MDR1 shRNA对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性实验研究

目的构建多药耐药基因（MDR1）的短发卡RNA表达质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的作用。方法培养脑胶质瘤干细胞；根据MDR1的DNA序列设计shRNA，用Siportxp-1脂质体法转染胶质瘤干细胞。分别采用定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot检测转染前后MDR1mRNA和蛋白表达情况；使用活细胞计数试剂盒（CCK-8）对转染后细胞进行药物敏感性试验，评价shRNA对多药耐药性的逆转作用。结果成功构建MDR1shRNA表达质粒，转染组MDR1mRNA表达水平有所下降（P〈0．05），转染5d组下降最明显；RT—PCR结果显示MDR1mRNA水平降低，第3、5、7d抑制率分别为78．46％±14．17％，82．02％±11．87％，79．5％±13．27％。Westernblot结果显示：shRNA转染组P-糖蛋白（P-gp）的表达降低，第3、5、7d抑制率分别为58．1％±6．5％，39．5％±5．2％，45．8％±8．6％；而药敏实验显示：阿霉素、长春新碱对转染MDRIshRNA的胶质瘤干细胞的半数抑制浓度（IC50）均有不同程度降低，且出现凋亡峰（P〈0．05）。结论MDR1短发卡RNA可在转录后水平对多药耐药进行调节，下调MDR1基因表达，提高药物敏感性，诱导细胞凋亡。     

异柠檬酸脱氢酶1基因突变增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性

目的探讨胶质瘤细胞异柠檬酸脱氢酶1（IDHl）基因突变对替莫唑胺（TMZ）细胞毒性的影响。方法将培养的U87胶质瘤细胞分组转染含空载体（空载体组）、野生型IDHl基因（野生组）和R132H突变型IDHl基因（突变组;IDHl第132位的精氨酸被组氨酸所取代）质粒,利用液相色谱串联质谱法检测细胞上清液中2-羟基戊二酸（2-HG）水平、噻唑蓝法检测细胞增殖活性、实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测细胞caspase3mRNA和蛋白质表达;将含三种不同质粒的U87细胞接种大鼠建立荷瘤大鼠模型并观察大鼠经TMZ治疗后60d存活率。结果与空载体组和野生组比较,突变组细胞上清液中2-HG水平、细胞caspase3mRNA和蛋白质表达水平均显著升高（P〈0．05）,而细胞增殖活性显著下降（P〈0．05）;TMZ治疗后60d,突变组大鼠存活率显著升高（P〈O．05）;空载体组和野生组之间均无统计学差异（P〈0．05）。结论IDHlR132H基因能够增加TMZ对神经胶质瘤细胞的细胞毒性作用并提高其治疗荷瘤大鼠的存活率。     

Skp2、P27kip1和PTEN在人脑胶质瘤中的表达及其相互关系的研究

目的探讨S期激酶相关蛋白2（skp2）、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白P27^kip1和抑癌基因蛋白PTEN表达与人脑胶质瘤发生、发展的关系。方法用免疫组化SP法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织标本中Skp2、P27^kip1和PTEN蛋白的表达。结果Skp2在8例正常脑组织中全部表达阴性。在52例胶质瘤标本中随着肿瘤恶性程度增高而表达增强。在低、高级别胶质瘤中的阳性率分别56％和81．5％，三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．001）。P27^kip1和PTEN在正常脑组织中表达均为强阳性，随着肿瘤恶性程度增高而表达减弱，P27^kip1和PTEN各自在低、高级别人脑胶质瘤中阳性率分别96％、77．8％和80％、55．6％。三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．01）。在52例胶质瘤标本中，Skp2表达与P27^kip1（r=-0．490，P〈0．01）和肿瘤抑制蛋白PTEN（r=-0．489，P〈0．01）表达呈负相关，PTEN表达与P27^kip1表达呈正相关（r=-0．802，P〈0．01）。结论人脑胶质瘤中Skp2蛋白过表达与P27^kip1降解及PTEN蛋白低表达有关，提示Skp2蛋白过表达可能是人脑胶质瘤发生和发展的一个重要原因。     

胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对化疗药物替尼泊苷敏感性的影响

目的探讨脑胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对替尼泊苷（VM-26）敏感性的影响。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U87细胞,作为实验组;转染GFP—shRNA的U87细胞作为阴性对照组,未转染的U87细胞作为空白对照组。应用RT—PCR、Westernblot检测3组U87细胞中AKT2mRNA和蛋白的表达变化。应用MTT法检测3组U87细胞对VM-26敏感性的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,实验组转染后的U87细胞AKT2mRNA和蛋白的表达水平明显下降（P〈0．01）。实验组VM-26对U87细胞的半数抑制量（IC50）为（6．46±0．42）μg／ml,阴性对照组为（1．16±0．25）μg／ml,空白对照组为（1．15±0．22）μg／ml,实验组与两对照组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人脑胶质瘤U87细胞株对化疗药物VM-26的敏感性。     

LRIG2基因全长及胞外段对胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响。方法将LRIG2全长,LRIG2胞外段（LRIG2_ecto）及空白质粒（对照）经慢病毒法分别转染胶质瘤细胞系U251细胞,筛选稳定细胞株,实时PCR及免疫印迹法检测mRNA及蛋白表达,细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期及细胞凋亡。结果两转染组Flag标签蛋白表达成功;两转染组LRIG2全长及LRIG2_ectomRNA表达较对照组明显升高（氏0．01）;两转染组细胞增殖率均明显高于对照组（P〈0．01）;两转染组s期与G2/M期细胞数之和（即细胞增殖指数）均明显高于对照组（P〈0．01）,而细胞凋亡率均明显低于对照组（P〈0．05）。结论LRIG2基因全长及LRIG2_ecto促进胶质瘤细胞增殖,并将细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞凋亡。     

外源性Bax基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株Smac蛋白表达的影响

目的观察Bcl-2相关X蛋白（Bax）基因过表达对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞第二个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂（Smac）蛋白表达的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000将携带人Bax基因的过表达质粒转入SH-SY5Y细胞（转染组）,同时设空载体组和未转染组。通过G-418筛选后获得转入目的基因的细胞克隆。Hoechst33258染色观察凋亡细胞,免疫印迹法法检测细胞中Bax、Smac蛋白表达,免疫荧光染色检测Bax、Smac蛋白在细胞中的分布。结果转染后用G-418持续筛选2周可获得G418抗性的细胞克隆。Smac主要分布于胞质,Bax主要位于细胞核。转染组SH-SY5Y细胞Bax蛋白表达水平（1.067±0.036）较空载体组（0.436±0.035）和未转染组（0.444±0.046）显著增高（P〈0.05）;转染组Smac蛋白表达水平（1.408±0.044）相比空载体组（0.708±0.021）和未转染组（0.748±0.041）显著增高（P〈0.05）;空载体和未转染组细胞Bax和Snac蛋白表达均无显著差异（P〉0.05）。转染组较未转染组细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。结论外源性Bax基因转入人神经母细胞瘤细胞中并稳定过表达,能够上调Smac蛋白表达,促进细胞凋亡。     

下调Homer—1 b／c基因对机械性损伤神经元存活率的影响

目的既往研究表明,Homer-1b／c在神经元损伤后恒定表达,但下调Homer—1b／c能否对损伤的神经元具有保护作用尚不清楚,这也是本实验中待研究的问题。方法采用RNA干涉（RNAi）技术,抑制神经元Homer-1b／c基因及蛋白表达。通过Westernblot法分析神经元转染小干扰RNA（siRNA）后Homer—1b／c基因抑制效果。建立神经元机械性损伤模型,通过细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定,研究下调Homer-1b／c基因对神经元损伤的保护作用。结果siRNA转染神经元后36h,Homer-1b／cmRNA和蛋白质表达明显被抑制。siRNA转染组神经元损伤后细胞存活率明显比阴性对照组、空载体组高（P〈0．05）。阴性对照组、空载体组和siRNA转染组神经元损伤前培养液LDH性无统计学差异（P〉0．05）,机械性损伤后24h,与阴性对照组及空载体组比较,siRNA转染组LDH活性明显降低（P〈0．05）。结论Homer—1b／csiRNA转染神经元效率较高,基因抑制效果显著。降低Homer-1b／c蛋白表达能够减少机械性损伤后继发性神经元损害,对神经元具有一定的保护作用。     

人脑胶质瘤中Skp2的表达与肿瘤恶性程度及预后关系的研究

目的探讨人脑胶质瘤中Skp2蛋白的表达与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法收集胶质瘤石蜡标本52例，其中低恶性度胶质瘤25例，高恶性度胶质瘤27例，采用免疫组化法检测瘤组织内Skp2、Ki-67的表达情况。同时，对病人的生存时间进行随访。结果①skp2在低、高恶性度肿瘤表达的阳性率分别为56％和81．5％。两组间差异显著（P〈0．01）。②skp2和Ki-67在胶质瘤中的表达呈显著正相关（r=0．818．P〈0．01），在Skp2表达阳性的胶质瘤细胞中其Ki-67的标记指数明显高于相应Skp2表达阴性者（P〈0．05）。③Kaplan—Meier生存分析显示，skp2高表达组（skp2LI〉15％）累积生存率显著降低（P〈0．05）。结论Skp2蛋白的过表达可能参与了胶质瘤的恶性进程。检测胶质瘤的Skp2蛋白水平可能有助于评价肿瘤的生物学行为和预后。     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。     

全反式维甲酸抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型，腹腔注射全反式维甲酸后．MRI检测胶质瘤的体积变化、流式细胞仪检测细胞增殖时相变化及免疫组化检测p27Kip1蛋白的变化。结果治疗组较对照组肿瘤体积明显减小（P〈0．05）；G1期细胞比例明显增加（P〈0．05），S期细胞比例明显减少（P〈0．05）；p27Kip1蛋白的表达明显增加（P〈0．05）。结论全反式维甲酸通过上调p27Kip1蛋白的表达而抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖。     

Beclin 1 基因对恶性胶质瘤细胞 U87 自噬活性和增殖的影响简

目的研究BeclinJ基因对U87胶质瘤细胞自噬和增殖的影响。方法实验分5组：空白对照组．pSUPER—Bec组（表达BeclinsiRNA）与其阴性对照组（pSUPER—non组）,pcDNA3．1-Bec组（表达BeclinJ基因质粒）与其阴性对照组（pcDNA3．1-non组）。分别转染U87细胞,采用免疫印迹检测Beclin1、LC3和p62蛋白在各组的表达;用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）检测各组细胞增殖率。结果转染后48h,pSUPER—Bec组Beclin1、LC3B—11蛋白表达下降,p62蛋白表达升高。pcDNA3．1-Bec组Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达升高,p62蛋白表达下降。与空白对照组或pcDNA3．1-non组相比．pcDNA3．1-Bec组细胞增殖速度降低（P〈0．05）,其他各组细胞增殖速度无明显差异。结论恶性胶质瘤细胞中自噬相关基因Beclinj表达下降,过表达Beclinl蛋白能增强细胞的自噬活性,抑制细胞的增殖活性。     

组蛋白H3乙酰化对脑胶质瘤中Nanog基因的调控作用

目的：探讨组蛋白H3乙酰化修饰对脑胶质瘤增殖相关标记因子Nanog的调控作用。方法体外培养胶质瘤U87细胞,用不同浓度的Apicidin在不同时间内干预U87细胞作为实验组,另设加入DMSO溶剂的DMSO组,及不加药的空白对照组。MTT增殖实验观察Apicidin对细胞增殖的影响,并选出合适的干预浓度。Real-time PCR检测Nanog mRNA表达水平变化,Western blot检测组蛋白H3乙酰化及Nanog蛋白水平,染色质免疫共沉淀（ChIP） Real-time PCR技术检测Nanog启动子区域组蛋白H3乙酰化水平。结果 MTT结果显示：实验组细胞生长出现显著抑制,48 h内细胞增殖的半数抑制浓度IC50为（1.74±0.13）μmol/L。与空白对照组比较,实验组脑胶质瘤U87细胞中Nanog mRNA表达降低46.52%±0.53%（P＜0.05）,H3乙酰化水平和Nanog蛋白也均明显降低（P＜0.05）,实验组Nanog启动子区组蛋白H3乙酰化水平降低46.52%±0.82%（P＜0.05）。结论在脑胶质瘤细胞系中,组蛋白H3低乙酰化水平抑制Nanog表达,Nanog受组蛋白H3乙酰化修饰的调控。     

姜黄素诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞增殖的研究

目的研究姜黄素对脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用10、20、40、60、80μmol/L姜黄素分别处理U87细胞72h后,MTT法检测姜黄素对U87细胞增殖的影响。流式细胞术检测40μmol/L姜黄素处理前后U87细胞周期和凋亡变化。提取40μmol/L姜黄素处理前后不同时间点U87细胞总蛋白,Westernblot检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果姜黄素呈剂量依赖性抑制U87细胞增殖(P0.05),半数抑制浓度(IC50)为42.44μmol/L。姜黄素诱导G2-M期细胞周期阻滞,实验组G2-M期细胞比例为(47.71±2.67)%,对照组为(17.96±0.88)%(P0.01);实验组细胞凋亡率为(3.93±0.82)%,对照组为(1.80±0.65)%,两组差异无统计学意义(P0.05)。姜黄素给药12、24、48h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为(0.89±0.004)、(0.93±0.01)、(1.09±0.02),高于对照组(0.76±0.04)(P0.05);3-MA能减弱姜黄素对U87细胞增殖的抑制作用。结论姜黄素通过诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖。     

缺氧条件下全反式维甲酸对U87胶质瘤细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究模拟缺氧条件下全反式维甲酸(ATRA)对U87胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其可能的机制。方法 U87胶质瘤细胞分为空白对照组、缺氧对照组、低浓度干预组、高浓度干预组。CoCl2模拟缺氧,U87胶质瘤细胞经不同浓度ATRA(5、10μmol/L)干预后,实时定量PCR法及Western blot法分别检测细胞中VEGF mRNA、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及VEGF蛋白的表达。结果与缺氧对照组相比,低、高浓度干预组VEGF mRNA表达分别为缺氧对照组的(2.08±0.23)倍及(3.13±0.14)倍,两组与缺氧对照组的差异均具有统计学意义(均P<0.01);低、高浓度干预组HIF-1αmRNA表达分别为缺氧对照组的(1.62±0.07)倍及(1.83±0.09)倍,两组与缺氧对照组的差异均具有统计学意义(均P<0.01)。而VEGF蛋白相对表达量在缺氧对照组为(2.15±0.12),低浓度干预组为(2.32±0.20),高浓度干预组为(3.09±0.08),各组间差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论在模拟缺氧条件下,ATRA可在转录及翻译水平增加U87细胞中VEGF的表达,而这种表达上调可能部分通过上调HIF-1α表达实现。     

ShRNA-AKT2对人脑胶质瘤U87细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究通过慢病毒载体靶向抑制丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因表达对胶质瘤细胞株U87增殖、凋亡的影响。方法利用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰载体感染U87细胞株,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测转染后细胞株AKT2 mRNA和蛋白表达水平变化,四唑盐(MTT)法检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期改变。结果转染AKT2-shRNA可有效降低U87细胞株内的AKT2表达。干扰组细胞从第3 d开始增殖明显降低(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞的凋亡率为11.80%±1.83%,明显高于阴性对照组的2.01%±0.20%和未转染组的2.13%±0.32%(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞周期S期细胞百分比显著低于对照组,而G0/G1期细胞比分比显著高于对照组(P0.05)。结论 AKT2-shRNA可抑制胶质瘤细胞株的增殖,并导致肿瘤细胞凋亡增加。     

LRIG3基因对脑胶质瘤细胞系U87和U251的细胞周期、侵袭性和凋亡的影响

目的探讨过表达的富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(LRIG3)基因对脑胶质瘤细胞系U251和U87的细胞周期、侵袭能力和凋亡的影响。方法将过表达的LRIG3质粒(实验组)和空白质粒(对照组)经慢病毒法感染胶质瘤细胞系U251和U87,筛选稳定细胞株,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测LRIG3表达的变化,碘化丙啶染色后用流式细胞仪测定细胞周期的变化,TransWell小室法检测细胞的侵袭能力,用免疫组化原位末端标记法(TUNEL)检测各组凋亡细胞。结果与对照组相比,实验组U251与U87细胞中LRIG3mRNA水平分别上升67.6%和79.9%,蛋白表达水平分别升高62.3%和91.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组U251细胞中S期与G2/M期细胞数之和低于对照组,有统计学意义(P<0.05);但U87细胞与对照组比无明显差异。实验组U251细胞中穿出细胞数量均明显少于对照组(P<0.05),TUNEL染色结果显示对照组U251细胞凋亡率为23.4%,实验组为35.7%;对照组U87细胞凋亡率为20.2%,实验组为39.5%;对照组与实验组间凋亡率均有明显差异(P<0.05)。结论 LRIG3基因过表达能阻断细胞周期于S期和G2/M期,降低胶质瘤细胞的侵袭能力,加速细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖的影响。方法应用不同浓度的MS-275作用于U251细胞,分别培养24、48和72h,采用细胞计数试剂盒检测其对U251细胞增殖的抑制作用,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态变化,碘化丙啶单染法检测细胞周期变化,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法经流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)经天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)3作用后的裂解产物。结果 MS-275对U251细胞增殖的抑制作用在相同作用时间下随药物浓度的增加而增大,在同一浓度作用下随作用时间延长而增大,其最佳浓度为10nmol/L。MS-275作用后U251细胞呈现凋亡,胞质和胞核浓缩或碎裂。10nmol/mlMS-275分别作用24、48和72h后细胞凋亡率分别为(2.1±0.4)%、(11.7±0.5)%和(29.0±2.3)%,三者差异显著(P<0.05);随作用时间延长,G1期细胞所占比例逐渐减少,G2期细胞所占比例先增多后减少,药物作用24h所占比例最高,S期细胞所占比例变化不明显,作用48h后开始出现亚G0凋亡峰,且逐渐增大,而对照组没有出现该峰;PARP被caspase3剪切。结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间双重依赖性;这种作用是通过激活caspase3信号通路诱导细胞凋亡实现的。     

miR-106a抑制胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡

目的胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,具有较高的病死率。现有的研究表明miR-106a在多种肿瘤中表达上调,并发挥着致癌性作用,但miR-106a在胶质瘤中的表达和作用却并不清楚。方法不同级别胶质瘤组织和胶质瘤细胞系(T98G,SHG44,U87,U251,U373)内的miR-106a水平通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定。转染miRNA寡聚核苷酸后的U87和U251细胞的增殖能力和细胞周期分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪测定,并且通过膜联蛋白/碘化丙啶(annexin V/PI)双染法测定了miR-106a对胶质瘤细胞的凋亡影响。结果miR-106a在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系内表达水平相对正常脑组织显著下降,并且miR-106a表达水平与胶质瘤病理级别负相关。胶质瘤细胞转染miR-106a后,可检测到过表达的miR-106a可显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力,阻滞细胞周期于G0/G1期,同时诱导胶质瘤细胞凋亡增加。结论 miR-106a可阻滞胶质瘤细胞细胞周期、抑制增殖和诱导凋亡。     

替莫唑胺通过TFRC抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 探讨转铁蛋白受体（TFRC）在替莫唑胺抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭中的作用。方法 体外培养U87胶质瘤细胞,加入50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L替莫唑胺作用;构建control siRNA、siTFRC转染U87细胞沉默TFRC表达,构建pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1/TFRC转染U87细胞过表达TFRC;利用CCK-8方法检测U87细胞增殖;利用Transwell小室实验检测U87细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR和免疫印迹法检查U87细胞TFRC mRNA和蛋白表达。结果 与空白组相比,替莫唑胺处理后,U87细胞的增殖和侵袭能力显著下降（P<0.05）,TFRC mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺浓度为200 μmol/L时,对U87细胞的抑制能力最强（P<0.05）。当利用pcDNA3.1/TFRC过表达U87细胞TFRC处理后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著下降（P<0.05）;而当利用siTFRC沉默U87细胞TFRC表达后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著增强（P<0.05）。结论 替莫唑胺可能通过抑制TFRC的表达而抑制U87胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

九节龙皂苷对胶质瘤U373MG的抑制作用及其机制研究

目的 探讨九节龙皂苷对人脑胶质瘤细胞U373MG增殖的抑制作用及其机制.方法 培养U373MG细胞系,随机分为二甲基亚砜对照组(control组)和九节龙皂苷治疗(ADS)组.采用甲基噻唑基四唑法检测不同剂量ADS对人胶质瘤细胞U373MG增殖的影响;流式细胞仪观察细胞凋亡情况.免疫组化检测凋亡蛋白Caspase-3、p-Caspase-3的表达变化.结果 与对照组比较,ADS可显著降低U373MG细胞的生存率;流式细胞仪检测结果显示,随着ADS浓度的增大,U373MG细胞的凋亡率明显上升,免疫组化结果同样证明,ADS可呈剂量依赖性的促进凋亡信号Caspase-3和p-Caspase-3的高表达,不同组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ADS可呈剂量依赖性的抑制U373MG细胞增殖,可能通过促进Caspase-3、p-Caspase-3的表达,诱发U373 MG细胞大量凋亡,发挥重要的抗肿瘤作用.