水通道蛋白2在脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型中表达的研究

目的:观察脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型及在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下大鼠尿液中水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)的变化,以探讨脾胃湿热证湿、热偏重型之间尿液中AQP2的变化规律及三仁汤、白虎加苍术汤的作用机理。方法:将40只大鼠随机分成5组各8只:正常对照组、湿偏重组、热偏重组、三仁汤组、白虎加苍术汤组,采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证湿、热偏重型的动物模型。分别用三仁汤、白虎加苍术汤对湿偏重、热偏重型大鼠模型进行干预,采用双抗夹心ELISA法检测各组大鼠尿液中AQP2的变化。结果:湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦尿液中AQP2含量较正常对照组明显增高;湿偏重组AQP2水平较热偏重组增高更明显;三仁汤组、白虎加苍术汤组分别与湿偏重组、热偏重组比较,AQP2的含量降低,三仁汤组、白虎加苍术汤组与正常对照组比较,无显著性意义。结论:脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型存在AQP2含量增高;三仁汤、白虎加苍术汤对大鼠尿液中的AQP2含量具有调节作用,能降低已增高的AQP2的含量。     

三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠尿液中AQP2的影响

目的:探讨三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠模型尿液中AQP2的调控作用。方法:选用清洁级SD大鼠32只,将其随机分成4组,每组各8只;正常对照组:正常温度、湿度下予以普通饲料喂养;湿热组:在湿热环境下予以肥甘饮食饲料喂养;湿偏重组:在湿热组饲养的基础上灌服北京产二锅头;三仁汤组:在湿偏重组饲养的基础上予以三仁汤;采用Bradford方法测定各组动物尿液中AQP2的含量。结果:AQP2含量湿热组、湿偏重组分别与正常对照组、三仁汤组比较均有非常显著性差异(P<0.01);湿偏重组与湿热组比较也有非常显著性差异(P<0.01);三仁汤组与正常对照组比较则无显著性差异(P>0.05)。结论:三仁汤对湿热证、湿偏重证大鼠尿液中AQP2的降低有调节作用,能较好地恢复AQP2在机体内的含量至正常水平。     

清香散对脾胃湿热证大鼠模型P物质、生长抑素含量的影响

目的:观察清香散对脾胃湿热证大鼠模型胃窦P物质(Substance P,SP)、生长抑素(Somatostatin,SS)含量的影响。方法:将24只大鼠随机分成3组:正常对照组、湿热组、清香散组,每组各8只,湿热组与清香散组采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证的动物模型。以放免法检测各组大鼠胃窦中SP、SS的变化。结果:湿热组大鼠胃窦SP、SS含量较正常对照组明显降低(P(0.01);清香散组与湿热组比较,SP、SS的含量提高(P(0.01);清香散组与正常对照组比较,SP含量亦有明显提高(P(0.01),而SS的含量与正常对照组比较,差异无显著性意义(P(0.05),说明清香散能提高已降低的SP、SS的含量。结论:脾胃湿热证大鼠模型存在胃肠激素的紊乱,SP、SS含量降低,而清香散对大鼠胃窦的SP、SS含量具有调节作用,能提高已降低的SP、SS的含量。     

脾胃湿热证大鼠湿偏重、热偏重模型尿液AQP2的变化及其在肾组织的表达

目的:研究脾胃湿热证湿、热偏重型之间AQP2在尿液中的变化及在肾脏组织中表达的变化规律,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用Bradford方法测定尿液中AQP2含量,采用SABC免疫组化法检测肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2的表达。结果:湿偏重组尿液AQP2含量明显减少,热偏重组尿液AQP2含量明显增加,而且热偏重组尿液AQP2含量更高。AQP2在肾脏的表达中,湿偏重组肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2表达明显比正常组、白虎加苍术汤组及清香散组减少,热偏重组表达最多。结论:AQP2对于脾胃湿热证"湿"的形成,湿、热的量化,判断湿、热的偏重具有重要的作用。白虎加苍术汤及清香散祛湿的作用可能是通过调节AQP2对细胞内外体液平衡的功能而达到的。     

清香散对大鼠炎症递质含量的影响

目的：研究清香散对大鼠炎症递质（NO）含量变化的影响。方法：建立温病湿热证动物模型,观察大鼠血清NO变化水平,并对正常对照组、湿热模型组、清香散预防组、清香散治疗组NO含量进行比较。结果：湿热模型组与清香散预防组显著低于正常对照组,而清香散治疗组与正常对照组比较差异无显著性意义,清香散预防组与湿热模型组比较差异无显著性意义,而清香散治疗组显著高于湿热模型组;清香散治疗组显著高于清香散预防组。结论：湿热证模型大鼠NO含量明显降低,清香散能显著提高大鼠血清NO含量。     

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白及线粒体相关性研究

目的：探讨慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与胃黏膜组织中水通道蛋白（AQP）、线粒体内腺苷酸含量的相关性,进一步揭示脾失健运,聚湿生热的现代生物学基础,补充脾主运化的研究内容。方法：纳入慢性浅表性胃炎患者40例,脾虚证组及脾胃湿热证组各20例;健康受试者10例作为正常对照组;对3组进行胃镜检查,检测胃黏膜组织中AQP3、AQP4的表达,以及线粒体内腺苷酸含量。结果：脾胃湿热证组及脾虚证组胃黏膜炎症病理分级与正常对照组比较,差异均有显著性意义（P〈0.05）;脾胃湿热证组与脾虚证组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。脾胃湿热证组及脾虚证组AQP3、AQP4表达均高于正常对照组（P〈0.05）;脾胃湿热证组AQP4表达与脾虚证组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。脾胃湿热证组及脾虚证组的腺苷酸含量与正常对照组比较,差异均具有显著性意义（P〈0.05）。结论：AQP3、AQP4以及线粒体内腺苷酸的含量异常是慢性浅表性胃炎脾胃湿热证形成机理之一。     

脾胃湿热证热偏重、湿热并重型大鼠模型血液中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)的变化研究

脾胃湿热证是临床常见病证,相关研究认为其形成与气候、饮食、病原微生物感染以及体质因素有关.为了探讨脾胃湿热证形成的机理,我们对大鼠进行了脾胃湿热证热偏重、湿热并重型造模,并在相应的清香散、苍术白虎汤干预下,分组观察大鼠血浆胃动素、胃泌素的变化情况.结果显示:湿热并重组血浆胃动素增高,热偏重组血浆胃动素降低,与正常对照组及苍术白虎汤组、清香散组比较有显著性差异(P＜0.05);而湿热并重组、热偏重组血浆胃泌素降低,与正常对照组及清香散组、苍术白虎汤组比较有显著性差异(P＜0.05).     

苍术炒焦前后对湿阻中焦模型大鼠AQP2,AQP3含量的影响

目的:探讨苍术炒焦前后对湿阻中焦模型大鼠水通道蛋白2(AQP2)和AQP3含量的影响,为苍术炒焦机制研究提供参考。方法:将动物分成空白组,湿阻中焦模型组,生苍术高、中、低剂量组(3 459.2,1 729.6,864.8 mg·kg~(-1))及焦苍术高、中、低剂量组(剂量同生品)和香砂胃苓丸阳性组(1 729.6 mg·kg~(-1)),连续灌胃给药7 d。利用紫外分光光度法和酶联免疫法分别检测给药前后大鼠尿液中AQP2含量和结肠黏膜中AQP3含量。结果:与空白组比较,模型组尿液中AQP2含量增加,结肠黏膜中AQP3含量降低,两者间的差异均具有极显著性意义。与模型组比较,各给药组大鼠尿液中AQP2含量均降低,且生品组AQP2含量较焦品组低;结肠黏膜中AQP3含量均增加,且焦品组含量高于生品组。结论:苍术的生品与焦品均有祛湿止泻作用,生苍术祛湿作用强于焦品,焦苍术止泻作用强于生品。     

脾胃湿热证湿、热偏重型大鼠模型血浆淋巴细胞HSP70的表达

目的:研究脾胃湿热证湿偏重型、热偏重型之间血浆淋巴细胞HSP70表达的变化,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用复合因素研制脾胃湿热证湿、热偏重型大鼠模型,并在清香散、白虎加苍术汤的干预下观察大鼠血浆淋巴细胞HSP70的变化,采用流式细胞仪检测细胞浆内HSP70。结果:湿偏重组、热偏重组淋巴细胞HSP70表达明显增加,且热偏重组比湿偏重组增高明显(P<0.05),同时清香散组、白虎加苍术汤组与正常组比较有显著性差异(P<0.05),与湿偏重组、热偏重组亦有显著性差异(P<0.05)。结论:复合因素特别是大肠杆菌的作用下,湿、热偏重型血浆中淋巴细胞HSP70表达明显增加,清香散、白虎加苍术汤组具有保持细胞结构完整,维持细胞正常功能的作用。     

清香散对脾胃湿热证大鼠模型胃粘膜上皮细胞凋亡及相关调控基因(Bcl-2、P53)表达的影响

目的:用分子生物学技术探讨脾胃湿热证细胞凋亡的特征及变化规律,揭示清香散治疗脾胃湿热证的作用机制.方法:采用TUNEL法检测胃粘膜组织(胃窦、胃体)的凋亡细胞及免疫组织化学法同步检测胃粘膜上皮Bcl-2、P53等基因相关蛋白.结果:造模组胃粘膜细胞凋亡指数(AI)明显高于清香散组和正常对照组(P＜0.05);胃粘膜Bcl-2、P53表达,造模组均显著高于清香散组和正常对照组(P＜0.05),而清香散组和正常对照组之间则无明显差异(P＞0.05).结论:脾胃湿热证造模组AI增高,P53、Bcl-2表达均增强.清香散可以抑制胃粘膜Bcl-2、P53蛋白表达的异常改变,从而促进细胞凋亡趋势向正常.     

清热化湿方对脾胃湿热证患者胃黏膜AQP3、AQP4蛋白表达的影响

目的:探讨脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白(AQP3)、AQP4表达的关系及中药清热化湿方的作用机制.方法:选择慢性浅表性胃炎患者68例,其中脾胃湿热证53例(湿重于热19例,热重于湿14例,湿热并重20例),脾虚证15例;另选正常健康体检者10例为正常对照组.脾胃湿热证患者予中药清热化湿方,并采用免疫组化方法检测入选者胃黏膜AQP3、AQP4表达情况.结果:AQP3、AQP4在脾胃湿热证组的表达明显强于正常对照组(P＜0.05);脾虚证组与正常组比较差异无显著性(P＞0.05);各亚型之间呈湿重于热＞湿热并重＞热重于湿的趋势,但差异无显著性(P＞0.05).治疗后,脾胃湿热证组AQP3、AQP4表达水平显著下降(P＜0.01),与正常对照组及脾虚证组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:AQP3、AQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一,中药清热化湿方可能通过影响AQP3、AQP4的表达而发挥治疗作用.     

王氏连朴饮对脾胃湿热证大鼠血清IL-1β与NO影响的实验研究

目的：观察王氏连朴饮对脾胃湿热证大鼠血清白细胞介素1（IL-1β）和一氧化氮（NO）含量的调节作用。方法：将30只大鼠随机分为正常对照组、脾胃湿热证模型组、治疗组三组,每组10只.除正常对照组外,其余各组均按“湿热环境＋高脂高糖饮食＋白酒”的内外因湿热证模型综合造模方法,建立脾胃湿热证大鼠模型。放免法检测IL-1β含量,硝酸还原酶法检测NO含量。结果：脾胃湿热证模型大鼠血清中1L-1β含量明显增高,NO含量显著降低（与正常对照组相比有显著性差异P〈0．01）,经治疗后大鼠血清中IL-1β含量、NO含量逐渐恢复正常,与正常对照组相比无显著性差异（P〈0．01）。结论：王氏连朴饮能有效改善大鼠脾胃湿热证诸症状,使增高的血清IL-1β含量恢复正常,使降低的血清NO含量恢复正常。提示其作用机制可能是：通过调节脾胃湿热证大鼠血清中NO的含量,恢复抗氧化功能,调节大鼠的免疫功能;通过调节脾胃湿热证大鼠血清中IL-1β的含量,减少致热源,减轻炎症反应,从而取得治疗脾胃湿热证的疗效。     

脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜AQP3、AQP4基因的表达

目的 探讨脾胃湿热证大鼠动物模型建立方法及脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜水通道蛋白AQP3、AQP4基因表达。方法 40只大鼠随机分为四组，造模20d，对照组正常喂饲；脾虚组隔日喂饲，非喂饲日灌喂番泻叶水煎液；模型组20％蜂蜜水自由饮用，隔日灌服油脂，每日2％水杨酸钠灌胃。造模开始后第16～20日每日20：00至次日8：00将大鼠置入人工气候箱中；治疗组前20d处理同模型组，第21～25日灌服清热化湿方。观察结束后，FQ—PCR方法测定大鼠胃黏膜AQP3、AQP4基因表达。结果 模型大鼠在造模过程中出现脾胃湿热证的特征性表现；模型组AQP3、AQP4基因表达水平高于对照组、脾虚组、治疗组。结论通过对大鼠施加内、外湿因素的造模方法可复制出临床脾胃湿热证的证候特征；AQP3、aQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一。     

清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL-2及TGF-α水平的影响

目的:研究清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL-2、TGF-α变化的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组(7只)、造模组(28只).Walker-256肿瘤细胞株注射入大鼠皮下,长出皮下实体瘤,取瘤体周边组织剪成小块,造模组大鼠予肝脏手术植入小瘤块,予高糖高脂饲料饲养,置于高温高湿环境,将造模组大鼠分为肝癌模型对照组、氟脲嘧啶组、清香散组、联合治疗组,每组7只,造模后第20天处死大鼠,采血,用放免法测血清IL-2、TGF-α.结果:造模成功后大鼠的IL-2、TGF-α比正常组升高(P＜0.05),清香散组和5-FU组给药后,大鼠的IL-2增加,TGF-α减少,二药联合治疗组大鼠变化大于单用清香散或5-FU(P＜0.05).结论:清香散可增加湿热型肝癌大鼠血清IL-2含量,降低TGF-α含量.清香散与5-氟脲嘧啶协同调节细胞因子,联合抗癌,效果更好.     

丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水通道蛋白表达的影响

目的观察丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠肾脏水通道蛋白(AQP)2、AQP4及肺脏AQP1表达的影响,探讨丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水液代谢异常的调节机制。方法从60只SD大鼠中随机选择10只作为正常组,剩余50只采用高糖高脂饲料刺激加小剂量STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠30只随机分为模型组、对照组、研究组各10只。对照组给予卡托普利灌胃,研究组给予卡托普利灌胃同时腹腔注射丹参单体IH764-3,正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。灌胃16周末处死大鼠,留取肾、肺组织行病理观察,采用免疫组化法、Western blot印记法、RT-PCR法检测肾组织中AQP2、AQP4及肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达情况。结果肾组织中AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达量模型组均明显高于正常组(P均0.05),对照组、研究组均明显低于模型组(P均0.05),研究组均低于对照组(P均0.05)。肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达量模型组均明显低于正常组(P均0.05),研究组与正常组比较差异无统计学意义(P0.05),对照组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 AQP2、AQP4在肾脏组织表达的增多及AQP1在肺脏组织表达的减少可能是导致糖尿病水液代谢异常的重要机制之一。丹参单体IH764-3对水通道蛋白的表达有调节作用,这可能是其调节水液代谢作用的机制,也是其防治糖尿病肾病的基础。     

丹参对糖尿病肾损伤大鼠水液代谢异常与水通道蛋白调节机制探讨

目的探讨肾脏水通道蛋白-2(AQP-2)、肺脏水通道蛋白-1(AQP1)的表达与糖尿病肾病大鼠水液代谢异常及丹参防治作用的机制。方法 60只健康SD大鼠分为正常组(10只),剩余50只采用高糖高脂饲料刺激加小剂量STZ诱导糖尿病大鼠模型成功30只,随机分为模型组、对照组、观察组每组各10只;免疫组织化学检测AQP2、AQP1在各组大鼠肾脏及肺脏中的分布及蛋白质的表达。结果肾免疫组化显示,AQP2主要在肾脏的集合管表达。在4组动物的肾脏AQP2蛋白[相对阳性面积:正常组(0.119±0.035),模型组(0.188±0.027),对照组(0.158±0.036),观察组(0.154±0.033)]的表达上观察组较模型组均下调。肺免疫组化显示:AQP1主要在肺毛细血管内皮细胞表达。模型组AQP1在毛细血管内皮细胞表达明显下降(P<0.05),这种减少全肺均能观察到,非局限于损伤严重部位;观察组AQP1已基本恢复正常,与正常组相比无显著差异;对照组未见AQP1有明显变化。结论模型组大鼠肾组织中AQP2表达增多,肺毛细血管内皮细胞的AQP1表达明显下降。AQP2在肾脏的增多及AQP1在肺脏的减少可能是导致糖尿病水液代...     

温病湿热证湿热量化的相关性实验研究

目的;为探讨温病湿热证湿热量化的实验方法,在以往研究基础上,筛选出相关性强的量化指标。方法;通过复制湿热证动物模型,采用Bradford方法测定水通道蛋白2(AQP2)含量,放免法检测内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP),一步双抗夹心酶联免疫法检测粒细胞集落刺激因子(G-CSF),比色法检测中分子(MMS)和巯基(R-SH)物质等。结果;湿热证模型组AQP2水平较正常组明显降低,用清香散治疗后AQP2水平基本恢复正常,与正常组接近。湿热模型组ET水平较正常对照组明显升高,而CGRP较正常组降低(P<0.01)。湿热证模型大鼠血中G-CSF、MMS升高,而R-SH水平降低,经清香散治疗1周后.大鼠血中G-CSF、MMS及R-SH基本恢复正常,模型对照组G-CSF阳性率升高。结论;AQP2与ET、CGRP、G-CSF、R-SH、MMS分别可作为“湿”偏重,“热”偏重,“湿热病因”的相关性量化指标。这些技术指标对湿热定性、量化,清热祛湿药物的研究以及湿热证“证”本质的深入探讨有重要意义。     

肺气虚大鼠肺、肾组织AQP1表达及血浆ET水平变化

目的观察肺气虚模型大鼠肺、肾组织水通道蛋白1(AQP1)表达及血浆中内皮素(ET)水平的变化,为中医学肺肾相关理论提供实验依据。方法20只大鼠随机分为模型组和对照组,应用放射免疫方法测定血中ET含量;应用Western blot方法测定AQP1蛋白含量的变化。结果肺气虚模型组肾组织AQP1表达高于对照组,而肺组织AQP1表达低于对照组;模型组血浆ET明显升高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论肺气虚模型大鼠肾组织AQP1表达增强,而肺组织AQP1表达降低,ET可能促进肾组织AQP1表达、抑制肺组织AQP1表达。     

三拗汤调节溃疡性结肠炎模型大鼠肺与结肠组织细胞膜AQP1、AQP4的表达效应

目的:观察三拗汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠肺与结肠组织细胞膜AQP1、AQP4的表达效应。方法:将60只SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组和给药组,每组各20只。采用TNBS+乙醇法7周制备溃疡性结肠炎大鼠模型,检测各组大鼠粪水含量、肺功能及血气指标;免疫组织化学法、Western blot法检测大鼠结肠组织AQP4与肺组织AQP1蛋白表达。结果:模型组粪水含量高于空白组,给药组粪水含量低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组PCO_2高于空白组,PH值、PO_2低于空白组;给药组PO_2、PH值高于模型组,PCO_2低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组气道阻力及肺顺应性高于空白组,给药组降低气道阻力及肺顺应性低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组结肠组织AQP4蛋白半定量及肺组织AQP1表达低于空白组及给药组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:三拗汤治疗溃疡性结肠炎模型大鼠,肺组织AQP1表达上升,促进肺泡水清除,减轻肺损伤,改善呼吸功能;同时结肠组织AQP4表达明显上升,粪水含量降低,泄泻减轻,共同降低大鼠死亡率。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P＜0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P＜0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.