肺鳞癌、腺癌中p14 ARF基因启动子区甲基化及蛋白表达的研究

背景与目的 p14^ARF基因是新近发现的抑癌基因，其异常表达与多种人类肿瘤发生有关，启动子区异常甲基化作为p14^ARF基因失活的重要形式可能参与了肿瘤的发生。本研究通过检测肺鳞癌、腺癌中p14^ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达，探讨p14^ARF启动子区甲基化与肺癌的关系。方法 通过免疫组织化学（IHC）、甲基化特异性PCR（MSP）和相关限制性内切酶PCR（RF-PCR）方法，检测40例肺鳞癌、腺癌组织中p14^ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达水平。结果 癌组织及癌旁正常组织中p14^ARF启动子区甲基化阳性率分别为17．5％（7／40）和2．5％（1／40）（P-0．025）。RE-PCR检测结果相同。癌组织及癌旁正常组织中p14^ARF蛋白阳性率分别为70．0％（28／40）和95．0％（38／40）（P-0．003）。p14^ARF基因启动子区甲基化和蛋白表达均与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征无明显关系（P＜0．05）。p14^ARF启动子区甲基化与蛋白表达呈负相关（r=-0．56，P=0．001）。结论 启动子区甲基化是p14^ARF基因失活的重要机制。p14^ARF启动子区异常甲基化可能参与了非小细胞肺癌的发生，是肺癌发生过程的早期事件。     

野生型p14ARF基因转染对人肺癌细胞生长抑制的这实验研究

目的 探讨外源性p14ARF基因能否对体内外生长的肺癌细胞起抑制增殖的作用。方法 选择4株具有不同基因背景的肺癌细胞系,转染人的野生型p14ARF基因。通过RT-PCR、免疫组化及Westernblot杂交检测,筛选出同时表达p14ARF mRNA及蛋白的阳性克隆。以母细胞及转染空载体细胞为对照,比较它们的增殖、细胞周期分布、裸鼠体内成瘤性以及形态学上的差异。结果 三株具有野生型p53基因的肺癌细胞在转染p14ARF基因后,细胞周期被显著阻滞于G1或G1/G2期,增殖受到抑制。结论 外源性野生型p14ARF基因转染能抑制人肺癌细胞的增殖,p14ARF基因是人体肺癌基因治疗的理想侯选基因。     

非小细胞肺癌中P14ARF与P16INK4a和p53蛋白表达及其相互关系的研究

目的:检测p14ARF、p16INK4a和p53蛋白在非小细胞肺癌中表达情况,对它们在非小细胞肺癌发生过程中的作用及其相互关系进行初步探讨方法:应用免疫组化方法检测了40例非小细胞肺癌组织标本的p14AHF、p16INK4a和p53基因的表达水平.结果:非小细胞肺癌组织中p14ARF、p16INK4a和p53蛋白总阳性率分别是72.5%,50.0%和52 5%,与癌旁正常组织(分别是95.0%,92.5%,2.5%)有显著性差异(P＜0.01);非小细胞肺癌中p14ARF和p53蛋白表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p16INK4a蛋白表达水平与组织分化程度相关(P＜0.05),但与肿瘤分期、组织类型、淋巴结转移情况无关;p14ARF和p53蛋白在组织中表达呈负相关,r2=-0.475(P＜0.0),而p14ARF和p16INK4a蛋白表达无关;p14ARF蛋白在Ⅰ期病例中强阳性( )占阳性比例为41.7%,在Ⅲ期中强阳性( )比例为10.0%.结论:p14ARF、p16INK4a和p53三个基因在NSCLC发生过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起到更为重要的作用;p14ARF和p53基因在同一调节通路上;p14ARF、p16INK4a和p53蛋白可以作为非小细胞肺癌早期生物学检测指标.     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况，探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR，检测50例肺癌组织和54例正常肺组织中p16基因第1外显子5′端启动子区域CpG岛甲基化及第2外显子缺失情况。结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为32.0%(16/50)。缺失率为28.0%(14/50);54例正常肺组织甲基化率为3.7%(2/54)，缺失率为0，二组比较，甲基化率（Fisher's exact=0.000)及缺失率（Fisher's exact=0.000)均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌p16基因失活的主要形式，检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。     

p14ARF蛋白在人脑胶质瘤中的缺失及其临床意义

目的　研究人脑胶质瘤中p14ARF蛋白的缺失情况及其与临床病理的关系。方法　采用链霉菌素 生物素 (SP)免疫组织化学法对 5 5例脑胶质瘤标本进行分析。结果　在 5 5例人脑胶质瘤标本中p14ARF缺失率为 5 0 .9%。I级 II级病例p14ARF缺失率为 32 % ,III级 IV级病例p14ARF缺失率为 6 6 .7% (P <0 .0 5 )。结论　p14ARF蛋白缺失与脑胶质瘤的发生发展有一定的相关性 ,提示p14ARF基因的失活可能是脑胶质瘤恶性演变的重要因素。     

非小细胞肺癌患者血清Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区域的甲基化状态及其临床意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域异常甲基化检出率为30.7%(23/75),而35例肺部良性疾病患者和15例健康志愿者中检出率均为0,差异有统计学意义(P＜0.001).RASSF1A启动子异常甲基化与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型无显著相关性,但在晚期及肿瘤分化程度较低的患者中检出率较高(P＜0.05).结论 RASSF1A启动子异常甲基化在NSCLC的发生、发展中起重要作用,有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记.     

肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的：研究抑癌基因位点ＩＮＫ４ａ－ＡＲＦ在肺肿瘤细胞中的表达状况,揭示ｐ１４ＡＲＦ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对６株肺癌细胞（ＳＰＣ－Ａ－１,Ｃａｌｕ－１,Ｈ４４６,ＳＨ７７,Ａ５４９,Ｈ４６０）的ＩＮＫ－４ａ－ＡＲＦ基因位点在ｍＲＮＡ、蛋白水平上进行检测,对ＰＣＲ产物进行纯化和测序分析。结果：６株肺癌细胞中,有３株细胞（Ｈ４     

p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从正常人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增人的肿瘤抑制基因Ｐ１４＾ＡＲＦ,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从培养的下沉人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增出０．４Ｋｂ的Ｐ１４＾ＡＲＦＣＤＮＡ片段,测序正确后郫具核表达载体ｐｃＤＮＡ３上的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点,命名为ｐｃＤＮＡ３ＡＲＦ。此质粒同脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＾ＴＭ介导转染肿瘤细胞Ｈｅｐ２、ＫＢ、ＫＢ－ｖ２０     

p14ARF、E2F-1与肺癌

p14ARF基因和核转录因子E2F-1在细胞周期调控,细胞凋亡和肿瘤发生中具有重要作用。近年来,有研究表明p14ARF在肺癌中的表达率低于正常组织,E2F-1的表达率高于正常组织。本文将就p14ARF、E2F-1与肺癌的关系进行综述。     

非小细胞肺癌化疗同期调强放疗靶区变化规律的临床分析

目的分析非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）调强放疗（intensitymodulatedradiotherapy,IMRT）过程中肿瘤体积动态变化的情况。方法25例经病理学或细胞学检查诊断为NSCLC的患者接受IMRT,分别于放疗前、放疗20Gy、30Gy、40Gv、50．5Gy、61Gy时予以螺旋CT模拟定位扫描检查,在各次cT扫描上勾画原发肿瘤（GTV）和纵隔转移淋巴结（GTvnd）,并分析其变化规律。结果随放疗剂量的增加,GTv和GTvnd的体积逐渐缩小,放疗40Gy后肿瘤缩小的速度逐渐缓慢,选择放疗40Gv时肿瘤体积与放疗前肿瘤体积进行比较,GTV（t=5．019,P=0．ooo）和GTvnd（t=5．267,P=0．000）体积缩小的差异有统计学意义。以中位值为分界点,GTV≥101．45em3GTV〈101．45cm3、GTVndI〉50．35cm^3和GTVnd〈50．35cm,放疗40Gy后肿瘤体积缩小的速度逐渐缓慢,与放疗前肿瘤体积缩小比较差异均有统计学意义（t=6．019,P=0．000;t=6．491,P=0．000;t=5．449,P=0．000;t=7．919,P=-0．000）。大体积肿瘤缩小更快、更明显。结论随着放疗剂量的增加,肿瘤体积逐渐缩小,放疗40Gy后肿瘤体积缩小的速度逐渐缓慢,大体积肿瘤比小体积肿瘤缩小更快、更明显。     

p53基因BstUⅠ位点多态性与非小细胞肺癌易感性及放射敏感性的相关性研究

背景与目的肺癌是世界上发病率和死亡率增长较快的恶性肿瘤。近几年来随着分子生物学的蓬勃发展，人们对疾病的认识达到了基因水平。通过分子生物学方法发现某一基因与肺癌之间的关联性并加以利用，为早期诊断及治疗肺癌提供了一个新的思路。本研究拟探讨p53肿瘤抑制基因BstUⅠ位点多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）易感性及放射敏感性的相关性。方法采用PCR-RFLP方法检测50例NSCLC患者及50例健康对照p53基因序列中的BstUⅠ位点单核苷酸多态性（SNP）。并采用病例对照方法分析p53基因BstUⅠ位点的多态性与肺癌的易感性，以及NSCLC患者p53基因BstUⅠ位点的多态性与放疗疗效的相关性。结果不同p53基因BstUⅠ基因型的NSCLC患者对放疗的有效率不尽相同。杂合子（A1／A2）基因型的患者对放疗的有效率低．仅为25．0％，而纯合子（A1／A1，A2／A2）基因型的患者对放疗的有效率较高，分别为71．4％和70．0％，三者之间的差异有显著性（χ^2=9．2，P〈0．05）。肺癌组的A1／A1、A1／A2及A2／A2基因型频率分别为28．0％、32．0％及40．0％，对照组为32．0％、42．0％及26．0％，但两组间纯合子的频率差异并无统计学意义（P均〉0．05），并且未观察到p53基因BstUⅠ的多态性与NSCLC易感性有密切的相关关系。结论p53基因BstUⅠ位点多态性可能与NSCLC发生无关，但NSCLC患者的p53基因BstUⅠ SNP可能与放射敏感性有关。     

p14ARF与子宫颈癌及癌前病变关系的研究进展

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,是目前所有恶性肿瘤中唯一病因明确、可进行早期预防和治疗控制的疾病.p14ARF是新近发现的一种抑癌基因,几乎在所有的子宫颈癌及癌前病变中高表达,且具有较高的特异性和敏感性,与侵袭及预后密切相关.因此,p14ARF是一种理想的标志物,可用于辅助子宫颈癌及其癌前病变的临床筛查诊断及判断预后.     

KIF5B-RET融合基因与非小细胞肺癌

肺癌是全世界范围死亡率最高的肿瘤。近年来,靶向治疗成为肺癌研究的热点。2012年研究发现肺癌中存在一种新的融合基因KIF5B-RET,其阳性患者多为不吸烟或很少吸烟的腺癌患者。其存在与其他已知的基因改变如EGFR、K-Ras、ALK等相互排斥,提示KIF5B-RET是一种新的致癌驱动突变,有可能成为非小细胞肺癌个体化诊断与治疗的一个分子靶点。     

Ⅰ期非小细胞肺癌预后因素的研究

目的 探讨Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)的联合预后因素。方法 回顾性分析58例Ⅰ期NSCLC患者的临床资料、术后病理结果和免疫组化技术检测的9项基因表达指标(c-myc、MDM2、c-erbB-2、EGFR、p53、p14^ARF、p16^INK4、p21^WAF1、nm23)。观察患者的总生存率、局部区域性复发率和远处转移率。结果 全组5年生存率、局部区域性复发率和远处转移率分别为71．1％,11．1％和33．5％。单因素分析结果表明,肿瘤细胞的低分化是影响总生存率的不良预后因素(P=0.028);c—myc与c-erbB-2的高表达均为影响总生存率和远处转移率的不良预后因素;促进肿瘤增殖基因总分组的高分值(P=0．041)与综合肿瘤基因组的高分值(P=0．006),是总生存率的不良预后因素。多因素分析结果表明,肿瘤细胞的分化程度与综合肿瘤基因的联合表达,是影响总生存率的独立预后因素。本组结果还显示,已行化疗的高危组患者,其总生存率与无远处转移率均优于未行化疗者,但差异尚未见有显著性。结论 肿瘤细胞的分化程度与综合肿瘤基因的表达,可能是Ⅰ期NSCLC的预后因素。高危组患者进行术后化疗似有提高疗效的趋势。     

非小细胞肺癌MAGE-3基因产物的表达

目的　检测MAGE 3基因编码的抗原在非小细胞肺癌表达的情况 ,探讨MAGE 3抗原的表达与患者临床表现的关系 ,以及利用MAGE 3基因产物对非小细胞肺癌患者进行特异性免疫治疗的可能性。方法　用免疫组化LSAB的方法对石蜡包埋的组织切片进行MAGE 3抗原的检测。结果　 10 4例非小细胞肺癌原发灶肿瘤组织切片中 ,MAGE 3抗原阳性者 31例 ,阳性率 2 9.8%。MAGE 3抗原阳性患者肿瘤转移率 (30 .0 % )明显低于阴性患者的转移率 (5 6 .1% ,P <0 .0 5 ) ,MAGE 3抗原阳性患者 18个月的生存率 (88.2 % )明显高于阴性患者生存率 (5 2 .9% ,P <0 .0 1)。结论　非小细胞肺癌有较高比例的MAGE 3抗原表达 ,并与患者的预后相关。对MAGE 3抗原阳性NSCLC患者 ,可以利用MAGE 3抗原作为靶分子进行免疫治疗。     

ILK与E-cadherin在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的整合素连接激酶（ILK）是一种丝／苏氨酸蛋白激酶，研究证明它是多种致瘤相关因素的上游交叉点，与肿瘤的形成、增殖、侵袭和转移密切相关。本文旨在探讨ILK在非小细胞肺癌（NSCLc）组织中的表达及其与组织类型、肿瘤分化、分期、淋巴结转移及预后的关系，并分析其与表皮钙粘素（E—cadherin）是否存在相关性。方法采用孓P免疫组化方法和Western Blot法，检测NSCLC组织及相应癌旁肺组织中ILK和Ecadherin的表达情况，并结合临床和病理资料进行分析。结果免疫组化结果显示：ILK在69．7％（53／76）的NSCLC组织中阳性表达，其中鳞癌阳性率75．0％（33／44），腺癌阳性率62．5％（20／32），其表达与组织类型无关（P=0．247），与肺癌分期（P=0．002）、淋巴结转移（P=0．006）显著正相关，与肺癌分化程度（P=0．009）、患者生存时间（P=0．006）显著负相关。ILK与E—cadherin间的表达呈显著负相关（P〈0．001）。Western Blm结果显示ILK在肺癌组织中的表达显著高于癌旁正常肺组织（P=0．0002），其表达与肺癌的分化（P=0．0001）和E—cadherin的表达（P=0．006）显著负相关。结论在NSCLC中，ILK是肿瘤相关信号通路中的交叉位点，可与许多致瘤因子相互作用，从而促进肿瘤的发生、发展、侵袭和转移。ILK与Ecadherin间显著负相关，其对Ecadherin的影响可能是ILK发挥作用的机制之一。ILK可作为判断NSCLC患者预后的参考指标，ILK和E—cadherin的联合检测将有助于更好地判断肺癌患者的预后情况。     

非小细胞肺癌ＳＦＲＰ１基因甲基化的研究

目的　检测ＳＦＲＰ１基因在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织和血浆中的甲基化状态,分析其临床意义。方法　留取７８例ＮＳＣＬＣ患者术中癌组织、正常肺组织及术前血浆标本,２５例肺部良性病变组织及５０例肺部良性病变患者或健康志愿者血浆标本为对照,甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）检测ＳＦＲＰ１基因启动子区甲基化情况,并分析与临床病理特征之间的相关性。结果　７８例ＮＳＣＬＣ组织中,ＳＦＲＰ１基因启动子甲基化比例为３２.１％,高于正常组织的７.７％和２５例肺部良性病变组织的０（Ｐ＜０.０１）;ＳＦＲＰ１基因启动子甲基化与患者淋巴结转移相关（Ｐ＝０.０３９）。ＮＳＣＬＣ术前血浆ＤＮＡ中ＳＦＲＰ１甲基化比例为２８.２％,高于对照组的４.０％（Ｐ＜０.０１）,且血浆ＤＮＡ甲基化状况与组织中具有良好的一致性。结论　血浆ＤＮＡ中ＳＦＲＰ１甲基化检测可能对ＮＳＣＬＣ早期诊断有益。     

p14ARF在宫颈癌中的表达及其与p53表达相关性的研究

目的探讨宫颈癌组织p14ARF蛋白的表达及其与p53表达的相关性.方法应用免疫组化方法检测p14ARF、p53基因在41例宫颈癌及20例正常宫颈组织中的表达.结果p14ARF在正常宫颈组织中不表达,41例宫颈癌中35例表达阳性,占85.4%.病理分级为G1、G2级的宫颈癌的p4ARF阳性表达率为68.4%,G3级为100%,两者比较,有显著性差异(P＜0.05).宫颈癌组织中p53蛋白表达阳、阴性者中p14ARF蛋白表达阳性率分别为75.0%(12/16)和92.0%(23/25),两者比较,无显著性差异,p14ARF与p53表达不相关.结论p14ARF在宫颈癌中高表达有一定的诊断和估测预后价值,可能是宫颈癌新的肿瘤标志物.     

Association of interindividual differences in p14ARF promoter methylation with single nucleotide polymorphism in primary colorectal cancer

BACKGROUND: CpG island hypermethylation has been reported at the promoter region of many tumor suppressor genes in colorectal cancers. However, there are significant interindividual differences in the degree of DNA methylation in colorectal cancers. The objective of the current study was to understand whether single nucleotide polymorphisms (SNPs) around the promoter of a gene are implicated in the interindividual differences of CpG island hypermethylation. METHODS: Promoter methylation of the p14(ARF) gene and messenger RNA (mRNA) expression levels of p14(ARF), DNA methyltransferase 1 (DNMT1), and DNMT3b were investigated by using methylation-specific polymerase chain reaction (PCR) analysis (MSP) and quantitative real-time PCR analysis in fresh tissues from 188 patients with colorectal cancer. SNPs around the p14(ARF) promoter were genotyped in DNA from peripheral blood lymphocytes in 300 healthy individuals and in 188 patients with colorectal cancer by using matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. RESULTS: p14(ARF) methylation was present in 61 of 188 colorectal cancers (32%). Fourteen SNPs among the 20 candidate SNPs were identified as monomorphic in the Korean population studied. Two individual SNPs (-4256 thymine to cytosine [T-->C] and -1477 guanine to adenine [G-->A]), which were in strong linkage disequilibrium (|D'|=0.99; correlation coefficient [r(2)]=0.95), were associated significantly with p14(ARF) methylation. Patients who had the CC variant at the-4256 locus or the AA variant at the -1477 locus had 2.42 times (95% confidence interval [95% CI], 1.07-5.46; P = .03) and 2.47 times (95% CI, 1.09-5.56; P= .03) greater risk of p14(ARF) methylation than patients who had the TT or GG homozygote, respectively, after adjusting for mRNA levels of DNMTs. Four major haplotypes were identified within a block (-4256 T-->C, -3631 T-->C, -1477 G-->A, and +20,188 T-->C). p14(ARF) promoter methylation also was associated significantly with the CCAT haplotype (odds ratio [OR], 8.31; 95% CI, 2.43-28.41; P= .0007) and the CTAC haplotype (OR, 9.71; 95% CI, 1.09-86.24; P= .04). CONCLUSIONS: The current results suggested that SNPs around the p14(ARF) promoter region may be responsible for the interindividual susceptibility to p14(ARF) promoter methylation among individuals with colorectal cancer.     

血浆Ras相关结构域家族基因1A和p16基因甲基化联合检测在非小细胞肺癌诊断中的意义

目前,提高肺癌患者生存率的关键措施是早期诊断,寻找与肺癌发生早期相关的分子标志物是肺癌早期诊断的有效方法。肺癌新型候选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(ras association domain family gene 1A,RASSF1A)是从3p21.3克隆得到的,p16是多肿瘤抑制基因,两基因主要以