姜黄素对血管紧张素II刺激下内皮细胞的保护作用机制研究

研究姜黄素对血管紧张素II刺激下人脐静脉血管内皮细胞的保护性作用及其机制。方法 采用MTT法检测HUVECs的细胞活力;生化比色法和ELISA法检测细胞培养上清中SOD、MDA、LDH、NO及ET-1的含量;实时RT-PCR检测HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bcl-2、Bax基因的mRNA相对表达水平。结果 1×10-7 M AngII刺激可以使HUVECs活力降低,使细胞培养上清中SOD、NO含量减少,使MDA、LDH及ET-1含量升高。AngII刺激下HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平均有所上调,Bcl-2基因的mRNA相对表达水平均有所下调。不同剂量的姜黄素能够减少AngII刺激下对HUVECs的损伤作用,能够不同程度地上调SOD、NO的含量及Bcl-2基因的mRNA相对表达水平,同时不同程度地下调MDA、ET-1及LDH含量及Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平。结论 姜黄素对于AngII刺激下的HUVECs具有保护作用,其机制可能与减少细胞氧化应激损伤以及抑制细胞线粒体途径凋亡有关。     

黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞(HUVECs)损伤的保护作用及机制。方法 HUVECs分为正常组,模型组,阳性药组(卡维地洛),黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组,各组水提醇沉液培养24 h后加入H_2O_2溶液使终浓度达到400μmol/L)。MTT法检测细胞存活率;检测细胞上清LDH(乳酸脱氢酶)活性,细胞内T-SOD(总超氧化物歧化酶)、NO、GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)、ET-1(内皮素-1)水平;Real-time PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞存活率减低(P0.01);与模型组比较,黄芪桂枝五物汤各组存活率升高(P0.01);LDH活性降低、NO水平升高、T-SOD活力增强、GSH-Px水平升高、ET-1水平降低(P0.05)。Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加(P0.05);Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增加(P0.05)。结论黄芪桂枝五物汤对H_2O_2损伤HUVECs有保护作用,其机制可能与提高内皮细胞T-SOD活性、促进细胞NO分泌、提高细胞内GSH-Px水平,降低细胞内ET-1水平以拮抗氧化应激造成的细胞损伤,调控凋亡相关基因及蛋白Bax、Bcl-2,抑制线粒体凋亡途径有关。     

桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组及桂郁金醇提物高(10 g/kg)、中(5 g/kg)、低(1 g/kg)剂量组,灌胃给药2次/d,连续3 d,最后一次给药1 h后,用10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞3 h,建立细胞氧化应激模型,采用CCK-8试剂检测细胞存活率,明确H_2O_2的最适造模浓度为800μmol/L;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;利用试剂盒检测细胞培养上清液中SOD、GSH-Px、MDA、LDH、NO、t-PA、PAI-1、IL-6、TNF-α水平;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;利用RT-PCR技术检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果:与模型组比较,各剂量含药血清均能升高细胞存活率,高剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平,降低LDH、MDA、t-PA、IL-6、TNF-α水平及Caspase-3、Bax mRNA表达,升高Bcl-2/Bax比值;中剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平及Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比值,降低LDH、t-PA水平及Caspase-3 mRNA表达;低剂量能升高NO水平,降低t-RA水平及Caspase-3 mRNA表达。结论:桂郁金醇提物含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞具有保护作用,其机制可能与升高SOD、GSH-Px活性,降低LDH、MDA含量,升高扩血管因子NO,调节纤溶系统,减少炎症因子含量,减少细胞凋亡,调控Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达有关。     

吉马酮改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

该文主要研究吉马酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。使用500μmol·L~(-1)H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞3 h,从而建立氧化损伤模型,再用不同浓度吉马酮(20,40,100,150,200μmol·L~(-1))保护24 h。利用MTT法检测吉马酮对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;ELISA法检测PGI2,TXB2,ET-1,t-PA,PAI-1,TNF-α和IL-6;硝酸还原酶法检测NO;比色法检测NOS及GSH-Px;再分别采用TBA法、WST-1法和微量酶标法检测MDA,SOD和LDH的含量等;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达。结果表明500μmol·L~(-1)H_2O_2作用3 h细胞损伤率达到52%,而在20~200μmol·L~(-1)随着吉马酮浓度的增大被损伤细胞活性不断增强。与正常组比较,H_2O_2损伤使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA降低,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA增加;与模型组比较,吉马酮(200,100,50μmol·L~(-1))使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA增加,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3mRNA减少。Hoechst 33258荧光染色与正常组比较,模型组细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光,细胞数量明显减少;与模型组比较,给药组的蓝色荧光强度降低等。以上研究结果表明,吉马酮可能通过抗氧化及抑制细胞凋亡等作用,从而改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用。     

芳香新塔花总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、一氧化氮(NO)和细胞凋亡的影响及其机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,复方丹参滴丸组(130 mg·kg-1),ZCF低、中、高剂量组(75,150,300 mg·kg-1)。通过结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支30 min,再灌注3 h建立缺血再灌注损伤模型,测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA),NO和一氧化氮合酶(NOS)等相关指标的变化。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价心肌梗死程度,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量显著升高,SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性显著降低,心肌梗死程度严重,出现明显的细胞凋亡,显著下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达(P0.01)。与模型组比较,ZCF给药组能明显降低大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量,提高SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性,同时可降低心肌梗死面积,改善缺血心肌的病理变化,抑制细胞凋亡,显著上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,提高Bcl-2/Bax水平(P0.05,P0.01)。结论:ZCF可减轻大鼠缺血心肌的损伤作用,其机制可能与减少氧自由基的产生,促进NO合成,上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达,抑制细胞凋亡有关。     

甘草次酸通过抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路保护心脏骤停心肺复苏大鼠心脏功能

目的:观察甘草次酸防治心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)大鼠心脏功能的作用,并探讨其抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路分子机制。方法:将60只大鼠随机分为:阴性对照组、模型组、阳性对照组(依达拉奉6 mg/kg)及甘草次酸50、100、200mg/kg剂量组,每天给药1次,连续6 d。实验第7 d,除阴性对照组外,其它各组均采用窒息法建立大鼠CA/CPR模型,并再给予相应药物1次。末次给药后1 h,记录大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(min))及平均动脉压(MABP)等血流动力学参数;采用生化法测定血清LDH、CK及CK-MB含量的变化;取大鼠心尖组织,进行HE病理切片染色,镜下观察心肌组织病理学变化;采用生化法检测大鼠心肌组织SOD、MDA、GSH-Px及T-AOC水平;采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)及Western blot法检测大鼠心肌组织Caspase 3、Bax及Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,模型组大鼠LVEDP升高,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(min)、LVSP及MABP降低,血清LDH、CK及CK-MB含量明显升高;心肌组织SOD、GSH-Px及T-AOC含量降低,MDA含量明显增多;心肌组织肌纤维走行紊乱,有纤维化和断裂现象,部分细胞结构受损、变性或坏死,可见少量炎性细胞浸润,且Caspase 3、Bax mRNA和蛋白表达水平明显上调,Bcl-2 mRNA表达水平明显下调。与模型组比较,甘草次酸200 mg/kg组大鼠LVEDP降低,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(min)、LVSP及MABP升高,血清LDH、CK及CK-MB活性下降;心肌组织SOD、GSH-Px及T-AOC含量明显升高,MDA含量明显下降;心肌组织病理损伤明显减轻,且Caspase 3、Bax mRNA和蛋白表达水平下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调。结论:甘草次酸对CA/CPR大鼠心脏功能具有保护作用,其作用机制与抑制氧化应激和下调Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。     

海风藤总黄酮抗氧化应激损伤作用研究

目的:观察海风藤总黄酮对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤的影响。方法:采用MTT法检测海风藤总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD),丙二醛(malondialdehyde MDA)及一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素1(Endothelin 1,ET-1)白细胞介素6(Interleukin6,IL6)、白细胞介素8(Interleukin8,IL8)的含量。结果:海风藤总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1、IL-6、IL-8水平。结论:海风藤总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO、IL-6、IL-8氧化应激及炎症相关因子有关。     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

葛根总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究葛根总黄酮对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:以HUVECs为研究对象,实验分为空白组、模型组、阳性药组(10μmol·L~(-1)依达拉奉)和葛根总黄酮10,20,40,80,160 mg·L~(-1)组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测葛根总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及NO含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中内皮素-1(ET-1)含量;采用二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.01),SOD活性,NO水平和e NOS蛋白表达显著降低(P0.01),MDA,ET-1水平,细胞ROS水平和VCAM-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,葛根总黄酮(40,80,160 mg·L~(-1))可以显著提高氧化应激损伤的HUVECs的存活率(P0.05,P0.01),葛根总黄酮(20,40,80 mg·L~(-1))可显著增加SOD活性,升高NO水平,显著降低MDA,ET-1水平,显著降低细胞ROS水平,显著升高e NOS,降低VCAM-1的表达(P0.05,P0.01)。结论:葛根总黄酮对H2O2诱导HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD,MDA,ET-1,NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白e NOS,VCAM-1的表达有关。     

姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯所致Eahy926细胞损伤的保护作用

目的 研究姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯(HTL)诱导融合内皮细胞株(eahy926)损伤的保护作用及其机制.方法 以体外培养的eahy926细胞为研究对象,建立HTL损伤模型,检测LDH漏出量,SOD和MDA含量,通过RT-PCR法检测细胞中对氧磷酶1( PONl) mRNA,TNF-α mRNA水平.结果 姜黄素可明显降低培养液中LDH活力,显著提高培养液中SOD含量,降低MDA含量;抑制HTL刺激的培养液中TNF-α浓度的升高,提高细胞中PONl mRNA水平,降低TNF-αmRNA表达.结论姜黄素对HTL诱导的eahy926细胞损伤具有一定保护作用.     

梓葛冻干粉对人脐静脉内皮细胞缺氧/ 复氧损伤的保护作用

目的:研究中药单体组方梓葛冻干粉对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,采用Krebs液建立缺氧/复氧损伤模型。用梓葛冻干粉干预后,采用MTT比色法测定细胞活力、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量、2,4-二硝基苯肼显色法测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量;Western blot法分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达。结果:与模型组相比,梓葛冻干粉12.5 mg.L-1显著提高细胞活力(P<0.05);梓葛冻干粉49.0,24.5,12.5 mg.L-1均显著提高缺氧/复氧后细胞SOD活性(P<0.05);梓葛冻干粉24.5,12.5 mg.L-1能显著减少LDH的释放量及降低MDA和NO的含量(P<0.05),并上调细胞Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01);梓葛冻干粉49.0,24.5,12.5 mg.L-1显著降低Bax的表达并上调Bcl-2/Bax(P<0.05,P<0.01),且梓葛冻干粉49.0,24.5 mg.L-1显著降低Caspase-3的表达(P<0.01)。结论:梓葛冻干粉可显著拮抗缺氧/复氧对HUVECs的损伤,可能与其抑制细胞过氧化损伤,增强细胞抗氧化和抗凋亡能力有关。     

三黄泻心汤活血化瘀优势方抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:研究三黄泻心汤活血化瘀优势方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响并探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用体外培养的HUVECs,分为空白组,ox-LDL损伤组(模型组),三黄泻心汤活血化瘀优势方15.63,31.25,62.50 mg·L-1组;用200 mg·L-1ox-LDL孵育24 h,造成HUVECs损伤模型;细胞存活率采用噻唑蓝(MTT)比色法测定,放射免疫法检测细胞上清液中内皮素(ET-1),6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α),血栓烷素B2(TXB2)含量,半自动生化分析仪检测抗氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)水平。采用试剂盒荧光定量法检测活性氧(ROS)含量,检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平酶联免疫吸附测定。细胞凋亡率及线粒体膜电位变化采用流式细胞术,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine aspartate-specific protease-3,Caspase-3),Caspase-9表达。结果:与空白组比较,模型组HUVECs存活率降低;MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平升高,SOD和NO含量降低,ROS的分泌增加,细胞凋亡率升高,Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量增加,Bcl-2的表达量减少(P0.05,P0.01)。与模型组比较,不同质量浓度的三黄泻心汤活血化瘀优势方使HUVECs存活率明显上升,显著降低MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平;提高SOD和NO含量,且减少ROS的分泌,降低细胞凋亡率,降低Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量,增加Bcl-2的表达量(P0.05,P0.01)。结论:在ox-LDL诱导损伤的HUVECs模型上,三黄泻心汤活血化瘀优势方具有抑制细胞凋亡,减轻炎性反应和抗氧化的作用,可能与抗动脉粥样硬化有密切关系。     

调脂颗粒干预血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞自噬水平的实验研究

目的研究调脂颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬水平的影响及其机制。方法采用中药血清药理学方法,以调脂颗粒含药血清和AngⅡ处理HUVECs,用MTT比色法检测血管内皮细胞生长的影响,Western blot检测各组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、beclin-1、SQSTM1/p62的相对表达量变化,免疫荧光法检测自噬小体的数量变化,用NO试剂盒检测各组NO含量的变化。结果 AngⅡ处理HUVECs对细胞活力无改变,调脂颗粒含药血清联合AngⅡ对细胞活力也无明显影响。AngⅡ刺激内皮细胞后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1表达量增加,SQSTM1/p62表达量降低,自噬小体数量显著增加,NO含量下降。调脂颗粒含药血清预处理后逆转了AngⅡ诱导的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1表达量的增多、SQSTM1/p62表达量的下降、自噬小体数量的减少及NO含量的降低(P0.05)。结论调脂颗粒对AngⅡ诱导的细胞自噬具有抑制作用,其机制可能与调节细胞内NO生成量有关。     

参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L~(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P0.01或P0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P0.01或P0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。     

舒心胶囊对缺氧致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察舒心胶囊对缺氧导致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法:体外培养HUVECs,建立缺氧模型,以透射电子显微镜技术观察细胞的微观结构;检测细胞培养液中LDH、NO、ET-1、Ang-Ⅱ及6-keto-PGF1α水平.结果:舒心胶囊能够稳定HUVECs的微观结构,显著降低细胞内LDH的释放及ET-1的分泌(P＜0.01),增加NO、PGI2的分泌(P＜0.01).结论:舒心胶囊对缺氧导致HUVECs损伤具有明显的保护作用.     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。     

苏木乙酸乙酯提取液通过miR-150/ELK1信号对血管内皮细胞凋亡的影响

目的观察苏木乙酸乙酯提取液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞凋亡及miR-150/ELK1信号通路的影响。方法通过ox-LDL诱导构建内皮细胞损伤模型,并给予SAEE、miR-150或SAEE联合miR-150干预。分别采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,硫代巴比妥酸法、比色法和黄嘌呤氧化酶法测定MDA含量、LDH释放量、Caspase-3和SOD活性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-150、ELK1、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达水平和Western blotting检测ELK1蛋白的表达水平。结果与模型组相比,SAEE能够显著改善ox-LDL诱导的HUVEC形态及排列,降低细胞内miR-150的表达和凋亡水平,增加ELK1蛋白及mRNA的表达水平,差异均具有统计学意义(P <0.05)。此外,SAEE组MDA含量和LDH释放量显著降低,SOD活性显著增加,Bax、Caspase-3 m RNA的表达水平和Caspase-3活性显著降低,Bcl-2 mRNA的表达水平显著增加,与模型组比较差异均具有统计学意义(P <0.05...     

通心络对血管紧张素Ⅱ致大鼠内皮损伤的保护作用

目的:观察中药通心络对血管紧张素Ⅱ致大鼠内皮损伤模型血管内皮的保护作用。方法:将54只SD大鼠随机分为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、通心络保护(TXL)组、对照(假手术)组,每组18只。每组分别于7、14、28d取材。AngⅡ组和TXL组分别于皮下埋置不同缓释终点的AngⅡ缓释泵,TXL组每天予以通心络(0.8g·kg-1·d-1)灌胃。测量颈总动脉血压,血浆AngⅡ、内皮素(ET-1)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量,扫描电镜观察内皮的病理损伤,检测凋亡基因Bax、Bcl-2和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶亚基p22phox基因的表达。结果:3组血压都未升高,但AngⅡ组和TXL组的AngⅡ水平明显高于假手术组。电镜显示TXL组血管壁上内皮细胞的剥脱面积明显较同时间点AngⅡ组少。TXL组血浆ET-1在14d较AngⅡ组降低(P<0.05),6-Keto-PGF1α水平以及Bax和p22phox基因表达在14、28d与AngⅡ组明显不同(P<0.05),Bcl-2/Bax比值在7、14、28d3时间点上较AngⅡ组升高(P<0.05)。结论:通心络可以抑制NADPH氧化酶p2...     

丹参破壁饮片、传统饮片中水溶性成分对心肌细胞保护作用对比研究

目的初步探讨丹参破壁饮片与传统饮片水溶性成分对缺血缺氧H9c2心肌细胞保护作用及分子机制,通过对比两者的药效差异分析丹参破壁饮片应用前景。方法将H9c2心肌细胞随机分为正常组,模型组,丹参破壁饮片水溶性成分低、中、高剂量组(1.6×10~(-5)、4×10~(-4)、10~(-2) mg·mL~(-1)),丹参传统饮片水溶性成分低、中、高剂量组(1.6×10~(-5)、4×10~(-4)、10~(-2) mg·mL~(-1))。采用CCK-8法检测细胞存活率;比色法测LDH、MDA、CK、T-SOD、ATP含量及活性;RT-PCR、Western Blot测Bax、Bcl-2、Caspase3 mRNA及蛋白表达。结果与模型组比较,丹参破壁饮片高剂量组可显著提高缺血缺氧H9c2细胞存活率,降低上清液LDH含量(P0.05);丹参传统饮片高剂量组及丹参破壁饮片中、高剂量组均可显著降低缺血缺氧H9c2细胞内MDA、CK浓度(P0.05),升高T-SOD浓度、ATP浓度(P0.05);丹参传统饮片高剂量组及破壁饮片中、高剂量组均可提高缺血缺氧模型H9c2细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白表达量(P0.05),降低Bax、Caspase3 mRNA、蛋白表达水平(P0.05)。丹参破壁饮片高剂量组调节Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达量效果最佳。结论丹参破壁饮片、传统饮片水溶性成分均可改善H9c2心肌细胞缺血缺氧,作用机制可能与调控MDA、LDH、CK、T-SOD、ATP含量及调节Bax、Caspase3、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平相关,且丹参破壁饮片水溶性成分对H9c2心肌细胞损伤的保护作用优于传统饮片。     

搜风祛痰法中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）核转录因子（NF-κB）mRNA及内皮素-1（ET-1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA,随机分为5组：正常对照组,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组,低浓度中药血清＋AngⅡ组,中浓度中药血清＋AngⅡ组,高浓度中药血清＋AngⅡ组。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-κB mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。