原因不明复发性流产与CD56CD16NK细胞的相关性研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)与外周血和蜕膜组织中CD56+CD16-、CD56+CD16+NK细胞水平及CD56+CD16-/CD56+CD16+平衡的相关性。方法:选取30例早孕原因不明复发流产患者为试验组,20例正常早孕人流妇女为对照组,采集两组病例的蜕膜组织及外周血标本,分离淋巴细胞,用流式细胞技术检测各组标本中CD56+CD16-、CD56+CD16-NK细胞的数量,计算ED56+ED16-/CD56+ED16+平衡偏移。结果:两组外周血中CD56+CD16-细胞和CD56+CD16+NK细胞水平以及CD56+CD16-/CD56+CD16+比值差异均无统计学意义(P>0.05);两组蜕膜组织中,URSA组CD56+CD16+NK细胞水平升高,ED56+CD16-/ED56+CD16+比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05),CD56+CD16-细胞与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组蜕膜组织中CD56+CD16-NK细胞数及CD56+CD16-/CD56+CD16+比值均高于其外周血相应值,差异有统计学意义(P<0.05),CD56+CD16+NK细胞数在两组间差异无统计学意义(P>0.05);在URSA组中,蜕膜组织中的CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞数均显著高于其外周血,差异均有统计学意义(P<0.05),CD56+CD16-/CD56+CD16+比值蜕膜组织中虽高于外周血,但无统计学意义(P>0.05)。结论:蜕膜组织中CD56+CD16+NK细胞水平升高以及由此引起的CD56+CD16-/CD56+CD16+比值的变化可能是原因不明复发性流产发生的一个主要因素。     

人工流产与复发性自然流产蜕膜淋巴细胞亚群FAS表达的研究

目的:研究不明原因复发性流产(RSA)患者外周血、蜕膜组织T细胞、NK细胞数量,NK细胞亚群数量及FAS抗原的表达,探讨其在RSA中的作用。方法:选取确定妊娠并难免流产者26例为实验组,25例正常妊娠行人工流产者作为对照组,用流式细胞仪检测两组外周血和蜕膜组织T细胞、NK细胞数量,NK细胞亚群数量及FAS抗原的表达。结果:①对照组外周血T细胞和NK细胞,蜕膜组织T细胞和NK细胞分别为(65.54±11.91)%、(12.26±6.46)%、(5.63±5.10)%、(56.50±19.80)%;实验组分别为(42.41±10.03)%、(12.24±6.40)%,(5.62±4.74)%、(60.14±21.52)%;两组差异无统计学意义(P>0.05)。②对照组外周血CD3-CD56+CD16+和CD3-CD56+CD16-细胞,蜕膜组织CD3-CD56+CD16+和CD3-CD56+CD16-细胞分别为(65.54±11.91)%、(6.06±3.05)%,(2.84±1.59)%、(83.79±6.02)%;实验组分别为(74.93±11.42)%、(5.58±2.72)%,(5.36±4.76)%、(74.12±11.32)%;P值分别是0.014,0.592,0.031,0.001,除外周血CD56+CD16-细胞两组无差异外,其余3组差异有统计学意义。③对照组外周血CD3-CD56+CD16+FAS和蜕膜组织CD3-CD56+CD16-FAS表达分别为(49.15±9.77)%和(4.97±2.32)%;实验组分别为(38.21±9.42)%,(9.59±6.42)%;P值分别是0.001、0.004,差异有统计学意义。结论:FAS/FASL系统可能是外周血和蜕膜组织NK细胞亚群凋亡的主要途径之一。     

细菌性肺炎新生儿体内免疫细胞及其细胞因子变化分析

目的探讨细菌性肺炎新生儿体内T淋巴细胞亚群、NK细胞及其亚群和细胞因子白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的变化情况。方法选择医院新生儿科2014年1月-2015年12月住院细菌性肺炎新生儿40例为细菌性肺炎组和住院单纯性高胆红素血症新生儿40例为对照组;流式细胞术检测外周血CD_3~+、CD_4~+、CD8+、CD19+、NK细胞、CD3-CD56bright CD16neg/dim、CD3-CD56dimCD16bright、CD3-CD56neg CD16bright及IL-4和IFN-γ。结果细菌性肺炎组新生儿CD_3~+、CD_4~+和CD8+(57.97±3.24、34.82±6.52、21.85±2.82)均低于对照组(60.48±4.12、40.46±5.57、23.38±2.47)(P<0.05),细菌性肺炎组新生儿CD19+(33.18±6.67)高于对照组(24.47±2.29)(P<0.05);细菌性肺炎组新生儿NK细胞、CD3-CD56bright CD16neg/dim、CD3-CD56dimCD16bright、CD3-CD56neg CD16bright和对照组比较差异无统计学意义;细菌性肺炎新生儿IL-4水平(2.26±0.24)高于对照组(2.08±0.29)(P<0.05),细菌性肺炎新生儿IFN-γ水平和对照组比较差异无统计学意义。结论细菌性肺炎新生儿存在免疫功能紊乱,体内CD_3~+、CD_4~+和CD8+降低,CD19+、NK细胞、CD3-CD56bright CD16neg/dim、CD3-CD56dim CD16bright、CD3-CD56negCD16bright升高,IL-4升高。     

不明原因复发性流产患者早孕期流产蜕膜组织CD3~-CD(56+16)~+NK细胞数量改变及分析

目的分析不明原因复发性流产(URSA)患者及人工流产患者流产蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞数量的变化,探讨早孕期蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞与稽留流产的关系。方法选取不明原因复发性流产患者20例作为URSA组,人工流产患者10例作为人工流产组,流式细胞仪检测两组的蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞数量。结果 URSA组患者的流产蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞比例显著少于人工流产组患者(P <0.05)。结论早孕期蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞比例失调可能是孕早期胚胎丢失的病因之一。     

外周血自然杀伤T细胞与原因不明复发性流产的相关性分析

目的探讨外周血自然杀伤T (NKT)细胞的水平与原因不明复发性流产(URSA)的相关性,为临床诊治提供参考依据。方法选取确诊为URSA的患者35例,其中怀孕者14例为URSA怀孕组,未孕者21例为URSA非孕组;选取37例正常体检者,其中正常怀孕者16例为正常妊娠组,未生育过的妇女11例为正常未生育组,有过妊娠史的10例为正常已生育组。采用流式细胞仪测定各组外周血中的CD3~+、CD3~+CD16~+CD56~+、CD3~+CD16-CD56~+细胞的表达水平。结果 URSA怀孕组孕妇的外周血NKT细胞比其他4组都高,且差异有统计学意义(均P0. 05);正常妊娠组妇女外周血NKT细胞比URSA非孕组、正常未生育组、正常已生育组都高,且差异有统计学意义(均P0. 05);而URSA非孕组与正常未生育组、正常已生育组之间的NKT细胞差异无统计学意义(均P0. 05)。5组妇女的CD3~+和CD3~+CD16-CD56~+细胞水平差异无统计学意义(均P0. 05)。结论 URSA患者怀孕时外周血中的NKT细胞表达水平上升,NKT细胞可能参与了URSA的发生。     

CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的 通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法 使用流式细胞分析外周血CD3-CD56+NK细胞及CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果 CD3+CD56+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3+CD56+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3-CD56+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3-CD56+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3-CD56+NK细胞的功能下降明显。结论 急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3+CD56+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。     

子痫前期患者蜕膜中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性 T细胞及NK细胞的相关研究

目的:对子痫前期(PE)患者蜕膜中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和NK细胞进行相关研究,探讨子痫前期发病机制中相关的免疫学变化。方法:选择子痫前期患者30例(轻度13例、重度17例)、正常晚期妊娠妇女30例。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和NK细胞后计数并检测其平均灰度值。结果:①子痫前期患者蜕膜CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞阳性表达率均明显低于正常晚期妊娠者(P均<0.05);②子痫前期患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇(P均<0.05)且NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇(P均<0.05)。结论:子痫前期患者蜕膜的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞均低于正常孕妇;蜕膜的NK细胞数均高于正常孕妇,这一结果造成母胎免疫耐受失衡且NK细胞呈激活状态,杀伤活性增强,导致子痫前期。     

正常妊娠外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞和雌二醇水平变化的研究

目的探讨外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞百分率和雌二醇水平在正常妊娠整个过程中的变化。方法采用三色荧光标记流式细胞术检测正常非妊娠健康女性（对照组）,早早孕组、早孕组、中孕组、晚孕组各35例妇女外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞百分率;采用电化学发光酶免分析技术分别检测以上各对象外周血雌二醇水平。结果对照组和早早孕组外周血雌二醇水平明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P〈0．05）,并且随孕周增大而升高（P〈0．05）;对照组和早早孕组外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞百分率明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P〈0．05）,并且随孕周增大而升高（P〈0．05）,晚孕组略低于中孕组,但无统计学意义（P〉0．05）。结论正常妊娠过程孕8周左右之后CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞百分率和雌二醇水平均呈现明显升高,并且随孕周增大而升高,正常的CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞百分率和外周血雌二醇水平在维持正常妊娠过程中发挥重要作用。     

慢性湿疹患者外周血淋巴细胞亚群及总IgE水平的检测分析

目的探讨慢性湿疹患者的外周血淋巴细胞亚群与总IgE水平相关性。方法通过流式细胞仪和BNII特定蛋白分析仪检测400例慢性湿疹患者外周血中淋巴细胞亚群及总IgE,并对其相关性进行分析。结果与正常组相比较,慢性湿疹组总IgE水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+比值均降低,CD8~+T细胞、CD3-CD16+56+NK细胞升高,差异有统计学意义(P0.05)。不同程度总IgE患者组的免疫功能相比较,CD3~+细胞与CD3-CD16+56+细胞差异有统计学意义(P0.05)。结论免疫功能的紊乱是慢性湿疹患者发病的一个重要机制,在慢性湿疹的发生、发展过程中可能起到重要的作用。     

严重脓毒症患儿外周血自然杀伤细胞比例、亚群的变化

目的探讨严重脓毒症患儿外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞及各亚群比例的变化。方法以2009年1月—2012年12月收治并临床治愈的严重脓毒症患儿8例为研究对象,所有患儿于诊断严重脓毒症24 h内(急性期)及病情稳定进入恢复期后抽取外周血检测N K细胞及各亚群:CD56+NK细胞、CD16+NK细胞、CD56+16+NK细胞百分率。计量资料采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 NK细胞、CD56+CD16+NK细胞、CD16+NK细胞比例恢复期[(5.70±2.77)%、(4.75±3.23)%、(0.53±0.41)%]均较急性期[(4.44±0.90)%、(3.73±1.21)%、(0.41±0.28)%]明显升高,比较差异均有统计学意义(均P0.05)。结论严重脓毒症患儿表达CD16+分子的NK细胞数量,恢复期较急性期明显升高。这可能是严重脓毒症患儿能进入恢复期或能治愈的重要原因之一。     

足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4~+CD25~+T细胞的变化

目的:检测足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4+CD25+T细胞的变化情况,探讨它们与分娩发动的关系。方法:对40例健康足月孕妇按临产情况分为足月未临产组和足月临产组,收集孕妇蜕膜组织,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、CD4+CD25+T细胞含量。结果:足月临产组的蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(36.3±6.5)%,足月未临产组蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(33.9±3.0)%,差异无统计学意义;足月临产组的蜕膜NK细胞表面CDl6的表达明显高于足月未临产组,两者分别为(8.9±1.1)%与(4.6±0.9)%(P<0.05);足月临产组的蜕膜CD4+CD25+T细胞含量明显小于足月未临产组CD4+CD25+T细胞的含量,两者分别为(4.5±0.7)%与(9.1±1.0)%(P<0.05)。结论:足月妊娠分娩发动前、后蜕膜中的NK细胞及CD4+CD25+T细胞发生变化,推测NK细胞与CD4+CD25+T细胞可能参与了分娩发动。     

HIV感染者抗病毒治疗前后CD3+CD4+T及NK/NKT细胞变化的临床意义

目的 了解HIV感染者抗病毒治疗前后不同时期CD3+CD4+T和NK/NKT细胞的变化,探讨CD3+CD4+T、NK/NKT细胞作为抗病毒治疗后评价免疫状况指标的临床意义。方法 采用重复测量资料方差分析对40个HIV 感染者抗病毒治疗前、治疗后6个月和12个月的CD3+CD4+T、NK、NKT细胞绝对计数差异进行比较,分析治疗前后CD3+CD4+T细胞计数与NK、NKT细胞计数的相关性。结果 感染者不同时间测得的CD3+CD4+T细胞数量差异有统计学意义（F =68.16,P <0.001）,两两比较差异均有统计学意义（P <0.001）。NK和NKT细胞计数三次测量结果差异有统计学意义（F =10.701,P <0.001;F =44.177,P <0.001）,两两比较发现治疗前分别和治疗后6个月、12个月的绝对计数差异有统计学意义（P <0.001）;CD3+CD4+T与NK、NKT细胞绝对计数的相关性不具有统计学意义。结论 经过1年抗病毒治疗后,CD3+CD4+T淋巴细胞有明显的提高,提示患者免疫状况显著改善。NK和NKT细胞在前6个月增加明显,6个月到12个月期间无明显增加,说明NK和NKT细胞在早期抗病毒中同样发挥了重要作用。NK/NKT细胞的变化可以评价患者治疗后天然免疫状况,但与获得性免疫的CD3+CD4+T淋巴细胞变化没有相关性。     

稽留流产患者外周血CD~4+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的表达及意义

目的:探讨CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞在稽留流产患者外周血中的比例变化。方法:选取16例稽留流产患者,采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测其外周血中CD4+ CD25+ Foxp3+的表达,并与正常妊娠和正常育龄妇女进行比较。结果:稽留流产患者外周血单个核细胞(PBMCS)CD4+ T细胞中CD25high细胞明显低于正常妊娠和正常育龄妇女,CD4+ CD25+ Foxp3+的表达显著降低。结论:稽留流产患者CD4+ CD25+ Foxp3+的表达明显减少,提示稽留流产的发生可能与患者外周血中CD4+ CD25+ Foxp3+下降有关;而在妊娠早期CD4+ CD25+ Foxp3+的表达明显升高,表明其可能是调控母-胎间免疫耐受形成的重要因素,参与了正常妊娠的维持。     

转录因子C/EBP-β在人子宫内膜中的表达

目的:探讨转录因子C/EBP-β在人正常子宫内膜及早孕蜕膜中的表达及其变化规律。方法:采用免疫组化进行组织学定位,采用免疫印迹进行蛋白质定量,采用RT-PCR进行mRNA检测,在蛋白质水平和mRNA水平检测人正常月经周期子宫内膜及早孕蜕膜中转录因子C/EBP-β的表达变化。结果:C/EBP-β蛋白主要在人子宫内膜基质细胞核中表达,C/EBP-β蛋白及mRNA在增生期C/EBP-β仅有弱表达,分泌期显著增加(P<0.05),以分泌晚期表达最强,在早孕蜕膜组织中也有较强的表达(P<0.05)。结论:C/EBP-β在人正常子宫内膜分泌晚期及早孕蜕膜组织中呈现较强的表达,可能在胚胎着床及妊娠的维持中发挥着重要的调节作用。     

Increase in CD57 + CD16 - lymphocytes in workers exposed to benzidine and beta-naphthylamine: assessment of natural killer cell subpopulations

Previously, we found a decrease in CD4+CD45RA+T lymphocytes in workers exposed to the aromatic amines (AAs) [benzidine (BZ) and beta naphthylamine (BNA)]. For further investigation of the effects of AAs on lymphocyte subpopulations, we measured natural killer (NK) cell subpopulations using two-color staining with anti-Leu7 (CD57) and anti-Leu11 (CD16) monoclonal antibodies in peripheral blood in 78 male dyestuff workers. The workers had been exposed to AAs before 1972 at a chemical plant, either in the production of AAs (40 workers, high-exposure group) or in other work that involved handling dye-stuffs (38 workers, low-exposure group). The controls were 30 “healthy” male volunteers without a history of occupational exposure to AAs or hazardous chemicals. The number of CD57+CD16-cells in the high-exposure group was significantly higher than that in the controls (P<0.01, analysis of covariance with age as a covariate). No significant differences were found in CD57+CD16-, CD57+CD16+ and CD57-CD16+NK cells between the low-exposure group and the controls. It is suggested that a decrease in the number of CD4+ T lymphocytes following exposure to AAs might be compensated by the increase in CD57+CD16- cells, i.e. circulating peripheral lymphocytes with poor NK cell activity.     

急性髓性白血病患者CD7~+ CD56~+和CD7~- CD56~-免疫表型对比分析

目的:比较CD7+CD56+和CD7-CD56-急性髓性白血病患者免疫表型的差异。方法:采用多色流式细胞术检测患者免疫表型,对患者的其他资料和免疫表型进行比较。结果:CD7+CD56+在M0+M1分型中的分布比例、外周血血红蛋白、骨髓原始细胞比例、中枢系统浸润率、CD34平均荧光强度均高于CD7-CD56-;但胞浆髓过氧化物酶(CyMPO)MFI低于CD7-CD56-。结论:CD7+CD56+起源早,浸润性强,需加强巩固治疗和中枢系统微小残留病灶监测。     

Large granular lymphocytes (LGLS) activity in women with spontaneous abortions during the 1st trimester of gestation

BACKGROUND: Despite increasing knowledge about the cell subsets that exist in the decidua in normal early pregnancy, little is known about the decidual cell subsets in women with spontaneous pregnancy failure. Decidual large granular lymphocytes (LGLs) are the most abundant lymphoid cell type found in 1st trimester maternal decidua. The function of LGLs remains controversial although freshly isolated LGLs have been shown to exert a weak natural killer cell (NK) activity. METHODS: Decidual leukocytes were investigated in 15 cases of spontaneous abortion and 15 cases of voluntary miscarriage, at 8th, 10th and 12th gestational week using a panel of monoclonal antibodies against Granzyme B (GRAN-B), CD2, CD38, CD56, and CD57 antigens and the immunoperoxidase technique. LGLs were demonstrated with the phloxine-tartazine stain. RESULTS: There was a statistically significant increase in the number of CD56 and CD57 positive cells (33.3%) to the advantage of spontaneous abortions (p<0.0001). No statistically significant difference was found in the number of GRAN-B, CD2 and CD38 positive cells in normal early pregnancy and in spontaneous abortion (overall gestational age p=0.22, 8th gestational week p=0.18, 10th and 12th gestational week, p=0.091). CONCLUSIONS: Our findings confirm previous studies referring that LGLs may have a cytotoxic activity similar to the NK activity and suggest an adverse pregnancy outcome.