VEGFR-3抗体对人喉鳞癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的 研究血管内皮生长因子受体3（vascular endothelial growth factor receptor3，VEGFR-3）抗体对人喉鳞癌裸鼠移植瘤模型生长的抑制作用。方法 利用人喉鳞癌细胞株Hep-2细胞建立裸鼠喉癌模型。将24只裸鼠模型随机分成2组：治疗组和空白对照组，每组12只，分别腹腔内注射VEGFR-3抗体和生理盐水，观察肿瘤体积及重量变化，进行微淋巴管计数，绘制生长曲线并计算抑瘤率。结果VEGFR-3抗体组移植瘤体积和重量小于生理盐水组，有统计学意义（t体积=56.90，P〈0.05；t重量=11.64，P〈0.05）。EGFR-3抗体抑瘤率为48.21%。但组间微淋巴管计数无差异（t=1.48，P〉0.05）。结论 VEGFR-3抗体可以抑制裸鼠人喉鳞癌细胞移植瘤的生长，其作用机制可能与VEGFC和VEGFR-3的抑制有关。     

人肝癌细胞原位种植裸鼠后VEGF的表达

目的;通过检测裸鼠肝癌模型中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,观察血管造影的表现,探索VEGF与肝癌发生、发展之间的关系。方法：将裸鼠25只平均分成5组,1组为对照外,其余20只原位种植人肝癌细胞,分别于1,2,3,4wk行动脉造影及用免疫组化的方法检测VEGF的表达。结果：VEGF的表达与肝癌的发生、发展成正相关,术后1wk组VEGF表达成弱阳性,术后2wk组VEGF表达成阳性,术后3wk组及术后4wk组VEGF表达强阳性。血管造影显示术后两周组肝脏血管开始有增生及扭曲,3wk及4wk组血管改变更加明显。结论：WEGF与肿瘤的生长、发展有密切的关系,血管造影显示为多血供的肿瘤VEGF表达较强。     

黄荆子乙酸乙酯提取物对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:采用人肝癌Hep G2裸鼠模型评估EVn-50在体治疗肝癌的有效性;免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、CD31蛋白表达。结果:EVn-50显著抑制人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性;5,10,20 mg/kg的EVn-50对移植瘤的瘤重抑制率分别为55%,62%,69%。免疫组化染色结果显示,EVn-50(5,10,20 mg/kg)与生理盐水组比较,PCNA、VEGF、CD31的表达下调,亦呈剂量依赖性。结论:EVn-50具有抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长作用,其作用机制可能与其下调PCNA、VEGF、CD31的表达有关。     

丹参多酚酸盐对裸鼠HCC 系人肝癌细胞株SMMC-7721 移植瘤的影响

目的：观察丹参多酚酸盐对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤的影响,探讨其对肝癌肿瘤的作用 机制。方法：建立裸鼠肝癌肿瘤模型,将36只裸鼠(雌雄各半)随机分成6组,每组6只,分别为模型组、阴性对照组 (生理盐水组)、阳性对照组(顺铂组)、3种不同质量浓度(10,20,50 mg/kg)的丹参多酚酸盐给药组。在裸鼠长出肉眼 可见瘤体后注射丹参多酚酸盐治疗16 d收集皮下肿瘤标本。肿瘤标本进行HE检测观察组织形态变化和免疫组织化学 检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肿瘤增殖抗原Ki67的表达情况,以验证是否抑制肿瘤 细胞生长、增殖。结果：各用药组的肿瘤生长受到抑制,肿瘤组织细胞形态较之模型组和阴性对照组呈现皱缩、破 碎、 不规则排列;且随着给药剂量的增大形态学改变更明显。丹参多酚酸盐给药组和顺铂组的VEGF和Ki67表达量均 较模型组和阴性对照组低(P<0.05)。结论：丹参多酚酸盐能抑制裸鼠HCC系人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤的生长, 其机制可能与下调Ki67和VEGF有关。     

持续小剂量化疗对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤VEGF-C及其受体Flt-4表达的影响

目的探讨持续小剂量(LDM)化疗对肺腺癌A549细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)/fms-样酪氨酸激酶-4(Flt-4)轴的影响及其机制。方法将人肺腺癌A549细胞接种于18只裸鼠皮下,建立荷瘤动物模型,以随机数字表法将其分为最大耐受剂量(MTD)组(CTX 100mg.kg-1腹腔注射,隔日1次,连续3次;n=6)、LDM组(CTX 20mg.kg-1.d-1腹腔注射,n=6)和对照组(0.1mL生理盐水腹腔注射,1次/d;n=6)。治疗21d后脱颈处死裸鼠,取皮下肿瘤组织,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肿瘤组织中VEGF-C、Flt-4的蛋白及mRNA表达。结果 LDM组裸鼠肿瘤组织VEGF-C、Flt-4蛋白及mRNA的表达水平均显著低于MTD组和对照组(P<0.05)。结论 LDM化疗可能通过降低肿瘤组织VEGF-C、Flt-4的表达而减少肺腺癌A549荷瘤裸鼠肿瘤的淋巴转移。     

重组人生长激素对裸鼠胃癌移植瘤生长及血清VEGF浓度的影响

目的:研究重组人生长激素(rhGH)对裸鼠人胃癌移植瘤生长及血清VEGF水平的影响。方法:取60只雄性裸鼠进行实验,通过免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株SGC-7901及MKN-45生长激素受体(GHR)的表达状况,将GHR阳性表达的胃癌细胞株SGC-7901及GHR阴性表达的胃癌细胞株MKN-45分别接种于4只裸鼠皮下,制作裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,3周后取出移植瘤制成组织匀浆,接种于剩余52只裸鼠。依据接种细胞种类不同分为移植瘤GHR阳性表达和GHR阴性表达裸鼠,不同GHR表达的裸鼠进一步分为对照组(C组:予0.9%NaCl,0.2 ml.d-1)、rhGH低剂量组(L组:予rhGH0.5 U.kg-1.d-1)、rhGH高剂量组(H组:予rhGH2.5 U.kg-1.d-1),连续给药14 d,观察并记录各组裸鼠体重和肿瘤体积变化,酶联免疫吸附法测定血清VEGF含量。结果:SGC-7901为GHR阳性表达的人胃癌细胞株,MKN-45为GHR阴性表达的人胃癌细胞株。对于接种GHR阳性表达的人胃癌细胞株的裸鼠,rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大(P<0.05),且H组促增长效应显著(P<0.05),3组...     

人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤模型的建立及其VEGF的表达

目的 建立人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤动物模型,研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在人浸润性膀胱癌的表达水平,探讨应用抗－ＶＥＧＦ抗体抑制血管生成治疗膀胱癌的应用前景。方法 裸鼠皮下接种人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞建立动物模型;应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学技术检测人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞及其裸鼠移植瘤组织血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达。结果 裸鼠皮下接种Ｔ２４细胞的成瘤率为９４．４％;Ｔ２４细胞及其移植瘤组织     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜VEGF和VEGFR蛋白表达的影响

目的 观察双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VFGFR)蛋白表达的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组30只.采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)法建立DR大鼠模型,再随机分为模型对照组、双丹明目组、阳性对照组,每组10只.各组大鼠分别连续给药8周后用蛋白质印迹法(Western Blot)检测视网膜组织VEGF和VEGFR表达.结果 (1)与正常组相比,模型对照组VEGF和VEGFR蛋白表达量升高(P＜0.01);(2)与模型对照组相比,双丹明目组和阳性对照组VEGF和VEGFR蛋白表达量降低(P＜0.01);(3)双丹明目组和阳性对照组相比,VEGF和VEGFR蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 双丹明目胶囊能够降低糖尿病视网膜病变大鼠视网膜VEGF蛋白和VEGFR蛋白的表达,从而可能抑制视网膜血管新生.     

Extract from Phyllanthus urinaria L. Inhibits Hepatitis B Virus Replication and Expression in Hepatitis B Virus Transfection Model in Vitro

Objective: To explore the effects of the extract from Phyllanthus urinaria L. on hepatitis B virus (HBV) replication and expression in HBV transient transfection model in vitro. Methods: The eukaryotic expression plasmid pHBV1.1, which contains 1.1-fold-overlength genome of HBV, was transfected into the human hepatoma cell line, HepG2, to establish and assess the HBV transient transfection model. The extract from Phyllanthus urinaria L. was prepared in different concentrations and methyl thiazolyl tetrazolium was used to detect the maximum nontoxic concentration of the drug. The extract from Phyllanthus urinaria L. were added into the transfected cell, at the concentrations of 0.8, 0.2 and 0.05 g/L, respectively. Four days after drug application, enzyme-linked immuno sorbent assay was used to detect the concentration of HBsAg in the supernatants, Southern blot was applied to analyze HBV DNA level, and Western blot was used to detect the expression of HBcAg in cells. Results: After the transfection of plasmid pHBV1.1 into HepG2 cells, the concentration of HBsAg in supernatants was increased obviously as compared with that of the normal cells (P<0.05), and all expected HBV replicative intermediates were confirmed by Southern blot analysis, which ensured the successful establishment of the HBV transient transfection model. After the application of drugs at the concentrations of 0.8 and 0.2 g/L, the level of HBsAg was obviously decreased in the supernatants, as compared with that of the virus group (P<0.05); Southern blot showed that the level of HBV rc DNA, ds DNA, ss DNA was obviously reduced compared with that of the virus group (P<0.01); Western blot revealed that the expression of HBcAg in the drug group was obviously inhibited, as compared with that of the virus group (P<0.01). Conclusions: The extract from Phyllanthus urinaria L. obviously inhibited replication and expression of HBV in HBV transfected cell lines in vitro, thus exerting distinctive anti-HBV effects.     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠肺气肿模型中的表达

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体 2 (VEGFR 2 )在大鼠肺气肿模型中的表达及意义。方法　经气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠肺气肿模型。免疫组化法检测VEGF在肺组织的表达部位 ,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中VEGF的含量 ,Westernblot检测VEGFR 2蛋白的表达。结果　VEGF在肺泡上皮细胞、支气管粘膜上皮细胞及血管内皮细胞表达 ,模型组BALF的VEGF含量 (110 2± 4 6 0 .1)pg/mL较对照组 (2 0 17± 84 0 .6 ) pg/mL明显降低 (P <0 .0 5 ) ;模型组VEGFR 2蛋白的表达低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF及VEGFR 2的减少可能参与了肺气肿的发生     

叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用

[目的]研究叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用。[方法]观察药物对三种大小鼠动物肝炎模型，体外抗谷丙转氨酶及对肝药酶的影响。[结果]表明叶下珠醇提物能明显对抗四氯化碳(CCL4)、硫代乙酰胺(TAA)和D-氨基半乳糖(D-GN)引起的小鼠或大鼠谷丙转氨酶(ALT)升高；对正常小鼠的ALT水平，无论体内或体外试验均无影响；能显缩短戊巴比妥钠引起的小鼠睡眠时间。[结论]叶下珠醇提物对肝损伤的保护作用机理是多方面的；叶下珠醇提物有诱导肝药酶活性的能力，这可能是叶下珠保肝作用的重要原因。     

非霍奇金淋巴瘤VEGF、VEGFR表达和姜黄素作用的实验研究

目的探讨淋巴瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)的表达及姜黄素对其表达的影响。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常人和非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者血浆及人B细胞淋巴瘤细胞系Raji经不同浓度姜黄素作用前、后培养上清中VEGF、VEGFR的含量。结果NHL患者(n=40)血浆VEGF、VEGFR浓度分别为(670.60±113.84)、(300.56±37.23)ng/L,显著高于正常对照组的(569.38±49.13)、(224.33±31.17)ng/L(P<0.05或P<0.01);22例高中危、高危NHL患者的血浆VEGF、VEGFR水平为(682.63±92.42)、(311.20±29.65)ng/L,18例低危、低中危NHL患者的血浆VEGF、VEGFR水平为(622.50±107.00)、(238.42±13.78)ng/L,两者比较差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01);Raji细胞经浓度为1.56、3.125、6.25、12.5μmol/L的姜黄素处理24h后,细胞培养上清中VEGF、VEGFR的含量同空白对照组相比均有降低(均P<0.05),不同药物浓度之间比较,差异具有显著性意义。结论VEGF及其受体在淋巴瘤细胞中存在高表达,姜黄素可能通过抑制淋巴瘤细胞VEGF及其受体的表达,阻断VEGF自分泌环而发挥抗肿瘤作用。     

人VEGF在NIH3T3细胞中的基因转移和表达

目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中。G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的pcDNA3.1(+)阳性细胞克隆和未转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测。用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性。结果Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符。细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性。结论人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株。     

trkA基因表达在神经母细胞瘤合成及分泌血管内皮生长因子中作用的研究

目的 :观察trkA基因在神经母细胞瘤 (NB)中表达对NB合成、分泌血管内皮生长因子 (VEGF)的影响。方法 :采用脂质体转染法建立trkA基因高表达的NB细胞系 ;RT PCR、免疫细胞化学及ELISA技术检测转染前后细胞中VEGF量的变化。结果 :trkA转染后细胞中的VEGFmRNA及VEGF蛋白表达较亲代SY5Y细胞均明显下降 (P均 <0 0 1) ;细胞培养上清液中的VEGF含量也明显下降 (P <0 0 1)。结论 :trkA基因的高表达有效抑制NB细胞合成、分泌VEGF ,为抗血管治疗NB提供新思路     

反义血管内皮细胞生长因子抑制裸鼠异体接种前列腺癌的生长和转移

目的用反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)转染前列腺癌LNCaPC42细胞,从体外和体内研究抑制细胞内VEGF的表达后对肿瘤生长、侵袭等生物学行为的影响。方法用3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑盐(MTT)方法测定体外反义VEGF转染的肿瘤细胞增殖。在体内分析,反义VEGF转染的肿瘤细胞皮下注射入裸鼠。根据公式体积=0.52×(宽)2×(长),计算肿瘤体积[13],以此绘制肿瘤生长曲线。用小鼠抗人CD31单克隆抗体经免疫组化检测肿瘤微血管密度。苏木精伊红(HE)染色检测肺转移结节。结果体外研究显示,反义VEGF显著抑制前列腺癌LNCaPC42细胞的增殖;与对照细胞比较发现,反义VEGF转染的细胞在裸鼠皮下致瘤能力减弱,肿瘤生长明显减慢;肿瘤微血管密度明显降低[(31±3.25):(14.25±3.40),P<0.05],且肿瘤肺转移也显著被抑制。结论体内外研究表明,反义VEGF通过抗肿瘤新生血管形成作用可显著抑制前列腺癌的生长和转移。结果提示抑制VEGF表达对前列腺癌治疗具有潜在价值。     

血管内皮生长因子基因在正常造血细胞中的表达

目的　探讨正常造血细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)基因的表达水平。方法　TRIzol一步法提取正常外周血和非恶性骨髓标本单个核细胞及正常血小板的总RNA ;以 β2 -微球蛋白基因为内对照 ,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)半定量分析VEGF基因的表达。结果　 2 2份外周血标本有 18份表达VEGF基因 ,表达率为81.8% ,其中 8份为中度表达 ;18份骨髓标本VEGF基因的表达率高达 94.4% (17/ 18) ,其中高度表达和中度表达分别为 5份与 6份 ;血小板有VEGF基因的低度表达。结论　正常造血细胞可表达VEGF基因 ,提示体内血管生成受到多种效应细胞的共同调节     

胃癌组织中血管内皮生长因子-C及其受体-3的表达与意义

[目的] 探讨血管内皮生长因子 C(vascular endothelial growth factor C,VEGF C)其受体 3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR 3)与胃癌临床病理因素的关系. [方法] 应用免疫组织化学(SP)方法测定胃癌及胃良性病变中 VEGF C与 VEGFR 3表达,计数 (200×视野下淋巴管数密度 (number density of lymph vessel,/200× nDLV).[结果] VEGF C阳性率胃癌组:60.00%,胃良性病变组 15.00%(P =0.000);淋巴结转移组 68.97%,无淋巴结转移组 36.36%(P =0.008);低分化组 72.73%,高 中分化组 44.44%(P =0.010) ;伴有远处转移组 100%,不伴有远处转移组 53.62%(P=0.02);pTNM分期Ⅰ Ⅱ组 43.75%,Ⅲ Ⅳ组 70.83%(P=0.015). 淋巴管数密度 (显微镜下每 200×视野 ):胃癌组为(5.800± 2.318 9),胃良性病变组为(2.3800± 0.462 9) (P=0.000);淋巴结转移组为 (6.948 3± 1.583 1),无淋巴结转移组为 (2.772 7± 0.428 9)(P=0.000);低分化组为 (7.681 8± 0.982 9),高 中分化组为 (3.500± 1.028 2)(P=0.000) ;pTNM分期,Ⅰ Ⅱ组为 (4.291 7± 1.688 0),pTNM分期,Ⅲ Ⅳ组为 (8.062 5± 0.759 4)(P=0.000). VEGF C与淋巴管数密度相关 (P=0.002).[结论] VEGF C刺激淋巴管生成,有利于胃癌淋巴道与远处转移.     

丹皮酚对人胶质母细胞瘤细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究丹皮酚(paeonol,Pae)对人胶质母细胞瘤细胞U251中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 以实时定量PCR法检测VEGF转录水平,以Western blot检测VEGF表达水平.结果 ①Pae可呈剂量依赖性下调U251细胞中VEGF的转录水平,当Pae作用浓度分别为47、94、188、376、752和1 504 μmol/L时,对U251细胞VEGF mRNA的抑制率分别为29.6％、43.94％、73.78％、79.49％、83.11％和88.06％;②Pae对U251细胞VEGF转录的抑制作用随着时间的延长而逐渐增强,在188 μmol/L浓度下,当Pae作用时间分别为4、12和24 h时,对U251细胞VEGF mRNA的抑制率分别为67.13％、71.33％和82.04％;③Pae可显著降低U251细胞VEGF蛋白的表达,以47、188、376、1 504 μmol/L浓度的Pae分别作用U251细胞24 h后,VEGF蛋白的表达水平量明显降低,并呈剂量依赖性减弱,以上浓度Pae对U251细胞VEGF蛋白表达的抑制率分别为33.09％、73.93％、81.23％和87.85％.结论 Pae可显著降低人胶质母细胞瘤细胞中VEGF的转录及表达,有可能通过下调VEGF表达而干预人胶质母细胞瘤细胞的血管新生及化疗敏感性.