参附芎泽注射液对压力超负荷大鼠心肌细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨参附芎泽注射液对压力超负荷大鼠细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、Bax的影响,分析其治疗心力衰竭的机制。方法:参照Ohkusa等介绍的方法复制腹主动脉缩窄大鼠模型。48只SD雄性大鼠随机分为假手术组(12)和造模组(36),术后4周将造模组随机分为模型组(11)、参附芎泽注射液治疗组(11)和依那普利治疗对照组(11)。参附芎泽注射液8ml.kg-1.d-1,依那普利对照组剂量为10mg.kg-1.d-1,假手术组和模型组腹腔注射等剂量生理盐水,干预时间共28天。连续用药4周后,分别用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,用SP免疫组化方法和图像分析技术检测心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:与假手术组相比,模型组心肌凋亡指数(AI)增多、Bcl-2蛋白表达光密度值(OD值)减少、Bax蛋白表达OD值增多。参附芎泽注射液组与模型组相比,心肌凋亡指数(AI)减少、Bcl-2表达明显增多而Bax的表达减少,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。与依那普利组相比无显著性差异。结论:参附芎泽注射液可通过上调Bcl-2抑制凋亡基因的表达,下调Bax促凋亡基因的表达,抑制压力超负荷大鼠心肌细胞凋亡。     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心室质量指数及心肌组织凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及心肌组织凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、Fas及其配体FasL表达水平的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、卡托普利组、艾灸+卡托普利组(简称艾卡组),每组12只。采用隔日腹腔注射盐酸多柔比星的方法复制CHF模型。艾灸组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴;卡托普利组用卡托普利混悬液(5mg/mL,25mL/kg)灌胃;艾卡组先灌服卡托普利混悬液,再行艾灸;均每日1次,连续3周。观察大鼠一般情况及行为体征;计算左心室质量指数(LVMI)和右心室质量指数(RVMI);HE染色观察心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法检测血清B型脑钠肽(BNP)与N末端前脑利钠肽前体(NT-pro BNP)含量;蛋白免疫印迹法检测心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现横纹不清,细胞肿胀、空泡等情况,其LVMI和RVMI显著增高(P0.01),血清BNP、NT-pro BNP含量明显升高(P0.01),Bax及Fas、FasL表达水平显著上升(P0.01),Bcl-2表达下降(P0.01)。与模型组比较,3个治疗组LVMI及RVMI显著降低(P0.05,P0.01),血清BNP含量显著下降(P0.01),Bax及Fas、FasL表达水平均显著下降(P0.01),Bcl-2表达明显升高(P0.01),艾灸组和艾卡组血清NT-pro BNP含量下降(P0.05,P0.01)。与艾卡组比较,艾灸组与卡托普利组Bax及Fas、FasL表达水平升高(P0.05,P0.01),Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低Bax、Fas、FasL蛋白表达,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡有关。     

参附注射液对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响

目的:探讨参附注射液对血管性痴呆(Va D)模型大鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响。方法:采用Pulsinelli四血管阻断法(4-VO)制作Va D大鼠模型,将36只大鼠随机分为假手术组、模型组和参附注射液组。采用Morris水迷宫检测学习记忆能力,采用免疫组化染色检测海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3阳性表达。结果:参附注射液组大鼠逃避潜伏期缩短,跨越平台次数增加,与模型组比较差异均具有统计学意义(P0.01)。参附注射液组大鼠海马区Bcl-2阳性细胞表达显著增多,而Bax和Caspase-3阳性细胞表达明显减少,与模型组比较差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:参附注射液能够通过下调凋亡相关基因Bax和Caspase-3的表达,上调抗凋亡基因Bcl-2水平,发挥抗海马神经元凋亡作用,改善Va D大鼠学习记忆能力。     

参附注射液对心力衰竭大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响

目的观察参附注射液对心力衰竭大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组(12只)、心衰模型组(12只)、参附治疗组(12只),术后第4周开始给予参附治疗组每日1次灌胃给药[日剂量6.0 mL/(kg·d)],共4周。观察评定左室舒张末径(LVDS)、室收缩末径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、血流动力学指标心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左心室压变化速率最大值、心肌超氧化物歧化酶(SOD)含量、心肌丙二醛(MAD)含量及心肌目的蛋白质等的变化。结果与假手术组比较,模型组LVDd、LVDS明显增大,LVEF、FS明显下降,BNP水平明显升高(均P0.05);参附注射液治疗后与模型组比较,各指标均改善(均P0.05)。与假手术组比较,模型组LVEDP明显增大,LVSP下降,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、HR明显下降(均P0.01);参附注射液治疗后与模型组比较,各指标均改善(均P0.01)。与假手术组比较,心衰模型组心肌SOD活性明显降低(P0.01),给予参附注射液处理后,心肌SOD活性明显高于心衰模型组(P0.01);心衰模型组MDA含量明显高于假手术组(P0.01),参附注射液处理后,MDA含量明显低于心衰模型组(P0.01)。Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2的比值明显降低(P0.01)。SOD与Bcl-2/Bax线性相关性具有统计学意义(r=0.652,P0.001),存在线性正相关关系;MDA与Bcl-2/Bax线性具有统计学意义(r=-0.644,P0.001),存在线性负相关关系。结论参附注射液可降低氧化应激水平,抑制蛋白凋亡,从而改善心衰大鼠心功能,其机制可能与上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,下调促凋亡蛋白Bax的表达有关。     

芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas FasL和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3表达的影响。方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型。健康wistar大鼠120只随机分成4组:正常对照组、模型组、芪贝复元饮组、L-T4组。光镜和电镜观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达。结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,治疗后芪贝复元饮组和L-T4组显著降低,且芪贝复元饮组的疗效优于L-T4组(P0.05)。结论:甲状腺功能减退引起Fas,FasL及Caspase-3蛋白的表达升高,心肌细胞凋亡增多。芪贝复元饮能减少促凋亡基因Fas、FasL和Caspase-3蛋白的表达,降低心肌细胞凋亡率。     

参附注射液对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的观察参附注射对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨参附注射液抗脓毒症心肌损伤的相关机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和参附组,以盲肠结扎穿孔(CLP)法建立脓毒症大鼠动物模型,观察各组大鼠心肌酶谱变化;凋亡原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,以RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 m RNA表达。结果参附组大鼠心肌酶谱升高程度较模型组低(P0.05),模型组较假手术组心肌酶水平高(P0.05);参附组大鼠心肌细胞TUNEL评分平均光密度(MOD)较模型组明显降低(P0.05),模型组较假手术组升高(P0.05);模型组心肌细胞Bcl-2 m RNA表达较假手术组明显降低(P0.05),参附组较模型组升高(P0.05)。结论参附注射液能减轻脓毒症大鼠的心肌损伤,其作用机制与上调Bcl-2 m RNA表达、减少心肌细胞凋亡相关。     

病毒性心肌炎小鼠T淋巴细胞凋亡的调控与清心胶囊的干预作用

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:复制VMCBALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI 双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P＜0.01),bcl-2表达均显著升高(P＜0.01、),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);与正常组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达无显著性差异(P＞0.05),Fas、bcl-2表达仍有显著性差异(P＜0.05);而Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC发病过程中存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.     

电针对吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、对照组、依赖组、电针组,连续20d递增量肌肉注射吗啡造成吗啡成瘾模型。造模后,依赖组立刻处死;对照组观察7d后处死;电针组电针双侧"足三里"穴(2/100Hz,2~4mA),每日1次,每次30min,治疗7d后处死。取大鼠胸腺,用免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白表达。结果:与正常组比较,对照组和依赖组Bcl-2表达明显减少,Bax明显增加(P<0.01);电针组与对照组相比,Bcl-2表达上升(P<0.05),Bax表达的下降尚未达到统计学意义(P>0.05)。对照组及依赖组Fas、FasL的表达比正常组明显升高(P<0.01);电针组与对照组相比,Fas、FasL的表达均明显减少,差异显著(P<0.01)。结论:电针"足三里"穴增加吗啡戒断大鼠胸腺细胞内Bcl-2蛋白表达的水平,减少Bax蛋白表达水平,降低Bax/Bcl-2比值,抑制Fas、FasL表达水平的提高,可能是电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制之一。     

宫宁颗粒对IUD避孕大鼠子宫血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨宫宁颗粒诱导IUD避孕大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法将50只已生育SD雌性大鼠随机分为宫宁颗粒组、消炎痛组、模型组、假手术组、空白对照组,应用光镜观察大鼠子宫组织病理学变化;免疫组化法检测大鼠子宫VSMC中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白表达。结果置入IUD后大鼠子宫内膜及血管结构功能发生异常,与模型组比较,宫宁颗粒能显著降低子宫VSMC中Bcl-2蛋白表达,增加Bax、Fas、FasL蛋白表达,并降低Bcl-2/Bax值(P0.01),且效果明显优于消炎痛组(P0.01)。结论宫宁颗粒可减轻大鼠子宫内膜形态学损伤,消除子宫血管构筑的异常,其机制可能是通过升高Bax、Fas、FasL蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,诱导子宫VSMC凋亡,进而达到防治置环后异常子宫出血的目的。     

清心胶囊对病毒性心肌炎小鼠不同分期T细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)不同分期T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:参照文献方法复制VMC急性期和恢复期BALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)无论急性期还是恢复期,模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC急性期、恢复期小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,无论急性期还是恢复期,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,急性期、恢复期模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,急性期、恢复期治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P分别＜0.01、0.05),bcl-2表达均显著升高(P分别＜0.01、0.05),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);无论急性期还是恢复期,Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC急性期、恢复期均存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.