用99Tcm-rh-Annexin V检测放疗或化疗后肿瘤细胞凋亡

目的 验证99Tcm直接法标记的重组人膜联蛋白V(99Tcm-rh-AnnexinV)用于早期评价放化疗后肿瘤组织细胞凋亡状态的可行性.方法 将小鼠肝癌细胞(Hca-F25)接种于实验小鼠右腋下,8 d后当肿瘤生长至直径约1 cm时,将模型鼠分为A(化疗组,13只)、B(放疗组,10只)、C(荷瘤对照组,12只)3组.其中A、C组按注射示踪剂后不同时间(1、4、6 h)各分为3个亚组(A1组3只,A2组4只,A3组6只;C1组3只,C2组4只,C3组5只);A组接受环磷酰胺单次化疗(按体重150 mg/kg,腹腔内注射),C组腹腔内注射同等量生理盐水,20h后A、C组鼠尾静脉注射99Tcm-rh-Annexin V 3.7MBq(0.5μg)/只.B组按不同吸收剂量(2、5、10 Gy)分为3个亚组(B1组4只,B2组3只,B3组3只),放疗后1 h注射与A、C组相同剂量示踪剂,6 h后显像.小鼠模型显像后即刻处死,取组织(肿瘤、血、肌肉)称重后,测量放射性计数,并计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及肿瘤(T)/肌肉(M)、T/血液(B)放射性比值,应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率.结果 A、B组小鼠肿瘤组织中凋亡细胞百分率[(11.16±3.83)%、(17.40±5.20)%]均明显高于C组[(2.11±1.51)%,F=56.414、94.748,P＜0.001];A2、A3及B组肿瘤组织%ID/g均明显高于C2及C3组(F值分别为14.307、7.074、28.672,P均＜0.05),且与凋亡细胞百分率呈明显正相关(A2、A3组r=0.813,P=0.002;B组r=0.780,P=0.004),而C组肿瘤组织%ID/g与凋亡细胞百分率无相关性(r=-0.238,P=0.229).结论 接受放疗或化疗后,小鼠肝癌组织对99Tcm-rh-AnnexinV的摄取明显增加,且其摄取程度与肿瘤组织内凋亡细胞量呈明显正相关;应用99Tcm-rh-AnnexinV显像可较准确地反映治疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状态.     

99Tcm-Annexin Ⅴ衍生物的制备及其生物分布和凋亡显像

目的 探讨^99Tc^m直接标记带有10个连续组氨酸的膜联蛋白V（Annexin V）衍生物的可行性，研究其在健康小鼠体内的分布和肺癌裸鼠模型凋亡显像。方法 直接标记法制备^99Tc^m-Annexin V衍生物，并测产物放化纯、胶体含量及健康小鼠体内不同时间点（5，30min和1，2,4，6，12，24h）的生物分布，DAS2．0软件拟合计算药代动力学参数。建立荷H460非小细胞肺癌裸鼠模型，分为紫杉醇诱导化疗组（5只）和未治疗对照组（5只）。紫杉醇诱导化疗后48h，于裸鼠尾静脉注射^99Tc^mAnnexinV衍生物18．5MBq，2和4h时进行凋亡显像，勾画ROI并计算肿瘤与对侧正常组织（T／NT）放射性比值。结果放化纯达（98．01±1．67）％，3h后放化纯仍可达（95．45±1．34）％，胶体含量为（3．31±1．37）％。健康小鼠体内分布实验表明肾脏对该示踪剂摄取最高，肝、脾摄取较少。DAS2．0软件拟合得到时间-放射性曲线符合二室模型特征，分布相半衰期（T1/2α）为（21．18±5．95）min，清除相半衰期（T1/2β）为（69．32±0．10）min。荷瘤鼠显像示，给药后2h即可获得清晰的图像，紫杉醇诱导化疗组2和4h的T／NT比值为3．85±1．10和4．63±0．97，明显高于对照组（1．60±0．29和1．71±0．43，P〈0．01）。结论 该AnnexinV衍生物易于^99Tc^m直接标记，方法简便，标记物在血液中清除迅速，肝、脾摄取少，易得到高清晰图像。     

99 Tcm-HYNIC-Annexin V荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像研究

目的研究99Tcm-联肼尼克酰胺-膜联蛋白V(HYNIC-Annexin V)的制备及其在荷瘤小鼠体内生物分布特性和活体显像.方法用双功能螯合剂法,以99Tcm标记Annexin V,经高效液相色谱仪分离纯化并检测产物的标记率、放化纯及稳定性.建立荷S180肉瘤小鼠模型,于20～25g/只昆明种小白鼠右前腋皮下接种S180肉瘤细胞1周.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹膜内化疗72h后,尾静脉注射7.4 MBq(200μl)99Tcm-HYNIC-Annexin V,分别于5、30min和1、3、6 h进行显像和体内生物分布测定.实验结果应用SPSS 12.0统计软件进行分析.结果 99Tcm-HYNIC-Annexin V的标记率达95%,放化纯为99%.荷瘤小鼠注射99Tcm-HYNIC-Annexin V后6 h显像,可见肿瘤组织放射性浓聚明显异常.体内生物分布实验示,注射显像剂后6 h肿瘤组织的放射性摄取最高[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)为1.59±0.44],与其他时相比较,差异有显著性(P＜0.05).99Tcm-HYNIC-Annexin V主要浓聚于肾、肺和肝,经肾脏排泄;其在血液中清除速度快,注射后30 min,血液放射性摄取[(1.59±0.50)%ID/g]较注射后5 min时[(8.85±2.65)%ID/g]减少80%(P＜0.05).注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液(2.80±0.54).结论 99Tcm-HYNIC-Annexin V活体细胞凋亡显像可应用于荷瘤小鼠模型,其临床应用有待进一步研究.     

99Tcm-HYNIC-Annexin V动脉粥样硬化显像的实验研究

目的 探讨99Tcm-联肼尼克酰胺(HYNIC)-膜联蛋白V(Annexin V)显像检测兔动脉粥样硬化(AS)病变的价值.方法 5只雄性日本大耳白兔通过免疫损伤血管和12周高脂饮食制备成AS模型(实验组),自兔耳缘静脉按体质量注射99Tcm-HYNIC-Annexin V 37 MBq/kg,分别行活体和离体血管的99Tcm-HYNIC-Annexin V显像.5只未经特殊处理的同种白兔行活体显像作为对照.对实验组兔的主动脉分段后,测定各片段质量和放射性计数,并进行病理学和免疫组织化学检查.采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理.结果 显像剂注射后2h,实验组兔主动脉可见放射性摄取达峰值,而对照组未见明显的放射性摄取,前者靶/非靶(T/NT)比值(2.70±0.26)明显高于后者(1.30±0.13,t=1.99,P＜0.05).实验组兔的主动脉血管斑块片段放射性摄取(每克组织百分注射剂量率,%ID/g)为(0.075±0.016)%ID/g,明显高于非斑块血管片段[(0.035±0.013)%ID/g,前者是后者的(4.55±0.99)倍,t=4.77,P＜0.001];两者的凋亡细胞指数(AI)分别为(40.53±14.94)%和(11.90±7.09)%,差异具有统计学意义(t=2.54,P＜0.01).所有血管片段的放射性摄取(%ID/g值)与AI呈正相关(r=0.98,P＜0.001).结论 99Tcm-HYNIC-Annexin V可以无创性地检测AS斑块的凋亡.     

99Tcm-His10-Annexin Ⅴ探测非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨99Tcm标记带有10个连续组氨酸的膜联蛋白Ⅴ(His10-Annexin Ⅴ)探测荷非小细胞肺癌(NSCLC)裸小鼠模型化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性.方法 用99Tcm直接标记His10-Annexin Ⅴ.荷H460 NSCLC肿瘤裸小鼠模型20只,按体表面积以100 mg/m2剂量紫杉醇化疗诱导,分成未治疗(对照)、化疗诱导后24,48,72 h共4组.99Tcm-His10-Annexin Ⅴ显像探测化疗前后肿瘤组织细胞凋亡,计算肿瘤/对侧正常肌肉组织放射性比值(T/NT),测定每克组织百分注射剂量率(%ID/g).以99Tcm-IgG显像为对照,确定肿瘤的非特异性摄取.用流式细胞术(FCM)测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3),光学显微镜HE及原位末端标记法(TUNEL)染色测定凋亡指数.采用SPSS 12.0软件进行统计学处理,运用单因素方差分析和直线相关分析(Pearson).结果 99Tcm-His10-Annexin V放化纯为(98.01±1.67)%.注射99Tcm-His10-Annexin V后2 h即可得到清晰图像,化疗诱导组肿瘤部位可见明显的放射性浓聚,化疗后24,48,72 h组的T/NT值分别为2.63±0.76,3.41±0.90,3.85±0.62;对照组T/NT值为1.42±0.19,F值分别为12.064,23.322,70.177,P均<0.01.未治疗组肿瘤仅有少量放射性摄取,为(1.09±0.18)%ID/g,化疗后肿瘤摄取明显增加,24,48,72 h肿瘤摄取分别为(2.55±0.73)、(3.60±1.09)、(3.73±0.97)%ID/g,明显高于未治疗组(F值分别为18.733,20.624,35.626,P均<0.01).99Tcm-IgG显像化疗组及对照组肿瘤均未见明显放射性浓聚.未治疗组活化Caspase-3为(3.70±0.74)%,化疗后24,48,72 h分别为(23.46±2.23)%、(62.85±6.13)%、(70.44±6.09)%,3个化疗诱导组和未治疗组相比差异均有统计学意义(F值分别为354.610,459.438,591.052,P均<0.01).光学显微镜HE及TUNEL染色法发现,未治疗组细胞凋亡指数为(3.31±0.61)%,化疗后24,48,72 h细胞凋亡指数分别为(32.90±6.64)%、<70.42±7.54)%、(83.23±9.71)%,化疗诱导组与对照组细胞凋亡指数差异均有统计学意义(F值分别为98.627,393.215,337.386,P均<0.01).T/NT值、肿瘤组织放射性摄取与活化Caspase-3及细胞凋亡指数均有很好的相关性(r=0.847,0.833,0.774,0.850,P均<0.01).结论 99Tcm-His10-Annexin V显像可早期探测NSCLC化疗后细胞凋亡,进而早期预测和评价肿瘤治疗疗效.     

99Tcm-DTPA-DG显像对乳腺癌荷瘤裸鼠化疗疗效的评价

目的 探讨99Tcm-DTPA-脱氧葡萄糖(DG)对乳腺癌荷瘤裸鼠化疗疗效的评价.方法 建立乳腺癌荷瘤裸鼠模型.取裸鼠25只,体质量20～25 g,分为5组,接种乳腺癌MCF-7细胞9 d后进行化疗.对照组:注射0.1 ml生理盐水;联合化疗1组:分别按体质量注射紫杉醇11 mg/kg和阿霉素4.7 mg/kg;联合化疗2组:分别按体质量注射紫杉醇5 mg/kg和阿霉素2.3 mg/kg;顺铂1组:按体质量注射顺铂8 mg/kg;顺铂2组:按体质量注射顺铂4 mg/kg.裸鼠化疗后分别于即刻和第7,14,21及28天注射99Tcm-DTPA-DG 3.7 MBq/只,0.5 h后显像,勾画感兴趣区(ROI),计算肿瘤/健侧对应部位放射性(T/NT)比值,并测量肿瘤体积.第28天完成显像后,处死裸鼠,测量肿瘤/血液及肿瘤/肌肉放射性比值,计算抑瘤率.结果 肿瘤组织吸收99Tcm-DTPA-DG较多,肿瘤/肌肉放射性比值对照组为5.65,高于联合化疗1组(0.98,t=8.735,P＜0.01)、联合化疗2组(1.13,t=4.826,P＜0.01)和顺铂1组(0.84,t=3.198,P＜0.05).肿瘤/血液放射性比值对照组为3.1,高于联合化疗1组(0.83,t=7.652,P＜0.01)、联合化疗2组(1.29,t=3.976,P＜0.05)和顺铂1组(0.96,t=3.945,P＜0.05);顺铂2组因不完全缓解,肿瘤/血液放射性比值为2.66,与对照组差异无统计学意义(t=2.496,P＞0.05).99Tcm-DTPA-DG可使肿瘤组织清晰显像,联合化疗1组肿瘤体积400.0 mm3,与对照组(1132.8 mm3)差异有统计学意义(t=3.952,P＜0.01);联合化疗2组肿瘤体积633.9 mm3(t=4.592,P＜0.05),顺铂1组肿瘤体积699.4 mm3(t=4.837,P＜0.05),这2组与对照组差异有统计学意义.除顺铂2组外,余各化疗组与对照组间T/NT比值差异有统计学意义(F=1018.165,P＜0.01).结论 化疗效果好的肿瘤,99Tcm-DTPA-DG显像示肿瘤体积较小,瘤体内放射性分布较少;而化疗效果差的肿瘤体积逐渐增大,瘤体内放射性分布较多.99Tcm-DTPA-DG显像可用于指导荷瘤裸鼠的化疗.     

99mTc标记annexin Ⅴ类显像剂细胞凋亡显像在肿瘤研究中的应用及进展

细胞凋亡在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,成功的肿瘤治疗将在肿瘤组织内诱导肿瘤细胞产生凋亡.99mTc标记annexin Ⅴ类显像剂凋亡显像能够在体内早期、无创伤性地检测到治疗所引起的细胞凋亡,这将有助于早期评判肿瘤患者的治疗效果及预后.     

Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记及在肝癌细胞中的表达

目的 :研究放射性核素99mTc标记Survivin反义寡核苷酸 (ASON)的方法及在肝癌细胞中的动力学 ,探讨用于肝癌诊断的可能性。方法 :用DNA合成仪合成 18碱基单链SurvivinASON ,在 5′末端经氨基修饰后 ,用S acetyl NHS MAG3作螯合剂 ,进行99mTc标记SurvivinASON ,并对其标记率、放化纯、比活度、稳定性、细胞摄取率和细胞清除率进行了研究。结果 :99mTc MAG3 ASON的标记率为 65 .2 2 %,放化纯为 94%,比活度为 1190kBq/μg。室温条件下与生理盐水温育 4h后 ,其放化纯为 92 %。 3 7℃ 5 %CO2 条件下与新鲜人血清温育 4h ,未见明显的血清蛋白结合作用。肝癌细胞摄取率 10h达 12 .73 %,细胞滞留率 8h为 5 4.2 2 %。结论 :采用S acetyl NHS MAG3 作螯合剂标记Survivin ASON的方法可行 ,可获得较好的标记效果 ,99mTc survivin ASON在肝癌细胞中有较理想的摄取率 ,可进一步研究用于肿瘤基因显像诊断的可能性     

99Tcm-MNLS乏氧显像评估肿瘤放疗后乏氧状态变化的实验研究

目的 探讨99Tcm-2-(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)磷酸乙酯(MNLS,甲硝唑磷酸酯)乏氧显像监测荷瘤小鼠肿瘤放疗后乏氧状态变化的可行性.方法 (1)建立荷H22肝癌细胞小鼠模型,待肿瘤直径约1 cm时,注射7.4 MBq 99Tcm-MNLS后进行显像,观察注射显像剂后30 min,1、2、3、4、6和8h(各时间组小鼠均为6只)乏氧显像情况并确定最佳显像时间.显像后处死荷瘤小鼠,计算各时间点各组织％ ID/g.(2)放疗组及其对照组荷H22肝癌细胞小鼠行即刻、24 h、48 h 99Tcm-MNLS显像(各组小鼠均为6只,放疗组小鼠肿瘤部位给予25 Gy放射治疗,对照组不予放疗),应用ROI技术测定T/NT(对侧部位),肿瘤标本行HIF-1α免疫组织化学染色,探讨放疗组及对照组T/NT与HIF-1α表达量的相关性.(3)应用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析、最小显著差异t检验、两样本t检验及Spearman相关分析.结果 (1)99Tcm-MNLS在肿瘤组织摄取早,2h显像最佳,99Tcm-MNLS主要通过肾脏排泄.(2)放疗后24 h显像组T/NT(2.65±0.27)、HIF-1α表达量[(50.62±3.78)％]低于即刻显像组[3.35±0.19、(85.32±0.94)％,t=5.640、6.701,均P＜0.05],高于48 h显像组[2.23±0.52、(21.69±0.75)％,t=7.674、4.911,均P＜0.05];放疗后即刻显像组T/NT比值、HIF-1α表达量均较相应对照组[2.74±0.29、(28.26±1.70)％]增高(t=4.235、3.473,均P＜0.05);放疗后24h显像组T/NT比值、HIF-1α表达量较相应对照组[2.98±0.16、(58.45±0.98)％]差异均无统计学意义(t=0.525、2.043,均P＞0.05);放疗后48 h显像组T/NT比值、HIF-1α表达量均较相应对照组[3.15±0.88、(67.64±3.55)％]降低(t=7.902、3.258,均P＜0.05).放疗组不同时间点各显像组T/NT与HIF-1α表达量呈正相关(rs=0.793,P＜0.05),对照组不同时间点各显像组T/NT与HIF-1α表达量呈正相关(rs=0.756,P＜0.05).结论 99Tcm-MNLS肿瘤乏氧显像可以评估荷瘤小鼠肿瘤放疗后乏氧状态变化.     

99Tcm-3P-RGD2用于肺癌整合素αv β3表达水平检测的实验研究

目的 采用99Tcm-3聚乙二醇4-RGD2(3P-RGD2)评估小细胞肺癌和肺腺癌细胞荷瘤鼠动物模型中整合素αvβ3表达水平.方法 按试剂盒说明书制备99Tcm-3P-RGD2.选取H446人小细胞肺癌细胞进行受体竞争抑制实验,检测3P-RGD2与整合素αvβ3的特异亲和性.通过细胞摄取实验检测H446和A549人肺腺癌细胞对99Tcm-3P-RGD2的摄取情况,以流式细胞术和免疫荧光染色测定2种细胞中整合素αvβ3的表达.观察99Tcm-3P-RGD2在H446和A549肺癌荷裸鼠模型(各6只)的microSPECT/CT显像情况.显像后断颈处死裸鼠,取部分肿瘤组织制备单细胞悬液,以流式细胞术检测细胞整合素αvβ3表达;部分组织制成切片,以免疫组织化学法检测肿瘤组织整合素αvβ3的表达.采用配对t检验对实验数据进行统计学分析.结果 99Tcm-3P-RGD2标记率为(97.0±2.0)％,4h时后放化纯仍高达95％.3P-RGD2与整合素αvβ3特异性结合的半数抑制浓度(IC5o)为8.759 nmol/L.H446细胞对99Tcm-3P-RGD2的亲和性高于A549细胞,摄取率均于120 min达峰值,分别为(5.75±0.50)％和(3.35±0.28)％(t=9.324,P＜0.05).H446和A549肺癌细胞均表达整合素αvβ3,且H446高于A549[(18.01±2.83)％和(5.77±0.64)％,t=7.488,P＜0.05].免疫荧光染色示H446细胞整合素信号明显高于A549细胞.MicroSPECT/CT显像示注射99Tcm-3P-RGD2后3 h T/NT达最大值,H446荷瘤鼠T/NT比值为6.39±1.29,高于A549荷瘤鼠(3.62±0.33,t=6.869,P＜0.05).H446和A549肿瘤组织经流式细胞术检测,整合素αvβ3表达水平分别为(22.89±3.63)％和(10.23±1.94)％(t=13.967,P＜0.05).免疫组织化学检测结果示H446和A549肿瘤组织和新生血管内皮细胞均有整合素αvβ3表达.结论 99Tcm-3P-RGD2可用于整合素αvβ3阳性肺癌的显像,并可无创评估不同肺癌组织整合素αvβ3的表达水平.     

99Tcm标记亲肿瘤三肽的实验研究

目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸(RES)的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度(100 ℃或室温)条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 (1)酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯最高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.(2)注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性(0.36%ID/g)降幅明显,仅相当于0.5 h(2.35%ID/g)的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.(3)荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.(4)兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.     

^99Tc^m标记亲肿瘤三肽的实验研究

目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸（RES）的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度（100 ℃或室温）条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 （1）酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯最高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.（2）注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性（0.36%ID/g）降幅明显,仅相当于0.5 h（2.35%ID/g）的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.（3）荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.（4）兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.     

99Tcm-MIBI显像用于分化型甲状腺癌复发与P-gp表达的关系研究

目的 探讨分化型甲状腺癌(DTC)手术及131I清除剩余甲状腺组织(清甲)后复发时99Tcm-甲氧基异丁基异腈(MIBI)显像的特点及耐药蛋白(P-糖蛋白,P-gp)的表达.方法 经手术病理检查确诊为DTC、清甲治疗后患者173例,术前均行99Tcm-MIBI双时相甲状腺局部静态显像,图像由3位有经验的核医学科医师集体阅片,计算99Tcm-IBI显像早期(10 min)、延迟(120 min)肿瘤/正常组织放射性(T/NT)比值及洗脱率,术后4-6周行清甲.3年内复发9例为复发组,单纯随机抽样法选择未复发病例9例为无复发组.选取术后癌组织保存标本,采用免疫组织化学法及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测P-gP的表达.统计学处理采用SPSS 10.0软件,行t检验及Spearman秩相关分析.结果 DTC复发组早期、延迟相T/NT比值及洗脱率分别为1.18±0.28,1.16±0.24和(17.00±2.91)%,无复发组分别为1.54±0.26,1.65±0.26和(7.130±3.21)%,差异均有统计学意义(t=2.835,4.152,6.924,P均<0.01);DTC组织中P-gp的阳性细胞数比率复发组为(43.00±8.21)%,明显高于无复发组的(26.00±6.91)%(t=4.753,P<0.01),不同病理类型间阳性细胞数比率差异无统计学意义(t=0.176,P>0.05);DTC组织中P-gp的基因表达量复发组为0.60±0.12,明显高于无复发组的0.31±0.19(t=3.871,P<0.01),不同病理类型DTC的P-gp基因表达量差异无统计学意义(t=0.337,P>0.05).免疫组织化学及RT-PCR结果均提示:DTC患者癌组织中的P-gp表达与99Tcm-MIBI显像洗脱率之间均存在直线正相关(r=0.84和0.79,P均<0.05).结论 99Tm-MIBI显像早期、延迟T/NT比值及洗脱率与DTC清甲后复发关系密切,DTC原发灶清除99Tcm-MIBI的能力可在体反映P-gp的活性,原发灶99Tcm-MIBI的洗脱率可以预测其术后复发.     

99Tcm标记MDM2反义寡核苷酸的实验研究

目的研究^99Tc^m标记小鼠双微体扩增基因（MDM2）mRNA的反义寡核苷酸（ASON）显像诊断乳腺癌的价值。方法以联肼尼克酰胺（HYNIC）为螯合物对ASON、错义寡核苷酸（ASONM）进行^99Tc^m标记，检测标记率、放化纯及其与互补正义链（SON）的结合能力。阳离子脂质体（1ipofectamine 2000）包裹反义探针及错义探针转染人乳腺癌细胞（MCF-7），通过RT-PCR和West-em．blotting法观察乳腺癌细胞MDM2mRNA和蛋白表达。建立荷人乳腺癌MCF-7裸鼠肿瘤模型，分别进行体内分布和肿瘤显像研究。结果ASON的标记率为（57．24-2．98）％（n=5），ASONM的标记率为（56．3±3．01）％（n=5），经纯化后放化纯可达95％以上，且仍保持与互补链的结合能力。不同浓度反义探针作用于乳腺癌细胞24h后，各浓度组MDM2mRNA和蛋白的表达量差异均有统计学意义（P〈0．01），而错义探针对MDM2mRNA和蛋白的表达没有明显影响。体内分布显示，反义及错义探针主要经肝、肾排泄，注射反义探针后，肿瘤／血液和肿瘤／骨骼肌放射性比值随时间的推移而增加。注射反义探针后1h肿瘤显影，肿瘤／对侧肢体放射性比值随时间推移而增加，各时间点错义探针在肿瘤内的聚集量均明显少于反义探针，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论^99Tc^m标记的MDM2ASON可在荷人乳腺癌MCF-7裸鼠肿瘤模型的肿瘤组织中特异性聚集，为乳腺癌的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达和神经细胞凋亡相关性研究

目的　研究大鼠脊髓损伤后半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)的表达变化 ,探讨与神经细胞凋亡发生的关系。方法　建立大鼠脊髓 (T8、T9)急性压迫损伤模型 ,损伤后 4、8小时和 1、2、3、7、1 4、2 1天免疫组化、半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR) ,测定各时间点Caspase 3的表达变化 ;原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸 (dUTP)标记法 (TUNEL法 )检测神经细胞的凋亡水平。结果　免疫组化结果显示正常大鼠脊髓神经细胞中很少有Caspase 3表达 (2 .1± 0 .5 ) ;脊髓损伤后 8小时 ,Caspase 3表达阳性的神经细胞明显增加 ,3天达到高峰 (1 89± 1 2 .7,P <0 .0 1 ) ,Caspase 3表达的阳性细胞与凋亡细胞出现的时限相似 ,呈正相关 (r=0 .94 1 )。RT PCR检测到Caspase 3mRNA 4小时开始增高 ,4 8小时达到高峰 (0 .6 34±0 .0 2 8) ,7天后恢复正常 ,早于凋亡出现的时期 ,与神经细胞凋亡水平呈正相关 (r =0 .6 2 2 )。结论　脊髓损伤后Caspase 3表达增强 ,Caspase 3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节     

肿瘤组织99Tcm-EC-甲硝唑显像与乏氧诱导因子-1α表达水平的相关性研究

目的探讨肿瘤组织^99Tc^m-双半胱氨酸（EC）-甲硝唑SPECT显像与乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达水平的相关性。方法建立昆明小鼠S180肉瘤肿瘤模型12个，对其进行^99Tc^m-EC-甲硝唑SPECT乏氧显像，测定其肿瘤／对侧肌肉放射性比值（T／M）。显像结束后即刻断颈处死小鼠，取出瘤体，用免疫组织化学法分别测定肿瘤组织HIF-1α及其调控的下游基因血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。结果12只荷S180肉瘤昆明小鼠注射^99Tc^m-EC-甲硝唑后3hSPECT显像的T／M为1．93～4．46（中位值3．13）。免疫组织化学结果显示表达HIF-1α的细胞占31．2％～60．8％（中位值50．4％），与T／M呈直线相关（t=2．732，r=0．654，P=0．021）；表达VEGF的细胞占33．8％．57．5％（中位值53．1％），与HIF-1α表达细胞亦呈直线相关（t=3．011，r=0．690，P=0．0131）。结论肿瘤组织^99Tc^m-EC-甲硝唑SPECT显像与其HIF-1α的表达水平呈线性相关，两者结合能较可靠地反映肿瘤组织的乏氧状况。     

99mTc(Ⅴ)-DMSA与99mTc-MDP骨显像诊断骨转移瘤的对比研究

目的评价９９ｍＴｃ（Ⅴ）二巯基丁二酸钠（ＤＭＳＡ）显像在骨转移瘤诊断中的意义。方法对１０６例疑骨转移瘤患者进行了９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ全身显像，并与９９ｍＴｃ羟基亚甲基二膦酸（ＭＤＰ）全身骨显像及其它检查作对比。结果１０６例患者中７０例证实有骨转移，９９ｍＴｃＭＤＰ骨显像均示有异常放射性浓聚，９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ显像６８例显示了在某些相同部位与９９ｍＴｃＭＤＰ显像有相似的放射性浓聚，２例显像呈阴性。７０例骨转移瘤患者中，９９ｍＴｃＭＤＰ显像检查出２３６个病灶，９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ显示了其中１７５个病灶。９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ诊断骨转移瘤的灵敏度为７４２％，特异性为１００％。２４例骨良性病变患者，９９ｍＴｃＭＤＰ骨显像示轻度异常放射性浓聚，而９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ显像却未见异常放射性浓聚。１２例无骨转移者，９９ｍＴｃＭＤＰ与９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ显像均未见异常。结论９９ｍＴｃ（Ⅴ）ＤＭＳＡ诊断骨转移瘤的特异性比９９ｍＴｃＭＤＰ骨显像高，在骨良恶性鉴别诊断中具有重要的临床价值     

TNF-α、Caspase-3在大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡中相关性研究

目的探讨大鼠脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在神经细胞凋亡中的动态表达,验证TNF-α和Caspase-3之间的相关性。方法将70只成年健康SD大鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化;免疫组化染色测定各时间点TNF-α、Caspase-3的表达变化;原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(d UTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平;通过Western blot法检测大鼠脊髓中TNF-α、Caspase-3蛋白的表达水平。结果正常大鼠脊髓神经细胞TNF-α、Caspase-3的阳性细胞表达率较少;脊髓损伤后8 h,脊髓神经细胞中TNF-α、Caspase-3的阳性表达率明显增多,分别为(24.13%±3.02%)及(40.79%±3.43%),1 d达高峰,分别为(51.36%±4.26%)及(70.78%±5.97%),3 d表达减弱,分别为(20.24%±2.93%)及(37.71%±2.88%),与正常大鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01)。TUNEL阳性细胞率在大鼠脊髓损伤后8 h明显增多(39.81%±2.27%),1 d达高峰(71.58%±3.87%),3 d表达减弱(40.55%±2.36%),与正常大鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。大鼠脊髓损伤后1 d,与损伤组比较,抑制剂组TNF-α、Caspase-3、TUNEL阳性细胞率明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。造模后7 d,与空白对照组比较,损伤组TNF-α、Caspase-3蛋白的表达上升;与损伤组比较,抑制剂组TNF-α、Caspase-3蛋白的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脊髓损伤后TNF-α、Caspase-3的表达增强,TNF-α抑制剂使Caspase-3表达减弱,且其参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节。     

肿瘤患者化疗后认知功能损害的影像学研究进展

非中枢系统的肿瘤患者经化疗等相关治疗后,生存期不断延长,但随之出现的不良反应,即化疗导致的认知功能损害（CICI）逐渐引起重视。CICI的患者的学习能力、记忆力、注意力、执行能力和信息处理速度等均下降,严重影响其生活质量。近年来,有很多研究报道了CICI的神经影像学改变,包括结构和功能MRI显示的以额叶、颞叶、顶叶为主的脑白质的减少,以及18F-氟脱氧葡萄糖（FDG） PET/CT显示的以额叶、部分边缘系统为主的脑葡萄糖代谢水平降低。笔者综述了肿瘤患者CICI的神经影像学研究进展,旨在解释CICI的潜在机制及可能的防治措施。     

脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的研究脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内的分布及反义显像诊断结肠癌的可能性,为反义显像和反义治疗的临床应用提供实验依据.方法制作荷瘤裸鼠模型,每只小鼠尾静脉注射约0.30MBq脂质体包裹的99Tcm-反义寡聚核苷酸,于不同时间眼眶静脉采血后处死小鼠,测定不同组织中及标准源的放射性计数.荷瘤裸鼠尾静脉注入脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸(30～90mg),于注射后不同时间显像,观察其在肿瘤组织的浓聚情况,并以脂质体介导的99Tcm标记的正义和无义寡聚核苷酸为对照.结果胃、网状内皮系统和肿瘤组织放射性浓聚较高,其次为心和血,余组织中放射性分布较少.肿瘤组织中放射性在2h时达到高峰,以后迅速降低.在2h时,脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸能清晰显示肿瘤部位,而对照组则不能.结论脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸可用于结肠癌的诊断,但临床应用前还需进行大量的研究.