,GDF-15的表达较高,且GDF-15水平和垂体瘤侵袭性存在相关性。     

山羊胚胎皮肤的发育及β1整合素在发育中的表达

目的：观察山羊胚胎皮肤发育的过程以及在此过程中表皮干细胞的特异性标志β1整合素的表达状况，以定位表皮干细胞。方法：实验于2006—11，2007—05在西北农林科技大学动物科技学院组织胚胎学实验室完成。取8-18周龄山羊胚胎背部皮肤，用组织学方法，观察山羊胚胎皮肤发育的形态学变化；用免疫组织化学SP法，观察β1整合素在山羊胚胎皮肤发育过程中的表达特征。结果：①表皮于8～9周龄时开始发育，10周龄时表皮由三层细胞构成，在11周龄时可见有原始毛囊的出现，有少量张力原纤维的存在，并发现朗格罕斯细胞，12～13周龄时表皮细胞出现角化层、透明层及颗粒层的分化，可见汗腺，14-15周龄毛球上皮细胞索开始分化为外根鞘、内根鞘的原基和毛发的前体，在毛囊一旁出现皮脂腺，张力原纤维增多、变粗，并发现典型的桥粒结构，16～17周龄时表皮层变薄，毛开始形成，并随着发育逐渐长出体表。18周龄皮肤的结构渐趋成熟。②胚胎发育早期，基底层细胞胞浆内表达β1整合素，随着皮肤发育，β1整合素阳性细胞出现在毛囊隆突区和外根鞘。结论：①山羊胚胎表皮的发生优先于真皮的发生，在胚胎时期处于剧烈的分化阶段。②β1整合素的阳性反应定位于基底层，随着皮肤的发育也表达于毛囊隆突区和外根鞘，表皮干细胞的数量和分布的部位与皮肤的发育特点有关系。     

下肢缺血大鼠模型血管内皮细胞生长因子变化

背景:组织缺血初期,机体通过代偿性调节与修复,实现血管的新生,使组织供血得以维持,在此代偿过程中,多种细胞因子,特别是血管内皮细胞生长因子发挥了关键的作用.目的:观察下肢缺血大鼠模型造模后不同时间点缺血组织及血清中血管内皮细胞生长因子水平变化特点及规律.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-04/11在东直门医院重点学科实验室和北京中医药大学分子生物实验室完成.材料:将4周龄雄性SD大鼠42只按照随机数字表分为6组:对照组、造模后4h、3d、1周、2周及4周组.方法:将模型组大鼠用100g/L水合氯醛麻醉后行左侧股总动脉结扎离断术制作下肢缺血模型,于造模成功后4h、3d、1周、2周及4周抽取大鼠腹主动脉血5mL,3 000r/min离心10min后,取上清;同时分离大鼠左小腿腓肠肌组织.对照组大鼠麻醉后直接取材.主要观察指标:利用Western Blotting法检测缺血组织血管内皮细胞生长因子蛋白表达量、ELASA法检测血清中血管内皮细胞生长因子水平.结果:缺血组织血管内皮细胞生长因子在缺血后4h即开始增多,3d时达到高峰,3d后血管内皮细胞生长因子表达量逐渐减少,至缺血2周时血管内皮细胞生长因子表达量最少,2周后缓慢回升,至缺血4周时血管内皮细胞生长因子表达量接近正常组织.缺血后血清血管内皮细胞生长因子水平立即下降,缺血后即刻至缺血4h下降幅度最大,缺血4h～1周下降幅度减少:缺血1～4周血清血管内皮细胞生长因子少量增加,至缺血4周时仍显著低于正常组(P＜0.01).血清血管内皮细胞生长因子含量变化趋势表现为至缺血4h迅速下降,缺血1周降至最低点,1周后缓慢升高的趋势.结论:大鼠后肢缺血后,缺血组织中血管内皮细胞生长因子水平呈现先升高-再下降-再上升的趋势,血清中血管内皮细胞生长因子水平呈现先下降-再上升趋势,即呈现血清水平低,局部组织水平高的特点.     

The hypoxia-inducible factor alpha pathway couples angiogenesis to osteogenesis during skeletal development

Skeletal development and turnover occur in close spatial and temporal association with angiogenesis. Osteoblasts are ideally situated in bone to sense oxygen tension and respond to hypoxia by activating the hypoxia-inducible factor alpha (HIF alpha) pathway. Here we provide evidence that HIF alpha promotes angiogenesis and osteogenesis by elevating VEGF levels in osteoblasts. Mice overexpressing HIF alpha in osteoblasts through selective deletion of the von Hippel-Lindau gene (Vhl) expressed high levels of Vegf and developed extremely dense, heavily vascularized long bones. By contrast, mice lacking Hif1a in osteoblasts had the reverse skeletal phenotype of that of the Vhl mutants: long bones were significantly thinner and less vascularized than those of controls. Loss of Vhl in osteoblasts increased endothelial sprouting from the embryonic metatarsals in vitro but had little effect on osteoblast function in the absence of blood vessels. Mice lacking both Vhl and Hif1a had a bone phenotype intermediate between those of the single mutants, suggesting overlapping functions of HIFs in bone. These studies suggest that activation of the HIF alpha pathway in developing bone increases bone modeling events through cell-nonautonomous mechanisms to coordinate the timing, direction, and degree of new blood vessel formation in bone.     

Transgenic mice expressing a B cell growth and differentiation factor gene (interleukin 5) develop eosinophilia and autoantibody production

Interleukin 5 (IL-5) has been suggested to be involved in the growth and differentiation of B cells and eosinophils. Especially, Ly-1+ B cells, which have been considered to produce autoantibodies, are selectively developed by this lymphokine in long-term bone marrow culture. To envisage the possible engagement of IL-5 in the development of these cells in vivo, transgenic mice carrying the mouse IL-5 gene ligated with a metallothionein promoter were generated. Transgenic mice carrying the IL-5 gene exhibited elevated levels of IL-5 in the serum and an increase in the levels of serum IgM and IgA. A massive eosinophilia in peripheral blood, bone marrow, and spleen, and an infiltration of muscle and liver with eosinophils, were observed. When cadmium-containing saline was injected intraperitoneally into transgenic mice, IL-5 production was augmented about five times within 24 h, and a distinctive Ly-1+ B cell population became apparent in the spleen after 5 d. IL-5 receptors were detected on those cells by monoclonal antibodies against IL-5 receptors. Another interesting finding in these transgenic mice was an increase in polyreactive anti-DNA antibodies of IgM class. It is suggested, therefore, that aberrant expression of the IL-5 gene may induce accumulation of Ly-1+ B cells and eosinophils. Furthermore, this IL-5 transgenic mouse can be a model mouse for eosinophilia, and we can determine the role of IL-5 in the differentiation of Ly-1+ B cells and eosinophils by using this mouse.     

Distinct growth hormone receptor signaling modes regulate skeletal muscle development and insulin sensitivity in mice

Skeletal muscle development, nutrient uptake, and nutrient utilization is largely coordinated by growth hormone (GH) and its downstream effectors, in particular, IGF-1. However, it is not clear which effects of GH on skeletal muscle are direct and which are secondary to GH-induced IGF-1 expression. Thus, we generated mice lacking either GH receptor (GHR) or IGF-1 receptor (IGF-1R) specifically in skeletal muscle. Both exhibited impaired skeletal muscle development characterized by reductions in myofiber number and area as well as accompanying deficiencies in functional performance. Defective skeletal muscle development, in both GHR and IGF-1R mutants, was attributable to diminished myoblast fusion and associated with compromised nuclear factor of activated T cells import and activity. Strikingly, mice lacking GHR developed metabolic features that were not observed in the IGF-1R mutants, including marked peripheral adiposity, insulin resistance, and glucose intolerance. Insulin resistance in GHR-deficient myotubes derived from reduced IR protein abundance and increased inhibitory phosphorylation of IRS-1 on Ser 1101. These results identify distinct signaling pathways through which GHR regulates skeletal muscle development and modulates nutrient metabolism.     

小鼠下颌下腺发育中转化生长因子β受体的表达

背景：小鼠的下颌下腺是研究唾液腺的发育的良好模型,转化生长因子β是器官发育和疾病中重要的生长因子,但是在下颌下腺中转化生长因子β受体的表达以及作用机制至今并不明确。目的：观察胚胎小鼠下颌下腺发育过程中转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体以及p-ERK1／2的表达,揭示转化生长因子β在小鼠涎腺发育中的作用。方法：取C57BL／6J小鼠胚胎期第14.5天的标本,使用转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体以及p-ERK1／2抗体,对小鼠的下颌下腺进行免疫组化染色。取新生小鼠标本,大体观察下颌下腺,并且使用苏木精-伊红染色观察其形态。结果与结论：①小鼠出生时,下颌下腺位于下颌骨下方;苏木精-伊红染色发现小鼠下颌下腺的腺泡、导管和闰管细胞也已经分化完成。②在胚胎期第14．5天,转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体在腺泡上皮和导管上皮内高表达,而腺体上皮细胞外的间充质没有表达。③p-ERK1／2主要也是表达在下颌下腺的上皮细胞中,与转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体在下颌下腺中的表达基本一致。说明在小鼠下颌下腺的发育过程中,转化生长因子β蛋白可能通过与上皮细胞表面的受体结合,激活ERK信号通路来调节涎腺腺泡和导管的发育。     

Signaling through the epidermal growth factor receptor during the development of malignancy

The epidermal growth factor receptor (EGFR) is overexpressed and/or constitutively activated in a variety of human malignancies. Detection of increased expression levels of EGFR in cancer and the association between overexpression and decreased patient survival has led to the development of several therapeutic strategies to target this receptor. The results of early-phase clinical trials to date suggest that targeting EGFR alone may not be sufficient to eradicate established tumors. This limited antitumor efficacy as monotherapy has led to combining EGFR inhibitors with chemotherapy or radiation therapy for advanced disease, or incorporating EGFR inhibition to cancer prevention approaches. This review will discuss the role of EGFR signaling in carcinogenesis and the rationale for EGFR inhibition as a clinical prevention and treatment strategy.     

骨髓间充质干细胞成骨分化中转化生长因子受体的表达

背景:机体受创后尤其是骨折发生后,骨髓间充质干细胞将启动成骨分化,其表面多种生长因子如碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子、骨形态发生蛋白的受体表达将发生变化.目的:观察骨折损伤后不同时相骨髓间充质干细胞表面转化生长因子受体的表达变化.设计、时间及地点:对照观察实验,于2002-02/2003-11在解放军第三军医大学预防医学院复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.材料:选用健康成年兔,建立成兔桡骨骨折模型.方法:在造模当日及造模后1,5,10,15,20d抽取实验兔骨髓液,取骨髓有核细胞,纯化间充质干细胞,成骨分化培养基诱导培养.主要观察指标:通过Western-blot法检测转化生长因子β1,β2受体在间充质干细胞上的表达.结果:造模后1 d转化生长因子β1受体表达与造模当日比较无明显差异(P>0.05):造模后5d,其表达显著高于造模当日(P<0.05);造模后10d与5d比较无明显差异(P>0.05),但显著高于造模当日(P<0.05);造模后15,20d的转化生长因子β1受体表达显著高丁造模当日及造模后5,10d(P<0.01).造模后1,5d转化生长因子β2受体表达与造模当日无明显差异(P>0.05):造模后10,15d,其表达显著高于造模当日(P<0.05);造模后20d转化生长因子β2受体的表达显著高于造模当日及造模1,5,10,15d(P<0.01).结论:创伤后体内骨髓间充质干细胞成骨分化过程中转化生长因子β1,β2受体的表达呈现逐渐增高的趋势.     

肝干细胞体外分化中细胞生长因子调控与肝癌的关系

目前人们对肝干细胞的分化潜能及特性已形成共识,但体外分离培养肝干细胞的方法还不成熟,肝干细胞体外分离培养方法的建立是在体外条件下对肝干细胞的生物学特性进行深入研究的前提和基础.肝细胞生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、胰岛素、转化生长因子等细胞生长因子对肝干细胞的体外培养、生长和分化可能具有重要的调控作用.肝干细胞在一定条件下可以转化为肝癌细胞,肝干细胞在肝癌的发生中起着非常重要的作用.肝干细胞移植研究为肝细胞移植、生物型人工肝、肝癌靶向基因治疗提供细胞来源.