5-氮胞苷诱导大鼠脂肪间充质干细胞分化成肌细胞

目的：观察并检测5-氮胞苷（5-Aza）诱导大鼠脂肪间充质干细胞（AMSCs）分化成肌细胞的过程中,细胞形态及相关基因、蛋白的表达情况,探讨5-Aza对大鼠AMSCs分化的诱导作用．方法：分离大鼠AMSCs,在含有10μmol／L5-Aza的培养液中培养,观察细胞形态的变化,并通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测诱导后MyoG的表达,免疫细胞化学染色法检测诱导后Desmin和α-Sarcometric Actin的表达．结果：用10μmol／L 5-Aza诱导后,细胞形态逐渐伸展变长,呈现肌细胞形态;RT-PCR结果显示,诱导后15h左右开始表达MyoG;免疫细胞化学染色结果显示,诱导10d后Desmin染色呈弱阳性,14d阳性程度增强,且此时部分细胞开始表达α-sarcomeric Actin,并随时间延长表达增强,至28d呈强阳性．结论：采用10μmol／L 5-Aza可以诱导大鼠AMSCs向肌细胞分化．     

MSC体外诱导分化为心肌样细胞的鉴定及Nesprin蛋白表达研究

目的 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化.方法 大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达.以10μmoL/L 5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导第2代MSC向心肌细胞分化,观察细胞形态学改变;RT-PCR、免疫组织化学法和免疫荧光细胞化学染色鉴定心肌细胞相关蛋白Desmin、α-sarcomeric actin、cardiac Troponin I(cTn I)mRNA和蛋白表达;Western blotting检测MSC分化前后Nesprin蛋白表达.结果 经5-Aza诱导分化后的MSC细胞及细胞核增大,形态渐趋一致,大部分呈长梭形;细胞Desmin、α-sarcomeric actin、cTn I mRNA和蛋白呈阳性表达.免疫荧光细胞化学染色显示Nesprin蛋白定位于核膜,Western blotting分析发现诱导分化后细胞Nesprin蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 成功诱导大鼠MSC向心肌细胞分化;Nesprin蛋白在分化后细胞中的表达明显增加,提示Nesprin可能参与MSC向心肌细胞样变化的过程.     

5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响

[目的]观察5-氮杂胞苷(5-Aza)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖和成肌分化的影响.[方法]无菌条件下取SD大鼠骨髓组织,采用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,传3代后的MSCs采用双标免疫组化法鉴定后,随机分为4组:浓度为5、10、15μmol/L的5-Aza组和空白对照组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度5-Aza对MSCs生长增殖的影响;以含5、10、20μmol/L5-Aza的培养基诱导培养MSCs 24 h后,改用完全培养基继续培养,采用免疫组织染色法鉴定5-Aza诱导分化3、7、14d后细胞肌分化相关蛋白肌凝蛋白(myosin)和结蛋白(desmin)的表达情况.[结果]双标免疫组化染色结果显示:所培养细胞同时表达Brdu和CD44、CD54,表达率达96%,鉴定结果表明所培养细胞为MSCs;5、10μmol/L5-Aza对MSCs增殖无显著影响(P>0.05),15μmol/L5-Aza可显著抑制MSCs生长(P<0.05);不同浓度5-Aza诱导培养MSCs后第3天,部分细胞出现desmin阳性表达,诱导后14 d,部分细胞表达myosin,以10μmol/L5-Aza组作用为佳.[结论]高浓度5-Aza可抑制MSCs体外增殖;适宜浓度的5-Aza可诱导MSCs向成肌细胞定向分化.     

MSC体外诱导分化为心肌样细胞的鉴定及Nesprin蛋白表达研究

目的体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化。方法大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达。以10μmol／L5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导第2代MSC向心肌细胞分化,观察细胞形态学改变;RT—PCR、免疫组织化学法和免疫荧光细胞化学染色鉴定心肌细胞相关蛋白Desmin、α—sarcomeric actin、cardiac Troponin Ⅰ（cTnⅠ）mRNA和蛋白表达;Western blotting检测MSC分化前后Nesprin蛋白表达。结果经5-Aza诱导分化后的MSC细胞及细胞核增大,形态渐趋一致,大部分呈长梭形;细胞Desmin、α-sarcomericactin、cTn ⅠmRNA和蛋白呈阳性表达。免疫荧光细胞化学染色显示Nesprin蛋白定位于核膜,Westernblo Ring分析发现诱导分化后细胞Nesprin蛋白表达明显增加（P〈0．05）。结论成功诱导大鼠MSC向心肌细胞分化;Nesprin蛋白在分化后细胞中的表达明显增加,提示Nesprin可能参与MSC向心肌细胞样变化的过程。     

C2C12成肌细胞体外诱导分化为肌管的实验

 摘 要： 【目的】 观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞C 2C 12向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用，探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】 将C 2C 12成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖DMEM培养基培养，收集细胞，在相差显微镜下观察形态变化，并通过免疫细胞化学（Imminocytochemistry，ICC）及RT-PCR方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】 ①20 mL/L和50 mL/L的马血清均能促使C 2C 12细胞形成肌小管，20 mL/L浓度马血清诱导效率最好（第7天时肌小管形成率分别为31．4％ ± 2．1％和19．0％ ± 1．6％，P<0．001）。②20 mL/L马血清诱导3～4 d开始有肌管形成，之后肌管越来越多，到8～9 d达高峰（第9天40．2％ ± 1．3％），往后细胞逐渐衰老死亡。③20 mL/L马血清诱导C 2C 12细胞向成熟肌细胞分化过程中，肌相关蛋白分子表达发生变化：结蛋白（desmin）、成肌分化抗原（MyoD）、生肌素（myogenin）和肌球蛋白（myosin）等表达逐渐增强（未刺激时分别约为49．6％ ± 1．1％、23．4％ ± 1．1％、4．8％ ± 1．6％和2．6％ ± 1．5％；第6天时分别提高为80．4％ ± 1．8％、85．4％ ± 1．1％、22．2％ ± 1．1％和26．0％ ± 1．6％；P<0．001）；desmin、MyoD和myogenin相应的mRNA分子也可以通过RT-PCR检测到。【结论】 ①低浓度的马血清能够有效刺激C 2C 12成肌细胞向成熟细胞分化，以20 mL/L浓度效果最好；②C 2C 12细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板；③肌分化发育过程比较复杂，许多因素都可能起影响，研究设计要尽量标准化。     

1-磷酸神经鞘氨醇对大鼠骨骼肌成肌细胞分化的影响

【目的】观察1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化?形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制?【方法】 分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,含不同浓度S1P的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜和共焦显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法分别检测成肌细胞分化的早期特异性标志-肌球蛋白和生肌素表达的改变?使用磷酸神经鞘氨醇激酶(SphK)活性抑制剂DMS和HACPT后观察S1P对骨骼肌成肌细胞的生肌素表达的作用?【结果】 S1P能明显促进骨骼肌成肌细胞细胞形成肌小管,诱导2 ~ 3 d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到6 ~ 7 d达高峰;同对照组相比随S1P浓度增高,细胞核生肌素阳性率逐渐增高(P <0.01);SphK活性抑制剂抑制S1P促进骨骼肌成肌细胞生肌素阳性率的增高(P < 0.01)?【结论】体外S1P可能通过提高SphK活性调节成肌细胞向成熟肌细胞分化?     

5-氮杂胞苷对骨髓间充质干细胞向肌细胞增殖及分化的影响

目的:探讨在不同浓度5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞过程中, 其对干细胞增殖及分化的影响。方法:分离纯化鉴定4周龄Wistar大鼠骨髓MSCs,以不同浓度5-Aza作用,用四唑盐(MTT)法测定细胞生长活力,观察细胞形态变化,通过RT-PCR及电泳测定诱导后大鼠的MSCs中骨骼肌肌动蛋白的表达。结果:0和1 μmol·L-1 5-Aza对细胞增殖无明显影响;随着5-Aza浓度的增高,MSCs 的增殖逐渐减弱;20～30 μmol·L-1 5-Aza对细胞有毒性作用,影响其增殖。3和6 μmol·L-1 5-Aza,MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达;9和12 μmol·L-1 5-Aza,MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达,该浓度作用9 d后有部分细胞体明显增粗,12 d有肌管样细胞出现。结论:5-Aza影响干细胞分化,调控基因的表达及调控MSCs向肌细胞定向分化为肌管样细胞的过程。     

含组织激肽释放酶1表达载体诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

目的 探讨组织激肽释放酶1(KLK1)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的影响.方法 选取2015年3-7月购买的大鼠BMSCs,将大鼠BMSC细胞分为3组即正常组、组织激肽释放酶1组、5-Aza组.采用RT-PCR分别对诱导培养后的大鼠BMSCs进行心肌细胞特异性蛋白Actin、c-TnI和Desmin的检测,并用Western blot免疫印迹分析c-TnT蛋白表达量.结果 RT-PCR检测显示,5-Aza诱导的BMSCs(1.964±0.805)在心肌特异性蛋白Actin RNA、c-TnI RNA和Desmin RNA的表达均高于空白组(1.000±0.000)(P<0.05),KLK1诱导组(2.633±0.582)以上蛋白的RNA表达量又显著高于5-Aza诱导组(P<0.05).Western blot结果显示,5-Aza诱导组c-TnT蛋白的表达(0.799±0.101)高于空白组(0.112±0.001)(P<0.001),KLK1诱导组(1.294±0.134)显著高于5-Aza组.差异有统计学意义(P<0.001).结论 5-Aza能有效使BMSCs向心肌样细胞诱导分化,KLK1也能诱导BMSCs向心肌样细胞分化.KLK1较5-Aza诱导的BMSCs在心肌细胞特异性蛋白RNA表达,心肌特异性蛋白T表达其心肌特异性更为突出.     

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其内向整流钾电流特征

【目的】体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞并探讨其内向整流钾电流(IK1)特征。【方法】采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs，在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导．用免疫细胞化学染色和RT—PCR方法鉴定诱导细胞，并采用全细胞膜片钳技术检测IK1表达。【结果】诱导后细胞体积较诱导前增大，呈长梭形。14d后细胞之间出现连接，排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示Desmin、α-sarcomeric actin和心肌特异性cTnⅠ呈阳性反应，RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达。诱导细胞IK1表达呈明显的不均一性，部分细胞IK1与正常心室肌细胞相似，但IK1电流密度总体上低于正常心室肌细胞。【结论】5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化；诱导细胞IK1表达不均一性提示可能有致心律失常潜能。     

人脐带间充质干细胞在体外向心肌样细胞的诱导分化

目的初步探讨人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向心肌样细胞诱导分化的方法。方法取第8代人脐带间充质干细胞用10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-Aza)进行诱导24h,对照组用含10%FBS的α-MEM培养液培养。每2d换1次培养液,并在不同诱导阶段进行细胞形态学观察。诱导第四周行免疫细胞化学法、RT-PCR检测。结果诱导第2周可见部分细胞体积逐渐增大,呈球状和杆状细胞。诱导第4周时经免疫细胞化学法可检测到分化后的细胞表达了cTn T、Cx43和desmin心肌标志物,RT-PCR检测到了心肌细胞标记NK2.5的表达。结论应用10μmol/L 5-Aza可以将人脐带间充质干细胞诱导分化成心肌细胞,进而可能为临床治疗难治性心脏疾病提供细胞来源。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

目的 探索在体外诱导人骨髓间充质干细胞(hMSC)向心肌细胞分化的方法。方法 以5-杂氮胞苷(5-Aza)对hMSC诱导,利用结蛋白抗体、房性利钠肽抗体以及闰盘蛋白抗体进行免疫组化染色,并进行超薄切片透射电镜观察。结果 经反复多次传代后,细胞形态及抗原表达无改变,始终保持未分化状态和稳定扩增。利用5-Aza对其诱导后第2周始,免疫组化染色发现细胞结蛋白、闰盘蛋白以及房性利钠肽表达均为阳性,不同浓度5-Aza诱导组之问差异无显著性。电镜观察发现这些细胞具有心肌细胞的特点。结论 在体外利用5-Aza可以诱导hMSC向心肌细胞分化。     

半乳糖凝集素-3联合HGF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

目的 探索半乳糖凝集素-3(Gal-3)联合肝细胞生长因子(HGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞分化的可行性及最佳诱导条件,并对诱导后的细胞进行鉴定.方法 离心、贴壁培养分离大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面标志.取第3代细胞进行分组诱导培养,A组:0 μg/mL Gal-3+ 20 ng/mL肝细胞生长因子(HGF);B组:0.1μg/mL Gal-3+ 20ng/mL HGF;C组:0.5 μg/mL Gal-3+20 ng/mL HGF;D组:1.0 μg/mL Gal-3+20 ng/mL HGF;E组:2.0 μg/mL Gal-3+ 20ng/mL HGF;阳性对照组:SD大鼠肝脏细胞IAR20.分别于诱导后7、14、21、28d时段进行细胞形态学观察、免疫荧光染色检测、实时荧光定量核酸扩增检测(Q-PCR)鉴定其诱导分化情况.结果 分组诱导培养后,各组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,与大鼠原代肝脏细胞IAR20相似,其中28 d时间段,C组转化成IAR20相似细胞比例最高;各组甲胎蛋白(AFP)、清蛋白(ALB)荧光染色阳性率明显增高,并且在28 d时间点C组AFP、ALB的荧光染色阳性率最高;C组AFP、ALB mRNA表达明显增加,同时以28 d时间点表达量达到峰值.结论 Gal-3联合HGF能有效诱导大鼠BMSCs分化为肝样细胞,分化后的肝样细胞能分泌肝细胞特异性产物AFP、ALB,且其诱导效率与诱导培养时间和Gal-3浓度有关.     

5-氮杂胞苷对骨髓间充质干细胞向肌细胞增殖及分化的影响

目的：探讨在不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞过程中，其对干细胞增殖及分化的影响。方法：分离纯化鉴定4周龄Wistar大鼠骨髓MSCs，以不同浓度5-Aza作用，用四唑盐（MTT）法测定细胞生长活力，观察细胞形态变化，通过RT-PCR及电泳测定诱导后大鼠的MSCs中骨骼肌肌动蛋白的表达。结果：0和1 μmol·L^-1 5-Aza对细胞增殖无明显影响；随着5-Aza浓度的增高，MSCs的增殖逐渐减弱；20~30 μmol·L^-1 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖。3和6 μmol·L^-1 5-Aza，MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达；9和12 μmol·L^-1 5-Aza，MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达，该浓度作用9 d后有部分细胞体明显增粗，12 d有肌管样细胞出现。结论：5-Aza影响干细胞分化，调控基因的表达及调控MSCs向肌细胞定向分化为肌管样细胞的过程。     

骨髓间充质干细胞向肌管状结构分化的动态

 【目的】探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化的最佳条件和体外分化的过程。【方法】体外培养Sprague-Dawley（SD）大鼠的MSCs，传代至P3、P6或P12；用5-氮胞苷诱导，比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率，观察诱导后细胞分化过程中形态学的变化，并且用cardiactroponinⅠ、desmin和α-sarcomeric actin抗体鉴定分化的心肌样细胞。【结果】P12代较P3或P6代骨髓MSCs易向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构。经10μmol／L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为（27±2．5）％，20μmol／L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为（17±2．2）%，其它诱导浓度和诱导时间均不能诱导细胞分化；50g（幼年鼠）体重组细胞分化率为（27±2．8）％，150g（成年鼠）体重组细胞分化率为（15±2．9）％，各组的差异有统计学意义。【结论】5-氮胞苷诱导MSCs向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构，年幼的SD大鼠MSCs易向心肌样细胞分化。     

黄芪注射液与5-氮杂胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究

目的研究黄芪注射液与5-氮杂胞苷（5-Aza）对大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）分化为心肌细胞的影响。方法在无菌条件下从成年大鼠胫骨骨髓分离出MSCs。以1：3的比例传代,取第3代的细胞．接种后随机将MSCs分为黄芪注射液诱导分化组、5-Aza诱导分化组、黄芪注射液预处理后5-Aza诱导分化组。分别以黄芪注射液、5-Aza及黄芪注射液＋5-Aza进行诱导,用相差显微镜观察各纽细胞形态变化;免疫细胞化学鉴定MSCs表面标志物及心肌特异性肌钙蛋白I。结果各组诱导后细胞形态发生改变,细胞之问形成连接,排列方向趋于一致,免疫组化检测结果显示肌钙蛋白I（eTnI）表达均阳性。黄芪注射液组与5-Aza组相比其诱导率无明显区别．但黄芪注射液＋5一Aza组阳性细胞比率均高于5-Aza组及黄芪注射液组．差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论黄芪注射液可体外诱导MSCs分化为心肌样细胞,采用黄芪注射液预处理后5-Aza诱导分化的方法优于单纯采用黄芪注射液或5-Aza谤导法。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

【目的】探讨体外培养定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的潜能。【方法】取大鼠下肢骨骨髓，分离培养MSCs，用5-氮胞苷(5-aza)定向诱导24h，相差显微镜下观察其形态变化，免疫组化法检测肌钙蛋白(cTnT)和心肌细胞结蛋白(desmin)表达，并通过RT-PCR对肌球蛋白重链(MHC)在细胞中的表达进行鉴定。【结果】MSCs经5-aza诱导后，部分细胞呈梭形，并可见肌管样结构。免疫组化检测示诱导后MSCs的cTnT阳性细胞数为15％，Desmin表达强阳性，RT—PCR示诱导后MSCs有MHC表达。【结论】MSCs在体外能在一定条件下被诱导分化为心肌样细胞，是心肌缺血干细胞移植的较理想的细胞来源。     

MiR-382促进大鼠肝前体细胞WB-F344肝向分化的研究

【立论依据】 肝卵圆细胞的定向分化可为肝细胞移植和生物人工肝提供丰富的肝细胞源。阐明肝卵圆细胞分化的分子机制,是实现控制其定向分化的基础和前提。前期研究显示:miR-382在肝干细胞分化过程中表达上调,提示miR-382可能促进肝干细胞的分化过程。然而,目前对于miR-382在肝干细胞分化中的作用和分子机制仍知之甚少。 【设计思路】 本项目拟利用肝细胞生长因子(HGF)诱导大鼠肝前体细胞WB-F344向肝实质细胞分化的细胞模型,观察miR-382在肝前体细胞WB-F344分化进程中的表达变化,并从功能学和分子标志物两方面检测该microRNA分子对肝卵圆细胞分化的作用,并通过寻找该microRNA分子的靶基因初步明确miR-382调控肝干细胞分化的分子机制。 【实验内容】 (1)建立HGF诱导大鼠肝上皮样干细胞WB-F344肝向分化的细胞模型,并通过糖原染色和肝分化标志物的检测证实该模型的有效性。(2)通过qPCR的方法检测miR-382在整个诱导分化进程中的表达变化。(3)从功能学指标和分子标志物指标两方面检测miR-382过表达或者低表达对WB-F344细胞分化的影响。(4)miR-382通过靶向抑制候选靶基因Ezh2的表达提高肝干细胞的分化能力。 【材料】 大鼠肝前体细胞WB-F344,肝细胞生长因子HGF,Trizol 试剂,Lipofectamine 2000转染试剂,MiR-382 mimics等等。 【可行性】 (1)项目组成员均系统学习了细胞生物学和分子生物学的知识和实验操作技能,对科研有浓厚的兴趣,并已加入指导教师课题组进行科研项目训练。(2)项目指导教师承担的浙江省教育厅课题(Y201330031)包含肝干细胞定向分化的研究,积累了丰富的肝实质细胞诱导分化经验。 【创新性】 (1)本项目首次研究miR-382在肝干细胞分化中的作用,该研究有助于我们认识miR-382的功能。(2)本项目首次提出miR-382通过调控表观遗传修饰酶Ezh2的表达影响染色质修饰状态并参与肝干细胞分化的作用机制,本实验数据将丰富我们对肝干细胞分化过程中表观遗传修饰的认识,具有一定的理论意义。     

新生大鼠棕色脂肪干细胞心脏细胞分化潜能研究

目的 探讨新生大鼠棕色脂肪干细胞(rADSCs)向心脏细胞分化的潜能及不同刺激因子的分化效能。方法采用不同刺激因子对rADSCs进行诱导处理,3周后通过逆转录-聚合酶链反应和免疫荧光染色测定心肌细胞和心脏传导系统细胞(CCSs)特异标记物的基因和蛋白表达。结果 rADSCs在5-氮杂胞苷(5-Aza)、转化生长因子β1(TGFβ1)、骨形成蛋白4(BMP4)刺激下可分化为心肌细胞和CCSs,其分化效能依次为5-Aza>BMP4>Tgfβ1;分化的心肌细胞为心肌细胞和CCSs的混合细胞群; 5-Aza能显著减少细胞数目,而TGFβ1和BMP4对细胞生长无明显抑制作用。结论 大鼠脂肪干细胞可分化为心肌细胞和心脏传导系统细胞,5-Aza、TGFβ1和BMP4对细胞分化效能和生长影响不同。     

人胸骨骨髓间质干细胞的生物学特性和体外诱导分化为心肌样细胞

[目的]研究胸骨来源的人骨髓间质干细胞(hMSC)的生物学特性和体外诱导分化为心肌样细胞的条件.[方法]抽取人胸骨骨髓,用密度为1.077 g/mL的Ficoll-Paque分离液离心分离单核细胞,利用hMSC的贴附特性进行纯化及培养,对获得的hMSC进行表面抗原、成骨、成脂等鉴定.A、B、C组分别用5、10、15 μmol/L 5-氮胞苷(5-Aza)或D组15 μmol/L 5-Aza联合10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导hMSC分化为心肌样细胞.用免疫荧光的方法检测心肌特异性的肌动蛋白、肌球蛋白和肌钙蛋白,透射电镜观察是否具有心肌特异性的超微结构.[结果]来源于人胸骨的hMSC经流式细胞仪检测细胞表面抗原表达与其他来源的hMSC一致,表达hMSC特征性表面抗原,能被体外诱导成成骨细胞、脂肪细胞.各组hMSC诱导后免疫荧光染色心肌细胞特异性肌动蛋白、肌球蛋白和肌钙蛋白阳性,其中单用5-Aza的A、B、C组的阳性率低,只有5-Aza联合bFGF的D组阳性率约为20%～30%.透射电镜显示诱导后的hMSC具有心肌特征性超微结构,如肌丝、闰盘、心房颗粒.[结论]胸骨骨髓来源的人骨髓间质干细胞具有与其他部位来源的间质干细胞相同的生物学特性,可以在体外被一定浓度的5-Aza或5-Aza联合bFGF诱导分化为心肌样细胞,其中15 μmol/L 5-Aza联合诱导效果最好.     

阿托伐他汀对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞分化的影响

【目的】观察阿托伐他汀对肺纤维化大鼠的肺成纤维细胞增殖的影响及其对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞表型分化的影响。【方法】建立Wistar大鼠肺纤维化模型,1周后取肺组织进行成纤维细胞原代培养,细胞经鉴定后以不同浓度的阿托伐他汀对试验组细胞进行干预,采用MTT法测定细胞增殖情况;TGF-β1诱导细胞分化,同时给予不同浓度阿托伐他汀干预,免疫细胞化学染色（SP）法检测药物对肌成纤维标志物-αSMA表达的影响。【结果】MTT结果显示：各剂量组中不同干预天数所测得的OD值之间存在显著差异（P〈0.01）。各时间点所测OD值与不同用药物剂量之间存在交互作用（P〈0.01）。各剂量组对细胞的抑制作用之间存在显著差别（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结果显示：药物因素对-αSMA的表达量有影响（P〈0.01）,区组因素对-αSMA的表达量有影响（P〈0.01）。【结论】阿托伐他汀可抑制肺纤维化大鼠肺成纤维细胞的增殖,同时可抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞的分化,这主要表现在抑制细胞增殖、改变其形态、减少肌成纤维细胞的标志性产物-αSMA的产生上。