模拟低压低氧暴露对雄性SD大鼠睾丸机能的损伤及机制研究

目的观察模拟低氧暴露条件对雄性SD大鼠睾丸机能的影响。方法随机将20只SD雄性大鼠分为两组,对照组置650 m海拔高度饲养,低氧组置模拟6000 m海拔高度低压氧舱饲养。饲养14天后脱颈处死大鼠,采集血液及组织标本,分别测定血清IL-1β和丙二醛(MDA)含量、睾丸匀浆组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。HE染色观察睾丸组织形态学变化。结果低氧组大鼠血清MDA、CAT及GPx的浓度或活性均较对照组显著升高(P0.05);两组血清IL-1β浓度无显著差异(P0.05)。与对照组比较,可见低氧组大鼠睾丸组织部分生精小管内初级、次级精母细胞变性、脱落、坏死,间质血管充血、扩张,间质细胞出现细胞肿胀及炎性细胞浸润。结论低氧低压暴露可能通过破坏睾丸组织内抗氧化系统稳态,导致大鼠睾丸生殖机能损伤。     

淫羊藿苷对环磷酰胺诱导生精障碍大鼠下丘脑垂体睾丸轴的影响

目的:探讨淫羊藿苷在环磷酰胺诱导的大鼠睾丸生精障碍动物模型中的作用,研究淫羊藿苷对下丘脑-垂体-睾丸轴的影响。方法:大鼠分为空白对照组、阴性对照组、模型组、淫羊藿苷治疗组;H-E染色观察睾丸组织结构变化,TUNEL检测睾丸生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH),SABC免疫组织化学研究下丘脑正中隆起促性腺激素释放激素(GnRH)神经纤维。结果:睾丸H-E染色切片观察显示模型组睾丸生精小管直径缩小,间距增宽,生精上皮变薄,生殖细胞数量减少,生精小管多未见精子形成,与空白对照组比较其生精小管结构变化显著;治疗组与模型组比较生精小管壁增厚,含有精子的生精小管明显增多。模型组与空白对照组比较,睾丸生精小管中生殖细胞凋亡显著增多;治疗组与模型组比较生精小管中生殖细胞凋亡数量明显减少。血清睾酮检测结果显示模型组与空白对照组比较血清睾酮明显降低;治疗组与模型组比较其血清睾酮明显增加;血清FSH、LH水平各组间无差异。与空白对照组比较,模型组正中隆起GnRH阳性纤维增多,染色深,光密度显著增高;治疗组与模型组比较其GnRH阳性纤维明显减少,染色浅。结论:淫羊藿苷具有改善睾丸生精小管结构、减少生殖细胞凋亡、促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能,降低GnRH在正中隆起的蓄集。     

淫羊藿苷调节雄性大鼠生殖功能

目的:探讨淫羊藿苷在环磷酰胺诱导的大鼠睾丸生精障碍动物模型中的作用,研究淫羊霍苷对睾丸功能的影响.方法:分为空白对照组、阴性对照组、模型组、淫羊藿苷治疗组;H-E染色观察睾丸组织结构变化,TUNEL方法检测睾丸生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮.结果:睾丸H-E染色切片观察显示模型组睾丸生精小管直径缩小,间距增宽,生精上皮变薄,生殖细胞数量减少,生精小管多未见精子形成,与空白对照组比较其生精小管结构变化显著;淫羊藿苷治疗组与模型组比较生精小管壁增厚,含有精子的生精小管明显增多.睾丸生精小管中生殖细胞凋亡的观察模型组与空白对照组比较其生殖细胞凋亡增多,变化显著;淫羊藿苷治疗组与模型组比较生精小管中生殖细胞凋亡数量明显减少.模型组与空白对照组比较血清睾酮明显降低;淫羊藿苷治疗组与模型组比较其血清睾酮明显增加.结论:淫羊藿苷对环磷酰胺诱导生精障碍的睾丸具有改善睾丸生精小管结构、减少生殖细胞凋亡、促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能.     

Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达

目的 探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理。方法 用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad2和Smad4蛋白的表达和定位。结果Smad2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质,胞核为阴性;而Smad4蛋白同主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色,结论 Smad2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF－β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

人绒毛膜促性腺激素对切除颌下腺小鼠静止期精母细胞的一些影响

目的：探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对切除颌下腺小鼠静止期精母细胞表皮生长因子(EGF)的表达和生精功能的影响。方法：采用组织化学和免疫组织化学技术。结果：EGF、分布在小鼠睾丸间质细胞、精原细胞、静止期精母细胞、细线期精母细胞和精子细胞。去颌下腺组EGF阳性反应静止期精母细胞数量明显减少，同时相应的生精小管的各级生精细胞也显著减少。与去颌下腺组相比，去颌下腺给药组EGF阳性反应静止期精母细胞数量明显增多，同时相应的生精小管的生精细胞也显著增多。结论：睾丸间质细胞和部分生精细胞能分泌EGF。EGF在生精小管上皮的分布与生精周期有密切关系。静止期精母细胞EGF表达减弱是切除颌下腺导致小鼠少精症的原因之一。HOG可促进静止期精母细胞表达EGF，以调节精子发生过程。     

环磷酰胺对大鼠睾丸和附睾的影响

目的探讨抗肿瘤药物所致大鼠睾丸和附睾损害,为寻找男性不育症中药治疗的研究提供理论依据。方法选用16只15周龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg·kg-1·d-1,连续5d,用药2个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸、附睾远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精细胞凋亡。结果实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻(P<0.01),睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生精细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生精上皮细胞数、均显著低于对照组(P<0.01);实验组生精细胞凋亡增多,与对照组比较,生精细胞显著凋亡(P<0.01);附睾管管腔内腔内精子稀少,含有大量脱落细胞,管壁变薄。结论环磷酰胺对大鼠睾丸、附睾远期损害明显,促进生精细胞凋亡。     

睾丸动脉血流障碍对小鼠睾丸生精上皮和血-睾屏障的影响

目的:探讨睾丸动脉血流障碍对小鼠睾丸生精上皮和血-睾屏障的影响.方法:成熟雄性BALB/c小鼠,随机分为对照组和6个实验组,对照组仅暴露睾丸动脉而不进行结扎,实验组显微镜下行单侧睾丸动脉结扎, H-E染色观察睾丸组织的病理改变,电镜观察血-睾屏障的变化.结果:对照组睾丸生精小管无明显病理改变;1h组睾丸生精小管上皮细胞排列不均匀,细胞界限清楚,线粒体轻微肿胀,核周隙轻微增宽,睾丸生精小管的基膜完整;2h和3h组生精小管生精细胞层数减少,线粒体轻微空泡改变,线粒体嵴扩张,支持细胞内质网扩张明显,有局部液化灶,生精小管基膜轻微波纹状;睾丸间质可见炎性细胞浸润,多为分叶的中性粒细胞;4h和5h组睾丸间质血管中充血明显,血管内壁有大量的炎性细胞贴壁现象,血管壁增厚呈玻璃样变,精原细胞有核碎裂现象,细胞界限不清,基膜间隙增宽,基膜皱折,精子细胞顶体位置未见顶体,精子细胞局部有空泡,界限不清,细胞膜不完整;6h组睾丸生精小管内主要为精原细胞和初级精母细胞,精原细胞与基膜脱离,基膜有"分层"现象,支持细胞、精母细胞肿胀明显,细胞膜不完整,界限不清,生精小管内可见多核巨细胞.结论:单侧睾丸动脉结扎/再通可引起睾丸生精细胞的缺血性损伤和坏死,生精上皮细胞和血-睾屏障的病理变化随缺血时间的延长而加重.     

凋亡生精细胞的观察

用瑞－姬法观察凋亡生精细胞的各种形态，即凋亡的初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞，并观察了凋亡的前列腺上皮细胞的形态，就生精细胞凋亡原因进行了分析。     

海洛因对小鼠初级精母细胞影响的形态定量分析

将昆明小鼠随机分为低(0.025)、中(0.05)、高(0.1)剂量组及生理盐水对照组,以2号海洛因经腹腔注射染毒,20天后,取睾丸组织制成石蜡切片.HE染色,光镜下观察生精小管上皮细胞的形态变化,并应用图像分析系统对初级精母细胞的形态参数进行了分析;结果表明,(1)光镜观察 对照组及低剂量组小鼠睾丸组织未见明显的变化;中剂量组小鼠睾丸曲细精管上皮有不同程度的组织改变;高剂量组小鼠生精管壁细胞明显地出现上皮层次减少,精子细胞和精子减少,并发现曲细精管内有脱落的生精细胞;(2)形态定量分析显示 低剂量组及中剂量组各形态参数(中剂量组圆形度除外)较对照组无显著差异;高剂量组初级精母细胞核面积、核灰度与对照组相比无显著差异,细胞面积、细胞周长及浆面积较对照组明显增大(P<0.05).而核浆比例、圆形度较对照组有减小(P<0.05).结果提示 海洛因可明显改变小鼠生殖细胞的形态结构.     

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的影响

目的 研究低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸生精细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响. 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg.d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg.d)+炔雌醇25μg/(kg.d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d)]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过原位缺口末端标记(TUNEL)染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化. 结果 TUNEL染色显示,在正常对照组,阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中.棉甾联合用药组和激素组,阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01).iNOS免疫组织化学显示,在正常对照组,在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性.在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在IX-XII期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达.在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05).iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至最低,3时间点表达量无统计学差别. 结论 iNOS蛋白在低剂量棉酚加甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;生精细胞凋亡数增加,可能与iNOS的表达增多有关.     

葛根素减轻乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡

目的 观察乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡及葛根素的干预。方法 将大鼠30 只,随机均分为对照组、乙醇组及葛根素干预组。于实验第40天免疫组织化学法（SABC）检测左侧睾丸各组Bcl-2、Bax 蛋白在生精细胞的表达; RT-PCR检测右侧睾丸各组Bcl-2及Bax mRNA的表达;TUNEL 法检测生精细胞的凋亡。结果 醇组平均每个生精小管断面中Bcl-2 蛋白阳性细胞数和A值低于对照组(P<0.01),而平均每个生精小管断面中Bax 蛋白的阳性细胞数和A值高于对照组(P<0.01);乙醇组Bax mRNA表达较葛根素干预组及对照组强（P<0.05）,而Bcl-2 mRNA表达较葛根素干预组及对照组弱（P<0.05）;乙醇组每个生精小管横切面中的凋亡细胞数目高于对照组(P< 0.01),葛根素干预组显著缓解上述变化。结论 根素对乙醇导致的大鼠生精细胞凋亡有干预作用。     

三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸组织雄激素受体和c-kit表达的影响

目的 通过检测三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸生精小管的形态学变化和睾丸组织雄激素受体(AR)和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达,验证三七复方合剂对慢性甲醛熏染的疗效。 方法 将18 只SD 雄性大鼠随机均分为对照组、甲醛组和治疗组,其中甲醛组和治疗组在甲醛熏染箱内熏染8周（8h/d）,治疗组自第5周起每天给予三七复方合剂灌胃治疗,持续4周。实验结束时,所有大鼠称量体重和睾丸重量,组织切片行HE染色和免疫组织化学检测,观察睾丸生精小管的形态学变化及睾丸组织AR和c-kit的表达。 结果 甲醛组鼠重和睾丸重量明显下降;经三七复方合剂治疗后,鼠重和睾丸重量较甲醛组明显增加（P<0.05）。甲醛组大鼠的睾丸生精小管萎缩,小管上皮层细胞排列紊乱,精子明显减少;三七复方治疗4周后基本恢复正常,管腔内可见大量精子。甲醛组睾丸组织ＡＲ和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显减弱,治疗组生精上皮细胞的雄激素受体和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显增强（P<0.05）,达到正常水平。 结论 较长时间甲醛熏染可使大鼠的体重和睾丸重量下降,生精小管损伤,睾丸组织中多种细胞AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达下降,三七复方合剂的应用有较明显治疗效果。     

巴戟天对环磷酰胺诱导的大鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨巴戟天在环磷酰胺诱导的大鼠生精障碍动物模型中的作用,研究巴戟天对大鼠生精功能的影响。方法:检测大鼠的精子活力、精子密度、睾丸指数、附睾指数及组织结构变化;酶联免疫吸附法检测血清睾酮、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)含量。结果:与空白对照组相比,模型组睾丸指数、附睾指数、精子活力以及精子密度降低;治疗组相对模型组睾丸指数、附睾指数、精子活力、精子活动率均显著增高;H-E染色显示模型组生精小管直径缩小,间距增宽,生精上皮变薄,生殖细胞数量显著减少;治疗组与模型组比较生精小管壁增厚,含有精子的生精小管显著增多;模型组与空白对照组比较血清睾酮显著降低;治疗组与模型组比较其血清睾酮显著增加。结论:巴戟天对环磷酰胺诱导的生精障碍睾丸具有改善睾丸生精小管结构,促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能。     

微囊藻毒素亮氨酸精氨酸(MC-LR)损伤睾丸支持细胞免疫反应及细胞生物学行为的机制研究进展

微囊藻毒素亮氨酸精氨酸(MC-LR)是水华爆发时微囊藻属、鱼腥藻属等蓝藻产生的一种对人类有致癌性的藻毒素。MC-LR可对雄性动物生殖系统产生毒性，导致不育，主要表现为诱导细胞凋亡、破坏细胞骨架、干扰DNA损伤修复途径或损伤血睾屏障(BTB)功能等。睾丸支持细胞(Sertoli细胞)是生精小管中与生精细胞直接接触的体细胞，可通过分泌多种细胞因子和免疫抑制因子调节免疫反应以维持睾丸免疫稳态，亦可与邻近生殖细胞形成BTB,为各级生精细胞提供营养、支持和保护作用的微环境。MC-LR可引发睾丸Sertoli细胞炎症、诱导细胞凋亡、破坏BTB完整性，进而造成睾丸生精功能障碍。     

精索静脉曲张大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达和细胞凋亡的研究

目的：研究精索静脉曲张（VC）大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达与细胞凋亡及其机制。 方法： 选取35只成年健康雄性 Wistar大鼠，随机分为VC组（VG, n=20）和假手术组（SOG, n=15）。术后10周，取双侧睾丸，采用火焰原子吸收法测定线粒体钙、采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2/Bax蛋白表达。 结果： VC组大鼠双侧睾丸生殖细胞线粒体钙的含量明显低于SOG组，生殖细胞凋亡显著增多，Bcl-2表达显著降低，Bax表达显著升高,但双侧睾丸生殖细胞凋亡率差异无显著。 结论： VC时，大鼠睾丸生殖细胞凋亡明显增加，提示VC时所致的男性不育可能是在某种凋亡诱发因素（高温、毒素返流、氧自由基等）作用下，线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达的变化直接对生殖细胞产生影响,导致男性不育。     

磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶在大鼠睾丸的表达

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的3个亚家族成员细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N-端激酶(JNK)和p38 MAPK的活化形式在睾丸中的定位,了解MAPKs在生精过程中所起的作用。方法免疫组织化学方法检测正常大鼠睾丸中磷酸化的p-ERKJ、NK、p38 MAPK的表达情况。结果正常大鼠睾丸中p-ERK主要分布于精原细胞、细线前期到粗线期的初级精母细胞以及9~12期长形精子细胞的细胞核,p-JNK则主要位于支持细胞与支持细胞、支持细胞与生精细胞(尤其是19期精子细胞)之间,而p-p38 MAPK除了在生精小管的部分细胞胞质中有分布外,其表达最明显的部位是在间质细胞的细胞质。结论ERKJ、NK和p-38 MAPK分别定位于正常大鼠睾丸内的不同部位,提示MAPKs不同的亚家族成员分别在精子发生的不同环节中发挥主要作用。ERK可能参与生精细胞增殖、分化的信号转导,JNK则可能通过调节细胞的黏附而最终影响生精细胞的迁移与精子释放过程,而p38 MAPK除了可能与JNK一起参与精子释放的调节外,最主要的作用可能是睾酮合成分泌的调节。     

“生精胶囊”对大鼠的生精作用的研究

本文用病理学的计数方法研究了“生精胶囊”对大鼠的生精作用。结果表明“生精胶囊”能明显增加睾丸曲细精管内生殖细胞数目、睾丸内精子数目、曲细精管数量及其直径和曲细精管内细胞层数,增加精子活率而对初级精母细胞直径及精子活动力无明显影响。为临床该药治疗“男性不育少精症”提供了科学依据。     

己烯雌酚对幼年香猪睾丸与附睾雌激素受体和一氧化氮合酶表达和分布的影响

目的 探讨己烯雌酚（DES）对幼年香猪睾丸和附睾中雌激素受体（ERs）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响,及DES对诱导雄性动物生精异常的作用机制。 方法 将20只20～25日龄幼年雄性香猪分成４组,对照组只注射生理盐水,实验组经腹腔每天注射DES(实验1组：0.03mg/kg;实验2组：0.3mg/kg;实验3组：3mg/kg),连续注射9d。最后１次注射24h后手术取出左侧睾丸和附睾组织经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规制备5μm石蜡切片,采用免疫组织化学SP法检测睾丸和附睾组织中ERα、ERβ和eNOS的表达。 结果 ERα只在输出小管上皮细胞胞核中表达;ERβ在输出小管上皮细胞、间质细胞及附睾管上皮细胞胞核中均有表达,在睾丸生精小管细胞胞质中也有少量表达。DES能够使ERα在输出小管中的表达率显著下降（P<0.05）。随着DES用量的增多,ERβ在输出小管和附睾管中的表达率显著升高（P<0.05）,当DES用量为3mg/kg时ERβ在输出小管和附睾管中的表达率明显高于用量0.03mg/kg和0.3mg/kg（P<0.05）。但0.03mg/kg用量的DES却使睾丸生精小管中ERβ的表达率显著性下降（P<0.05）,并在0.3mg/kg和3mg/kg用量时在睾丸生精小管中未能检测到ERβ受体的表达。eNOS在睾丸生精小管细胞和输出小管上皮细胞中都有表达,DES能促进eNOS在睾丸生精小管细胞中表达（P<0.05）而降低其在输出小管细胞中表达（P<0.05）。结论 DES明显影响ERs和eNOS在睾丸和附睾中的表达。     

羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响.方法:雄性性成熟小鼠,随机分为对照组(蒸馏水灌胃),模型组(醋酸铅灌胃),给药组(醋酸铅灌胃+腹腔注射羊睾丸提取液),染毒2周.Tunel法观察睾丸生精细胞的凋亡,透射电镜观察生精细胞超微结构的变化. 结果:与对照组相比,模型组睾丸生精细胞凋亡指数明显增高,多数细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化,溶酶体增多;与模型组相比,给药组睾丸生精细胞凋亡指数有所降低,细胞结构趋于正常,核膜结构清晰,线粒体数量增多.结论:羊睾丸提取液可抑制铅染毒小鼠睾丸生精细胞的凋亡,对精原细胞、精母细胞、精子细胞的超微结构具有显著的保护作用.     

饮酒对小鼠睾丸生精小管一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原表达及细胞凋亡影响的研究

目的　探讨酒精对小鼠睾丸的组织结构、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞凋亡的影响。　方法　用 5 %、10 %及 15 % 3种不同浓度的酒精作用于 2 2d龄小鼠 ,取睾丸做石蜡切片、HE染色 ;用免疫组织化学方法检测睾丸eNOS、细胞增殖的变化 ;TUNEL法检测细胞凋亡的变化 ,并进行统计学分析。　结果　随着酒精浓度的增大 ,睾丸组织结构发生明显改变 ,生精小管的直径逐渐减小 ,eNOS阳性细胞面积密度逐渐增大 ,单位面积内PCNA阳性细胞和凋亡细胞数目增加 ,高浓度酒精组与其他组差异极显著 (P <0 0 1)。　结论　酒精可使生精小管的直径变小 ,eNOS及PCNA表达增强 ,凋亡细胞增加并随酒精浓度的增大而变化加重。这可能是过量饮酒导致生精细胞减少 ,生殖能力降低的重要因素。