庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区部分序列的一级结构及其变异

测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂     

山东省HCV分离株C 区及NS5 区核苷酸序列分析

①目的 探讨山东省丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）分离株Ｃ区、ＮＳ５区的核苷酸序列及其基因型别。②方法 以ＲＴ－ｎｅｓｔ－ＰＣＲ方法从１例临床ＨＣＶ感染者血清中分别扩增出ＨＣＶＣ区（４３２ｂｐ）及ＮＳ５区（３１９ｂｐ）的基因片段,将其克隆于Ｔ载体上,以双脱氧末端终止法自动测序并进行序列分析。③结果 该分离株与ＧｅｎＢａｎｋ中５０多个１ｂ型分离株同源性均在９０％以上,其中Ｃ区与中国北京的１ｂ型株ＨＣＵ６３３７     

广东地区GBV-C/HGV5'NCR区序列变异的研究

目的 了解广东地区ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ５＇ＮＣＲ区的序列变异情况。方法 以ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ的５＇ＮＣＲ区安全同源的序列设计合成引物用于套式ＲＴ－ＰＣＲ。从广东地区的１０例ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者血中扩增了１０个充列,分别克隆对ｐＵＣ１９、ｐＴ－Ａｄｖ载体。以３５Ｓ标记的双脱氧链末端终止法对这１０个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果 １０株充列相互间同源性最大为１００％,最小为８４．４％。与Ｇ     

山东地区输血后丙肝患者HGV感染状况及HGV部分核酸序列测定

目的 了解山东地区输血后丙型肝炎患者庚肝病毒感染的状况及ＨＧＶ部分基因核苷酸序列。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＧＶＲＮＡ，并对阳性扩增的产物采用ＰＣＲ技术片段直接克隆法测定。结果 从８６例ＰＴＨ－Ｃ患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性者３１例（３６％），其中一例患者ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国原始株和另一例日本株核苷酸同源性比较分别为８６％和８４％。结论 证实山东地区ＰＩＨ－Ｃ患者存在着ＨＧＶ感     

庚型肝炎病毒不同地理株5‘端非编码区序列的变异性分析

目的：为明确了解中国不同地区（广东，云南，香港）庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）株５‘端非编码区（ＮＣＲ）序列的差异。方法：采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，从广东省２例，云南省１例，香港３例共６例ＨＧＶ感染者血浆中扩增ＨＧＶ５’ＮＣＲ ｃＤＮＡ片段，为２３８ｂｐ，ＰＣＲ产物纯化后直接经对脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：中国ＨＧＶ株间５‘ＮＣＲ相应序列的同源性介乎９２．９３％￣９７．９８     

Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因的克隆与序列分析

目的构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的真核表达载体，分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１基因片段，通过定向克隆将其克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上，采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的克隆，该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）的同源性为８８．３７％，Ⅱ型中国株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｃ２）的同源性为７０．６９％，其推定的氨基酸同源性分别为８９．２９％和７５．５５％。结论基因的核苷酸一级结构在同一基因型中有较高的同源性，而不同基因型之间的同源性则相对较低。对不同基因型之间Ｅ２／ＮＳ１基因一级结构的研究将有助于ＨＣＶ疫苗的研制。     

中国人庚型肝炎病毒部分基因的克隆及序列分析

目的：分析中国人血清中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ或ＧＢＶ－Ｃ）ＮＳ３区部分基因序列。方法：从个体供血者及肝硬化患者血清中，通过逆转录合成ｃＤＮＡ，设计特异性引物进行多聚酶链式聚合反应，将产物克隆于载体上，采用双脱氧核苷酸链终止法进行双向测序。结果：分离出的５株ＮＧＶ毒株的ＮＳ３区部分核苷酸序列之间同源性从８５％到９８％，与国外已发表的ＨＧＶ序列比较，同源性在７９％～９１％。推测的其编码氨基酸序列，５株之间１００％一致，与国外已报告的ＨＧＶ比较，同源性为９４．９％～１００％。结论：从中国人血清中分离出５株ＨＧＶ序列，其ＮＳ３区部分核苷酸存在着一定的变异性，但其编码的氨基酸非常保守。     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病人血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性。对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－３）基因组５＇端非翻译区（５＇ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％、８８．７％、８７．１％。本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染。ＨＧＶ高度保守区５＇ＵＴＲ的分子克隆与核苷酸序列的测定对开展ＨＧＶ感染的基因诊断具有重要意义。     

陕西株庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）RNA NS3区cDNA（4248nt— …

目的 了解陕西株庚型肝炎病毒（ＨＧＶ,ＲＮＡ／ＧＢＶ－Ｃ）的核苷酸序列特点。方法从陕西省西安市两位非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎患者的血清中,应用反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录引物Ｐ４反转录成ＣＤＮＡ,以此为模板分别用Ｐ３,Ｐ４及Ｐ１,Ｐ２两对引物进行ＰＰＣＲ扩增,扩增到２１８ｂｐ的ＨＧＶ ＲＮＡ ＮＳ３区部分基因,将     

庚型肝炎病毒不同地理株5'端非编码区序列的变异性分析

目的：为明确了解中国不同地区（广东、云南、香港）庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）株５′端非编码区（ＮＣＲ）序列的差异。方法：采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术,从广东省２例、云南省１例、香港３例共６例ＨＧＶ感染者血浆中扩增ＨＧＶ５′ＮＣＲｃＤＮＡ片段,为２３８ｂｐ,ＰＣＲ产物纯化后直接经双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性介乎９２９３％～９７９８％,与国外分离株比较,同源性介乎８６３６％～９１９２％。结论：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性较大,与国外分离株的同源性较小;碱基变异在序列中呈散在分布,部分区段变异较大;ＨＧＶ核酸变异与地域因素有关。     

HCVE＿2／NS＿1基因的PCR检测克隆与序列分析

本文报道了利用ＰＣＲ技术检测了３４例丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因的ｃＤＮＡ并与５’非编码区基因的ｃＤＮＡ检测技术进行了比较，应用ｐＵＣ１８质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析，结果表明克隆片段ＨＣＶ－Ｓ１为我国主要流行的ＨＣＶ基围亚型－ＩＩ型，其与ＨＣＶ－ＩＩ型的核苷酸与氨基酸的同源性均在９０％以上，序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸，可能具有复杂的空间构型，且与４个糖基化位点一样保持稳定，另外，在ＨＣＶ－Ｓ１片段的３’端有一３６个核苷酸的区域，其变化可能具有型特异性     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

目的;研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞,将转染上清再次感染ｓｆ细胞,以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析,检测重组蛋白。结果：序     

中国HCV一株NS5区部分基因克隆及序列分析

目的：研究ＨＣＶ ＮＳ５基因的结构与功能，为进一步研制适合我国使用的第３代抗－ＨＣＶ试剂打下基础。方法：自行设计引物，从河北固安县慢性丙型肝炎患者血中，用逆转录－聚合酶链反应扩增出ＨＣＶ ＮＳ５基因，并将其克隆到载体ｐＫＰＬ－３ａ，经Ｄｏｔ ｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和限制性内切酶分析筛选出阳性克隆ｐＫＨＣ－５ａ，进行序列测定。结果：核苷酸序列分析表明，克隆的ＨＣＶ ＮＳ５基因与ＨＣＶⅡ     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性，对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－Ｓ）基因组５端非翻译区（５′ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

庚型肝炎病毒RNA NS3区基因分型

目的：探讨ＨＧＶ ＮＳ３区基因变异与基因型的关系。方法：对３２株ＮＳ３区序列进行酶切位点分析，比较中国株与ＧＢＶ－Ｃ株与已发表的ＨＧＶ ＮＳ３区酶切位点，选择特异性内切酶切点。结果：３２株ＮＳ３序列酶切位点分析表明存在５种基因型。１组：在４３３８位元ＨｈａＩ切点，而在４３６０位有ＨｈａＩ切点；２组，４３３８位及４３６０位均无ＨｈａＩ切点；３组：仅在４３３８位有ＨｈａＩ切点；４组：４３３８位及４３５     

HCV E2／NS1基因的PCR检测克隆与序列分析

本文报道了利用ＰＣＲ技术检测了３４例丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因的ｃＤＮＡ并与５非编码区基因的ｃＤＮＡ检测技术进行了比较，应用ｐＵＣ１８质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析，结果表明克隆片段ＨＣＶ－Ｓ１为我国主要流行的ＨＣＶ基因亚型－ＩＩ型，其与ＨＣＶ－ＩＩ型的核苷酸与氨基酸的同源性均在９０％以上，序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸，可能具有复杂的空间构型，且与４个糖基化位点一样保持稳定，另外，     

HCVNS3区C33c抗原基因cDNA的克隆及序列分析

自上海市及江苏省慢性丙型肝炎患者血清中分离丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，采用自行设计的引物，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），获得长为６９４ｂｐ的Ｃ３３ｃ抗原基因ｃＤＮＡ，将其克隆于表达载体并作序列分析。结果表明，上海株ＨＣＶ－Ｓ１及江苏株ＨＣＶ－Ｓ２该区域核苷酸水平有很高的同源性（＞９９％），上海及江苏株ＨＣＶ与美国原型ＨＣＶ－１、日本株ＨＣＶ－Ｊ及河北株ＨＣＶ－ＨＢ在该区域核苷酸水平的差异分别为１８．６４％、５．５５％及８．０１％～８．１７％，氨基酸水平的差异在２．３１％～６．０２％之间。上海株同一份血清三个独立克隆间核苷酸水平有０．６％～０．９％的差异。本实验为进一步表达Ｃ３３ｃ蛋白作好了准备。     

七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增ＨＥＶ开放读码框架２（ＯＲＦ２）ｃＤＮＡ，并用ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０ＤＮＡ序列分析试剂盒，经双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止直接测序法测定ＲＴ－ｎＰＣＲ扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京５个城市４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶＯＲＦ２ｃＤＮＡ，对其中７株进行了核苷酸序列分析，表明它们与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）的同源性为７８．９％～８０．２％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）流行株（Ｅｐ）的同源性为９３．１％～９５．１％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）散发株（Ｓｐ）的同源性为９２．３％～９４．２％；与ＨＥＶ中国新疆流行株ＣＨ１．１同源性为９６．５％～９８．９％；７株散发性ＨＥＶ间核苷酸序列的同源性为９５．７％～１００％。结论该７株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＨＥＶＣＨ１．１核苷酸序列的同源性较高，均属同一亚型。     

HCV广东株5‘NCRcDNA的克隆及序列测定

从广东省１例慢性丙型肝炎病人血清中提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后用ＨＣＶ５’端非编码区（５’ＮＣＲ）特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增产物３０２ｂｐ，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组质粒ｐＵＮ采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列，与国内外多相株比较，核苷酸同源性介乎９２．６９％～１００％，其中与ＨＣＶⅡ（１ｂ）型的同源性最大，本文的测序结果可为引物设计提供依据，获得的Ｈ     

庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３′和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ／Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的