喉鳞状细胞癌中BAG-1和 p53基因的表达及其临床意义

目的：研究BAG-1和p53基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达,探讨BAG-1在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用及与p53的关系。方法：运用免疫组织化学SP技术,检测40例喉鳞状细胞癌组织,27例喉癌旁正常组织及20例声带息肉组织中BAG-1与p53的表达。结果：BAG-1在喉癌中表达阳性率为72．5％,较喉癌旁组织（18．5％）、声带息肉组织（20．0％）高（P〈0．05）,其表达与预后呈负相关（P〈0．05）;p53在喉癌中表达阳性率为65．0％,而在喉癌旁组织和声带息肉组织中均无表达,与在喉癌组织中的表达相比差异有统计学意义（P〈0．05）;其表达与病理分化程度、颈淋巴结转移及预后呈负相关（P〈0．05）;在喉癌组织中BAG-1与p53表达之间未见显著性相关（P〉0．05）。结论：BAG-1和p53基因的过度表达与喉鳞状细胞癌的发生、发展存在一定的关系。BAG-1可作为早期诊断喉癌的一种生物标记,尤其是细胞核BAG-1定位可作为一种不良预后的预测因子;p53表达与喉癌颈淋巴结转移有关,可单独作为喉癌的预后指标。     

喉癌组织转化生长因子-α及其受体mRNA定量分析的意义

为了探讨生长因子自分泌刺激环路在喉癌发生发展中的作用。本研究采用逆转录聚合酶链式反应技术（RT－PCR）,以β-actin为内参照,测定喉癌、癌旁正常喉粘膜及声带息肉组织转化生长因子-α（TGF-α）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA水平。结果显示,喉癌和癌旁组织TGF-α和EGFRmR－NA水平明显高于声带息肉组织（P＜0．05）,而喉癌组织TGF－αmRNA水平又高于癌旁组织（P＜0．05）。表明TGF－α及其受体在喉癌的极早期,甚至尚未出现组织表型改变时,就可构成自分泌刺激环路,而且TGF－αmRNA表达水平的进一步上调在触发癌变中有重要作用。     

脆性组氨酸三联体在喉癌中的表达

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)中的表达,并分析其与p53、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及临床病理学特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例喉鳞癌、25例癌旁组织、25例喉角化症和20例声带息肉标本中FHIT表达,使用同样方法检测实验组60例喉癌中突变型p53和PCNA的表达水平,结合喉癌患者的临床病理学特征进行分析。结果①在喉癌、癌旁组织和喉角化症中均检测到不同程度FHIT缺失,低表达,在喉癌中最高,缺失,低表达率分别为61．7%(37/60)、36．0% (9/25)、32．0%(8/25);声带息肉中未见FHIT缺失/低表达(0/20);②喉癌中FHIT缺失/低表达率高于癌旁组织、喉角化症和声带息肉(x~2=4．682,P=0．030;x~2=6．243,P＜0．01 3：x~2=22．946,P=0．000);癌旁组织和喉角化症中FHIT缺失/低表达率均明显高于声带息肉(x~2=6．891,P=0．009;x~2=5．749,P=0．017);喉角化症中FHIT缺失/低表达率略低于癌旁组织,但差异无统计学意义(x~2=0．089,P=0．765);③FHIT表达与喉癌患者年龄、性别、肿瘤的原发部位、颈部淋巴结转移情况、临床分期及组织病理学分级均无明显相关性(P＞0．05);④FHIT与p53表达无明显相关性(g =0．103,P=0．434);FHIT与PCNA表达具有明显负相关性(g=-0．413,P=0．001)。结论FHIT缺失,低表达在喉癌的发生中可能起到重要作用,是喉癌发生的早期事件,可能与肿瘤的恶性增殖有关。     

喉癌组织中热休克蛋白和人乳头状瘤病毒的相关性

目的 探讨喉鳞状细胞癌（简称喉癌）组织中热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）和人乳头状瘤病毒1 6E7（human papiloma-virus 1 6E7,HPV16E7）蛋白的表达及其在喉癌发生和发展过程中的相互关系.方法 用免疫组织化学方法检测78例喉癌、24例声带息肉和10例癌周喉组织标本中HSP70和HPV16E7蛋白的表达.结果 在喉癌组织、声带息肉和癌周喉组织中HSP70的阳性表达率分别为69.2%,8.3%和0%,HPV16E7蛋白的阳性表达率分别为43.6%,4.2%和0%,HSP70和HPV16E7蛋白的阳性表达在喉癌组织与声带息肉、癌周喉组织之间均有显著性差异（P＜0.05）;HPV16E7阳性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为85.3%,HPV16E7阴性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为56.8%,二者之间有显著性差异（P＜0.05）.结论 HPV16E7可以诱导喉癌组织中HSP70的高表达,二者在喉癌的发生和发展过程中发挥重要作用;检测HSP70和HPV16E7蛋白的表达可用于喉癌恶性程度的评定.     

喉癌中凋亡抑制基因Livin的表达

目的探讨凋亡抑制基因Livin在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测了50例喉癌组织,45例癌旁组织,10例喉乳头状瘤及16例声带息肉中Livin蛋白的表达情况。RT-PCR方法检测41喉癌组织,41例癌旁组织和11声带息肉组织中Livin mRNA的表达情况。结果 RT-PCR检测结果显示Livin mRNA在喉癌组织中相对表达量明显高于癌旁组织及声带息肉组织（P〈0.01）。免疫组织化学检测结果显示Livin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织、喉乳头状瘤及声带息肉（P〈0.05）。Livin蛋白表达与肿瘤的病理分级有关（P〈0.05）,而与患者年龄、肿瘤部位、临床分期、淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论 Livin在喉癌组织中异常高表达,提示在喉癌的发生、发展中可能起重要作用。     

喉鳞状细胞癌中细胞周期素E的表达及临床意义

目的：探讨细胞周期素E（cyclin E）在喉鳞状细胞癌的表达及临床病理学意义。方法：采用免疫组织化学技术检测10例声带息肉、20例不典型增生病变和50例喉鳞状细胞癌组织中cyclinE的表达。结果：cyclin E阳性表达定位于细胞核,cyclin E在喉癌细胞的阳性表达率为6％（3／50）,同声带息肉组10％（1／10）,不典型增生组15％（3／20）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,但cyclin E在喉癌间质血管内皮细胞阳性表达意义显著,同临床分期及淋巴结是否转移相关（均P〈0．01）。结论：cyclin E在喉癌组织呈非特异性表达,或许并不参与喉癌细胞的恶性转化事件,但cyclin E对于间质中血管增生相对敏感,参与血管内皮细胞分裂增殖,其阳性高表达或可用来间接评估喉癌的恶性进程。     

转化生长因子β_1蛋白在原发性喉癌及喉旁组织和声带息肉中表达的研究

为探讨转化生长因子β1在原发性喉癌中的表达情况，采用免疫组化LSAB方法对36例原发性喉癌及其边缘1．0cm组织和20例同年龄段声带息肉组织进行检测，喉癌组阳性车38．9％，癌旁组织组66．7％，声带息肉组60．0％，喉癌组与癌旁组织组阳性率差异显著（P＜0．05），喉癌组及声带息肉组中阳性与强阳件表达率差异显著（均P＜0．01），癌细胞分化越高TGF-β1表达越高。提示TGF-β1对喉癌细胞的增殖调控起着重要作用。     

联合检测喉癌及癌前病变中两种肿瘤相关蛋白的表达

目的联合检测喉癌及癌前病变中细胞S期激酶相关蛋白2 （S phase kinase associated protein 2, Skp2）、与细胞骨架蛋白tensin同源的10号染色体有缺失的磷酸脂酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN）蛋白表达，探讨它们的临床意义及相互关系。方法采用免疫组化方法检测skp2和FYEN蛋白在79例喉癌组织、16例声带不典型增生、14例成人喉乳头状瘤和27例声带息肉组织中的表达，分析它们在不同病变组织中的表达情况、相互之间及与喉癌临床病理指征的关系。采用Kaplan-Metier法计算生存率。结果在声带息肉、成人喉乳头状瘤、声带不典型增生和喉癌组织中skp2组间差蛋白的阳性率分别为11．11％、14．29％、37．50％、39．24％，表达强度各异有统计学意义（Hc=11．57，P〈0．01）。PTEN蛋白在各病变中的阳性率分别为100％、92．86％、75．00％、56．96％，表达强度各组间差异有统计学意义（Hc=62．86，P〈0．05）；在喉癌组织中skp2和PTEN蛋白的表达呈负相关关系，相关系数r=-0．4512，P〈0．01。skp2在喉癌中阳性表达的患者5年生存率为31．25％，低于阴性表达的患者85．71％，差异有统计学意义（χ^2=21．46，P=0．000）。结论skp2和PTEN蛋白表达与喉癌的发生、侵袭转移有关。在喉癌中Skp2蛋白高表达与PTEN蛋白的低表达呈负相关，提示抑癌基因PTEN可能参与skp2表达的调节。     

人端粒保护蛋白POT1和TRF2在喉癌中的表达

目的探讨人端粒保护蛋白1（human protection of telomeres1,POT1）和端粒重复序列结合因子2（telomeric repeat binding factor-2,TRF2）在喉鳞状细胞癌（简称喉癌）及声带息肉中的表达及意义。方法采用间接免疫荧光法检测20例喉癌、19例声带息肉中POT1和TRF2的表达水平。结果POT1和TRF2在喉癌中的阳性表达率为65．00％和70．00％,在声带息肉中未见POT1和TRF2的表达。POT1在低分化喉癌中的表达高于POT1在高及中分化喉癌中的表达（P〈0．05）,POT1的表达水平在喉癌的不同发生部位、T分级、临床分期及淋巴结转移率中的差异无统计学意义（P〈0．05）。TRF2的表达程度与肿瘤的发生部位、组织病理、T分级、淋巴结转移率和临床分期均无关（P〈0．05）。相关分析显示喉癌中POT1的表达与TRF2的表达无相关性（P〈0．05）。结论POT1和TRF2在喉癌中高表达,两者在喉癌的发生中可能起重要作用。POT1在喉癌中的表达与肿瘤的分化程度有关。     

喉癌及癌前病变中细胞周期调控基因甲基化的研究

目的探讨细胞周期调控基因P14,P15及P16在喉癌发生发展中的作用。方法选取20例喉癌癌前病变（包括喉角化8例、白斑4例和成人复发性喉乳头状瘤8例）、30例喉鳞状细胞癌（声门型）及10例癌旁组织。采用甲基特异性聚合酶链反应（methylationspecific PCR,MSP）检测P14,P15及P16基因启动子区过甲基化。结果P14,P15及P16基因启动子过甲基化发生率在癌前病变中分别为10％（2／20）、15％（3／20）、20％（4／20）;在喉癌中分别为30．0％（9／30）、40．0％（12／30）、36．7％（11／30）;在癌旁组织中未检测到过甲基化事件。结论细胞周期调控基因p14,p15及p16启动子区过甲基化发生于喉癌早期病变中,可作为喉癌前病变及早期喉癌筛查的指标之一。     

Studies of the cell cycle regulatory proteins P16, cyclin D1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue

Defects in the system controlling the cell cycle can lead to an increased proliferation of cancer cells. The aim of this study was to analyse the immunohistochemical expression of chosen cell cycle proteins (P16, cyclin D1 and retinoblastoma protein) and their connection with the clinical course of the disease in laryngeal squamous cell cancer (LSCC). Cancer tissue sections obtained from 58 patients after total laryngectomy served to determine the level of the proteins' expression using immunohistochemical staining and commercial antibodies. A decreased level of P16 expression in 47 per cent, of retinoblastoma protein in 12 per cent and strong cyclin D1 expression in 48 per cent of cases was revealed. Our results show significant correlation between decreased P16 expression and increased tumour dedifferentiation. Overexpression of cyclin D1 was statistically more common in locally advanced tumours (T(3) -T(4)). Low expression of retinoblastoma protein was significantly correlated with both positive P16 immunostaining and with strong cyclin D1 expression. Our study confirms that dysfunction of cell cycle regulation is a common event and may play a significant role in the development of squamous cell carcinoma of the larynx.     

喉癌病变过程中细胞周期调控因子的流式检测及意义

目的：探讨细胞周期调控基因cyclin E、cyclin D1、p21、p16在喉癌发生、发展中的作用。方法：选取23例声带息肉、69例喉癌前病变、33例喉癌石蜡包埋组织为研究对象,切片脱蜡后制备成细胞悬液,采用流式细胞术检测cyclin E、cyclin D1、p21、p16基因的荧光表达情况。结果：在声带息肉、喉癌前病变、喉癌组织中,cyclin E的阳性表达率分别为13.04%、20.29%和42.42%;cyclin D1的阳性表达率分别为26.09%、43.48%和93.94%;p16的阳性表达率分别为61.90%、40.98%和14.28%;p21的阳性表达率分别为47.62%、23.81%和26.23%。提示cyclin D1、cyclin E的阳性率表达形成声带息肉→喉癌前病变→喉癌组织阳性强度逐渐增强的梯度现象,而p21、p16的阳性表达强度则呈逐渐减弱的现象。结论：①细胞周期调控因子的异常表达是喉癌发生的分子事件;②正性调控因子cyclin D1、cyclin E高表达,负性调控因子p16、p21低表达,即多个与细胞周期相关的正负调控因子失衡在喉癌的发生中可能起着重要作用。     

Expression patterns of cyclin E,cyclin A and CDC25 phosphatases in laryngeal carcinogenesis

The aim of the research was to evaluate the expression levels of cyclin E/A and CDC25A/B during laryngeal carcinogenesis. The expression was demonstrated using immunohistochemistry in 46 cases of laryngeal cancer (LSCC), 23 epithelial dysplasias (ED) and 21 samples of normal mucosa (NM). The mean labeling indices (LI) for cyclin E in LSCC, ED and NM were 10.6, 4.9 and 0%; for cyclin A 27.2, 17.5 and 7%; for CDC25A 73.9, 53 and 32% and for CDC25B 36.5, 25.9 and 0%, respectively. A gradual increase in cyclin A and CDC25A expression levels from mild through moderate and severe dysplasia to in situ carcinoma were noted. Cyclin A LI significantly increased also from NM through ED to LSCC. Cyclin A and CDC25A LI significantly increased from NM to ED. Overexpression of cyclin A and CDC25A was significantly associated with proliferation among ED. Linear interdependency was detected in ED between the expression of CDC25A and cyclin A. Cyclin E and CDC25B overexpression occurs as a late event in neoplastic transformation. The progressive expression of proteins supports the multistep model of laryngealcarcinogenesis. The results indicate a possible role of cyclin A as a marker reflecting cell proliferation. The enhanced immunoexpression of cyclin A and CDC25A suggests the potential for malignant formation in preneoplastic lesions.     

喉鳞癌端粒酶活性与细胞周期蛋白D1的表达及其意义

目的 :了解喉鳞癌端粒酶活性的表达情况及其与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)过度表达的关系。方法 :分别应用TRAP法和免疫组化法对 38例喉鳞癌组织及相关喉粘膜组织的端粒酶活性和cyclinD1的表达情况进行检测。结果 :喉鳞癌病例中 82 % (31/ 38)有端粒酶活性表达 ,5 0 % (19/ 38)有cyclinD1过度表达 ;两者表达均与患者的年龄、肿瘤部位、T分期、病理学分级无关 (P >0 .0 5 ) ,而端粒酶表达与肿瘤的临床分期有关 (P <0 .0 5 ) ,cyclinD1表达与肿瘤的临床分期无关 (P >0 .0 5 ) ,喉正常粘膜中两者均无表达 ;喉鳞癌组织中两者均表达 18例 ,两者密切相关 (P <0 .0 5 )。结论 :端粒酶的激活在喉鳞癌组织中普遍存在 ,cyclinD1过度表达可能是喉鳞癌端粒酶激活的重要机制之一。     

Cyclin D1 amplification and p16(MTS1/CDK4I) deletion correlate with poor prognosis in head and neck tumors

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: Cyclin D1, a cell cycle regulator localized to chromosome 11q13, is amplified in several human tumors including head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Amplification and/or overexpression of cyclin D1 have been correlated to a poor prognosis. Deletion of the p16 gene, localized to 9p21, has also been observed in a significant proportion of HNSCC. The p16 gene regulates cyclin D1-CDK4 activity and prevents retinoblastoma tumor suppressor gene phosphorylation, thereby downregulating cellular proliferation. Detection of cyclin D1 amplification and p16 deletion using a simple and sensitive method will be valuable for the development of effective treatment modalities for head and neck cancer. STUDY DESIGN: We have used fluorescence in situ hybridization (FISH) to study cyclin D1 amplification and p16 gene deletion in head and neck tumors. Both single- and dual-color FISH were performed. METHODS: Paraffin-embedded tissues from 103 patients with HNSCC were analyzed using genomic DNA probes for cyclin D1 and p16. Dual-color FISH was performed with chromosome 11 or 9 centromeric probes as a control. Twenty-eight of these samples were analyzed for p16 expression by immunohistochemistry. RESULTS: Cyclin D1 amplification was observed in 30% (31/103) of patients, and p16 deletion in 52% (54/103). Lack of p16 expression was observed in 64% (18/28) of patients. There was a good correlation between the deletion of p16 sequences and the loss of p16 expression (P = .008). Amplification of cyclin D1 had a statistically significant association with recurrence, distant metastasis, and survival at 36 months. There was a significant association between p16 deletion and the development of distant metastases. Cyclin D1 amplification and p16 deletion together correlated with recurrence, distant metastasis, and survival. CONCLUSIONS: We demonstrate that FISH is a simple and sensitive method for detecting cyclin D1 amplification and p16 deletion in head and neck cancer. Our results suggest that these two genetic aberrations together portend a poorer outcome than either of the abnormalities alone in head and neck cancer.     

细胞周期蛋白D1基因的表达与喉鳞癌相关性研究

目的：探讨细胞周期蛋白Ｄ１的表达与喉鳞癌（ＳＣＣＬ）的关系。方法：对３５例经病理证实ＳＣＣＬ患者的肿瘤组织及其邻近的正常粘膜,运用反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、光密度半定量法,分别检测其ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达程度。结果：发现几乎所有的肿瘤标本的表达量要高于正常粘膜（Ｐ〈０．０５）,有淋巴结转移者的表达量要明显高于无淋巴结转移者（Ｐ〈０．０５）;表达量与ＴＭＮ分期也有明显的相关性（Ｐ〈０．０     

Stat3及其靶基因Cyclin D1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:研究喉鳞状细胞癌组织中信号转导和转录激活因子3(Stat3)及其靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达情况并探讨其临床意义。方法:应用Western blot和RT-PCR方法,研究喉鳞状细胞癌组织中Stat3、Cyclin D1蛋白和mRNA的表达情况以及与喉鳞状细胞癌临床病理因素的关系。结果:喉鳞状细胞癌组织中Stat3、Cyclin D1蛋白和mRNA的表达水平明显高于正常喉黏膜组织(P<0.01)。Stat3、Cyclin D1蛋白表达水平与喉鳞状细胞癌临床分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01);在喉鳞状细胞癌组织中Stat3蛋白、mRMA与CyclinD蛋白、mRNA的表达均呈正相关(r=0.564、0.552,均P<0.01)。结论:Stat3信号转导通路在喉鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要作用,检测喉鳞状细胞癌组织中Stat3及其靶基因Cyclin D1的表达可以反映肿瘤的恶性程度。     

三种癌基因与喉癌生物学行为关系的研究

为探讨癌基因在原发性喉癌中的增殖调控作用，采用免疫组化ＳＡＢＣ方法对３６例原发性喉癌行Ｐ１６、Ｒｂ和周期蛋白Ｄ１（ＣｙｃｌｉｎＤ１）的检测，结果：Ｐ１６在肿瘤中阳性率３０．６％与癌旁组织阳性率６１．１％之间差异有显著性（Ｐ＜０．０５），Ｒｂ、ＣｙｃｌｉｎＤ１阳性率分别为６１．１％和４７．２％。Ｐ１６与Ｒｂ之间阳性率差异有显著性（Ｐ＜０．０５），多数情况下当Ｐ１６阳性时Ｒｂ阴性，反之亦然。经秩相关检验Ｒｂ与ＣｙｃｌｉｎＤ１阳性呈正相关。Ｐ１６、Ｒｂ在肿瘤高、低分化之间表达差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。同一抗体在不同的临床分期及肿瘤部位和同一分期及部位在不同的抗体中表达差异不显著。结果显示：由Ｐ１６、Ｒｂ及ＣｙｃｌｉｎＤ１等形成的反馈调节链在喉癌的增殖调控中起重要作用。     

喉鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体基因微卫星的不稳定性和杂合性丢失

目的　探讨脆性组氨酸三联体 (fragilehistidinetriad ,FHIT)基因微卫星不稳定性(microsatelliteinstability ,MSI)和杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)与喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )发生、发展的关系。方法　采用聚合酶链式反应 简单序列长度多态性 银染技术 ,分析 4 1例喉鳞癌中FHIT基因D3S12 34和D3S130 0位点的MSI及LOH。结果　D3S12 34位点LOH发生率为 4 4 4 % (16 /36 ) ,MSI发生率为 19 4 % (7/ 36 ) ;D3S130 0位点LOH发生率为 36 4 % (12 / 33) ,MSI发生率为 2 4 2 % (8/33)。两个位点总的LOH发生率为 5 2 6 % (2 0 / 38) ,总的MSI发生率为 2 8 9% (11/ 38)。总的LOH发生率与喉鳞癌患者TNM分期、病理分级、淋巴结转移及复发有关 (P <0 0 5 ) ,总MSI发生率与喉鳞癌患者淋巴结转移有关 (P <0 0 5 )。结论　FHIT基因LOH和MSI与喉鳞癌的发生、发展有关 ,并可能为喉鳞癌的早期诊断提供新的途径和依据     

喉鳞状细胞癌及转移淋巴组织中Cyclin E的表达

目的：定量检测细胞周期素E（Cyclin E）在喉鳞状细胞癌及颈部淋巴组织中的表达,探讨其在喉癌转移中的可能作用。方法：采用激光共聚焦显微镜、多参数流式细胞技术对手术切除的21例喉鳞状细胞癌（7例伴颈淋巴结转移,14例不伴颈淋巴结转移）组织标本中Cyclin E的表达含量进行检测分析。结果：Cyclin E在喉鳞状细胞癌、阳性淋巴结、阴性淋巴结中均有不同程度的表达,喉鳞状细胞癌伴颈淋巴结转移平均荧光强度为78.12士6.54,略高于不伴颈淋巴结转移者（74.93士8．82）（P〉0．05）;阳性淋巴结平均荧光强度为93．65士7．48,明显高于阴性淋巴结（30．65士7．48）（P〈0．01）,且高于喉鳞状细胞癌伴颈淋巴结转移和不伴颈淋巴结转移者（P〈0．05）。结论：Cyclin E的异常表达是喉癌发生、发展过程中一个重要的分子事件;Cyclin E的检测可望成为临床评估喉癌淋巴结转移的指标之一。