缺氧对小鼠背根神经节细胞IK电流的影响

目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从 10 mV至 70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

缺氧对小鼠背根神经节细胞ⅠK电流的影响

目的：探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法：应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录ⅠK电流。结果：当小细胞缺氧时,钾通道在3min之内即可发生变化,表现为绝大多数（86％,6／7）细胞的ⅠK减弱,1个细胞（14％,1／7）的ⅠK电流增强;缺氧1min时以减弱,3min时产生最大抑制。当测试电位从＋10mV至＋70mV时,急性缺氧显著性降低ⅠK,ⅠK电流密度降低最大幅度从（304．4±122．9）降为（253．9±106．4）pA·pF^-1,但ⅠK稳态激活曲线无明显变化。结论：急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞ⅠK电流,而ⅠK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

大麻素对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸激活电流的抑制作用

目的探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用。方法采用全细胞膜片钳技术。结果①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1000μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断。②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性。WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;最大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85μmol/Lvs25.76μmol/L)。③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断。细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用。结论大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一。     

大鼠新鲜分离DRG同一神经元膜GABA、NMDA和P物质激活电流的比较

本文应用全细胞膜片钳实验技术观察到大鼠背根神经节(DRG)神经元膜上共存有GABA、NMDA和P物质受体(21/57,36.8%);在同一DRG神经元膜上就上述三种受体分别被激活后所引起的电流进行了幅值、去敏感等的比较分析;并就这三件受体被激活后可能存在的相互调制及生理意义进行了讨论.     

人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察

①目的 观察人眼视网膜神经节细胞（ＲＧＣ）胚胎发育的状况,为研究ＲＧＣ提供形态学依据。②方法 对胎龄６～３８周５７３眼的ＲＧＣ进行光镜及电镜观察。利用计算机自动图像分析系统对２０～３８周的ＲＧＣ进行定量分析;用Ｉ（ＳＥＬ法定性标记凋亡细胞。③结果 电镜下胚胎６周ＲＧＣ的轴突与树突已可分辨;１５周时ＲＧＣ层及内丛状层在视网膜周边部已形成,后极部ＲＧＣ层小细胞多,周边部ＲＧＣ层大细胞多;胎龄１８～２２     

缓激肽对DRG分离细胞GABA激活电流的抑制作用

本文系应用全细胞膜片钳技术在大鼠新鲜分离背根神经节(DRG)神经元上．观察预加缓激肽(BK)对GABA-激活电流的调制作用，在受检的36个细胞中绝大多数对GABA敏感(34／36)，反应具有明显的浓度依赖性(10^-6～10^-3M)。此GABA-激活电流可为museimol，isoguvacine模拟，并为bicuculline所阻断。36个细胞中多数对BK反应(31／36),大部分为内向电流(27／31)，少数为外向流(4／31)，5个细胞对BK无反应(5／36)。     

和厚朴酚对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

采用全细胞膜片钳技术,观察和厚朴酚(honokiol,Hnk)对急性分离的小鼠背根神经节上河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流及其通道动力学的影响,探讨Hnk可能的镇痛机制及作用靶点。结果显示:和厚朴酚浓度依赖性地抑制TTX-S钠电流,30 μmol/L和厚朴酚可以使稳态激活曲线向较正电压方向偏移达10.2 mV,通道失活后恢复时间明显延长,但对稳态失活动力学特征无明显的影响。     

阿米诺利敏感的小鼠生精细胞离子电流

目的研究记录小鼠生精细胞上表皮钠通道电流。方法应用机械分离获得小鼠单个生精细胞,采用全细胞膜片钳技术记录上皮钠离子通道电流。结果当钳制电位在-50mV、指令电压-100～ 40mV、步阶电压10mV,测试脉冲为200ms时,可记录到一快速激活并且不失活的电流。细胞外液中加入1μmol/L的阿米诺利能显著性抑制该电流,并呈现出两类不同的作用(抑制率分别为58.49±9.82%,31.44±5.69%)。结论电流特性和阿米诺利敏感性特征表明,生精细胞上所记录到的电流是上皮钠通道电流。     

地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。     

牛蛙初级感觉神经P物质对GABA激活电流的抑制作用(英文)

目的　在牛蛙背根神经节神经元研究P物质对γ -氨基丁酸激活电流的调制作用。方法　实验采用的方法是全细胞膜片钳技术 ,实验材料为急性分离的牛蛙背根神经节神经元。结果　在受检的神经元中大多数神经元 ( 95% )对γ -氨基丁酸 ( 1～ 1 0 0 0um)敏感 ,并且能被荷包牡丹碱 (GABA受体的阻断剂 )所阻断。另一方面 ,P物质能抑制γ -氨基丁酸激活电流的 3 0 .85%。结论　由于P物质受体和γ -氨基丁酸受体共存于牛蛙DGR神经元膜 ,并且P物质受体的激活可以调制γ -氨基丁酸受体激活的反应 ,从背角神经元释放的P物质可以逆转由γ -氨基丁酸介导的突触前抑制反应     

Neuroprotective Effect of Melatonin on Retinal Ganglion Cells in Rats

Glaucoma , the fourth blindness-causing ill-ness in the world, is mainly manifested by twosymptoms : elevated intraocular pressure (IOP)and loss of visual field. Though the IOP of manypatients with glaucoma can be li mited to a properor low level ,it can' t prevent the i mpaired nervefrom deteriorating and therefore , with the condi-tionit is i mportant to protect optic nerve .In addi-tion, the progressive apoptosis of RGCs is thepathological basis for the glaucoma to i mpair thevisual func…     

猪视网膜神经节细胞的培养及超微结构

目的：建立视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs)的体外培养方法,并研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用,为RGCs的体外实验研究奠定基础。方法：进行猪视网膜细胞混合体外培养和神经节细胞的纯化培养,观察神经节细胞生长状态及轴突生长情况,研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用。结果：视网膜细胞混合培养时,神经节细胞生长良好,纯化后的神经节细胞间连接减弱,细胞存活时间缩短。结论：视网膜细胞混合培养有利于神经节细胞的贴壁和生长。     

大鼠发育过程中视网膜神经节细胞的膜学特性

目的 研究出生后不同发育阶段Wistar大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的膜学特性，包括被动膜学特性和去极化脉冲诱发的动作电位(AIction potential，AP)，并分析其与年龄的关系。方法 应用视网膜切片膜片钳全细胞记录技术，获得7～30dWistar大鼠视网膜神经节细胞的膜片钳全细胞记录。结果 ①记录了112个视网膜神经节细胞；②随着发育，RGCs的膜学特性发生显著变化，兴奋性增加，睁眼前组与睁眼后组间有显著性差异；③去极化脉冲诱发其产生的动作电位有3种形式：单峰型、瞬变型、持续型。随着视觉发育，单峰型逐渐减少，持续型逐渐增加，细胞成熟时未见到单峰型，只见到瞬变型和持续型。随着发育，RGCs的电生理特性发生显著变化。结论 ①睁眼后形觉刺激促进RGCs膜学特性的成熟；②随着发育，RGCs的AP类型发生显著变化，单峰型是RGCs发育过程中的一种前期状态，最终分化为瞬变型和持续型RGCs。     

Muller细胞诱导视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化

目的研究Muller细胞在视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化中的作用。方法分离培养Muller细胞和不同时期的胚胎视网膜前体细胞,将其与Muller细胞共同培养,并进一步用Muller细胞条件培养液来诱导视网膜前体细胞的分化。倒置相差显微镜每天观察细胞的生长和分化情况,Thy1.1标记视网膜神经节细胞并计数。结果视网膜前体细胞能分化为多种视网膜细胞类型,包括视网膜神经节细胞。不同时期、不同培养条件下的视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化的百分比不同。单独培养组、共同培养组和Muller细胞条件培养液组视网膜神经节细胞的百分比,E14分别为(16.91±4.05)%,(47.25±9.67)%和(42.36±10.52)%,E18则分别为(4.65±1.88)%,(9.90±3.19)%和(8.69±3.01)%。相同时期的视网膜前体细胞,共同培养组和Muller细胞条件培养液组视网膜神经节细胞的百分比较单独培养组高,差异有统计学意义。相同培养条件下,E14视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化的百分比较E18高,差异有统计学意义。结论Muller细胞能诱导视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化,可能通过Muller细胞释放某些可溶性因子发挥作用。     

人胚胎三叉神经节细胞发育形态学测量

目的观察人胚胎三叉神经节细胞随胎龄增长的变化发育规律。方法取19~32w人胚胎三叉神经节,光镜观察,进行细胞计数,图像分析仪测量三叉神经节细胞面积、周长、直径。结果随着胎龄增长三叉神经节细胞数目无明显变化,直径随胎龄增长而增大,面积和周长均随胎龄增大而明显增大。结论人胚胎三叉神经节细胞形态发育在7~8个月(32w)时达成年人水平;但细胞数目随胎龄增长无明显变化。     

Inhibition of 5-HT3 receptors-activated currents by cannabinoids in rat trigeminal ganglion neurons

This study investigated the modulatory effect of synthetic cannabinoids WIN55,212-2 on 5-HT3 receptor-activated currents (I5-HT3) in cultured rat trigeminal ganglion (TG) neurons using whole-cell patch clamp technique. The results showed that: (1) The majority of examined neurons (78.70%) were sensitive to 5-HT (3-300 μmol/L). 5-HT induced inward currents in a concentration-dependent manner and the currents were blocked by ICS 205-930 (1 μmol/L), a selective antagonist of the 5-HT3 receptor; (2) Pre-application of WIN55,212-2 (0.01-1 μmol/L) significantly inhibited I5-HT3 reversibly in concentration-dependent and voltage-independent manners. The concentra-tion-response curve of 5-HT3 receptor was shifted downward by WIN55,212-2 without any change of the threshold value. The EC50 values of two curves were very close (17.5±4.5) mmol/L vs. (15.2±4.5) mmol/L and WIN55,212-2 decreased the maximal amplitude of I5-HT3 by (48.65±4.15)%; (3) Neither AM281, a selective CB1 receptor antagonist, nor AM630, a selective CB2 receptor antagonist re-versed the inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2; (4) When WIN55,212-2 was given from 15 to 120 s before 5-HT application, inhibitory effect was gradually increased and the maximal inhibition took place at 90 s, and the inhibition remained at the same level after 90 s. We are led to concluded that-WIN55,212-2 inhibited I5-HT3 significantly and neither CB1 receptor antagonist nor CB2 receptor an-tagonist could reverse the inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2. Moreover, WIN55,212-2 is not an open channel blocker (OCB) of 5-HT3 receptor. WIN55,212-2 significantly inhibited 5-HT-activated currents in a non-competitive manner. The inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2 is probably new one of peripheral analgesic mechanisms of WIN55,212-2, but the mechanism by which WIN55,212-2 in-hibits I5-HT3 warrants further investigation.     

Culture of rat retinal ganglion cells

This study aimed to modify the mixed and purified culture of rat retinal ganglion cells(RGCs) in vitro.The retinae of 1-3 day old Sprague-Dawley(SD) rats were separated bluntly into two layers:inner layer and outer layer,under a surgical microscope.Retinal cells isolated from different layers(inner layer,outer layer and whole retinal tissue) by using enzyme dissociation method were cultured in F12/DMEM medium containing 15% FBS.After 3-day culture,the RGCs in the retinal cells obtained from mixed culture of inner,outer,and whole retinal tissue were identified by immunocytochemical staining of Thy-1.1,and the rate of RGCs to retinal cells(RGCs%) was calculated.Two monoclonal antibodies,anti-macrophages/granulocytes(OX-41) against rat macrophage and antibody against rat Thy-1.1(OX-7),were used to purify RGCs by either a conventional or modified two-stepped immunopanning procedure(purification in situ).Purified RGCs were seeded at different cell density and cultured in F12/DMEM medium containing 15% FBS.Immunocytochemical staining for Thy-1.1,MTT,and PI-Hoechst33342 fluorescence imaging were used to identify the purity and the viability of RGCs in purified culture of RGCs.The results showed:(1) Immunocytochemistry of different retinal tissue layers culture revealed that the RGCs% was(19.9±1.2)%,(0.5±0.2)%,and(6.2±1.7)% respectively in the mixed culture of inner,outer,and whole retinal tissue,with differences being significant(P<0.05);(2) fluorescent double staining of Hoechst33342 and PI indicated that with the same RGCs%,RGCs obtained from purification in situ grew well with more neurite outgrowth than those by the conventional two-stepped immunopanning method;(3) the viability of purified RGCs seeded at high density was in-creased and the cells developed complex intercellular networks.The viability of RGCs was declined with the decreasing seeding density,and most cells presented round or oval in shape with thin neurites.It was concluded that:(1) RGCs% in the inner layer retina was higher than that in the outer layer retina;(2) RGCs obtained by in situ purification had more neurite outgrowth and lower mortality than those by conventional two-stepped immunopanning procedure;(3) the viability of purified RGCs could be increased by increasing cell seeding density to some extent.     

大鼠视网膜共培养诱导神经干细胞分化为视网膜神经节细胞

目的:研究新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养对干细胞分化的影响.方法:采用机械分离、无血清培养基选择培养的方法从孕14 d的胚鼠上丘中获取神经干细胞并传代培养.使用组织-细胞共培养系统将出生4 d的乳鼠视网膜组织与上丘源神经干细胞共培养,观察干细胞分化过程,对分化细胞进行鉴定,并与干细胞的自然分化过程进行比较.结果:从胚鼠上丘中获得的细胞在无血清培养条件下聚集呈球形悬浮生长,可以持续传代培养,具有多向分化能力,经免疫荧光鉴定证实为神经干细胞.新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养促进干细胞的分化,并诱导分化出Thy1.1阳性细胞.结论:从胚胎大鼠上丘可以分离培养神经干细胞,与新生鼠视网膜组织共培养可以诱导上丘源神经干细胞分化出视网膜神经节细胞.     

大鼠螺旋神经节细胞的电压依赖型钠离子通道的研究

目的 认识大鼠螺旋神经节细胞膜上电压依赖型钠离子通道的电生理特征。方法 采用全细胞电压钳记录模式，观察分离出的大鼠螺旋神经节细胞在不同的钳制电压下胞膜上钠离子通道电流的幅度、激活和失活等电生理特性。结果 在全细胞电压钳制下共在17个螺旋神经节细胞膜上成功记录到钠离子通道电流。钠离子通道电活动有着电压依赖特性，在-40mv激活，-20mV最大，＋20mV失活，但钠离子通道电流与电压为非直线性关系，同样，该通道对0．05μmol／L河鱼屯毒素阻滞剂敏感，且大鼠螺旋神经节细胞膜上的电流密度都基本相同。结论 大鼠螺旋神经节细胞存在着电压依赖型钠离子通道，其电生理学特性适合作初级听神经元离子通道的实验研究。     

绿茶提取物EGCG对视网膜神经节细胞氧化应激损伤的防护作用

目的 研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对视网膜神经节细胞(RGC-5)氧化应激损伤的防护作用.方法 利用外源性活性氧(H2O2)造成RGC-5细胞的氧化应激损伤,同时应用EGCG进行保护.通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)验证RGC-5细胞的死亡方式,2',7'-二氢乙啡啶(OHE)染色实验检测细胞内活性氧簇(ROS)生成情况,蛋白质印迹法定量分析细胞核酶(PARP-1)的激活,噻唑蓝(MTT)法分析比较EGCG、维生素E水溶性衍生物(Trolox)和PARP-1抑制剂NU1025对RGC-5细胞的保护作用.结果 H2O2以浓度和时间依赖的方式降低RGC-5细胞活性,500μmol/L H2O2在24 h可以导致RGC-5细胞活性下降50%.H2O2可以导致RGC-5细胞凋亡,并显著增加细胞内ROS的生成,上调细胞核酶PARP-1的表达;而预先给予EGCG可以明显减少RGC-5细胞凋亡和细胞内ROS生成.MTT实验显示EGCG可以使氧化应激损伤中RGC-5细胞活性恢复到87%,而Trolox和NU1025可以分别提高细胞活性到62%和71%.结论 EGCG能够有效地防护氧化应激对视网膜神经节细胞的损伤,是一种极具开发潜力的神经保护性药物.