替罗非班对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的观察替罗非班对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法向培养的HUVECs中加入氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)80 mg/L共同孵育12 h,后加入固定浓度的替罗非班(替罗非班用量根据体重计算)分别作用12 h、24 h、36 h,逆转录-聚合酶链反应检测LOX-1mRNA表达,流式细胞仪间接免疫荧光法测定HUVECs LOX-1阳性细胞数。结果与对照组比较,ox-LDL组LOX-1mRNA的表达显著升高(P0.05);替罗非班抑制HUVECs LOX-1mRNA的表达作用呈时间依赖性。与ox-LDL组比较,应用替罗非班后12 h、24 h、36 h LOX-1mRNA表达降低8%、64%和73%,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,ox-LDL组HUVECs LOX-1阳性细胞数明显增加(P0.05);固定浓度的替罗非班作用后HUVECs LOX-1阳性细胞数的表达量随替罗非班的作用时间延长而减低,其作用呈时间依赖性。结论替罗非班可显著抑制ox-LDL诱导的HUVECs LOX-1表达,可通过抑制ox-LDL诱导的HUVECs LOX-1表达从而发挥其血管内皮细胞保护效应。     

凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1介导氧化低密度脂蛋白促进血管平滑肌细胞血管紧张素转化酶的表达

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对血管平滑肌细胞(VSMC)血管紧张素转化酶(ACE)表达的影响及凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在其中的作用。方法:人脐带动脉平滑肌细胞体外原代培养,传至4~5代用于实验。ox-LDL干预,RT-PCR测定VSMC ACE mRNA和LOX-1mRNA表达。并观察予以LOX-1的抑制剂多聚肌苷酸作用后,VSMC ACE mRNA表达的变化。结果:①较高浓度ox-LDL(20mg/L,100mg/L)作用后,VSMC ACE mRNA表达升高,作用1h出现峰值。低浓度ox-LDL(10mg/L)此种作用不明显。②ox-LDL作用后,VSMCLOX-1 mRNA表达升高,且随着ox-LDL浓度的升高而表达增强。③多聚肌苷酸抑制LOX-1后,ACE mRNA表达明显下降。结论:ox-LDL明显促进VSMC ACE表达,LOX-1在此过程中起重要介导作用。     

缬沙坦对氧化低密度脂蛋白诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的观察缬沙坦对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时,将细胞分为4组:对照组;OX-LDL组(加ox-LDL 100 mg/L);低浓度组(先加ox-LDL 100 mg/L,再加缬沙坦10 μmol/L);高浓度组(先加ox-LDL 100mg/L,再加缬沙坦30μmol/L)。RT-PCR测定MMP-1 mRNA的表达。结果与对照组比较,ox-LDL组MMP-1mRNA的表迭明显增多(P<0.05),与ox-LDL组比较,低、高浓度组抑制MMP-1 mRNA的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论缬沙坦的抗炎及稳定动脉粥样硬化斑块的作用,可能与抑制内皮细胞MMP-1的表达有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导肝窦内皮细胞植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达

目的：探讨植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）受体1（LOX-1）在肝窦内皮细胞（HSECs）中的表达和ox-LDL对其表达的调控作用。方法使用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法从基因和蛋白水平检测未经处理HSECs 中LOX-1的表达。应用不同浓度ox-LDL（0、20、40、60、80和100 mg/L）对HSECs作用24 h并应用80 mg/L ox-LDL对HSECs作用不同时间（0、12、24和48 h）,作用后实时定量PCR检测HSECs内LOX-1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测细胞内LOX-1蛋白表达。给予80 mg/L ox-LDL干预组多聚肌苷酸250 mg/L作用24 h后,测定LOX-1 mRNA和蛋白的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。结果 LOX-1 mRNA和蛋白在HSECs中均有表达。20～80 mg/L ox-LDL组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达水平随ox-LDL剂量增加而升高,与剂量有明显相关性（F＝38.7、3.43,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,100 mg/L ox-LDL 组 LOX-1 mRNA、蛋白表达下降,差异有统计学意义（ t ＝23.75、18.26, P ＜0.05）。80 mg/L ox-LDL对HSECs作用时间在0～24 h时,随着时间延长,LOX-1 mRNA、蛋白表达递增,与ox-LDL作用时间有明显相关性（F＝2.36、0.33,均P＜0.05）。与作用24 h相比,作用48 h组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达下降（t＝69.21、36.27,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,多聚肌苷酸组中LOX-1 mRNA和蛋白表达降低,两组差异均有统计学意义（ t＝54.93、28.19,均P＜0.05）。结论LOX-1存在于HSECs。在一定浓度和时间范围内,ox-LDL对HSECs LOX-1的调控作用具有时间和浓度依赖性,而多聚肌苷酸可部分抑制这种效应。     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1和凋亡蛋白表达的影响

目的 观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 (LOX-1)和凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制及LOX-1在吡格列酮调节凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达中的作用.方法 清洁型SD大鼠26只,随机分为对照组(n=9)、高脂饮食组(n=17),高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9),分别干预4周后,检测各组血脂水平,HE染色观察主动脉病理形态学改变,免疫组织化学法检测主动脉LOX-1、Bax和Bcl-2的表达.结果 高脂饮食组喂养12周后,血脂明显升高(P＜0.01);给药4周后,与模型组比较,吡格列酮组甘油三酯、总胆固醇水平明显降低(P＜0.01),且主动脉血管内皮基本完好,偶有脱落,平滑肌细胞增殖不明显.与对照组相比,模型组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01);与模型组相比,吡格列酮组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01).结论 高脂饮食可引起主动脉LOX-1和凋亡蛋白Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值的改变,而吡格列酮可降低血脂,调节LOX-1和凋亡蛋白表达,抑制内皮细胞凋亡,从而改善内皮细胞功能和动脉粥样硬化病理进程.     

吡格列酮保护缺氧复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的离子通道机制

目的观察吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨保护作用与ATP敏感性钾通道开放的关系。方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,分为8组:溶媒组、缺氧复氧组、0.1μmol/L吡格列酮组、1 μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098组、2μmol/L吡格列酮+0.5mmol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098+0.5 mmol/L 5-HD组。利用膜联蛋白-V与碘化丙啶双染法及Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡。结果缺氧复氧组乳鼠心肌细胞发生明显凋亡,经吡格列酮预处理后减少心肌细胞凋亡(P<0.05);与0.1μmol/L、1μmol/L及2μmol/L吡格列酮组比较,5-HD削弱吡格列酮抑制心肌细胞凋亡的作用(P<0.05),HMR-1098无作用(P>0.05)。结论吡格列酮对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,线粒体ATP敏感性钾通道的开放可能介导了吡格列酮的保护作用。     

吡格列酮对高脂饮食兔主动脉CD40L表达的影响

目的探讨吡格列酮对高脂饮食兔主动脉CD40L表达的影响。方法设立正常饮食、高脂饮食及高脂饮食加吡格列酮干预三组,比较主动脉病理形态学改变、血脂变化,采用免疫组织化学检测兔主动脉CD40L的表达,采用逆转录聚合酶链反应检测兔主动脉凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达。结果吡格列酮能减轻高脂饮食所致的内膜增厚和平滑肌细胞增殖,吡格列酮还能明显升高高密度脂蛋白胆固醇水平。高脂饮食刺激兔主动脉CD40L的表达,吡格列酮能显著减轻这种作用。高脂饮食能上调兔主动脉表达凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达,而吡格列酮能显著抑制这种作用。结论吡格列酮能减轻高脂饮食兔主动脉CD40L的表达,其作用可能与抑制凝血酶样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达有关,提示吡格列酮可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而达到抗动脉硬化的作用。     

PPARs激动剂对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨PPARs激动剂吡格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 首先用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）将体外培养的RAW264.7巨噬细胞诱导分化为泡沫细胞,然后进行油红O染色,并在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化;再以不同浓度吡格列酮（0 μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L）作用泡沫细胞24h,以30 μmol/L的吡格列酮作用0h、6h、12h、24 h、48 h;最后酶法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①50 mg/Lox-LDL诱导巨噬细胞48 h后分化为泡沫细胞.②与对照组相比,不同浓度吡格列酮作用后泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈剂量依赖性.③与对照组相比,30 μmol/L的吡格列酮作用6h、12 h、24 h、48 h后,泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈时间依赖性.结论 PPARs激动剂吡格列酮能够减少泡沫细胞内胆固醇含量,且呈剂量和时间依赖性。     

氧化型低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞透明质酸表达的影响及机制

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人主动脉血管平滑肌细胞透明质酸(HA)合成的影响,并初步探究其分子机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞T/G HAVSMC,使用不同浓度(10、25、50、75、100 mg/L)ox-LDL对T/G HAVSMC细胞进行干预,使用CCK-8法检测细胞存活率,并进行分组分析。采用浓度为25和50 mg/L的ox-LDL干预T/G HAVSMC细胞48 h,并设置天然LDL(native-LDL,N-LDL)组(50 mg/L的N-LDL)和对照组,使用HPLC法测定HA含量,使用实时定量PCR检测透明质酸合成酶2(HAS2)和透明质酸合成酶3(HAS3)的mRNA表达,使用Western blot法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、氧化脂蛋白的清道夫受体(SR-PSOX)以及脂肪酸转位酶(CD36)的表达。结果低于100 mg/L的ox-LDL对T/G HAVSMC细胞无明显细胞毒性。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组HA含量、HAS2和HAS3的mRNA表达量明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),N-LDL组与对照组组间差异无显著性(P0.05)。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组LOX-1表达明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),而LRP-1、SR-PSOX和CD36表达无明显变化(P0.05)。结论 ox-LDL能够诱导人主动脉平滑肌细胞中HA的合成,其机制可能与结合LOX-1有关。     

辛伐他汀对内皮细胞PD-L1表达的影响

目的研究辛伐他汀对受氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）干预的人脐静脉内皮细胞程序性死亡配体1（PD-L1）表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用50 mg/L ox-LDL含或不含5μmol/L辛伐他汀共同孵育温育人脐静脉内皮细胞12 h,RT-PCR及流式细胞术分别检测人脐静脉内皮细胞PD-L1 mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞PD-L1表达明显升高（P〈0.01）;预先给予辛伐他汀可明显抑制ox-LDL诱导的PD-L1表达,与单纯ox-LDL组比较具有统计学差异（P〈0.05）。结论PD-L1参与了辛伐他汀的免疫抑制作用。     

LOX-1/NF-κB信号途径对ox-LDL刺激的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用

目的：探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）/核因子（NF）-κB信号途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用。方法：设立不同浓度的ox-LDL刺激组,LOX-1中和抗体干预组,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氢基甲酸盐（PDTC）干预组,氟伐他汀干预组及空白对照组;检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6的浓度。结果：25mg/L、50mg/L、100mg/L浓度的ox-LDL刺激组24h后上清液TNF-α浓度分别为：（32.34±2.46）pg/ml、（96.43±8.36）pg/ml、（62.79±4.64）pg/ml,IL-6浓度分别为：（264.71±15.06）pg/ml、（630.70±17.77）pg/ml、（378.62±16.33）pg/ml,均较空白对照组TNF-а（22.99±3.55）pg/ml、IL-6（80.37±8.29）pg/ml水平显著升高（P〈0.05~0.01）;NF-кB抑制剂PDTC和LOX-1中和抗体干预后上清液TNF-α浓度较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.01）。不同浓度氟伐他汀（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）干预HUVECs 24h后上清液TNF-α浓度分别为（73.84±6.50）pg/ml、（42.59±6.45）pg/ml、（23.55±4.27）pg/ml;IL-6浓度分别为（549.0±20.23）pg/ml、（434.56±22.4）pg/ml、（302.42±21.30）pg/ml,较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.05~0.01）。结论：氧化低密度脂蛋白可刺激人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达,在25~50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系。氟伐他汀可浓度依赖性抑制人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。     

氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1诱导血管内皮细胞粘附分子的表达

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导血管内皮细胞粘附分子表达中的作用。方法用不同浓度ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用RrealtimeRT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达;RT—PCR测定细胞间粘附分子1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子1（VCAM-1）以及E选择素的mRNA表达;用Westernblot测定LOX-1、ICAM-1、VCAM-1以及E选择素蛋白的表达,观察ox-LDL对血管内皮细胞粘附分子表达的影响。HUVECs预先用聚肌苷酸[poly（I）]和爱兰苔胶处理,再用ox—LDL培养,再分别测定上述粘附分子的表达水平,比较加入LOX-1阻断剂前后粘附分子表达的变化。结果ox-LDL各剂量组皆可上调LOX-1、ICAM-1、E选择素的mRNA和蛋白表达（P〈0．01）,在10～50μm/ml剂量范围内呈现明显的剂量一效应关系（P〈0．01）,但ox—LDL对VCAM-1的表达没影响。HUVECs预先与250μg／ml的poly（Ⅰ）或爱兰苔胶作用2h,然后加入50μg/ml的ox—LDL作用24h。poly（Ⅰ）和爱兰苔胶都能抑制ox—LDL诱导的LOX-1、ICAM-1和E选择素的mRNA和蛋白表达水平,与未阻断组相比,差异皆有统计学意义（P〈0．01）。结论ox—LDL可以上调血管内皮细胞粘附分子的表达,LOX-1受体阻断剂可以部分阻断ox—LDL的上调作用,ox-LDL诱导血管内皮细胞粘附分子的表过是通过LOX-1介导的。     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响及机制分析

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响并探讨其可能作用机制.方法 采用胰蛋白酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,取2～5代用于实验,随机分为:①对照组用RPMI1640培养基;②氧化型低密度脂蛋白不同浓度(5、25、50和75 mg/L)组;③氧化型低密度脂蛋白作用不同时间(6、12、24、48和72 h)组;④氧化型低密度脂蛋白+p38MAPK特异性阻断剂SB203580组;⑤p38MAPK特异性阻断剂SB203580组.用RT-PCR及EusA法检测Fractalkine mRNA及蛋白表达水平,用Western blot法检测p38MAPK磷酸化表达水平.结果 ①氧化型低密度脂蛋白在一定浓度范围及作用时间呈时间-剂量依赖方式诱导Fractalkine mRNA及蛋白表达增加,最佳作用时间为48 h,最佳作用浓度为50 mg/L;②与对照组比较,氧化型低密度脂蛋白诱导组人脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达水平显著增加(P<0.05);使用SB203580干预后p38MAPK磷酸化水平明显下降,与氧化型低密度脂蛋白诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05).③预先用p38MAPK特异性阻断剂SB203580(20 μmol/L)与内皮细胞共同孵育60 min后,再加入氧化型低密度脂蛋白作用48 h后,Fractalkine表达水平明显降低,与氧化型低密度脂蛋白组比较有统计学差异(P<0.05).结论 氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞Fractalkine表达增加,其作用机制可能是通过p38MAPK信号转导通路.     

洛伐他汀能下调人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达

目的　探讨洛伐他汀对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和摄取氧化型低密度脂蛋白的影响。方法　用TRIzol试剂常规方法提取人脐静脉内皮细胞总RNA ,逆转录聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA含量 ,检测12 5　I标记的氧化型低密度脂蛋白放射活性法来确定内皮细胞摄取率 ,分光光度法测量乳酸脱氢酶含量。结果　人脐静脉内皮细胞与 1、10和 5 0 μmol/L洛伐他汀孵育 4 8h后 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达分别为对照组的 84 %、6 9%和 4 8% ;与 10 μmol/L洛伐他汀孵育 2 4、4 8和 96h后 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达分别为对照组的 82 %、6 9%和 5 2 %。洛伐他汀使人脐静脉内皮细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少 ,对乳酸脱氢酶含量没有影响。结论　洛伐他汀能降低血凝素样氧化型低密度脂蛋白mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。