兔耳增生性瘢痕形成与外科常见致病真菌感染的关系

目的:分析外科感染常见致病真菌对兔耳创面增生性瘢痕组织块形成的影响。方法:实验于2004-02/07在新疆医科大学动物实验室和新疆医科大学病理科完成。选取新西兰大耳白兔12只,随机分为白色念珠球菌污染组、金黄色葡萄球菌污染组、空白对照组,4只/组。在各组兔耳腹侧制作直径为1cm全层皮肤缺损创面,创面形成时及术后第1天白色念珠球菌污染组分别于创面放置微量白色念珠球菌,金黄色葡萄球菌污染组于创面放置微量金黄色葡萄球菌,空白对照组不予任何干扰因素。观察各组创面愈合及增生性组织块发生情况,测定各组术后不同时间点成纤维细胞数及转化生长因子β1和胶原Ⅰ的表达。结果:实验纳入12只兔,兔耳创面制作时因麻醉药物过量4只死亡,予以补充。①白色念珠球菌污染组和金黄色葡萄球菌污染组兔耳腹侧创面愈合后可出现类似人增生性瘢痕的增生组织块,愈合时间均长于空白对照组[(14.7±1.0),(15.3±1.1),(11.2±1.3)d,P<0.01];增生组织块出现率均高于空白对照组(85.4%,91.6%,62.5%,P<0.05);术后28,49,60d增生组织块成纤维细胞含量均明显高于空白对照组(P<0.01)。②各组成纤维细胞中转化生长因子β1及胶原Ⅰ在术后28,49d均为强阳性表达,白色念珠球菌污染组最为显著,随时间的推移各组表达逐渐减弱直至消失。结论:白色念珠球菌和金黄色葡萄球菌污染创面均易出现增生性组织块,其形成与创面愈合过程关系密切,创面愈合时间越长增生组织块的出现率越高,符合人增生性瘢痕变化规律,验证转化生长因子、成纤维细胞及胶原之间的密切关系构成了增生性瘢痕的生物学基础。     

兔耳创面愈合后增生瘢痕块形成与外科感染常见致病细菌的影响

背景：外科感染虽然被认为是人增生性瘢痕形成的重要原因，但为何外科感染后容易形成增生性瘢痕需要明确其机制以期预防。 目的：在建立兔耳增生性瘢痕动物模型基础上，观察外科感染常见致病细菌对兔耳腹侧创面愈合后增生组织块形成的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验、细胞病理学及免疫组织化学检测，于2002-10／2004-03在新疆维吾尔自治区包虫病研究所完成。 材料：选用20只新西兰大耳白兔，按兔耳动物模型建立方法于双耳腹侧制作直径为10mm的创面。 方法：动物造模后按随机数字表法分为4组（n=5），创面形成后即日、术后第1天在金黄色葡萄球菌污染组、大肠杆菌污染组、绿脓杆菌污染组创面上分别放置浓度为1．0麦氏单位的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及绿脓杆菌0．1mL，共2次；对照组不予任何干扰因素，创面包扎。 主要观察指标：各组动物于术后28，49，70 d 3个时间点，分别切取兔耳全层愈合创面20个，测定增生性组织块中成纤维细胞含量、转化生长因子β1及I型胶原表达水平。 结果：①各组动物增生性组织块中成纤维细胞、转化生长因子β1及I型胶原术后28d表达最显著，随着时间推移逐渐减少直至消失。②术后28，49，70d，金黄色葡萄球菌污染组、大肠杆菌污染组、绿脓杆菌污染组增生性组织块中成纤维细胞含量均高于对照组（P〈0．01）；在术后28，49d，金黄色葡萄球菌污染组、大肠杆菌污染组、绿脓杆菌污染组增生性组织块中转化生长因子β1、I型胶原表达水平均高于对照组（P〈0．01）。 结论：外科感染常见致病细菌是促进增生性瘢痕形成的重要因素。兔耳创面愈合后增生性瘢痕组织块中成纤维细胞含量及转化生长因子β1、I型胶原表达水平高，与人增生性瘢痕中检测结果基本相同，提示增生性组织块中转化生长因子β1可能在兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖和I型胶原合成中具有一定促进作用。     

苦参碱对兔耳皮肤增生性瘢痕形成的抑制

目的：观察使用苦参碱预防兔耳创面增生性瘢痕形成的作用.方法：实验于2004-04/11在南方医科大学附属珠江医院心内科实验室及病理科完成.在10只兔耳作80个创面建立增生性瘢痕的动物模型.随机分为苦参碱组和生理盐水组,每组5只兔,40个创面.在做兔耳创面后的第2天起,开始使用药物,每次取0.5 mL液体点至创面,3次/d.苦参碱组使用苦参碱贮液,生理盐水组使用生理盐水.在第3周切除兔两耳增生性瘢痕,做苏木精-伊红染色、Masson染色,苦味酸天狼猩红染色.观察两组兔耳创面中不形成增生性瘢痕的创面愈合时间及形成增生性瘢痕的数量;胶原纤维的面密度比、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的面密度比值.结果：10只大白兔、80个创面均进入结果分析.①大体观察：苦参碱组未形成增生性瘢痕有12个创面（30%）,平均愈合时间为（10.6&;#177;1.7）d,形成增生性瘢痕块有28个创面（70%）.生理盐水组未形成增生性瘢痕有9个创面（22.%）,平均愈合时间为（10.1&;#177;1.1）d,形成的增生性瘢痕块有31个创面（77.5%）,两组间无统计学差异（P＞0.05）.②光镜观察：苦参碱组平均胶原纤维面密度比明显较生理盐水组低（0.481&;#177;0.048,0.604&;#177;0.040,P＜0.001）;苦参碱组平均Ⅰ/Ⅲ型胶原的面密度比值显著高于生理盐水组（2.574&;#177;1.006,2.286&;#177;0.416,P＜0.001）.结论：苦参碱不影响兔耳创面的正常愈合,也不能预防兔耳创面增生性瘢痕的形成,但可以减轻所形成的增生性瘢痕的增生程度.     

骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的：骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有多向分化潜能和持续增殖能力，显示出作为组织工程种子细胞新来源的诱人前景。探讨MSCs作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法：采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化新西兰兔MSCs，经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。12只兔随机分成3组：MSCs复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原对照组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于兔耳皮肤缺损处，比较观察创面修复效果。结果：MSCs复合胶原实验组、单纯胶原对照组和空白对照组创面愈合时间分别为(14．2&;#177;1．9)d，(16．3&;#177;2．7)d和(20．1&;#177;4．1)d，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。组织学观察显示，MSCs复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原对照组和空白对照组明显增多。结论：MSCs复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以MSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子表达及胶原合成的作用

目的：观察结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子mRNA、蛋白的表达和胶原合成的影响。 方法：实验于2005—03／12在哈尔滨医科大学免疫教研室完成。选取哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容中心手术标本，包括正常皮肤和增生性瘢痕。将手术中切下的正常皮肤、增生性瘢痕组织在无菌条件下去除表皮后采用组织块贴壁法培养于含体积分数为0．1的胎牛血清的RPM11640培养液中，置37℃，体积分数为0．05的CO2条件下原代培养。经2．5g/L胰蛋白酶消化传代，传代至3～5代时进行实验。实验分4组：①正常皮肤成纤维细胞组。②增生性瘢痕成纤维细胞组。③增生性瘢痕成纤维细胞＋5，0mg／L转化生长因子β1组（简称转化生长因子β1组）。④增生性瘢痕成纤维细胞＋5．0mg／L转化生长因子β1＋结缔组织生长因子反义寡核苷酸组（简称反义寡核苷酸组）。用5．0mg／L转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞后，以脂质体介导方法将结缔组织生长因子反义寡核苷酸转染增生性瘢痕成纤维细胞中，用反转录一聚合酶链反应方法和Western Blot方法检测细胞中结缔组织生长因子mRNA和蛋白质的表达；采用^3H-脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。 结果：①反转录-聚合酶链反应结果：结缔组织生长因子mRNA在正常皮肤成纤维细胞中无表达，在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强，转化生长因子β1刺激后表达量0．64&;#177;0．32明显高于增生性瘢痕成纤维细胞0．31&;#177;0．14，差异显著（P〈0．01）；反义寡核苷酸组可以大部分抑制结缔组织生长因子mRNA的表达，表达量0．12&;#177;0．62明显低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组，差异显著（P〈0．01）。②Western印迹结果：蛋白水平趋势与mRNA水平相一致。结缔组织生长因子蛋白在正常皮肤成纤维细胞中无表达，在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强84．63&;#177;11．49，转化生长因子β1刺激后表达量102．89&;#177;14．35明显高于增生性瘢痕成纤维细胞组，差异显著（P〈0．01）；反义寡核苷酸组可以大部分抑制转化生长因子β1的作用，结缔组织生长因子蛋白表达量41．75&;#177;10．56低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组（P〈0．01）。③结缔组织生长因子反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的作用：增生性瘢痕成纤维细胞组、转化生长因子β1组、反义寡核苷酸组的^3H-脯氨酸掺入率分别为5381&;#177;185．8273&;#177;357．2475&;#177;859，转化生长因子β1可以显著增加成纤维细胞胶原的合成（P〈0．01）；而结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1刺激后的成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用，差异显著（P〈0．01）。 结论：结缔组织生长因子反义寡核苷酸能够抑制转化生长因子β1引起的结缔组织生长因子mRNA、蛋白质表达的增高和胶原合成的增多，表明阻断结缔组织生长因子可能是延缓瘢痕纤维化的有效手段。     

复方壳多糖人工皮肤促进创面愈合的作用

目的：证明复方壳多糖人工皮肤在体促进创面愈合能力，为该人工皮肤应用于临床尤其是覆盖感染创面提供实验依据。方法：健康雄性大鼠24只，每只背部做全层皮肤缺损创面2个，每个创面涂1&;#215;10^5克隆形成单位(colony foming unit，CFU)金黄色葡萄球菌，建立金黄色葡萄球菌污染创面大鼠模型，随机数字法分成实验组、对照组和空白对照组，每组16个创面，将复方壳多糖人工皮肤和复方胶原凝胶人工皮肤分别覆盖于实验组和对照组创面上，空白对照组无覆盖，通过细菌学、病理、免疫组化检查，了解两组之间的差别。结果：实验组和对照组的一般情况好，空白对照组差，实验组创面感染轻、创面收缩好，24h痂下细菌计量实验组为(8．09&;#177;2．51)&;#215;10^4CFU／g，明显少于对照组(5．91&;#177;2．51)&;#215;10^5CFU／g和空白对照组(5．55&;#177;2.18)&;#215;10^7CFU／g，差异有显著性意义；创周组织病理切片观察，实验组炎性细胞浸润少，愈合最快最好，对照组有炎性细胞浸润，空白对照组可见大量炎性细胞和渗出、出血、坏死；肌动蛋白免疫组化表明，实验组增生的纤维母细胞染色强阳性，对照组散在阳性，空白对照组染色阴性。结论：复方壳多糖人工皮肤有抗菌、抗感染和促进创面愈合作用，其作用优于复方胶原凝胶人工皮肤，是理想的创面覆盖物。     

595nm Vbeam激光对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：观察595nmVbeam激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中成纤维细胞增殖的抑制作用。 方法：实验于2004-10／2005—06在哈尔滨医科大学附属第二医院激光美容中心完成。成年大耳白兔20只，建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型，上皮化后切取一组瘢痕8处，然后将瘢痕随机分为激光治疗组和对照组，激光治疗组在创面上皮化后按一定参数进行激光照射，开始时每周照射1次，1个月后改为每两周照射1次，共两个月。对照组不进行治疗。在上皮化后1，2，4，6，8周分别切除两组增生性瘢痕各8处，每次取材前用游标卡尺测量瘢痕厚度，对切取组织进行苏木精一伊红和Masson染色，并对上皮化后4周组织进行电镜观察，对上皮化和上皮化后4周组织进行增殖细胞核抗原蛋白测定，对比研究在瘢痕形成过程中595nmVbeam激光照射对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的影响，观察成纤维细胞超微结构的改变，检测增殖细胞核抗原蛋白表达变化。 结果：实验大耳白兔20只全部进入结果分析。兔耳增生性瘢痕经595nmVbeam激光照射后，按不同时间段取材与对照组比较，①瘢痕厚度明显变薄：创面上皮化后即出现增生块高出于皮面，且不断增厚，在上皮化后4周时最高，以后逐渐下降。激光照射（即上皮化后）2，4，6周后激光治疗组瘢痕增生厚度显著小于对照组[激光治疗组：（1．95&;#177;0．08），（2．16&;#177;0．09），（1．53&;#177;0．08）mm；对照组：（2．04&;#177;0．09），（2．37&;#177;0．11），（1．68&;#177;0．09）mm，P〈0．05]。②苏木精-伊红染色显示不同时间取材的兔耳增生性瘢痕组织对照组真皮层明显增厚，为周围正常真皮厚度的三四倍。而激光治疗组真皮层较对照组变薄。Masson染色显示瘢痕胶原纤维呈蓝色，对照组可见蓝染较深的胶原纤维，外形粗大，排列杂乱无章。而经激光照射的瘢痕虽然也可见蓝染的胶原纤维，但与对照组比较蓝染变浅且纤细，胶原排列也趋于一致。③高倍镜下成纤维细胞计数在上皮化后随时间逐渐增多，在上皮化后4周时达到高峰，以后又下降，但在上皮化后1，2，4，6，8周激光治疗组成纤维细胞数量与对照组比较未见明显减少（P〉0．05）。④透射电镜观察显示经595nmVbeam激光照射4周后成纤维细胞核变小、畸变，胞质中细胞器减少，细胞功能不活跃，线粒体空泡变性，细胞周围的胶原呈溶解状态。⑤增殖细胞核抗原蛋白表达激光治疗组较对照组明显减弱（增殖细胞核抗原阳性细胞反应率上皮化后为18．33％，上皮化后4周，激光治疗组为41．93％，对照组为64．26％，P〈0．05）。 结论：595nmVbeam激光照射可抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的增殖过程，应用595nmVbeam激光预防和治疗瘢痕可行。     

反义TGF—β1对兔耳增生性瘢痕抑制作用的组织形态学研究

目的 研究反义TGF—β1脱氧寡核苷酸(ODN)对兔耳增生性瘢痕抑制作用。方法 利用兔耳腹侧面增生性瘢痕模型，采用组织形态学的方法对比研究反义TGF—β1在兔耳增生性瘢痕形成过程中的影响。结果 兔耳腹侧面增生性瘢痕局部注射反义TGF—β1后，按时间段取材，HE和Masson染色显示真皮层变薄，成纤维细胞数量明显减少，胶原排列趋于一致。反义TGF—β1组的增生块的相对高度低于对照组。结论 反义TGF—β1能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程，使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。     

三七总甙对增生性瘢痕的作用

背景：增生性瘢痕的传统治疗手段如手术切除、类吲孵激素、抗代谢药、免疫抑制剂和放射疗法等,均易复发或有严重的不良作用而限制了其临床应用。近年来应用活血化瘀类中药提取成分治疗增生性瘢痕取得了较为理想的进展,而且不良反应小。目的：通过组织染色及相关基因检测的方法,观察三七总甙对兔耳增生性瘢痕的作用以及对转化生长因子β1mRNA表达的影响。方法：创建兔耳增生性瘢痕模型,约术后4周,按随机数字表法将24只大耳白兔分为3组,三七总甙组、曲安奈德组及空白对照组每组8只。以曲安奈德为阳性对照,分组分次瘢痕基底局部给药,用药5次后取瘢痕组织,以苦味酸酸性复红染色法、苏木精一伊红染色法对胶原纤维、成纤维细胞进行观察,应用反转录PCR方法检测细胞内转化生长因子β1基因的表达情况。结果与结论：苏木精-伊红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中成纤维细胞数量低于空白对照组,与曲安奈德组无明显差异。苦味酸酸性复红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中胶原纤维较空白对照组排列整齐,与曲安奈德组无明显差异。基因检测结果显示三七总甙组、曲安奈德组转化生长因子β1mRNA的表达显著低于空白对照组（P〈0．05）。提示三七总甙及曲安奈德均能通过抑制转化生长因子β1mRNA的表达,降低转化生长因子G1在瘢痕组织中的含量,从而抑制成纤维细胞的过度增殖及以胶原为主的细胞外基质过度沉积,进而降低胶原纤维合成,来达到有效抑制瘢痕组织过度增生的目的。     

腺相关病毒载体介导转化生长因子β3在防治增生性瘢痕愈合中的生物学效应

目的:观察腺相关病毒载体介导转化生长因子β3在防治增生性瘢痕愈合中的作用。方法:实验于2005-07/2006-10在青岛大学医学院创伤骨科研究所和中心实验室完成。①实验方法:通过改进的Morris法建立兔耳增生性瘢痕模型,术后将携带转化生长因子β3的腺相关病毒颗粒转染于增生性瘢痕愈合创面处。②实验评估:观察创面愈合情况,应用反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学染色法检测创面愈合组织中转化生长因子β3的表达;应用免疫印迹法检测主胶原Ⅰ,Ⅲ型胶原含量;应用氯胺-T法检测羟脯氨酸含量;评价腺相关病毒载体介导转化生长因子β3在防治增生性瘢痕愈合中的生物学效应。结果:①术后6个月,对照组瘢痕较前仍稍有增生,颜色淡红,质地硬。腺相关病毒载体介导转化生长因子β3转染组愈合创面稍突出皮面,颜色接近肤色,质地接近周围皮肤。②腺相关病毒载体介导转化生长因子β3转染组TGFβ3基因反转录-聚合酶链反应电泳条带亮度明显高于对照组。③腺相关病毒载体介导转化生长因子β3转染组创面愈合组织中羟脯氨酸的含量逐渐降低。至术后3个月,两组创面愈合组织中羟脯氨酸含量始于稳定,腺相关病毒载体介导转化生长因子β3转染组低于对照组(109.57±9.13,285.92±10.63)μg/g(t=2.98,P<0.05)。④免疫印迹检测显示腺相关病毒载体介导转化生长因子β3转染组创面愈合组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成比中Ⅲ型胶原的比例高于对照组。结论:①腺相关病毒载体可介导目的基因转化生长因子β3高效转染增生性瘢痕创面并有效防治增生性瘢痕愈合。②其作用可能是通过抑制创面愈合组织中羟脯氨酸的合成以及提高Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成比中Ⅲ型胶原的比例实现的。     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

精神疾病患者家属教育的情况分析

目的：通过对精神疾病患者家属教育的调查，探讨家属教育的内容和教育方式。方法：采用自拟问卷对参加系列教育的家属进行调查分析。结果：患者和家属接受教育次数越多，对疾病知识了解越多；在患者的亲属中患者的父母参加教育比率较大。结论：家属教育对治疗疾病起着积极的作用，应更具有针对性，同时还应该注意教育方式。