sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminal kinase，JNK）信号传导通路特异阻断剂sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）凋亡以及Fas蛋白表达的影响。方法：不同浓度sp600125对乙醛刺激的大鼠HSC-T6进行处理后，用Hoechst 33258染色后，观察凋亡细胞的形态变化，FCM法检测细胞凋亡率，SAN2法检测Fas蛋白表达。结果：不同浓度的sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，表现为细胞核浓缩、碎裂，形成凋亡小体；随着sp600125浓度增加，HSC-T6凋亡率逐渐增高（F=42．57，P〈O．01），HSC-T6细胞内Fas蛋白阳性表达率也逐渐增高（F-72．58，P〈0．01）。结论：不同浓度sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，这可能与上调Fas蛋白表达有关。     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞cAMP的影响

目的探讨脂多糖（LPS）作用后,大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）cAMP浓度变化及其与B—AR变化的关系。方法分别在100ml培养瓶内接种等量RPMVEC,细胞单层汇合后分为3组：LPS组加LPS10μg／ml;LPS＋山莨菪碱组加LPS10μg／ml和山莨菪碱10μg／ml;正常对照组加等量稀释液（各组n=4）。于作用后15、90min,采用放免法测定各组RPMVECcAMP浓度。结果正常对照组RPMVECcAMP浓度为（11．83±1．35）fmol／μl;LPS组和LPS＋山莨菪碱组15、90min两个时相点RPMVECcAMP浓度均显著高于正常对照组（P〈0．01）。10μg/mlLPS作用15min,cAMP浓度显著低于10μg／mlLPS作用90min（P〈0．01）;LPS＋山莨菪碱组作用15min,cAMP浓度也显著低于作用90min（P〈0．01）。LPS组作用15min与LPS＋山莨菪碱组作用15min比较,细胞内cAMP浓度无显著差异（P〉0．05）;两组作用90min比较,cAMP浓度也无显著差异（P〉0．05）。结论LPS作用可引起RPMVECcAMP浓度显著升高,其机制可能与LPS引起的腺苷酸环化酶活化有关,而与LPS引起的β—AR变化下调无关。     

黄芪对过氧化损伤软骨细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响

目的：观察黄芪（astragalus）对体外关节软骨细胞过氧化损伤中细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响。方法：原代培养兔膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光法进行鉴定,分为正常组、过氧化氢损伤对照组（损伤组）和过氧化氢损伤＋黄芪干预组（黄芪组）。损伤组采用终浓度为0．2mmol／L的过氧化氢制造体外软骨细胞过氧化损伤模型,黄芪组将终浓度分别为0．02、0．1、0．5g／L的黄芪在过氧化氖损伤前60min加入。测定各组细胞活力（MTT法）、细胞凋亡率（流式细胞术）、Bim蛋白含量（免疫组化染色）、培养上清LDH活性（紫外分光光度法）。结果：与正常组比较,损伤组细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bim蛋白表达增加,培养上清LDH活性显著上升。黄芪组与损伤组比较,细胞活力显著升高,细胞凋亡率下降,Bim蛋白表达降低,培养上清LDH活性显著下降。结论：黄芪能降低细胞凋亡率和Bim蛋白的表达,抵抗过氧化氢造成的体外软骨细胞过氧化损伤。     

大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caspase-3表达的影响

目的研究大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caco-2细胞Caspase-3表达的影响。方法对LPS诱导的Caco-2炎症细胞模型,采用不同浓度的大黄素干预处理,用RT-PCR和westernblot法检测Caspase-3表达的情况。结果 LPS诱导的Caco-2细胞Caspase-3的表达升高,不同浓度大黄素作用于LPS诱导的Caco-2细胞24h后,Caspase-3mRNA和蛋白表达随大黄素浓度的增加而下降。结论大黄素抑制Caco-2炎症细胞模型凋亡因子Caspase-3的表达,抑制Caco-2细胞凋亡。     

LPS和TNFα对肺微血管内皮细胞内游离钙的影响

目的探讨脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子α（TNFα）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法将细胞接种于盖玻片上,细胞单层汇合后进行实验。实验分组：LPS组（用10ug/mlLPS）,LPS＋山莨菪碱组（用10ug／mlLPS＋10ug/ml山莨菪碱）,TNFα组（用5000u／mlTNFα）,TNFα＋山莨菪碱组（用5000u／mlTNFα＋10ug／ml山莨菪碱）,正常对照组加等量稀释液。作用15、90min后按照试剂盒提供的方法,并参照文献测定[Ca^2＋]i。结果与正常对照组比较,LPS组、LPS＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;LPS组与LPS＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]无明显差异（P〉0．05）。同样,与正常对照组比较,TNFα组、TNFα＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;TNFα组与TNFα＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i无明显差异（P〉0．05）。结论LPS、TNFα作用可使RPMVEC[Ca^2＋]i显著升高,山莨菪碱对LPS、TNFα诱导的RPMVEC[Ca^2＋]i升高无显著抑制作用;LPS、TNFα引起的[Ca^2＋]i浓度升高与β—AR介导的信号转导通路无关;[Ca^2＋]i升高可能参与了G蛋白偶联受激酶的活性调节。     

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂对结肠癌细胞的增殖抑制作用

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）JZ004对结肠癌细胞系HCT-8和HT-29细胞增殖的影响,并初步探讨其抗癌机制。方法用不同浓度JZ004分别处理HCT-8和HT-29细胞, MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期停滞、细胞凋亡;若丹明（rhodamine）123和二氯二氢荧光素二乙酸酯（ DCFH-DA）测定细胞线粒体跨膜电位及活性氧（ reactive oxygen species ,ROS）产生的变化;免疫印迹法检测细胞内乙酰化组蛋白H3、p21、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）4、Bcl-2、Mcl-1、Bax等相关蛋白的表达水平。结果MTT结果显示,JZ004对结肠癌细胞系的增殖有明显抑制作用,其抑制效果与时间、剂量呈正相关;流式分析结果显示,细胞凋亡率随JZ004浓度提高而增加;JZ004处理72 h后,p21表达水平上调,CDK4蛋白表达下调,细胞周期停滞于G0／G1期而抑制细胞的生长,细胞内ROS产生增多,且线粒体跨膜电位显著下降,促凋亡蛋白Bax的表达呈上调趋势,而抑凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达则受到抑制。结论 JZ004作为一种新型的HDACi对结肠癌细胞具有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,凋亡诱导机制可能与Bcl-2家族蛋白表达水平变化有关。提示JZ004具有成为结肠癌临床化疗药物的潜能。     

肼致心肌成纤维细胞凋亡作用机制的研究

目的观察肼作用于体外培养心肌成纤维细胞的凋亡情况并探讨其机制。方法将新生大鼠心肌成纤维细胞培养标本分为对照组和肼处理组。用2mmol／L浓度的肼处理细胞72h后Hoeehst33258染色，荧光显微镜下观察凋亡细胞核的变化；膜蛋白V／磺化丙啶双染流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率；Rodamine123荧光染色流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax／Bob2和Caspase-3表达的变化。结果肼处理后的细胞与对照组相比，出现明显的细胞凋亡的核浓缩、核聚集形态；细胞凋亡率和坏死率与对照组比较差异均有显著性；细胞内线粒体膜电位降低；Bax表达增高、Bcl-2表达降低、Caspase-3表达增高。结论肼可引起心肌成纤维细胞凋亡，并可能通过线粒体通路即肼损伤线粒体引起Bcl-2表达降低，Bax表达增加致使线粒体膜通透性转换孔开放，膜电位降低，细胞色素C释放入胞浆，激活Caspase-3，引起细胞凋亡。     

广藿香醇对β-淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用

目的研究雌激素受体卢亚型（estrogen receptor β,ERβ）选择性激动剂广藿香醇（patchouli alcohol,PA）对β-淀粉样蛋白（β-amyloidpe ptide,Aβ）片段神经毒性的体外抑制作用。方法Aβ25-35位氨基酸片段（Aβ25-35）作用于人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）之前不同浓度PA预防给药,荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋];）,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果PA（0．05、0．5、5μg·ml^-1）能够抑制Aβ25-35引起的细胞内ROS水平和[Ca^2＋];升高,使细胞凋亡减少。结论PA对Aβ25-35的神经毒性具有抑制作用。     

低能量激光照射对脂多糖介导人牙周膜成纤维细胞炎性损伤的保护作用

目的:研究低能量激光照射(low level laser irradiation,LLLI)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)炎性损伤的影响及机制。方法:将hPDLFs接种于孔板中,随机分为正常组和LPS组以及LPS+LLLI组。正常组细胞行常规培养基培养,LPS组及LPS+LLLI组在加入1 mg/1 LPS培养基中培养24 h,LPS+LLLI组3个亚组分别接受不同强度照射。4 d后检测各组细胞凋亡、活力及细胞内游离Ca~(2+)浓度,酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量,RT-PCR及Western-blot检测各个实验组hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达。结果:与正常组比较,LPS组hPDLFs细胞凋亡率及细胞内游离Ca~(2+)浓度增加,细胞活力降低(P0.05),细胞的上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量显著升高(P0.05),Ca~(2+)hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达显著升高(P0.05)。与LPS组比较,LPS+LLLI组细胞凋亡率及细胞内游离Ca~(2+)浓度降低,细胞活力升高(P0.05)。细胞的上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量显著降低(P 0.05),Ca~(2+)hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论:LLLI对LPS诱导hPDLFs炎性损伤有保护作用,照射强度为4 J/cm~2时效果最明显。     

熊果酸对体外胃癌细胞Mcl - 1基因表达的影响

目的：观察熊果酸（ursolic acid）对体外胃癌细胞凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法：胃癌细胞株（SGC-7901）分为对照组和熊果酸不同浓度组,将终浓度分别为1、5、25p,mol／L的熊果酸加入培养液中,观察胃癌细胞形态学变化,测定各组熊果酸作用2、8、24h后细胞凋亡率（流式细胞术）、Mcl-1转录及蛋白表达变化（RT—PCR法和Westernblot法）。结果：与对照组比较,熊果酸不同浓度组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞凋亡率增加,Mcl-1转录及蛋白表达水平下降,有明显的药物作用时间和浓度依赖关系。结论：熊果酸能提高胃癌细胞凋亡发生率,降低Mcl-1基因的表达。     

地塞米松改善脂多糖诱导的炎症反应及足细胞损伤简

目的Nephrin在维持肾小球裂孔隔膜结构的完整性上起关键作用。本文观察地塞米松对脓毒症小鼠及体外培养足细胞nephrin磷酸化水平的影响,探讨其改善足细胞损伤的机制。方法脂多糖制备脓毒症小鼠模型,设正常对照组、脓毒症组、地塞米松治疗组。检测24h尿蛋白和血清超敏c反应蛋白、白介素-6、降钙素原。RT—PCR、Westernblot法检测nephrinmRNA的表达及磷酸化水平。体外培养小鼠永生化足细胞,分别给予脂多糖或地塞米松干预,TUNEL法检测足细胞凋亡,MTT法测定足细胞活力,并检测足细胞nephrinmRNA及磷酸化水平。结果在脓毒症小鼠实验中．脓毒症组24h尿蛋白、血清超敏c反应蛋白、白介素-6、降钙素原水平升高,nephrinmRNA表达及磷酸化水平降低,地塞米松可改善脓毒症鼠尿蛋白及炎症指标,维持nephrinmRNA的表达及磷酸化水平。在体外培养的足细胞中,脂多糖诱导足细胞的凋亡,降低足细胞的活力,降低nephrinmRNA表达及磷酸化水平;而地塞米松明显减少足细胞的凋亡,刺激足细胞的活力．上调nephrinmRNA的表达及磷酸化水平。结论地塞米松拮抗脂多糖引起的炎症反应,改善nephrin的磷酸化水平,保护足细胞。     

内毒素作用下淋巴细胞中CD4＋CD25＋调节性T细胞变化及连翘对其的影响

目的探讨不同时间点内毒素（LPS）对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatory T cell,Treg）的影响及连翘（forsythia suspensa,FS）干预后CD4＋CD25＋调节性T细胞的变化。方法体外培养Wistar大鼠脾脏淋巴细胞,分为对照组、LPS（10ng/ml）组、LPS（10ng/ml）＋多黏菌素B组（10ng/ml）、LPS（10ng/ml）＋连翘（12．5、25、50mg／ml）组,分别于3、6、12h收集标本．流式细胞术检测CD4＋CD25＋调节性T细胞在淋巴细胞中的百分比,荧光定量RT—PCR法检测Foxp3mRNA表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测TNF—a、IL-10分泌水平。结果脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg的百分比和Foxp3mRNA的表达在12h较3、6h明显升高（P〈0．01）;TNF—a、IL-10的分泌随时间点的延长均显著升高（P〈0．01）;随连翘剂量增加,TNF-a、IL-10分泌水平,Foxp3mRNA表达和CD4＋CD25＋Treg百分比均明显降低（P〈0．05）。结论内毒素参与并诱导了CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的变化,其随内毒素作用时间延长呈上升趋势。连翘能显著降低CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的百分比。     

重组腺病毒Ad5-KAI1对骨髓瘤细胞的功能调节作用

目的研究抗癌一号KAI1（又称CD82）基因对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及机制。方法将携带KAI1基因克隆至重组腺病毒,制备Ad5-KAI1重组腺病毒,并感染骨髓瘤细胞SKO-007。Ad5-GFP作为阴性对照,未感染细胞为空白对照,利用CCK-8和AnnexinⅤ-PI等方法分别检测不同时间点（24 h,48 h）的细胞活率和凋亡水平。另外,利用W estern印迹方法检测不同组别细胞表达ERK及其磷酸化水平。结果 Ad5-KAI1组细胞活率抑制水平和凋亡水平明显高于对照组,且剪切型胱天蛋白酶（caspase）3、ERK磷酸化水平在实验组高表达,而抑制ERK磷酸化则导致凋亡进一步增加。结论 KAI1显著抑制骨髓瘤细胞增殖,并诱导其caspase依赖的凋亡;KAI1在促进凋亡的同时,其应激性诱导了ERK磷酸化,后者又对细胞具有保护作用。     

小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中SRC-3的作用研究

目的 探讨类固醇受体辅活化子（SRC）-3蛋白在脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中的作用.方法 健康SPF级雌性野生型（SRC-3＋/＋）小鼠、SRC-3基因敲除（SRC-3-/-）小鼠各5只,分别分离和原代培养腹腔巨噬细胞,并相应分为SRC-3＋/＋组和SRC-3-/-组.收集并调整细胞浓度为1×106/ml,接种于6孔板,1 ml/孔,给予10 μg/ml LPS刺激,分别在刺激前（0 h）、刺激后4 h和12 h收集腹腔巨噬细胞.通过Western blot测定腹腔巨噬细胞Toll样受体4（TLR4）的表达,并通过transwell趋化实验和中性红吞噬实验,分别测定腹腔巨噬细胞的趋化指数（CI）和吞噬功能.结果 LPS诱导前两组腹腔巨噬细胞TLR4的蛋白表达和CI差别无统计学意义,但SRC-3-/-组的吞噬功能显著低于SRC-3＋/＋组（P＜0.01）;无论是SRC-3＋/＋组,还是SRC-3-/-组,LPS诱导4 h和12 h后,两组腹腔巨噬细胞TLR4的表达和CI均显著增高（P＜0.01）,但在相应时间点,SRC-3-/-组与SRC-3＋/＋组相比差别无统计学意义.LPS刺激4 h后,两组吞噬功能均显著增加（P＜0.01）,但SRC-3-/-组增加的程度显著低于SRC-3＋/＋组（P＜0.01）;相反,LPS刺激12 h后,两组吞噬功能均受到不同程度的抑制（P＜0.05或P＜0.01）,且SRC-3-/-组较SRC-3＋/＋组抑制的程度更低（P＜0.01）.结论 SRC-3调节腹腔巨噬细胞的先天性免疫功能可能与吞噬功能有关,而与其趋化功能无关.     

活性维生素D对肾病大鼠的肾脏保护作用

目的观察转化生长因子-β1（TGF-β1）、α3β1整合素在Heymann肾病鼠肾小球的表达以及活性维生素D1,25-（OH）2D3对两者表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组（NC）和Heymann肾病模型组;后者经腹腔注射肾小管刷状缘抗原诱导肾病模型,再随机分为Heymann肾病组（HN）和1,25-（OH）2D3治疗组（HT）。HT组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）2D3,3ng/（100g.d）,连用4周。检测大鼠血清中的肌酐（Cr）、钙（Ca）、磷（P）、甲状旁腺素（PTH）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,尿蛋白（UP）、尿足细胞（UPC）。电镜观察每视野足细胞数、足突平均宽度。逆转录-聚含酶链反应法检测肾小球TGF-β1,α3整合素mRNA表达水平的变化。蛋白印迹检测肾小球TGF-β1,α3整合素蛋白的表达。结果与NC组相比,HN组大鼠Cr、P、PTH、AngⅡ明显升高,Ca降低;UP、UPC排泄明显增多;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显增加,而α3整合素mRNA和蛋白表达明显降低。与HN组相比,HT组Ca无显著差异,PTH、AngⅡ明显降低;UP、UPC排泄明显减少;足细胞数目增加,足突宽度变窄;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达下调,α3整合素表达上调。结论1,25-（OH）2D3可能是AngⅡ的负向调节因子,可减少Heymann肾病鼠尿蛋白及尿足细胞的排泄,下调肾小球TGF-β1的表达,增加α3β1整合素的表达,从而减少足细胞脱落,维持肾小球足细胞数量。     

环维黄杨星D对急性分离大鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究环维黄杨星D（CVB-D）对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca^2＋浓度的影响。方法急性分离大鼠心肌细胞,应用特异性荧光指示剂Fluo^-3/AM负载细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果在台氏液中,CVB-D浓度为10^-7、10^-6、10^-5mol·L^-1时,心肌细胞内[Ca^2＋]i逐步升高,其峰值分别为（52.78±1.41）、（59.86±4.17）、（62.99±2.66）,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,环维黄杨星D对胞内钙的升高有显著性差异（P〈0.05）;在无外钙并加入内罗啶孵育后,环维黄杨星D引起的胞内[Ca^2＋]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异（P〉0.05）。结论环维黄杨星D具有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca^2＋]i的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

瑞舒伐他汀对波动性高糖诱导的血管内皮损伤的作用

目的通过培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,构建糖尿病患者内皮细胞损伤模型,然后用瑞舒伐他汀干预以寻求一种保护内皮细胞、防治糖尿病心血管并发症的高效安全的新疗法。方法选取活性较好的人脐静脉内皮细胞分成5组进行实验,分别为对照组（A组）、波动性高糖组（B组）、波动性高糖＋瑞舒伐他汀（0．5umol／L）组（C组）、波动性高糖＋瑞舒伐他汀（5umol／L）组（D组）、波动性高糖＋瑞舒伐他汀（10umol/L）组（E组）。建立好波动性高糖损伤模型后,检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,丙二醛（MDA）及NO含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,lit—PCR检测NOX4的mRNA的表达。结果与对照组比较,波动性高糖组NO含量和SOD活性,及NOX4mRNA的表达明显减少;MDA含量,细胞凋亡率明显增高;与波动性高糖组相比,随着药物浓度的增加波动性高糖诱导的HUVEC细胞凋亡率及MDA含量呈递减趋势,SOD的活性,NO含量及NOX4mRNA的表达逐渐递增。结论①波动性高糖对内皮细胞有损伤作用;②波动性高糖对内皮细胞的损伤作用可能是通过其氧化应激作用来实现的;③不同浓度的瑞舒伐他汀对波动性高糖诱导的内皮细胞损伤有保护作用。     

黄荆子乙酸乙酯提取物增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用

目的观察黄荆子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitexnegundoseed,Evn-50）和顺铂（cisplatin,DDP）在体外对人卵巢癌细胞株COC1凋亡的影响,探讨Evn-50提高COC1细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法Evn-50,DDP以及两药联合分别处理人卵巢癌COC1细胞株,台盼蓝染色计数法检测药物对细胞生长的抑制率,并用流式细胞术、AO/CB荧光双染色法测Evn-50,DDP以及两药联合对细胞凋亡的影响。结果细胞抑制率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且明显高于同剂量单用组（P〈0.01）;细胞凋亡率在联用组中随Evn-50剂量的增加而增加,且高于同剂量单用组（P〈0.01）,流式细胞仪分析结果显示Evn-50呈浓度依赖性将COC1细胞阻滞在G2/M期,而DDP将COC1细胞阻滞在G1/S期。结论Evn-50有增强顺铂诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用,其机制可能与二者对卵巢癌细胞株COC1周期阻滞点不同有关。