复合血管内皮细胞组织工程骨修复兔下颌骨缺损的研究

目的探讨血管内皮细胞构建的组织工程骨修复兔下颌骨缺损。方法实验分为三组,A组：兔成骨细胞（rabbit osteoblast,ROB）和血管内皮细胞（rabbit vascular endothelial cell,RVEC）复合外消旋聚乳酸（poly-DL-lacide,PDLLA）;B组：单纯成骨细胞复合PDLLA,C组：单纯PDLLA。分别修复兔下颌骨缺损,手术后4周、8周通过形态学、X线观察骨缺损修复及血管化情况。结果A组骨组织形成与血管化程度均高于B组,在材料中心区可见有血管形成,越靠近血管成骨越多。X线观察,A组：骨缺损区阴影面积明显减小,材料植入区可见骨组织影像;B组：缺损面积减小,骨组织影像增加,中心区影像低于周围区域。C组：缺损区未见骨组织影像,周围可见骨痂形成。结论复合血管内皮细胞和成骨细胞的细胞支架复合体无论在成骨还是血管化方面均好于单纯成骨细胞复合支架植入组。     

复合血管内皮细胞的组织工程骨构建

目的:探讨将血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)与成骨细胞(osteoblast,OB)复合后用于血管化组织工程骨预构的可能性。方法:6只日本大耳白兔分为两组,分别在背阔肌下植入(OB+VEC)/外消旋聚乳酸(PDLLA)、OB/PDLLA。术后4、8周处死动物,大体标本、HE染色镜下观察体内成骨与血管化情况,以及血管化与成骨之间关系。结果:OB/PDLLA、(OB+VEC)/PDLLA两组植入物表面均有大量毛细血管肌纤维长入。OB/PDLLA组植入4周后可见骨组织形成,材料周围可见有小血管长入,随时间延长成骨量及血管化程度均有所增加。OB+VEC/PDLLA组可见在支架内部有大量毛细血管形成,支架周围成骨细胞活跃,成骨能力较强,在体内成骨能力及血管化程度均高于单纯成骨细胞复合支架组。结论:复合血管内皮细胞的组织工程骨成骨能力与血管化程度均高于单纯成骨细胞构建的组织工程骨。     

成骨细胞与血管内皮细胞复合PDLLA的体外实验研究

目的：探讨兔成骨细胞与血管内皮细胞体外复合外消旋聚乳酸（PDLLA）的可能性,为血管化组织工程骨构建打下实验基础.方法：制备PDLLA浸提液培养血管内皮细胞,MTT法检测细胞活性.将制备好的PDLLA预湿、Ⅰ型胶原包埋;体外培养兔成骨细胞及血管内皮细胞后,与PDLLA复合10 d,扫描电子显微镜观察其在支架上的生长情况.结果：PDLLA浸提液对血管内皮细胞无毒性,成骨细胞与血管内皮细胞在支架上成片状分布,可见细胞外基质分泌.结论：两种细胞在经Ⅰ型胶原包埋的PDLLA上生长状态良好,可用于血管化组织工程骨的构建.     

山羊乳牙牙髓干细胞构建组织工程骨的异位成骨研究

目的:评价山羊乳牙牙髓干细胞在体外的成骨分化能力,及复合多孔磷酸钙骨水泥在山羊肌袋模型内的异位成骨能力。方法:采用改良组织块法培养山羊乳牙牙髓干细胞,并且在成骨诱导条件下培养。经成骨条件培养的第3代细胞与多孔磷酸钙骨水泥复合后,植入山羊背部左侧肌袋;将多孔磷酸钙骨水泥空白支架植入右侧肌袋作为对照组。分别在植入后4、8周取材,进行组织学观察。结果:复合山羊乳牙牙髓干细胞的支架材料在4周后有类骨质形成;植入8周后,类骨质形成更多;未复合细胞的支架材料在组织学检查中未见有类骨质形成。结论:山羊乳牙牙髓干细胞在体外具有分化为成骨细胞的能力;多孔磷酸钙复合山羊乳牙牙髓干细胞在山羊体内具有异位成骨能力。     

负压与BMSCs膜片促进细胞定植和体内成骨的探讨

目的:研究经过负压处理的TCP支架材料与细胞复合后的体内成骨能力。方法:将TCP支架材料负压处理,和骨髓基质细胞(BMSCs)细胞共培养一段时间后,成骨诱导2周,电镜下观察支架材料和细胞复合情况。再将该复合物与BMSCS细胞膜片复合,植入到裸鼠皮下,8周后作组织切片,HE染色和Masson染色,观察其体内成骨能力。结果:负压(有细胞)+膜片组异位移植8周后,内部可见大量胶原纤维和成骨纤维,在团块样组织内部可见大量成骨细胞,并有血管形成。对照组仅有个别细胞密集区,胶原纤维和成骨纤维较少。空白组未见类似情况。结论:经过负压+骨髓基质细胞膜片处理的TCP支架材料,在体内有成骨潜能。     

预构血管化神经的动物模型的建立

目的 :建立兔耳中央动静脉束植入预构面神经上颊支的动物模型。方法 :选用 2 8只新西兰大白兔 ,将兔右耳中央动静脉束植入右面神经上颊支旁 ,2周、3周、4周、5周后进行血管墨汁灌注检查。结果 :兔耳中央动静脉束植入预构面神经 2～ 4周后 ,无明显的新生血管化 ,预构 5周后 ,神经外膜、束膜、内膜新生血管化明显。结论 :兔右耳中央动静脉束植入预构面神经是研究预构带血管神经移植的比较理想的动物模型。     

低温保存成骨细胞复合生物活性玻璃陶瓷修复兔下颌骨缺损

目的 观察经低温保存的兔骨膜源性成骨细胞(POBs)的生物学特征,及其与生物活性玻璃陶瓷(BGC)体外复合后修复颌骨缺损的能力。方法 将经鉴定的幼兔骨膜源性成骨细胞置入液氮罐中保存,取冻存6个月的细胞做生物学鉴定,并进行体外培养扩增,然后与BGC复合培养,植入兔下颌骨缺损处,对照组为植入单纯BGC组。术后第2、4、8、12周取材,行X线摄片及组织学检查,观察复合材料的成骨能力。结果 复苏的成骨细胞仍具有典型的成熟成骨细胞的生物学特征,与BGC复合植入体内后,能继续生长增殖并形成骨组织,能较快较好地修复骨缺损。结论 利用冻存复苏的成骨细胞进行组织工程学研究是可行的,细胞与材料复合所形成的组织工程化骨,可望在骨组织的修复与重建中得到更加广泛的应用。     

骨髓基质成骨细胞-松质骨基质复合人工骨皮下移植成骨作用的实验研究

目的：观察骨髓基质成骨细胞－松质骨基质复合人工骨皮下移植的成骨作用，探索骨髓基质成骨细胞和松质骨基质分别作为骨组织工程种子细胞和支架材料的可行性。方法：成年新西兰兔骨髓细胞体外培养，诱导后，经混匀，接种，固化，形成骨髓基质成髓细胞－藻酸盐－松质骨基质复合人工骨，并植回取材兔背部皮下，对照组分别植入藻酸盐－松质骨基质复合物和松质骨基质，植入4，8周取材，行X线摄片，组织学检查和组织学定量分析，观察骨形成情况，结果：骨髓基质成骨细胞－藻酸盐－松质骨基质复合人工骨皮下成骨效果明显优于藻酸盐－松质骨基质复合物组和松质骨基质组，复合人工骨标本兼有膜内成骨和软成骨，以膜内成骨为主，对照组仅见不得软骨成骨，结论：采用组织工程方法形成的复合人工骨皮下成骨作用明显，骨髓基质成细胞和松质骨基质可以分别作为种子细胞和支架材料而用于组织工程骨的构建。     

成骨细胞与血管内皮细胞联合培养对成骨细胞功能的影响

目的　探讨不同比例兔成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)直接联合共培养后,对成骨细胞功能的影 响。方法　取兔成骨细胞与血管内皮细胞,将两者分为4组分别以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1直接联合共培养于培养皿中, 通过对细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定和培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的 影响。结果　成骨细胞与血管内皮细胞直接联合共培养相容性良好,2∶1的细胞比例组ALP活性及OC含量较其 他各组明显增高。结论　在体外直接联合共培养的体系中,血管内皮细胞有明显促进成骨细胞活性的作用。     

共培养下成骨细胞与血管内皮细胞相互功能影响

目的:了解共培养条件下成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)功能相互影响。方法:取传代兔成骨细胞与血管内皮细胞,首先将成骨细胞与血管内皮细胞以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1比例联合直接共培养于培养皿中,另将成骨细胞与血管内皮细胞以0∶1、1∶1、2∶1、4∶1联合直接共培养于培养皿中的盖玻片上。通过对成骨细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定及培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的影响。通过血管内皮细胞计数、生长曲线测定,检测成骨细胞对血管内皮细胞的影响。结果:成骨细胞与血管内皮细胞比例为2∶1组碱性磷酸酶活性测定、骨钙素含量明显高于其他两实验组,但与对照组无明显区别。血管内皮细胞增殖能力高于其他两实验组,而与对照组无差异。结论:两种细胞在该培养体系中可以起到互相促进作用。     

Studies on plaque formed on implants

In vivo plaque formation on implant materials was studied. When different implant materials were set on the gingiva, the number of adhering viable bacteria depended on material surface properties 4 hours after setting, but not 48 hours after setting. The formation of pellicle-like thin layers and subsequent covering by lamellarly formed plaque were observed on the surfaces of all materials. Streptococcus species were predominant at the 4-hour setting time but anaerobes increased at the 48-hour setting time; this was common to all materials. The results indicate that surface properties of the implants influence early bacterial adherence, but do not influence bacterial flora or plaque maturation. The subgingival microflora at the neck of implants with clinically normal peri-implant tissues was compared with that at the neck of natural teeth. The bacterial isolates were classified based on their biochemical characteristics. For the spirochaetes, the number was counted directly under light microscopic observation. The most predominant bacterial species was Streptococcus, followed by Actinomyces, Neisseria and then Capnocytophaga at both sites. The ratio of spirochaetes in the microflora was extremely low for both the implant and natural tooth. Such a bacterial distribution pattern closely resembled the hitherto-reported distribution of bacteria existing in a healthy gingival crevicular. This suggested that the microflora in plaque at the neck of a normal implant is basically similar to that at the neck of a natural tooth. In conclusion, plaque formation on implant materials was not influenced by their surface properties in actual oral cavity.