雌二醇单克隆抗体的制备及性质

本文建立了5株稳定分泌抗雌二醇(E_2)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中1株McAb与雌酮、雌三醇交叉反应率分别为8.1%和0.5%,与其它7种甾体化合物交叉反应率均<0.01%。抗体亲和力为1.8×10~(10)L/M,腹水抗体滴度:1:400,000。其所做的剂量反应曲线稳定,灵敏度1pg,样品回收率:104±15.8%(n=7),批内变异系数:4.07%(n=12),批间变异系数:8.82%(n=6)。该株McAb可望取代常规抗血清应用于雌二醇放射免疫测定等方面。     

人类孕激素受体单克隆抗体的制备与鉴定

人类孕激素受体单克隆抗体的制备与鉴定黄薇，曹泽毅，韩字研，李明远，王道若孕激素受体（ＰＲ）是一种细胞内受体，在妇产科内分泌疾病和妇科肿瘤中，该受体的存在与否及含量，与疾病的诊断、治疗密切相关。因此，ＰＲ的测定受到关注。以往测定ＰＲ的方法主要为生物化学...     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

利用杂交瘤技术制备了11株抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)的单克隆抗体。根据这些抗体和~(125)I 标记的hCG,hCGα,hCGβ和hLH 结合的情况,可将抗体分为三类。抗体BAH_2作用于hCG_α和β亚单位结合后所暴露出的抗原决定簇,抗体10E_5和8D_5特异地和hCGβ亚单位结合但不和hLH 结合。大多数抗体是作用于hCG 和hLHβ亚单位上共有的决定簇。实验显示这些单克隆抗体特异性优于多克隆抗体,它们亲合常数在5.3×10_7～7.2×10~(10)M~(-1)之间。     

抗人上皮性卵巢癌单克隆抗体的制备与鉴定

应用卵巢浆液性乳头状囊腺癌可溶性相关抗原ＣＡ＿（９２５）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，与ＮＳ－１骨髓瘤细胞株融合制各单克隆抗作（ＭｃＡｂ），获得５株持续性分泌抗体的细胞株，以融合孔为代号，分别为ＯＣ＿（４Ｄ９），ＯＣ＿（７Ｅ１０），ＯＣ＿（１Ｂ４），ＯＣ＿（３Ｂ８），ＯＣ＿（９Ｂ９）。５种ＭｃＡｂ的滴度分别为１：１０￣７，１：１０￣７，１：１０￣６，１：１０￣４，１：１０￣５，免疫球蛋白亚型为ＩｇＭ和ＩｇＧ型，染色体呈双亲染色体特点。所获得５种ＭｃＡｂ与ＣＡ＿（９２５）有特异性反应（阳性反应）；与正常卵巢组织及子宫平滑肌瘤未呈阳性反应；与肺癌、胃癌、肾癌、食管癌、直肠癌组织有弱阳性反应。     

孕酮测定方法的进展

孕酮是卵巢分泌的一种重要激素。在生殖器官发育和生殖过程中都具有重要的作用。50年代以来由于计划生育工作的需要,各种甾体类避孕药陆续     

孕酮阴道用药

本研究对经雌激素(E)治疗后雌二醇(E_2)水平正常妇女应用三种不同剂量的孕酮(P)阴道用药,评估其对子宫内膜的影响。40例因卵巢早衰(n=31)或卵巢发育不全(n=9)失去卵巢功能者接受经皮用E_228天,剂量范围为0.1～0.4mg/d。从第15～27天,随机隔日使用一种新的P阴道凝胶。剂量分别是45mg(A组,n=14,4%的凝胶1.125g);90mg(B组,n=13,8%凝胶1.125g)和180mg(C组,n=13,8%的凝胶2.25g),于治疗前1～28天中每周两次抽     

两种单克隆抗体—hCG、hLH的制备及其临床应用

用半固体培养基筛选hCG和LH单克隆抗体。272株细胞克隆系分泌hCG抗体,hCGβ-4D6(亲和常数1.2×10~(10)m~(-1))和hCG_2β-_1EO(亲和常数8.7×10~(18)M)选作制备hCG免疫测定药箱。43株细胞克隆系分泌LH抗体,LH_(15)(亲和常数6.7×10~9m~(-1))和LH_(48α)(亲和常数5×10~8m~(-1))选作制备LH免疫测定药箱。设计放射免疫竞争测定法(RIA),固相免疫放射测定法(IMRA)固相免疫酶标测定法等三种方法测定hCG和LH浓度。hCG和LH免疫测定药箱灵敏度分别为3mIU/ml和2mIU/ml。月经规则妇女的LH峰可用一种30分钟的程序从尿样中测出。为尽可能减低激素之间的交叉反应,hCG免疫测定药箱系统加入LH_(130)单克隆抗体,LH免疫测定药箱系统加入hCGβ-4D6。实验结果表示hCG和LH水平可用不同免疫测定药箱测定之,其免疫交叉反应极低。     

孕酮对淋巴细胞毒的抑制作用:妊娠淋巴细胞特有的孕酮敏感性

孕酮(P)虽然在体外对淋巴细胞有肾上腺皮质激素样的免疫抑制作用,但仅在高浓度时才能降低对有丝分裂原的应答.P在妊娠时的天然免疫抑制作用,也仅局限于胎-母接触部位,因此处P可达到体外封闭所需的浓度.作者近期发现妊娠血清中去除P可降低80%血清     

排卵前的孕酮分泌

现已知促性腺激素在滤泡期的分泌对将来的黄体分泌功能有重要影响.另外,FSH对成熟滤泡的破裂起决定性作用.在排卵前夕,卵巢分泌的甾体激素对促性腺激素分泌的作用特别重要.在滤泡期卵巢仅分泌很少的孕酮,加上肾上腺分泌的孕酮及外围△_5孕烯醇酮转变的孕酮,血流中孕酮量不超过0.6ng/ml.但在排卵前LH高峰初期,约在LH开始上升后6～9小时,血孕酮即上升.当LH达高峰时,血孕酮量为1ng/ml,排卵前上升的孕酮主要由成熟滤泡分泌,因在滤泡液中     

猪卵透明带单克隆抗体的研制

用热溶猪卵透明带抗原免疫BALB/C 小鼠,取其脾细胞和SP2/O 细胞融合产生的杂交瘤。用间接免疫荧光和ELISA 方法筛选,经四次克隆化后,获得三株分泌猪卵透明带单克隆抗体杂交瘤细胞株(LPD_8,LPC_4,LPD_2)。通过间接免疫荧光试验,其中二株单克隆抗体(LPD_8,LPC_4)与人卵透明带有交叉反应。但它们在猪与人卵透明带上呈现的荧光部位有明显的不同,LPD_8位于整个透明带上,而LPC_4只见于透明带外层。LPD_2荧光位于透明带内层且与人卵无交叉反应。我们认为这种差别是由于抗原决定簇的不同所致。     

抗人精子单克隆抗体的特性研究

本文报告7株抗人精子McAb的免疫学特性和体外抗受精效应的研究结果。Ig亚类测定,5株为IgG_1,2株为IgM。应用间接免疫荧光试验进行McAb人精子表面抗原定位,1株McAb与人精子顶体后、颈和尾中段结合,5株McAb与浆膜及顶体结合,而另1株未显示结合。TAT结果表明,5株为混合型,2株为尾—尾型。SIT结果为3株阳性,2株弱阳性,其余2株阴性。间接免疫荧光试验测定7株McAb与人7种组织以及外周血淋巴细胞的交叉反应性,3/7McAb与脾、胸腺和外周血淋巴细胞发生反应。人精子地鼠卵穿透试验显示,5/7 McAb对精子穿卵有明显抑制作用,且两株联合应用有协同效应,提示避孕疫苗研制中McAb相应抗原的联合似乎是必要的。     

hCG单克隆抗体特性的研究

用hCG 免疫BALB/C 小鼠,取其脾细胞和NS1骨髓瘤细胞融合,得到二株能分泌识别hCG 和hCG-β亚单位的单克隆抗体的杂交细胞株。其抗体A_(46)和A_(24)对hCG 的亲和力用Scatchard 法测得平衡常数分别为1.60×10~9M~(-1)和2.33×10~9M~(-1),对hCG-β的平衡常数为0.62×10~9M~(-1)和2.50×10~9M~(-1)。A_(46)抗体还能识别hLH,和hCG-α、hFSH 和hTSH 的交叉反应很小。而A_(24)抗体和hLH 只有2%的交叉反应,和其它几种激素几乎无交叉反应。这两种单克隆抗体都能阻断hCG 在雄小鼠体内刺激睾酮产生的作用。实验结果还提示A_(46)和A_(24)抗体在hCG 分子上所识别的抗原决定簇很接近,并可能都和hCG 分子的生物学活性的表达有关。     

利用单克隆抗体研究人绒毛膜促性腺激素的结构与功能关系

利用一组抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体研究它们与hCG及其亚单位结合以及在体内外中和hCG,hLH活性的能力。发现至少在hCG存在着6个抗原决定簇。其中与BAH_1,9C_2,10E_5,8B_5反应的决定簇和hCG生物活性有关,而与BAH_2和7F_3反应的决定簇与hCG生物活性无关。与抗体10E_5和8B_5反应的这两个抗原决定簇是hCGβ亚单位所特有的,它们不存在于hLH分子中。     

多克隆及单克隆抗体的免疫吸附亲和层析用于人绒毛膜促性腺激素的纯化

本实验对多克隆抗体和单克隆抗体与Sepharose 4B偶联制成的免疫吸附亲和层析柱对hCG纯化的效果进行了分析。马抗hCG的多克隆抗体和正常兔免疫球蛋白一起偶联到Sapharose 4B上。由这样的免疫吸附剂吸附的hCG,可用4M MgCl_2,PH 6.0脱附。不同纯度的hCG起始物经一次纯化后,生物学效价提高的程度是不同的。26iu/mg的hCG-A制品纯化后效价可提高100倍以上;1096 iu/mg的hCG-C制品的效价可提高7倍;6272iu/mg的hCG-D制品经纯化后可达到高纯度hCG制剂的水平(>13000iu/mg)。从聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相色谱分析,也表明hCG的纯度有不同程度的、明显的提高。但是,免疫学分析表明,不管起始物的纯度是多少,经纯化后所有hCG的制品的免疫学效价均提高到高纯度hCG制剂的水平。单克隆抗体的免疫吸附亲和层析对hCG的纯化具有同样的效果,只是hCG的洗脱条件改成0.2M甘氨酸—HCl缓冲液,PH3。由于单克隆抗体的来源充足,已有可能用免疫吸附亲和层析进行大量hCG的纯化。     

猪卵透明带单克隆抗体特性研究

从猪卵巢中分离卵子提取透明带(ZP)免疫动物,实验研究证明多克隆ZP抗体,对卵巢功能有一定影响。我们制备的三株猪ZP单克隆抗体,它们与人体主要器官无交叉反应。用免疫荧光、ABC免疫组织化学及体外阻断人精卵结合等方法,进行研究。发现有一株单抗(LPD_8)能明显阻断体外人精卵结合。此外有二株单抗(LPD_8,LPC_4)对卵透明带及卵细胞质有交叉反应,而对卵泡颗粒层,卵泡膜,间质细胞等均无交叉反应。这说明卵细胞质内有与上述单抗结合的抗原决定簇,因此透明带与卵细胞质有共同的抗原成分,这一现象支持了ZP由卵细胞产生的理论。本研究结果提示ZP抗体对卵巢功能的影响是由于抗体和卵细胞结合,早期抑制了卵泡的发育而导致卵泡数目减少,内分泌功能下降,而不是直接作用颗粒层和卵泡膜而使激素分泌紊乱。