EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的：探讨鼠表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)对大鼠深Ⅱ度汤伤创面成纤维细胞的影响。方法：采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期，透射电镜观察成纤维细胞的形态，HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化。结果：应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第3，6d有成纤维细胞增殖活性的增加，后又迅速恢复近正常水平，电镜下可见用药组大成纤维细胞明显增生迹象，两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同。结论：按临床常规用药方法，EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性，但对创面愈合并未产生明显影响。     

苦参素诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法：用苦参素处理结肠癌Lovo细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制结肠癌细胞增殖，能诱导结肠癌细胞凋亡。     

EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的探讨鼠表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响. 方法采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期,透射电镜观察成纤维细胞的形态, HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化. 结果应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第3、6d有成纤维细胞增殖活性的增加,后又迅速恢复近正常水平,电镜下可见用药组大鼠成纤维细胞明显增生迹象;两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同. 结论按临床常规用药方法,EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性,但对创面愈合并未产生明显影响.     

表没食子儿茶素没食子酸酯影响慢性紫外线辐射诱导的人皮肤成纤维细胞凋亡和突变的研究

目的 研究紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞的细胞凋亡率、细胞周期变化和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变频率的影响以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法 采用一定剂量的中、长波紫外线(UVA和UVB)慢性照射培养的新生儿包皮成纤维细胞.通过流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,HPRT突变分析法检测突变频率.结果 慢性UVA组引起的细胞凋亡率低于UVB组(P<0.05),而HPRT基因位点突变的频率是UVB组的4.79倍.EGCG干预组与单纯UV辐射组相比,成纤维细胞的凋亡率增加,HPRT基因位点突变的频率降低.结论 慢性照射日常剂量UVA,其损伤性高于UVB.EGCG可以升高慢性UV照射引起的细胞凋亡率,降低UV照射引起的突变频率,提示EGCG可以诱导不可逆损伤细胞的凋亡,从而减少突变细胞.     

周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究

目的 观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法 MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响.Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析.结果 不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示Go/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现.结论 周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响.     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

2-甲氧基雌二醇对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对体外培养的SGC-7901胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将不同浓度的2-ME不同时间作用于SGC-7901,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2-ME对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞超微结构变化.结果 2-ME对SGC-7901细胞有很强的抗增殖的作用,引起大量细胞凋亡,且在一定范围内呈剂量和时间依赖性,作用组与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05).细胞周期检测发现作用组大量细胞阻滞于G2/m期G0/G1及S期细胞减少,与对照组存在显著差异(P<0.05).结论 2-ME可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡.     

Apoptin基因诱导体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞凋亡的初步研究

目的 观察基因Apoptin对人眼球筋膜囊成纤维细胞的杀伤效果,探讨其可能的机制. 方法 用脂质体将Apoptin基因导入人眼球筋膜囊成纤维细胞,通过RT-PCR法检测Apoptin mRNA的表达,同时用SABC免疫组化法分析Apoptin和p53的表达.采用细胞计数法检测细胞生长抑制率,TUNEL法标记凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期的变化. 结果 转入Apoptin基因后,人眼球筋膜囊成纤维细胞的生长明显受抑制(P＜0.05).细胞周期分析可见凋亡峰,凋亡率35%.细胞中可见Apoptin阳性表达(P＜0.05),p53表达无显著性差异(P＞0.05).凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体. 结论 转入Apoptin基因可显著促进人眼球筋膜囊成纤维细胞的凋亡,Apoptin诱导的凋亡不依赖功能性p53的生成.此技术可能是抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕化的新手段.     

人胚肺二倍体细胞KMB_(17)凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法 ,具有简便、快速的特点 .用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞 (KMB1 7)在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程 .结果 :无血清诱导后 1h ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态 ;3h后 ,少数细胞(1%～ 5% )出现圆缩 ;6h后 ,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形 ,体积缩小 .荧光及电镜下可将细胞凋亡从形态上分为两个阶段 ,第一阶段细胞出现典型的凋亡特征 ,细胞圆缩、出芽、核染色质凝缩、成块状或新月状分布于核膜边缘 ;第二阶段 ,在细胞凋亡晚期出现坏死症状 :电镜下整个细胞崩解成碎片 .结果表明 :无血清培养诱导的凋亡在凋亡的晚期由于营养过度缺乏易出现二次坏死现象 .首次报道用于生物制品生产的人胚肺二倍体细胞在无血清诱导下凋亡发生的形态学特征 .     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

雷公藤甲素对人肝癌细胞株HepG2体内外作用的研究

目的:探讨雷公藤甲素在体内外对人肝癌细胞HepG2的作用及可能的分子机制。方法:应用不同浓度的雷公藤甲素作用于体外培养的HepG2细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法和Western blot法分别检测热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)mRNA和蛋白表达变化;caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制,建立人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下种植瘤模型,实验组和对照组分别用雷公藤甲素(0.4mg/kg,每天1次)和相同体积的生理盐水,用药3周后观察肿瘤生长情况。结果:雷公藤甲素可显著抑制体外培养HepG2细胞增殖和诱导细胞发生凋亡(P<0.05),并呈现明显的量-效与时-效关系。应用雷公藤甲素后HepG2细胞中的HSP70的mRNA和蛋白表达明显的降低,呈现浓度依耐性,同时细胞质内caspase-3的活性随着剂量的增加而增加。此外,雷公藤甲素实验组种植瘤体积明显小于对照组(P<0.05)。结论:雷公藤甲素能通过诱导凋亡在体内外发挥对人肝癌细胞HepG2抗肿瘤作用,其机制可能与抑制HSP70蛋白和增加caspase-3的活性有关。     

LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性及其细胞毒性

目的:研究重组免疫毒素LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性,并观察由此产生的细胞毒性作用.方法:ELISA方法检测LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的高度特异性、饱合性及其与时间的关系;LHRH-PE40由LHRH受体介导对Hela细胞产生细胞毒作用进行光、电镜观察.结果:LHRH-PF40与Hela细胞表面受体的结合与正常鸡胚成纤维细胞的结合相比有显著意义(P＜0.01);LHRH-PE40与LHRH竞争LHRHR的OD值和TSH相比有显著意义(P＜0.01);光镜观察,LHRH-PE40对Hela细胞作用明显而对正常鸡胚成纤维细胞几乎没有作用;电镜观察,LHRH-PE40使Hela细胞表面出现凋亡征象.结论:与其他正常组织的细胞相比,Hela细胞膜表面LHRH受体分布呈过表达状;LHRH-PE40与细胞表面LHRH受体的结合具有高度特异性、饱和性;LHRH-PE40对细胞的作用由LHRHR介导,并且只对LHRHR阳性细胞产生毒性作用.     

复方消斑灵对创伤性瘢痕作用的实验研究

目的:观察复方消斑灵对体外培养的成纤维细胞的胶原蛋白合成的影响,以及对水浴烫伤动物模型的作用。方法:采用光镜、电镜研究用药前、后成纤维细胞的形态学变化,以3 H-脯氨酸掺入等方法检测成纤维细胞胶原蛋白的合成,通过建立水浴烫伤动物模型,观察复方消斑灵对增生性瘢痕的作用。结果:消斑灵能明显影响成纤维细胞的超微结构,抑制胶原蛋白的合成,并呈量效关系;在大鼠水浴烫伤实验中复方消斑灵可抑制瘢痕增生,而且大剂量使用未发现药物毒性。结论:复方消斑灵对创伤性瘢痕有良好的治疗作用。     

雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化。结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞。结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞。     

茶多酚对雷公藤甲素致小鼠胃粘膜损伤的保护作用

目的:观察不同剂量雷公藤甲素(Tri)致小鼠胃粘膜损伤的作用以及茶多酚(TP)对其损害的保护作用,并初步探讨相关机制。方法:昆明种小鼠70只,雌雄各半,随机分成5组:高剂量Tri组(0.03 mg/kg)、低剂量Tri组(0.015mg/kg)、高剂量Tri(0.03 mg/kg)+TP(300 mg/kg)组、低剂量Tri(0.015 mg/kg)+TP(300 mg/kg)组和正常对照组。各组按相应剂量每日灌胃给药60 d后观察各组小鼠胃粘膜损伤指数,测定胃组织匀浆MDA含量、SOD活性并行胃粘膜病理组织学检查。结果:与对照组相比,低剂量Tri组、高剂量Tri组均可见胃粘膜明显损伤,胃粘膜损伤指数显著升高(P<0.05),胃组织匀浆MDA的含量显著提高,SOD活性显著降低(P<0.05),病理组织学均可见显著胃粘膜上皮细胞变性坏死等改变;高剂量Tri+TP组、低剂量Tri+TP组胃组织匀浆MDA含量、SOD活性无显著性改变,病理组织学轻度异常。结论:Tri对小鼠胃粘膜有一定的损害,而TP具有很好的保护作用,其机制与对抗组织脂质过氧化反应有关。     

辅酶I对缺血再灌注损伤诱导L02肝细胞凋亡的影响

目的：研究辅酶I（NADH）对体外培养正常肝细胞系L02缺血再灌注损伤模型的保护作用。方法：实验分组：（1）正常对照组（control组）；（2）缺血再灌注损伤组（I／R组），即用模拟缺氧液及复氧液处理；（3）NADH＋缺血再灌注损伤组（NADH＋I／R组），即先加NADH(终浓度为400μg/ml）后再进行缺血再灌注处理。流式细胞术观察细胞处理后1、6、12、18、24h凋亡率及12h时p16、p21、p53和 Bcl-2蛋白表达。透射电镜观察细胞超微结构。结果；NADH可明显抑制缺血再灌注损伤 诱导的肝细胞凋亡，并且能够上调Bcl－2蛋白表达，下调p53、p16、p21蛋白表达，差异显著（P＜0．01）；透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征。结论：NADH对缺血再灌注损伤的L02肝细胞有明显的保护作用，其作用机制可能与通过调节Bcl－2家族蛋白及p16、p21、p53蛋白有关。     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

四溴苯三唑对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨四溴苯三唑（TBB）对人宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用,阐明其对相关信号转导通路的作用机制。方法：选取处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,将其分为对照组（未给予TBB）和实验组（给予TBB）。采用MTT比色法检测HeLa细胞存活率,采用倒置显微镜观察人宫颈癌HeLa细胞形态表现,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞中凋亡相关蛋白p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3和Pro-caspase-3表达水平。结果：MTT法检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞存活率明显降低（P<0.01）,且呈浓度依赖性;倒置显微镜下观察,实验组HeLa细胞出现体积缩小、细胞核皱缩等细胞凋亡的形态变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法和流式细胞术检测,与对照组比较,实验组各时间段（3、6、12和24 h）细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;Western blotting检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞中抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达水平逐渐降低,促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3表达水平逐渐升高,Pro-caspase-3表达水平逐渐降低（P<0.05或P<0.01）。结论：TBB可能通过抑制Akt信号通路的活性进而有效促进HeLa细胞凋亡。     

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的：比较４种细胞凋恨检测方法的优缺点。方法：以ｂｕｆａｌｉｎ诱导ＨＬ６０细胞凋亡为例,选择４例方法即电镜（ＥＭ）、ＤＮＡ电泳、原位缺口标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,并对凋亡率进行了比较。结果：ＥＭ和ＤＮＡ电泳技术是定性说明凋亡的可靠方法,而ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ擅长于定量检测凋亡细胞,ＥＭ、ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测的凋亡率具有显相关性。结论：研究细胞凋亡时宜选用既特异、灵敏