抗ErbB2嵌合抗体chA21对SKBR3细胞的增殖抑制以及对PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响

目的检测抗ErbB2嵌合抗体chA21对高表达ErbB2乳腺癌细胞SKBR3的增殖抑制作用,并分析抗体对细胞膜上ErbB2分布以及对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响,探讨chA21的抑癌机制。方法采用MTT检测chA21对SKBR3的增殖抑制作用,流式细胞术检测经chA21处理后细胞膜上ErbB2抗原的分布变化,Western blot检测抗体作用后对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响。结果chA21可抑制SKBR3细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性。抗体作用后可下调细胞膜上ErbB2含量,并不同程度下调细胞的PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。结论chA21可抑制SKBR3细胞增殖,可能通过下调细胞膜上ErbB2分布而减少其介导的PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的活化来实现的。     

赖氨大黄酸通过抑制HER-2信号通路诱导乳腺癌SK-Br-3细胞凋亡

为研究赖氨大黄酸(rhein lysinate，RHL)对人乳腺癌细胞株SK-Br-3细胞增殖、凋亡的影响及HER-2信号通路在其中的作用。应用MTT法检测赖氨大黄酸对SK-Br-3细胞增殖的影响；应用流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡；应用Western blotting检测HER-2信号通路蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平；应用RT-PCR和免疫化学方法分别检测HER-2 mRNA和蛋白表达水平。结果显示， 赖氨大黄酸能有效抑制乳腺癌SK-Br-3细胞增殖， 作用48 h的IC₅₀值为85 μmol·L^{-1，并能诱导其凋亡，随药物浓度的增加，细胞凋亡率也逐渐升高；Western blotting结果显示，赖氨大黄酸抑制HER-2蛋白表达和蛋白磷酸化，抑制NF-κB蛋白表达，升高p53和p21蛋白表达；RT-PCR和免疫化学结果表明，赖氨大黄酸能抑制HER-2 mRNA的转录水平，从而抑制其蛋白表达。因此，赖氨大黄酸能有效抑制SK-Br-3细胞增殖，并诱导其凋亡，HER-2/NF-κB/p53/p21参与了赖氨大黄酸诱导SK-Br-3细胞凋亡的过程。赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的难题，并且能够通过HER-2信号通路诱导细胞凋亡，有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。}     

HER-2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞的影响

目的 乳腺癌发病率高,远期生存率低。原癌基因HER-2与乳腺癌的恶性转化密切 相关。本课题以HRE-2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)抑制乳腺癌细胞目的mRNA的转录表达,观察 对细胞的影响。方法:HER-2寡脱氧核苷酸(ODN)与表皮生长因子(EGF)连结,形成ODN-EGF。 将6．8 μmol·L1 ODN-EGF250μl·d1加入对数生长期乳腺癌细胞SK-Br-3培养,每天给药一次,连 续给药3天。末次给药后24小时,消化和收集细胞。用RT-PCR逆转录扩增HER-2 DNA,进行凝 胶电泳。电镜检测细胞显微结构的改变。结果 5组药物细胞mRNA RT-PCR的扩增片断为98bp DNA。电泳条带灰度值ASODN-EGF组13 009．33±74．19,SODN-EGF组13 291．33±39．72, NODN-EGF组13 234．00±95．50,ASODN组13 216．33±77．78,正常对照组13 284．67±31．94。电 镜检测ASODN-EGF组细胞,核畸形,胞浆内有裂痕和自身围成的腺腔,脂滴空泡化改变,线粒体外 室轻度肿胀,上皮样细胞特征角蛋白表达减少。结论 ASODN-EGF具有抑制SK-Br-3细胞HER-2 mRNA转录和表达的作用。     

乳腺癌原癌基因HER-2反义寡脱氧核苷酸-叶酸诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究乳腺癌原癌基因HER-2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对乳腺癌细胞SK-Br-3凋亡和蛋白表达的影响。方法:采用DNA原位末端标记染色和Annexin-V荧光标记法检测ASODN-叶酸(FA)对乳腺癌细胞凋亡的影响,免疫组化检测p185蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,ASODN-FA组凋亡指数、早期凋亡细胞阳性率、p185表达平均光密度值2组分别为(4.60±1.76)%、(17.37±2.78)%,(2.75±1.09)%、(18.62±1.80)%,0.31±0.06、0.11±0.02(P<0.05)。结论:HER-2A-SODN可诱导乳腺癌细胞SK-Br-3的早期和晚期凋亡,p185蛋白表达降低。     

重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体的构建及鉴定

目的:构建重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体SM03,并进行特性鉴定。方法:分别克隆鼠抗人CD22单抗轻/重链可变区基因VL/VH,构建重组SM03嵌合抗体轻链表达载体(SM03pEkappa)和重链表达载体(SM03pEgamma)。转染细胞经选择培养和克隆化,筛选出高效表达细胞株。采用SDS-PAGE、ELISA、流式细胞仪和免疫组化分析,检测纯化产物的相对分子质量、特异性和亲和力、淋巴瘤细胞毒效应,以及人体组织交叉反应性。结果:构楚了重组人CD22嵌合抗体SM03表达系统,SM03嵌合抗体相对分子质量约1．5×10~5,还原为轻链和重链两条带,相对分子质量分别为2．7×10~4和5．0×10~4。SM03嵌合抗体特异于B细胞CD22抗原,对恶性淋巴瘤细胞具有生长抑制效应。结论:成功构建重组人CD22单克隆抗体,为恶性B细胞淋巴瘤的临床治疗和应用奠定了基础。     

抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对裸鼠肝癌原位移植瘤的治疗作用

目的 检测抗血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)嵌合Fab抗体对裸鼠肝癌原位移植瘤的治疗作用.方法 40只4周龄雄性BALB/c裸鼠建立肝癌H22细胞移植瘤模型后随机均分为Fab抗体(A)组和生理盐水对照(B)组.比较两组裸鼠生存时间、移植瘤病理变化及微血管密度(MVD).结果 成功建立裸鼠H22肝癌原位移植瘤模型,HE染色显示肝细胞肝癌.A组裸鼠中位数生存时间明显长于B组(20.0 d vs.14.0 d)(P＜0.01);A组肝脏实体瘤内MVD较B组显著减少(8.65±1.79 vs.25.64±1.53)(P＜0.05).结论 抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对裸鼠肝癌原位移植瘤有治疗作用.     

姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;Hoechst 33258荧光核染色法观察姜黄素对胃癌BGC-823细胞的形态学改变的影响。结果姜黄素80μmol·L-1和160μmol·L-1剂量在24、48和72 h均可显著抑制胃癌BGC-823细胞对MTT的摄取能力(P0.05或P0.01),并呈现一定的时间依耐性;姜黄素20μmol·L-1和40μmol·L-1剂量在短时间内对胃癌BGC-823细胞摄取MTT的能力无显著作用,但随作用时间的增长,也表现出显著的抑制作用(P0.05);流式细胞术和Hoechst 33258荧光核染色法结果表明姜黄素40、80和160μmol·L-1剂量均可显著提高胃癌BGC-823细胞的凋亡率(P0.05或P0.01)。结论姜黄素可能通过介导胃癌BGC-823细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

虫草素体外抑制NB4细胞增殖与诱导细胞凋亡作用研究

目的观察虫草素体外对急性早幼粒细胞性白血病细胞（NB4细胞）的抑制增殖和诱导凋亡作用。方法将0.5,1.0,1.5,2.0 mg&#8226;mL 1虫草素在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度虫草素在24,48,72 h对NB4细胞增殖的抑制作用;用细胞瑞氏染色法、Hoechst33258荧光染色法、DNA亚二倍体检测法和线粒体膜蛋白检测法观察虫草素诱导NB4细胞凋亡的作用。结果与对照组比较,不同浓度虫草素均能显著抑制NB4细胞增殖,并呈剂量和时间依赖的量效关系;不同浓度虫草素作用24 h后均能显著促进NB4细胞凋亡。结论虫草素在体外能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

紫杉醇对绒癌JEG-3细胞增殖与凋亡的影响

目的该文围绕紫杉醇对人绒毛膜癌细胞JEG-3的增殖与凋亡的影响进行研究。方法通过MTT法检测细胞增殖及流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用下细胞的凋亡及其对细胞周期的影响。结果随紫杉醇浓度的增加或时间的延长,JEG-3细胞增殖抑制率及凋亡率均增大,各组间比较有统计学意义（P〈0.05）。结论该次实验的结果显示紫杉醇在抑制绒癌细胞JEG-3增殖及促凋亡方面均有显著的作用。     

姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与凋亡诱导的影响

目的研究姜黄素对人原髓细胞白血病HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,探讨其诱导细胞凋亡的机理。方法应用MTT比色法、细胞荧光染色法和Western blotting检测姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制、凋亡诱导以及对HL-60细胞表达Bcl-2、Caspase9和c-myc的影响。结果姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与剂量相关(P<0.05);经姜黄素作用后HL-60细胞的形态差异明显,表现凋亡的特征性变化,而且姜黄素作用后HL-60细胞的Bcl-2和原癌基因c-myc的表达量低于对照组(P<0.05),而Caspase9的表达量则明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制体外培养的HL-60细胞增殖,其诱导HL-60细胞凋亡的途径可能通过线粒体介导。     

白藜芦醇烟酸酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导细胞的凋亡

目的：观察白藜芦醇的修饰物白藜芦醇烟酸酯（ResT）对人肝癌细胞HepG2生长增殖的影响及诱导凋亡的作用。方法：用不同浓度的ResT处理HepG2细胞，MTT法检测ResT对HepG2细胞生长增殖的抑制作用；应用Hochest荧光染色法观察凋亡细胞的发生；流式细胞术（FCM）检测分析细胞周期和细胞凋亡率；比色法测定Caspase-3酶活性。结果：ResT抑制HepG2细胞的增殖并呈现一定的量效和时效关系，HepG2细胞与ResT作用后出现典型的凋亡细胞形态改变，FCM分析显示大部分细胞阻滞于G1期，S期细胞比例降低。且药物作用组出现凋亡峰。药物作用12、24、48h后，细胞的凋亡率分别为8．7％、21．1％、和32.7％。显示ResT诱导的细胞凋亡作用随时间的延长而增加，同时Caspase-3酶活性显著增强。结论：ResT可抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖，其作用机制之一可能与阻滞细胞于G1期及诱导细胞凋亡有关。     

Apoptogenic peptides from Tityus discrepans scorpion venom acting against the SKBR3 breast cancer cell line

Two novel peptides named neopladine 1 and neopladine 2 were purified from Tityus discrepans scorpion venom and found to be active on human breast carcinoma SKBR3 cells. Mass spectrometry molecular masses of neopladine 1 and 2 were 29918 and 30388 Da, respectively. Their N-terminal sequences were determined by Edman degradation. The peptides induced apoptosis of SKBR3 cells but had a negligible effect on non-malignant MA104 monkey kidney cells. Neopladine 1 and 2 induced 6.3 and 4.1% of SKBR3 apoptosis, respectively, in 5 h of exposure; the effect was larger with more prolonged exposures. Inmunohistochemistry showed that neopladines bind to SKBR3 cell surface inducing FasL and BcL-2 expression.     

KTDA抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的探讨3-Keto-tirucall-8,24-dien-21-oic acid(KTDA)体外抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察KTDA对肿瘤细胞的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察肿瘤细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法检测它们对细胞DNA降解的影响。结果KTDA浓度为100、10、1μg.mL-1,作用72 h时,能抑制人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC-7721、人慢性髓性白血病细胞系K562、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113的生长,并呈浓度依赖性。当KTDA浓度为10μg.mL-1时,处理72 h后,于荧光显微镜下观察到凋亡小体,电泳结果显示典型的DNA梯状条带。结论KTDA能抑制5种肿瘤细胞的增殖,并呈浓度依赖性,KTDA对MCF-7、SMMC-7721、K562、Hela比较敏感,Tca 8113次之,其机制可能为通过诱导5种肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤的作用。     

ClC-3氯通道对H_2O_2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究C lC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测C lC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及C lC-3蛋白过表达对其影响。结果C lC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率,增加细胞存活。结论提示C lC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡。     

白藜芦醇对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160μmol.L-1)Res对人黑色素瘤细胞株Mel-RM和MM200增殖的抑制作用,溴化丙啶(propidium iodide,PI)单染进行流式细胞仪分析,检测Res对黑色素瘤细胞凋亡的影响。通过JC-1染色法检测Mel-RM和MM200细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)。试剂盒检测Caspase-3的活性变化。结果随着Res的浓度的增加,对人黑色素瘤细胞株的增殖产生明显的抑制作用,80、160μmol.L-1的Res可诱导Mel-RM和MM200细胞出现明显的凋亡,JC-1染色结果显示,Res处理后Mel-RM和MM200线粒体膜电位分别降低51.0%和68.8%。Caspase-3活性检测结果显示Res对Caspase-3具有激活作用。结论 Res具有抑制黑色素瘤细胞增殖诱导其凋亡的作用,其机制可能与降低细胞线粒体膜电位及激活Caspase-3有关。     

Effect of β-escin sodium on endothelial cells proliferation, migration and apoptosis

β-Escin, the major active compound in extracts of the horse chestnut Aesculus hippocastanum seed, has shown clinically significant activity in chronic venous insufficiency (CVI). Our previous studies had shown that β-escin sodium inhibited angiogenesis in chick chorioallantoic membrane (CAM) and in aortic disk assay. In this study, we explored the direct effect of β-escin sodium on proliferation, migration and apoptosis in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and ECV304 cells. Sulforhodamine B (SRB) assay showed that β-escin sodium (10, 20, 40 μg/ml) inhibited endothelial cells (ECs) proliferation dose-dependently. β-escin sodium also induced ECs apoptosis at 40 μg/ml. Cell migration was evaluated by an improved wound assay: barren spot assay. And the direct effect on cell motility excluding influence of cell proliferation was examined by High Content Screening (HCS, Cellomics) assay. The data indicated that β-escin sodium suppressed ECs migration and cell motility. Western blot results suggested that β-escin sodium acts on ECs possibly by increasing expression of thrombospondin-1 (TSP-1), and decreasing expression of PKC-α and activation of p44/42 mitogen-activated protein kinase (ERK) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK). Our findings give the evidence that β-escin sodium might have potential anti-angiogenic activity via its direct effects on ECs.     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。