体外模拟二氧化碳气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过建立体外模拟二氧化碳(CO2)气腹的手术环境,研究CO2气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,对腹腔镜用于宫颈癌手术的安全性作出初步评价。方法体外建立模拟CO2气腹环境,流式细胞仪PI染色分析宫颈癌细胞株Hela细胞周期和凋亡,比较不同CO2灌注压力(0～16mmHg)和作用时间(1～4h)对细胞增殖程度和凋亡的影响,MTT比色法测定活细胞数量。结果Hela细胞在不同的CO2气腹环境中培养48h后,实验组与对照组一样均呈增殖性生长。但随压力增加和作用时间的延长,实验组细胞增殖的速率变慢;48h后,各压力实验组之间的细胞增殖指数(PI)和对照组之间的PI值出现显著性差异(P<0.05)。实验组不同CO2压力作用的凋亡细胞指数随作用时间的增加呈上升趋势,并且随CO2压力的增高,凋亡细胞比例也随之增加,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。MTT比色法显示,Hela细胞随着CO2作用时间的延长和压力的增大,细胞增殖受抑制程度增大,其中4h作用组抑制程度最为显著(P<0.05)。结论体外模拟CO2环境对宫颈癌细胞(Hela)的生长均有明显的抑制作用,其抑制程度与CO2气体的压力和作用时间显著相关;CO2的压力和作用时间,均与宫颈癌细胞凋亡过程有关。     

胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

顺铂对人宫颈癌Hela细胞超弱发光影响的观察

目的：探讨人宫颈癌Hela细胞株经顺铂（DDP）作用后其超弱发光与细胞增殖活性变化的关系．方法：选择DDP诱导人宫颈癌Hela细胞株,比较人宫颈癌Hela,Hela＋DDP细胞株形态变化．MTT比色法、流式细胞仪检测细胞生长周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测Hela,Hela＋DDP细胞的超弱发光强度变化．结果：DDP对Hela细胞有生长抑制作用,并呈时间和浓度依赖性,其48h的Ic5。值为3mg,／L,当DDP浓度在3mg／L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系（P〈0．01）．流式细胞仪结果表明,与Hela细胞相比较,Hela＋DDP细胞G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少（P〈0．01）;细胞凋亡率在24,48,72h分别为（11．4±5．8）％,（21．8±7．9）％,32．5±11．6）％．在1×10^-4mol／L鲁米诺及3mL／L双氧水（H2O2）条件下超弱发光强度随着时间的变化,Hela＋DDP细胞明显降低（P〈0．01）．结论：在DDP非毒性剂量作用后,Hela＋DDP细胞超弱发光强度降低,提示超弱发光检测可能作为筛选敏感化疗药物的一项指标．     

不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响

目的探讨不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响。方法建立CO2气腹体外模型，以不同压力（0、7、14mmHg）的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理4h，设未处理组为对照组。采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况。结果7mmHg组第1—5天吸光度值明显高于0mmHg组、14mmHg组、对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；7mmHg组G2／M期的人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0mmHg组、14mmHg组、对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；14mmHg组S期人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0mmHg组、7mmHg组、对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）；人宫颈癌CaSki细胞的增殖指数随着CO2气腹压力的升高而增高；电镜下观察结果显示，7mmHg组、14mmHg组均可见明显异常的核分裂像。结论CO2气腹在一定的压力状态下表现出较强的促细胞生长效应。     

小白菊内酯对宫颈癌细胞增殖、凋亡及PTEN/AKT通路的影响

目的研究小白菊内酯对宫颈癌细胞增殖、凋亡及磷酸酶及张力蛋白同系物/蛋白激酶(PTEN/AKT)通路的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,分别用不同浓度(10、50、60 mg/L)小白菊内酯(Par)处理对数期生长的Hela细胞为实验组,未经处理的Hela细胞为阴性对照组,2.5 mg/L顺铂处理为阳性对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组宫颈癌Hela细胞增殖情况;采用平板克隆试验法检测宫颈Hela细胞增殖能力;采用AnnexinVFITC/碘化丙锭(PI)双染法体外检测宫颈癌Hela细胞凋亡;采用免疫印迹法(WB)检测宫颈癌Hela细胞中PTEN/AKT通路相关蛋白及凋亡相关蛋白表达。结果与阴性对照组比较,顺铂组、5、10、20、40、50 mg/L Par组对Hela细胞增殖抑制率均显著升高,差异有统计学意义(P均0.05),且呈浓度依赖性和时间依赖性,其中50 mg/L Par作用48 h时,对Hela细胞抑制率达51.04%。与阴性对照组比较,顺铂组、10、50、60 mg/L Par组Hela细胞克隆形成率及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p-AKT蛋白水平降低,细胞凋亡率及B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、cleavedCaspase8、cleaved-Caspase3、PTEN蛋白水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。其中50、60 mg/L Par组与顺铂组Hela细胞克隆形成率、凋亡率及Bcl-2、p-AKT、Bax、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase3、PTEN蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论小白菊内酯可能通过抑制PTEN/AKT通路,从而抑制宫颈癌Hela细胞增殖,促进其凋亡。     

模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响。方法 建立体外模拟CO2的气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12mmHg,作用时间4h。处理后用MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞周期变化。结果 MTT法检测细胞增殖结果显示,气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期,CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 体外模拟持续12mmHg CO2气腹环境,连续对人胃癌MNK-45细胞作用4h,不会促进胃癌细胞的增殖和生长。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

一种腹腔镜人工气腹体外模型的建立及评价

目的：建立腹腔镜人工气腹体外模型并评价其效果。方法：采用不锈钢密封罐和自动气腹机建立腹腔镜人工气腹体外模型,用M1Tr法观察CO2气腹（7mmHg,4h）对人宫颈癌细胞CaSki体外生长的影响,实验重复3次。设未处理组为对照。结果：CO2气腹组和对照组同次处理的组间比较结果显示,处理后第24h、48h两组吸光度值无明显差异（P〉0．05）,处理后第72h、96h、120hCO2组各时间点吸光度值明显高于对照组（P〈0．05）。两组组内3次重复实验同一时间点所测吸光度值（A）无显著差异（P〉0．05）。结论：采用密封罐和自动气腹机建立的腹腔镜人工气腹体外模型是一种进行腹腔镜体外研究的理想模型;采用该模型发现CO2气腹促进人宫颈癌细胞CaSki的体外生长。     

氯丙嗪单独及与顺铂联合应用对人宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的:探讨氯丙嗪(CPZ)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:将氯丙嗪、顺铂单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪和顺铂联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05)。二者均可诱导细胞凋亡,联用凋亡率明显增加,并出现G0/G1期细胞阻滞。结论:氯丙嗪可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,且对顺铂有协同作用。     

沉默survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的实验研究

目的探讨survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。方法设计并构建靶向survivin的shRNA真核表达载体（psh-svv）,转染宫颈癌Hela细胞,用实时PCR法检测RNA干扰（RNA interference,RNAi）后survivin mRNA的表达,用Western blot检测survivin蛋白表达,观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用,转染psh-svv对Hela细胞凋亡的影响,裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。结果测序结果证实载体构建成功。转染psh-svv的实验组survivin mRNA表达明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组survivin蛋白表达亦明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组caspase-3活性显著高于其他3组（P〈0.05）。survivin基因沉默后,裸鼠移植瘤生长速度减慢,survivin低表达的实验组小鼠对放射线敏感。结论 psh-svv通过RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞survivin的表达,抑制Hela细胞增殖,诱导凋亡,增加Hela细胞对放射线的敏感性。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

维生素C增加入宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用，流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长，将肿瘤细胞阻滞在G0／G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用，细胞生长抑制率显著提高，凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

garcinol对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的研究

目的研究多聚异戊二烯基苯甲酮（garcinol）对宫颈癌Hela细胞株放射敏感性的影响。方法不同浓度garcinol作用于人宫颈癌Hela细胞12、24、48h,CCK-8法检测garcinol对Hela细胞增殖活性的影响,并计算出24h时的20％和50％的药物抑制浓度（IC20和IC50）值;克隆形成实验检测20Ixmol／Lgarcinol对Hela细胞放射敏感性的影响;反转录PCR法和Westernblot法检测Hela细胞内环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在mRNA水平和蛋白表达水平的变化。结果garcinol抑制宫颈癌Hela细胞的生长,并且有明显的时间-剂量依赖性;通过单击多靶模型计算放射生物学参数,经20μmol／Lgarcinol处理24h的Hela细胞,与单纯照射组相比,放射敏感性增加（t=6．69,P〈0．05）,放射增敏比（SER）为1．26;经20μmol／Lgarcinol处理24h的Hela细胞,COX-2的蛋白表达水平下降（P〈0．05）,而COX-2mRNA水平无明显变化（P〉0．05）。结论garcinol可以增加宫颈癌Hela细胞的放射敏感性,这可能与其降低Hela细胞中COX-2的蛋白表达水平有关。     

γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞系增殖和凋亡的影响.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0 μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析不同浓度DAPT对Hela细胞凋亡率及细胞周期分布的影响.结果 3 种浓度的DAPT均能显著抑制Hela细胞的增殖,抑制率分别为22.847%、32.492%、46.565%,作用呈明显剂量依赖性;不同浓度的 DAPT能使Hela细胞凋亡率明显增加,分别为,且使S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,作用呈剂量依赖性.结论 DAPT对体外培养的人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖、调节细胞周期、诱导凋亡的作用.     

Ｔｏｌｌ 样受体９ 在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的：研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9（TLR9）的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hela细胞中TLR9 mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术（FCM）检测CpG-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果①TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用CpG-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。②MTT比色法检测显示, TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50（223．092±3．850）ng／mL。③流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂CpG-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为（15．32±2．46）％,与无CpG-ODN预刺激组[（43．49±2．04）％]相比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR9特异性激动剂CpG-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。     

腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长影响的研究

目的:探讨腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长的影响.方法:体外培养CaSki细胞,模拟腹腔镜建立CO2气腹和N2气腹处理细胞,另设未处理组为对照.采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况.结果:处理后48h起CO2促进CaSki细胞生长,N2组在处理后48～72h短暂抑制细胞增殖;CO2组G2-M期细胞明显增加;CO2组细胞见明显核分裂像,N2组可见线粒体肿胀,核周间隙扩大.结论:CO2气腹促进CaSki细胞生长,而N2气腹则起一定的抑制作用.     

人表皮生长因子受体-2 siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞株的抑制作用

目的：应用人表皮生长因子受体-2（C-erbB-2）基因的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）联合卡铂作用于肺腺癌A549细胞株,探讨siRNA敲除c—erbB-2基因联合卡铂对A549细胞的抑制作用,为开拓肺腺癌患者治疗的新途径提供实验依据。方法：应用CCK-8比色法检测不同浓度的卡铂在不同时间点对A549细胞的抑制率。设计并合成3对C—erbB-2siRNA（2621组、1724组、1491组）,分别转染肺腺癌A549细胞,应用实时荧光定量RT—PCR检测该基因的mRNA水平,筛选出最佳siRNA。再应用CCK-8比色法检测卡铂与c—erbB-2 siRNA联合应用时A549细胞的抑制率。结果：卡铂对A549细胞的生长有显著抑制作用。随着浓度的升高（r=0．415,P〈0．001）、作用时间的延长（r=0．689,P〈0．001）,细胞的抑制率升高。48h的IC50为25．99mg／L。3对sLRNA中2621组和1724组干扰效果最佳（F=11．854,P〈0．05）。CCK-8比色法检测显示,A549细胞的抑制率分别为：siRNA干扰组（28．68±1．98）％、卡铂组（45．63±2．14）％、siRNA＋卡铂组（59．62±1．35）％,其中siRNA＋卡铂组抑制率最高,与其它各组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：C—erbB-2 siRNA与卡铂具有协同作用,能抑制A549细胞增殖。     

青藤碱联合卡铂抑制宫颈癌细胞的疗效

目的通过观察青藤碱联合卡铂对宫颈癌患者癌细胞抑制的影响,探讨青藤碱联合卡铂治疗方案的临床价值。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,取对数生长期细胞分为4组,分别为对照组(6孔,只加培养液)、青藤碱组(6孔,只加2.5 mmol/L青藤碱)、卡铂组(6孔,只加40μg/ml卡铂)、联合用药组(分为3个亚组,每个亚组6孔,分别加0.625 mmol/L青藤碱+40μg/ml卡铂、1.25 mmol/L青藤碱+40μg/ml卡铂及2.5 mmol/L+青藤碱40μg/ml卡铂),处理24、48及72 h后,分别以MTT法检测细胞增殖变化,并观测48 h细胞周期变化及不同浓度的青藤碱对细胞凋亡的影响。结果各组细胞增殖情况均受到显著抑制,高浓度联合用药组宫颈癌细胞抑制率显著高于其他各组,青藤碱联合卡铂的抑制作用与时间和浓度呈正比,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,青藤碱组G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,卡铂组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多;联合用药组的G1期细胞与S期细胞位于两组之间。高浓度联合用药组凋亡率(75.58%)显著高于其他组(53.33%),且随着时间增加而升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论青藤碱联合卡铂能够影响细胞周期分布,促进细胞凋亡,从而显著抑制宫颈癌细胞增殖,是宫颈癌较为有效的辅助治疗手段。     

低氧培养的PC12细胞凋亡的研究

目的研究PCI2细胞在低氧状态下,内源性一氧化碳（CO）的生成及其导致细胞凋亡的作用。方法将PCI2细胞分为常氧对照组（C组）、低氧组（H组）和低氧加血红素氧合酶（HO）抑制剂卟啉锌-9组（H＋ZnPP组）。检测2h时间点PCI2细胞血红素氧合酶的表达及内源性CO水平和细胞凋亡率。结果氧应激状态下,HO-1明显表达,HO-2无表达;H组HO水平与C组、H＋ZnPP组比较明显升高（P〈0．01）,H＋ZnPP组的HO水平高于C组（P〈0．01）;内源性CO水平以及细胞凋亡率与C组、H＋ZnPP组比较均明显升高（P〈0．01）。结论低氧状态下,PCI2细胞表面HO-1高表达,HO-2无明显表达,PC12细胞的凋亡率与内源性CO的水平密切相关,提示HO／内源性CO可能导致细胞凋亡的发生。     

YH-16对宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤鼠生长抑制作用。方法用MTT法检测细胞生长;用透射电镜观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下,观察不同浓度YH-16（0、0.4、0.75和1.5mg/kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果YH-16抑制Hela细胞增殖（P〈0.01）;能诱导Hela细胞凋亡。YH-16能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）;YH-1615mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其他治疗组明显降低（P〈0.05）。结论YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。