视黄醇酸受体拮抗剂LE135诱导大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化

<正>用成体干细胞修复软骨损伤是目前的研究热点,其中骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)可以诱导成软骨细胞,转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)可以通过活化成软骨标志物诱导BMMSCs成软骨,但分化软骨细胞容易肥大且生长因子可能引发免疫反应。有研究者致力于寻找适合的药物来诱导BMMSCs成软骨分化,有报道视黄醇酸受体是一种可能的药理     

体外应用大鼠胰腺提取物诱导小鼠间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞

目的 探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法. 方法 传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分化小鼠BMMSCs为IPCs,首先取18瓶小鼠BMMSCs随机分为6组,每组3瓶,分别加入RPE 10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L,筛选出最佳的分化剂量,然后用最佳的分化剂量(50mg/L)分化BMMSCs,免疫酶细胞化学鉴定细胞内胰岛素的表达;双硫腙染色检测胰岛素产生细胞的分化和纯度.放射免疫分析检测C肽片段表达. 结果 50mg/L RPE可以使间充质干细胞分化良好,形态较规则,1周后细胞分化成熟,双硫腙染色呈现猩红色;免疫酶细胞化学和免疫荧光细胞化学显示:胰岛素表达阳性,C肽放射免疫学显示有C肽释放. 结论 RPE可以使小鼠的骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞.     

干细胞治疗骨质疏松症的可能与可行*

背景：药物治疗骨质疏松并不理想,近年来越来越多的科学家尝试采用干细胞移植方法治疗骨质疏松症。 目的：旨在探究通过干细胞治疗骨质疏松的进展,以促进其临床应用。 方法：由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI) 1997-05/2011-10相关文献。在标题、摘要、关键词中以“stem cell,osteoporosis,bone metabolism,osteoporosisbone marrow mesenchymal stem cells(BMMSCs),Adipose-derived stem cells (ADSCs)或“干细胞,骨质疏松,骨代谢,骨髓间充质干细胞,脂肪源干细胞”为检索词进行检索。选择文章内容与干细胞治疗骨质疏松有关者,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章。 结果与结论：初检得到144篇文献,根据纳入标准选择50篇文献进行综述。应用干细胞治疗骨质疏松主要是通过增加成骨细胞的数量来达到治疗目的,常用的方法有干细胞移植及诱导干细胞分化。干细胞可以从根本上治疗骨质疏松,并且能避免药物治疗的毒副作用,具有广阔应用前景。 关键词：骨质疏松;干细胞;骨代谢;骨髓间充质干细胞;脂肪源干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.01.032      

补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的研究不同浓度的补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成骨分化的影响,为临床应用补骨脂素治疗骨质疏松症提供理论依据。方法选取8周龄健康雄性SD大鼠,取双侧股骨、胫骨,对大鼠的BMMSCs进行分离、原代培养和细胞表型鉴定。取第3代大鼠BMMSCs,体外利用成骨诱导培养基进行不同浓度补骨脂素的药物诱导,MTT法检测不同浓度的补骨脂素对大鼠BMMSCs生长的影响;通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定、Western blot法和茜素红染色方法评价不同浓度补骨脂素对大鼠BMMSCs成骨分化能力。结果第3代大鼠BMMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准,成骨诱导后给予15μmol/L补骨脂素对大鼠BMMSCs的增殖作用最佳,ALP活性、Runx-2表达和钙化结节数目均明显高于经典成骨诱导组、5μmol/L和10μmol/L和20μmol/L补骨脂素组。结论15μmol/L补骨脂素成骨诱导促进BMMSCs向成骨分化,从而起到防治骨质疏松的作用。     

间充质干细胞与巨噬细胞共培养体系的细胞因子表达模式研究

目的比较外周血间充质干细胞(PBMSCs)和骨髓间充质干细胞(BMMSCs)与巨噬细胞(M0型)共培养后的细胞因子表达差异。方法分离培养大鼠PBMSCs、BMMSCs和M0型巨噬细胞,采用Transwell培养体系分别进行PBMSCs和BMMSCs与M0共培养,同时还采用PBMSCs、BMMSCs和M0单独培养组作为对照。共培养3 d后采用Bio-Plex免疫微球法对各组培养上清液中IL-10、IFN-γ、IL-1β、TNF-α细胞因子含量进行检测分析。结果与PBMSCs组比较,PBMSCs+M0共培养上清液中的IL-10、IL-1β含量升高(P0.05),TNF-α的含量降低(P0.05),而IFN-γ的含量没有变化(P0.05);BMMSCs+M0共培养组的细胞因子表达变化模式同PBMSCs+M0共培养组,但变化程度均高于后者(P0.05)。结论 PBMSCs和BMMSCs与M0共培养均可促进IL-10、IL-1β表达,抑制TNF-α的表达,且BMMSCs的调节能力强于PBMSCs,表明PBMSCs和BMMSCs均具有炎症免疫调节潜力并具有差异性,为间充质干细胞在不同疾病状态下的治疗应用提供了新的实验依据。     

骨髓间充质干细胞在小鼠早衰性骨质疏松中的细胞生物学功能研究

 目的：研究在小鼠早衰性骨质疏松症中骨髓间充质干细胞（BMMSCs）功能的变化,为揭示骨质疏松发病机制提供理论依据。方法：以早衰小鼠（SAMP6）为动物模型（对照小鼠：SAMR1）,分离培养3个月与6个月小鼠的BMMSCs,利用流式细胞术进行干细胞表型鉴定后用于基因芯片检测筛选差异表达基因,并对该结果进行了Pathway分析。分离培养鉴定2组的BMMSCs并对其成骨与成脂的分化能力进行比较,在诱导分化后进行实时定量RT-PCR检测相关基因的表达,揭示骨髓间充干细胞功能在早衰性骨质疏松中的改变。结果：本研究证明了随着年龄的增长,骨髓间充质干细胞成骨能力降低而成脂能力增高;芯片结果的Pathway分析显示,转化生长因子β（TGF-β）信号通路有4个关键基因发生改变,提示TGF-β信号通路可能在此过程中发挥重要作用。结论：随着年龄增长,早衰性骨质疏松个体的骨髓间充质干细胞生物学功能及TGF-β通路发生了改变,为通过改变骨髓间充质干细胞的生物学功能从而有效逆转治疗、改善骨质疏松状态提供靶点和理论依据。     

骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化过程在银屑病发病中的作用

目的:将银屑病患者骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外分化为血管内皮细胞(VEC),并对定向分化的VEC活性进行初步研究,为银屑病患者BMMSCs生物特性的深入研究提供依据。方法:寻常型银屑病患者20例,健康对照组15例为骨髓象正常者。采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,通过贴壁法培养BMMSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面标志;加入血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导BMMSCs向VEC分化,流式细胞仪进行细胞表型鉴定;免疫细胞荧光技术鉴定VEC标志物VWF的表达;体外血管成形试验检测诱导的内皮细胞体外成形能力。结果:流式测定显示两组培养的BMMSCs高表达CD44、CD29,而HLA-DR、CD45、CD34阴性表达;银屑病组CD34、CD45、ICAM-1、HLA-DR阳性表达,且明显高于对照组(P﹤0.05);免疫细胞化学显示两组都可分化为VEC,与正常对照组比较具有统计学差异(P﹤0.05),银屑病患者诱导的VEC体外血管成形能力较强。结论:银屑病患者BMMSCs生物学活性异常,且易于转分化为VEC。银屑病患者BMMSCs-VEC发育分化系统在银屑病患者皮损真皮乳头层微血管异常增生过程中可能发挥重要的作用。     

放射抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨潜能并导致骨损伤

目的 观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨组织的影响.方法 分离、培养正常的及接受4Gy放射后28d的小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色法鉴定BMMSCs体外成骨分化潜能的改变,并通过骨组织形态学和骨密度(BMD)检测放射后小鼠体内骨组织的相关变化.结果 4Gy照射28d后小鼠BMMSCs的成骨潜能明显降低,同时体内骨组织结构破坏,小鼠骨密度降低.结论 放射损伤后小鼠BMMSCs的成骨潜能显著降低,可能在干细胞水平参与了放射后骨损伤的发生.     

沉默IFN-γR表达对大鼠BMMSCs免疫调节能力的影响

目的:通过沉默大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)干扰素γ受体(IFN-γR)基因表达,研究抑制IFN-γ信号通路对大鼠BMMSCs免疫调节能力的影响。方法:根据大鼠IFN-γR基因序列,构建沉默IFN-γR基因的重组慢病毒shIFNγR-LV,并转染大鼠BMMSCs,沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表达;混合淋巴细胞培养实验分别检测对照组、BMMSCs阴性对照(BMMSC-NC)组和BMMSC-shIFNγR组淋巴细胞的活力和炎症因子浓度。结果:构建的慢病毒shIFNγR-LV能显著降低大鼠BMMSCs的IFN-γR mRNA表达;混合淋巴细胞培养实验显示,相对BMMSC-NC组,BMMSC-shIFNγR组抑制淋巴细胞活力的作用减弱(P0.05)。混合淋巴细胞培养体系中,BMMSC-NC组肿瘤坏死因子α浓度低于BMMSC-shIFNγR组,而白细胞介素10浓度高于BMMSC-shIFNγR组(P0.05)。结论:利用RNA干扰技术能有效沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表达,并能显著降低BMMSCs的调节免疫功能。     

麝香多肽体外诱导成年大鼠和人骨髓间充质干细胞定向分化为神经元的研究

目的:观察麝香多肽体外定向诱导成年大鼠和人骨髓间质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)分化为神经元的能力。方法:采用含100-150mg/L麝香多肽的无血清L-DMEM培养基诱导成年大鼠和人BMMSCs分化为神经元,免疫组化鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经巢蛋白(nestin)的表达。结果:成年大鼠和人BMMSCs在加入含麝香多肽的无血清L-DMEM培养基诱导后,BMMSC胞体收缩,突起伸出,形似神经元;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:麝香多肽可以在体外诱导成年大鼠和人BMMSCs定向分化为神经元。     

雌激素缺乏导致的骨质疏松发病过程中骨髓间充质干细胞FasL表达降低对CD4+T淋巴细胞凋亡的影响

 目的：研究雌激素在骨质疏松发病过程中导致骨髓间充质干细胞（BMMSCs）Fas配体（FasL）表达降低对CD4+T淋巴细胞凋亡的作用。方法：选用8周龄健康雌性小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立绝经后骨质疏松模型。选用同一批次周龄相同、体重相近的健康小鼠行双侧卵巢附近脂肪组织部分切除,建立假手术组（sham）,Micro-CT确定模型成功建立。流式细胞术对BMMSCs行表型鉴定,将OVX组、sham组和sham+雌激素刺激组BMMSCs与激活的T淋巴细胞共培养,以Annexin V/7-AAD/CD4流式细胞仪计数3组共培养体系中CD4+T淋巴细胞的凋亡差异,用实时荧光定量PCR和Western blotting检测OVX组、sham组及不同浓度雌激素刺激BMMSCs后FasL的表达情况。结果：流式检测显示sham+雌激素刺激组CD4+T淋巴细胞凋亡程度大于sham组(P<0.05),sham组CD4+T淋巴细胞凋亡程度大于OVX组(P<0.05),实时荧光定量PCR及Western blotting显示OVX组FasL mRNA及蛋白水平表达都较sham组低。在一定范围内不同浓度雌激素刺激下的sham组BMMSCs中FasL mRNA及蛋白表达与雌激素浓度呈梯度上升。结论：雌激素能够调控BMMSCs中FasL的表达,雌激素调控BMMSCs表达FasL能够影响CD4+T淋巴细胞凋亡的改变,这可能与绝经后骨质疏松发病相关。     

诱导性多能干细胞的研究进展及应用前景

<正>干细胞治疗被认为是21世纪治疗人类疾病最理想的模式。根据分化潜能的不同,干细胞可以分为全能干细胞、多能干细胞、专能干细胞;根据来源的不同,干细胞可分为     

PFT-α与BMP-2联合诱导大鼠BMMSCs分化为心肌样细胞

目的探讨p53抑制剂(PFT-α)与骨形态发生蛋白2(BMP-2)联合诱导对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法分离大鼠BMMSCs进行培养、传代及纯化,分别应用PFT-α、BMP-2及两者联合对第2代BMMSCs定向诱导,不加诱导剂为对照组。倒置显微镜下观察并记录对数增殖期细胞的形态变化;流式细胞计数法鉴定BMMSCs表面联合标记物;免疫组化法检测c Tn I、Cx43及TPM的表达;免疫荧光检测技术对c Tn I和Cx43进行荧光标记;透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。结果经诱导后的BMMSCs以梭形为主,细胞体积变大。CD45、CD29和CD90的阳性率分别为0.3%、86.5%和84.7%。诱导组细胞的c Tn I、Cx43及TPM均呈阳性表达,对照组为阴性。诱导组细胞胞质内Cx43免疫荧光染色表达呈红色,c Tn I则呈绿色,胞核椭圆位于细胞中央,胞质内可见平行排列的肌丝、线粒体和糖原等。结论 PFT-α和BMP-2均可单独诱导BMMSCs分化为心肌样细胞,两者联合应用更加高效、安全。     

骨髓间充质干细胞在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是所有慢性肝病的共同病理基础,严重影响人类健康,大量肝病患者因缺乏理想、有效的治疗手段而死亡。骨髓间充质干细胞因具有可塑性、取材方便、不存在免疫排斥问题以及易于外源基因的转染和表达等优点而被广泛用于疾病研究,为肝纤维化的有效治疗带来希望。就骨髓间充质干细胞的概况和其在肝纤维化中的研究进行阐述。     

大鼠骨髓间质干细胞定向分化的心肌细胞间形成闰盘样结构

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞（BMMSCs）定向分化为心肌细胞的模型，了解细胞间藕联情况。方法： 采用贴壁筛选法分离BMMSCs，体外扩增，5-氮胞苷(5-aza)定向诱导第2代BMMSCs分化为心肌细胞，取继续培养1周、2周、3周的细胞进行免疫细胞化学染色，鉴定横纹肌肌动蛋白和闰盘样结构的存在。结果： 5-aza处理后1周、2周、3周均可见横纹肌肌动蛋白染色阳性细胞。5-aza处理后1周及2周连结蛋白43在部分细胞上表达:呈核周散在分布的棕黄色颗粒，5-aza处理后3周连结蛋白43 在细胞密度大的区域呈核周聚集成线形分布的棕黄色颗粒，个别细胞间可见此结构,类似正常心肌的闰盘结构。结论： 骨髓间质干细胞分化为心肌细胞过程中，随培养时间延长及细胞密度增加逐渐形成闰盘样结构。     

间充质干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种起源于中胚层的成体干细胞,可以向所有中胚层来源的细胞及部分外胚层来源的细胞分化,且MSCs具有来源广泛、易于体外分离培养、免疫原性低,移植后无免疫排斥反应和易于基因转染等特点。血管内皮细胞属于中胚层细胞,MSCs可定向诱导分化为血管内皮细胞,在体外构建成理想的血管移植物,用于心脏组织工程瓣、血管组织工程以及再生医学领域。本文就间充质干细胞的生物学特性及诱导分化为内皮细胞的相关研究以及研究中存在的问题作一综述。     

自体骨髓间充质干细胞在脊髓损伤中的应用展望

近年来研究发现 ,除了胚胎干细胞 ,机体内还存在一些组织干细胞 ,它们具有一定的自我更新和分化能力。在骨髓中存在一种间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs) ,具有多向分化的潜能 ,在特定的条件下向成骨细胞 ,软骨细胞 ,脂肪细胞 ,神经细胞等方面分化。与其它的干细胞相比 ,骨髓间充质干细胞易于分离和培养扩增 ,还易于外源基因的导入和表达 ,有望成为一种新的细胞治疗和基因治疗的靶细胞。在此基础上本文探讨了骨髓自体间充质干细胞体外培养后移植 ,修复损伤脊髓的可行性     

α2-巨球蛋白减轻X射线所致人骨髓间充质干细胞成骨分化障碍

目的:初步探讨α2-巨球蛋白(α2M)对X射线导致的人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs)成骨分化障碍的作用。方法:体外培养h BMMSCs,取第4代细胞经8 Gy X射线照射后,进行成骨诱导并以0.5和1.0 g/Lα2M分别作用于照射后的h BMMSCs。成骨诱导的第7天检测碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-q PCR法检测Runt相关转录因子2(RUNX2)的mRNA表达;成骨诱导的第14天采用Western blot检测骨甘氨酸(OGN)的蛋白表达;成骨诱导的第21天采用茜素红染色法检测钙结节的形成情况。此外,正常培养的h BMMSCs于8 Gy X射线照射后加入α2M作用24 h,提取细胞检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测含锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)的蛋白表达。结果:h BMMSCs经8 Gy X射线照射后给予0.5和1.0 g/Lα2M处理,与未加入α2M的单独照射组比较,ALP活性、RUNX2的mRNA表达、OGN和Mn SOD的蛋白表达及SOD活力均升高,钙结节形成增多。结论:α2M可明显提高放射损伤后h BMMSCs的成骨分化能力,上调SOD活力和Mn SOD的蛋白表达水平。     

脂肪来源干细胞诱导表皮细胞化的研究现状与进展

背景：脂肪干细胞通过向表皮细胞进行诱导可以对难愈创面的修复提供理想的解决方法。 目的：通过分析总结近10年以来脂肪干细胞的研究方法和思路,期待能为脂肪干细胞诱导表皮细胞化提供总结和探索。 方法：由第一作者分别以“干细胞、脂肪干细胞”、“ADSCs 、adipose derived stem cells” 为检索词,应用计算机检索重庆维普(VIP)期刊全文数据库以及万方数据库2001-01/2010-10有关文章,纳入有关脂肪干细胞组织工程的文献。排除与研究目的无关和内容重复者。保留26篇文献做进一步分析。 结果及结论：脂肪干细胞作为一种种子细胞,有望在一定的条件下定向诱导分化成为表皮细胞,并且提高诱导分化率和扩增能力,最终达到临床治疗使用的目的。其具有的来源丰富、易于获得、有多向分化潜能、相容性好、对患者损伤小等特点无疑是其他众多间充质干细胞所无法比拟的。但同时,脂肪干细胞在无免疫力的移植受体上表现的肿瘤样无限增生特性,在进入临床试验前仍需要寻找并建立合适的动物模型进行长期观测以确定其移植后的安全性;其次,脂肪干细胞向表皮细胞诱导尚无一安全稳定并行之有效的培养、诱导方式;以及在批量提取生产脂肪干细胞的过程中,如何保障细胞质量的均一稳定性仍然有待进一步研究。     

间质干细胞研究进展

间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)在体外不同的诱导条件下 ,可分化为多种非造血组织特别是中胚层和神经外胚层来源的组织细胞 ,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、成腱细胞和神经元样细胞等。另外 ,MSCs取材方便、易于在体外分离、扩增 ,又可在体内外表达多种治疗性的外源目的基因 ,因而可望成为细胞治疗和基因治疗的理想靶细胞