婴幼儿巨细胞包涵体病组织中巨细胞病毒的免疫组织化学检查

婴幼儿巨细胞包涵体病组织中巨细胞病毒的免疫组织化学检查吕庆杰闻德亮李冠群王伟一、材料与方法收集１９７９～１９９５年我科常规尸检诊断巨细胞包涵体病（ＣＩＤ）的病例４４例。其中年龄在２天～１个月者１６例，２～１５个月２８例。取腮腺、肺、肾、肝组织石蜡切片...     

经胎盘接种小鼠巨细胞病毒宫内感染模型建立

目的应用小鼠巨细胞病毒宫内感染模型,观察母鼠妊娠结局。方法用ELISA筛选无MCMV感染史性成熟期小鼠,雌雄同笼受孕。孕龄12.5天时,模型组胎盘显微注射MCMV,对照组注射生理盐水,空白对照组不做任何处理。部分在孕龄18.5天处死母鼠,部分待母鼠自然分娩,观察母鼠妊娠结局及子代感染情况。结果模型组36.62%(26/71)和生理盐水对照组29.85%(20/67)的死胎率,χ2=0.711,P>0.05。分别和空白对照组0.00%(0/68),P<0.01。比较三组组畸胎率分别为22.54%(16/71)、0.00%(0/67)和0.00%(0/68),P<0.01。空白对照组和生理盐水对照组未发现胎盘和胎仔感染,模型组胎盘感染率63.27%(31/49)、胎仔感染率为32.65%(16/49),χ2=0.136,P<0.01。结论小鼠巨细胞病毒宫内模型的建立为其发病机理研究、选择宫内感染的干预介入点提供了新的靶点。     

小鼠巨细胞病毒对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨小鼠巨细胞病毒对小鼠卵母细胞体外成熟的影响.方法将未成熟小鼠卵母细胞置于含100 TCID50、10TCID50、1TCID50小鼠巨细胞病毒的培养液中培养,观察卵母细胞的生发泡破裂率和第一极体的释放率,并应用电镜观察卵母细胞超微结构.结果各组的卵母细胞生发泡破裂率和第一极体的释放率差异无显著性,100 TCID50组未出现卵母细胞超微结构异常.结论小鼠巨细胞病毒对未成熟卵母细胞体外成熟发育无重大影响.     

1744例巨细胞包涵体细胞检查及临床意义

对1726例儿科住院患儿及18例成人常规作尿细胞学检查,发现巨细胞包涵体细胞阳性率为22.89%,并对此种细胞作了详细观察描述。临床对照分析表明,阳性组主要表现为呼吸道及消化道症状;抗病毒治疗有良好效果。作者认为用细胞学方法检查包涵体细胞,结合临床诊断巨细胞包涵体病仍很有实用价值。     

经胎盘接种小鼠巨细胞病毒对仔鼠听力的影响研究

目的观察胎盘接种建立小鼠巨细胞病毒对仔鼠的听力的影响。方法MCMV Smith标准株经小鼠胚肺细胞增殖传毒后,用ELISA筛选无MCMV感染史性成熟期小鼠,雌雄同笼受孕。孕龄12.5天时,模型组胎盘显微注射MCMV,手术对照组注射DMEM培养基,空白对照组只手术开腹,清点孕囊,不做任何特殊处理。待母鼠自然分娩后,随机选取4周龄仔鼠,应用听性脑干反应（aud itory brainstern response,ABR）检测听力水平。结果模型组与其他各组比较,ABRI波阈值明显上升,差异有显著意义（F=5.984,P=0.009）。结论经胎盘接种MCMV可以引起仔鼠的听力损伤。     

BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型的特征

目的：探讨BALB/c小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎模型的特征。方法:60只4周龄BALB/c小鼠随机分成2组：实验组(36只，MCMV腹腔注射)和对照组(24只，3T3细胞裂解液腹腔注射)。在注射后3、7、14、21、28、35、42、49、56、63和70 d，记录心电图，测血清抗心肌β1受体抗体，分批处死小鼠行心肌病理、免疫组化和MCMV DNA检测。结果:实验组心肌炎累积发病25只(25/36，69.4%)，死亡4只(4/36，11.1%)；心肌炎急性期心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和灶性心肌细胞变性坏死，慢性期心肌间质散在炎性细胞浸润，急慢性期心肌炎病理积分均在2分或以下；免疫组化示急性期心肌IL-1β和TNF-α蛋白强阳性表达。实验组心律失常累计发生率达50.0%，可出现各种心律失常，急性期以窦性、房性心律失常和传导阻滞为主，慢性期以室性和房性心律失常为主。实验组3-7 d时心肌组织可检测到MCMV DNA片段，14-70 d时则不能检测到。实验组前5周血清抗β1受体抗体滴度为0，第6-10周明显升高；对照组前7周该抗体滴度为0，第8-10周轻微升高。结论:MCMV心肌炎并不严重，心肌细胞变性坏死具有局灶性和散在性特点，可出现各种心律失常；心肌炎早期病变和心律失常的发生可能与病毒感染直接损伤有关，慢性期病变和心律失常的发生则可能与抗β1受体抗体的作用有关。     

用原位杂交技术研究小鼠巨细胞病毒对巨噬细胞的感染

目的 检测巨细胞病毒（CMV）是否能够感染并影响小鼠腹腔巨噬细胞。方法 以小鼠巨细胞病毒（MCMV）攻击小鼠腹腔巨噬细胞后,用地高辛标记的152bp MCMV DNA探针进行原位杂交测定。结合受染细胞形态学改变,巨细胞包涵体检测,以及细胞表达Fc受体表达（Fc花环形成）的变化,观察MCMV对单核－巨噬细胞的作用。结果 原位杂交技术检测表明受MCMV攻击的巨噬细胞的胞浆和核内,有杂交阳性的灰蓝色颗粒沉积,与阳性对照细胞片（小鼠成纤维细胞3T3）相一致;未受MCMV攻击的巨噬细胞片（阴性对照）中,则未见有着色颗粒。同时发现,受染细胞的形态改变,核呈现典型的嗜酸性包涵体;受染细胞表达Fc受体表达呈上调趋势。结论 巨细胞病毒能够感染巨噬细胞并影响其形态和功能。     

巨细胞病毒单克隆抗体的研究进展

自Ｐｅｒｅｉｒａ等１９８２年制备出巨细胞病毒单克隆抗体以来，国内外学者先后建立了多种不同性质的巨细胞病毒单克隆抗体。本文概述了这些单克隆抗体在巨细胞病毒的预防、诊断方面的应用，以及对巨细胞病毒的生物学特性和致病机理的研究。     

人巨细胞病毒包涵体--病毒核酸和特异阶段表达抗原的产物

目的 探讨人巨细胞病毒包涵体的组成及意义。方法 采用显微切割技术结合PCR和Southern杂交及免疫组织化学的催化信号扩增法，检测人巨细胞病毒的核酸和3种不同阶段表达的抗原。结果 通过液压显微切割系统将组织中巨细胞病毒包涵体游离出来，PCR扩增出预期长度的DNA片段，Southern杂交证实为HCMV的核酸片段，催化信号扩增法检测结果显示包涵体主要表达立即早期和早期抗原DDG9／CCH2，而基质蛋白AACl0则为阴性。结论 人巨细胞病毒包涵体的成分包含有病毒DNA和特异阶段表达的抗原产物。     

鼠巨细胞病毒感染RAW264.7细胞的体外实验研究

目的 体外观察鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)对鼠巨噬细胞株RAW264.7的感染特点及其对细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、0.1、0.01的MCMV Smith株感染RAW细胞,于感染后6、12、24、36、48、72、96和120 h收集细胞和培养上清,光镜下观察细胞病变,透射电镜观察感染细胞内病毒颗粒和细胞超微结构变化;免疫细胞化学检测MCMV早期抗原(early antigen,EA)表达以及蚀斑形成实验监测病毒增殖情况;MTT法和流式细胞术分别评估感染细胞增殖与凋亡的改变,以MCMV敏感的鼠胚胎成纤维细胞为阳性对照.结果 MCMV感染后24～48 h可见RAW细胞肿胀和脱落,电镜显示RAW胞浆中存在完整的病毒颗粒且细胞器肿胀明显;病毒感染RAW细胞后6 h(MOI:1和0.1)～12 h(MOI=0.01)可见病毒EA的阳性表达;感染后24 h培养上清中病毒滴度即明显上升,至96～120 h达高峰;RAW细胞增殖在感染后72～120 h受到明显抑制;当MOI=0.1时,感染后72～120 h细胞死亡率明显增高,但凋亡率改变不显著.结论 巨噬细胞株RAW264.7在体外对MCMV易感,较鼠胚胎成纤维细胞更快形成溶细胞性的产毒性感染;病毒可抑制细胞增殖但不影响细胞凋亡,为深入探讨CMV相关免疫学致病机制提供了一个良好的体外细胞模型.     

Influence of early maternal deprivation on adult humoral immune response in mice

Mice were submitted to early maternal deprivation before weaning and were weaned earlier than the usual age. When adult, those mice showed decreased number of PFC and lowered level of seric immuno-globulins compared with controls. Two etiogenic hypothesis are discussed: undernourishment and adrenal stress.     

Activation of hepatic natural killer cells and control of liver-adapted lymphoma in the murine model of cytomegalovirus infection

Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is a promising therapeutic option against hematopoietic malignancies. Infection with cytomegalovirus (CMV) and tumor relapse are complications that limit the success of HSCT. In theory, CMV infection can facilitate tumor relapse and growth by inhibiting “graft take” and reconstitution of the immune system or by inducing the secretion of tumor cell growth-promoting cytokines. Conversely, one can also envisage an anti-tumoral effect of CMV by cytopathic/oncolytic infection of tumor cells, by inducing the secretion of death ligands for tumor cell apoptosis, and by the activation of systemic innate and adaptive immunity. Here we will briefly review the current knowledge about tumor control in a murine model of CMV infection and liver-adapted B cell lymphoma, with a focus on a putative implication of CD49⁺NKG2D⁺ hepatic natural killer cells. There are inclusions in this text reproduced or recombined from previous articles published in the Journal of Virology (American Society for Microbiology), which are cited in the reference section.     

巨细胞病毒感染的致病机制初探

目的 探讨人巨细胞(HCMV)的致病机制。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对36例早孕人工流产妇女进行了HCMV抗体IgG、IgM的检测，对抗体阳性者的绒毛及蜕膜进行了HCMV的PCR检测，对DNA阳性者进行了绒毛蜕膜的病理切片分析。结果 HCMV免疫抗体阳性的31例患者仅有10例DNA阳性者绒毛蜕膜均发生了明显的病理变化，绒毛细胞滋养层增生过长，蜕膜变性坏死，伴淋巴细胞浸润。结论 绒毛蜕膜的病理改变可能参与了HCMV的致病机制。     

稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。     

大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响

目的探讨大蒜新素(即大蒜素注射液)对鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染小鼠脾转录因子Tbet和GATA3基因表达的影响。方法20只BALBc小鼠被随机分成大蒜新素治疗组(10只)和安慰剂组(10只)。均在MCMVSmith株接种24h后分别用大蒜新素一般剂量(每天25mgkg)和等量生理盐水腹腔注射,每天1次,连续2周。另设正常对照组(10只)不接种病毒,仅用等量生理盐水治疗。用PFUml测定小鼠脾组织病毒滴度;用RTPCR方法检测小鼠脾转录因子TbetGATA3mRNA表达强度;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清细胞因子IFNγ和IL10表达水平。结果MCMV感染小鼠14d,TbetmRNA和IFNγ的表达基本下降至基线水平,而GATA3mRNA和IL10的表达显著增强;大蒜新素能诱导MCMV感染模型鼠转录因子TbetmRNA和IFNγ的表达显著增加(P<0.01),而转录因子GATA3mRNA和IL10的表达显著下降(P<0.01);同时显著降低小鼠脾组织匀浆中病毒滴度(P<0.01)。结论MCMV感染可导致TH1TH2类细胞因子表达失衡,主要表现为IFNγ表达明显降低和IL10表达明显增高;大蒜新素通过上调转录因子TbetmRNA的表达促进IFNγ的分泌,并下调转录因子GATA3mRNA的表达抑制IL10的分泌。     

Restricted infection of murine cytomegalovirus (MCMV) in neonatal mice with MCMV-induced sensorineural hearing loss

BackgroundCongenital infection with human Cytomegalovirus (HCMV) is known to be a causative agent of sensorineural hearing loss (SNHL).ObjectivesTo clarify the nongenetic etiology of SNHL by identifying the Cytomegalovirus (CMV)-infected region in the cochleae.Study designWe established an animal model of SNHL by injecting neonatal Balb/c mice with intracerebral murine Cytomegalovirus (MCMV) within 24 h after delivery.ResultsAt 3 weeks of age, unilateral and bilateral SNHL were observed in 24% (5/21) and 29% (6/21) of the mice, respectively. SNHL thereafter progressed, with 79% of mice developing bilateral SNHL by 6 weeks of age. MCMV antigens and DNA were detected in the spiral ganglion, and cells surrounding the meninges and scala tympani at 1 week of age. However, both MCMV antigens and DNA had completely disappeared by 2 weeks of age. It is possible that the MCMV reached the spiral ganglion via cerebrospinal fluid as the result of meningitis, as the stria vascularis was found to be MCMV antigen negative. Myosin VI expression in the outer hair cells was lost at 3 weeks of age. MCMV and myosin VI expression disappeared before and during SNHL progression, respectively.ConclusionsThere was a definite lag time between the period in which MCMV antigens/DNA-positive cells were observed and that in which SNHL developed and myosin VI-negative hair cells were observed. Further study is needed to explore the role of MCMV in the loss of myosin VI expression in the outer hair cells.